目的:探讨术后非人类白细胞抗原(HLA)抗体与肾移植体液性排斥反应(HR)的相关性。方法:回顾性分析上海交通大学医学院附属仁济医院2019年9月至2021年1月检测了非HLA抗体水平的40例肾移植受者资料，选取活检证实发生HR，并且发生HR时供者特异性HLA抗体阴性或者弱阳的受者入组HR组(11例)，选取术后2周至检测非HLA抗体时移植肾功能稳定的受者入组稳定组(29例)。采用Luminex单抗原微珠法检测HLA抗体、MHCⅠ类链相关基因A(MICA)抗体、32种非HLA抗体的水平，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)抗体水平。分析两组受者非HLA抗体阳性率和阳性非HLA抗体数量的差异。结果:24例受者具有阳性非HLA抗体，剩余16例受者的非HLA抗体全为阴性。HR组分别有3例受者的肌动蛋白(ACTIN)抗体、Ⅲ型胶原蛋白(Collagen Ⅲ)抗体、谷胱甘肽硫转移酶θ1(GSTT1)抗体和γ干扰素(IFN-γ)抗体阳性，而稳定受者的这4种非HLA抗体都是阴性，两组比较，差异有统计学意义( P＝0.017)。4例HR受者的Collagen Ⅱ抗体阳性，而仅1例稳定受者的Collagen Ⅱ抗体阳性，HR受者的Collagen Ⅱ抗体阳性率高于稳定受者( P＝0.023)。HR受者的平均阳性非HLA抗体数为2.36个，而稳定受者为0.90个，两组之间的差异有统计学意义( P＝0.008)。 结论:高水平非HLA抗体增加肾移植HR的发生风险。

目的:通过全外显子组测序(WES)技术筛查原发性胆汁性胆管炎(PBC)家系共有的低频变异位点，以期发现与PBC相关的新易感基因。方法:收集2000年1月至2017年12月于天津医科大学总医院诊断的3个PBC家系的7例PBC患者和2名健康对照者的临床资料，提取血液DNA样本并进行WES，应用SAMtools 1.3软件检测基因单核苷酸多态性(SNP)和得失位变异位点，并于已知数据库1000 Genome、ExAC、ESP6500和诺禾-中华基因数据库筛选低频变异位点。应用Pymol V2.3.2软件模拟主要组织相容性复合体-Ⅱ(MHC-Ⅱ)分子三维结构，观察家系间共有变异位点对应的氨基酸位置。结果:7例PBC患者首诊年龄为(61.2±10.2)岁。血清检测结果示7例患者的ALP为(306.9±242.5) U/L，GGT为(121.7±85.9) U/L，ALT为(47.6±33.1) U/L，AST为(55.7±34.1) U/L，免疫球蛋白G为(14.9±3.1) g/L；抗核抗体核型均存在胞质颗粒型特征；抗线粒体抗体均为阳性。5例PBC患者出现腹腔内淋巴结肿大；2例患者合并肝外自身免疫病；2例患者肝脏活组织检查结果均提示界面性肝炎和小胆管病变。3个PBC家系间共有18个SNP位点，分别位于 OTOA、 OBSCN和人类白细胞抗原- DRB1( HLA- DRBI)基因。 OTOA基因的rs200988634是3个家系共有的多态性位点； OBSCN基因的rs746424683、rs545316651、rs553144914、rs533059830和rs56087721分别导致9种氨基酸的改变；基因 HLA- DRB1共有12个不同的SNP位点，分别导致12种氨基酸的改变，其中rs16822698、rs112796209和rs11554463核苷酸突变分别导致MHC-Ⅱ分子β链的G154A、Y152C和Y107X氨基酸改变，Y107X氨基酸位于MHC-Ⅱ分子与抗原肽结合凹槽区域。 结论:对PBC家系进行WES是阐明恶性变异候选基因 OBSCN和 OTOA较好的策略。 HLA- DRB1为PBC的易感基因，可能通过改变氨基酸序列影响MHC-Ⅱ分子介导的抗原提呈过程。

目的:研究结核分枝杆菌Rv0446c的抗原表位及其免疫原性，为结核病的免疫诊断技术及疫苗研发提供候选抗原及表位。方法:利用生物信息学软件TE-predict和IEDB的T细胞表位预测软件对结核分枝杆菌抗原Rv0446c进行T细胞表位预测，用ELISPOT实验检测表位在2019年1月到2020年12月期间来自佛山市第四人民医院和福州肺科医院的结核病患者（50例）、肺部疾病患者（39例）及健康志愿者（55例）中的免疫反应性。将60只6周龄BALB/c小鼠随机分成10组，每组6只，分别采用PBS、血蓝蛋白（KLH）、高剂量结核分枝杆菌抗原Ag85B（50 μg/只）、低剂量Ag85B（20 μg/只）、高计量P120、低剂量P120、高计量P121、低剂量P121、高剂量P123、低剂量P123（P120、P121、P123高剂量为100 μg/只、低剂量为50 μg/只）多肽对其皮下免疫，每只小鼠免疫3次，每次间隔2周，末次免疫后4周，应用ELISA方法检测各组小鼠脾细胞产生的IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10细胞因子水平。结果:预测的7条表位多肽中，ELISPOT试验筛选出4条阳性T细胞表位多肽P120、P121、P122、P123，在结核病患者中检测灵敏度和特异度分别为30.0%、18.0%、6.0%、22.0%和96.8%、98.9%、100%、96.8%。与对照PBS组和KLH组比较，P120多肽能刺激小鼠产生较高水平的IFN-γ、IL-4、IL-10，P121多肽刺激小鼠产生较高水平的IFN-γ和IL-4（均 P<0.05），P123多肽刺激小鼠产生较高水平的IFN-γ（均 P<0.05）。P120、P121、P123多肽刺激小鼠产生的IL-2的水平高于PBS组低于Ag85B-L组和Ag85B-H组（均 P<0.05），但与KLH组差异无统计学意义（均 P>0.05）。 结论:Rv0446c蛋白及其T细胞表位具有较好的免疫原性及免疫反应性，能刺激机体产生强烈的细胞免疫应答，可用于结核病的临床诊断技术研究和新型结核亚单位疫苗的构建。

目的:探讨过表达Dectin-1基因对树突状细胞(DCs)功能的影响,阐明Dectin-1基因抑制DCs成熟活化发挥免疫学功能的机制及对小鼠心脏移植物的免疫保护作用.方法:小鼠骨髓干细胞诱导形成DCs后进行体外培养扩增,采用带有绿色荧光蛋白(GFP)标签的腺病毒载体将Dectin-1基因转染至DCs,经过Dectin-1基因修饰的未成熟DCs(imDCs)为DC-Dectin-1组,同时设未经病毒转染的DCs组和转染GFP(DC-GFP)组,24 h后采用免疫荧光染色法检测腺病毒转染情况,采用Western blotting法检测各组DCs中Dectin-1 蛋白表达情况,采用流式细胞术和酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测脂多糖(LPS)刺激前后各组DCs表型、功能和细胞培养上清液中白细胞介素 10(IL-10)和白细胞介素 12(IL-12)水平.建立同种异体小鼠腹部异位心脏移植模型,分为DCs组、DC-GFP组和DC-Dectin-1组,于移植术后第1、3和5天分别输入DCs、DC-GFP和DC-Dectin-1,移植术后第7天HE染色观察各组小鼠心脏移植物病理形态表现,TUNEL染色观察各组小鼠心脏移植物细胞凋亡情况,观察各组小鼠心脏移植物中位存活时间(MST).结果:经基因修饰的Ad5F35载体可提高Dectin-1基因转染效率,转染后GFP可持续在DCs中表达.LPS刺激前,DCs、DC-GFP和DC-Dectin-1组细胞中CD40、CD80、CD86和人类主要组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)表达水平均较低,呈现imDCs表型;与LPS刺激前比较,LPS刺激后DCs组和DC-GFP组细胞中CD40、CD80、CD86和MHC-Ⅱ表达水平升高,呈现成熟DC表型,而DC-Dectin-1组细胞中CD40、CD80、CD86和MHC-Ⅱ表达水平仍较低.LPS刺激前,各组细胞培养上清液中IL-10和IL-12水平比较差异无统计学意义(P>0.05);LPS刺激后,与DCs组和DC-GFP组比较,DC-Dectin-1组细胞培养上清液中IL-10水平明显升高(P<0.05),IL-12水平明显降低(P<0.05).移植术后第7天,与DCs组和DC-GFP组比较,DC-Dectin-1组小鼠心脏移植物组织中炎性细胞浸润减少,排斥反应表现明显减轻,TUNEL染色呈阳性的凋亡细胞明显减少.与DCs组和DC-GFP组比较,DC-Dectin-1组小鼠术后心脏移植物MST明显延长(P<0.01).结论:Dectin-1基因可抑制未成熟DCs在LPS作用下的成熟和活化,减弱其抗原提呈功能,在一定程度上延长小鼠心脏移植物MST,诱导移植物免疫耐受形成.

背景 内脏高敏感的发生与肠系膜淋巴结树突状细胞(mesenteric lymph node dendritic cells,MLNDC)的异常活化相关;蛋白质二硫键异构酶A3(protein disulfide isomerase A3,PDIA3)可以调节信号转导与转录激活因子3(signal transduction and activator of transcription 3,STAT3)通路的活性.我们假设,在MLNDC中,PDIA3可以抑制STAT3通路,激活MLNDC,并最终引起内脏高敏感.目的 初步探讨PDIA3/STAT3在内脏高敏感小鼠肠道树突状细胞异常免疫活化中的可能作用 方法 40只C57BL/6小鼠随机分成对照组(20只)和模型组(20只),采用束缚应激建立小鼠肠易激综合征内脏高敏感模型,用腹部撤回反射评估小鼠肠道敏感性,磁珠分选技术分离两组小鼠MLNDC,流式检测分选纯度以及比较两组MLNDC表面主要组织相容性复合体Ⅱ (major histocompatibility complex Ⅱ,MHC-Ⅱ)类分子的表达情况,蛋白印记技术和免疫荧光技术比较两组MLNDC中PDIA3和磷酸化-信号转导与转录激活因子3(phosphorylated signal transduction and activator of transcription 3,P-STAT3)的表达及分布情况,混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)比较两组DC对初始T淋巴细胞的激活能力.结果 模型组小鼠结肠扩张容量阈值明显低于对照组[(0.53mL±0.07 mL)vs(0.85 mL±0.12 mL),t=-10.845,P=0.000];流式检测磁珠分选所得的小鼠树突状细胞特异性抗原CD11c阳性MLNDC为86.61％±7.02％;模型组MLNDC表面MHC-Ⅱ类分子表达显著高于对照组[(73.08％±2.64％)vs(53.20％±4.50％),t=-7.617,P=0.000];与对照组相比,模型组小鼠MLNDC表达PDIA3明显升高[(0.77±0.04)vs(0.42±0.03),t=11.086,P=0.000],同时P-STAT3的表达明显下降[(0.73±0.03)vs(1.24±0.18),t=-4.737,P=0.038)],MLR中刺激初始T淋巴细胞增殖的能力明显增强[(34.24％±2.95％)vs(17.22％±3.47％),t=6.472,P=0.003].结论 内脏高敏感小鼠MLNDC的异常免疫活化或许和PDIA3/STAT3有关.

斑秃(AA)是一种自身免疫性或免疫介导性疾病,与特定的主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类等位基因明显相关。作者使用聚合酶链反应(PCR)技术结合等位基因特异的寡核苷酸(SSO)探针杂交对一组美国白人AA患者作人类白细胞抗原(HLA)-DQA1,-DQB1,-DPB1等位基因分型,同时对38例DR4和23例DR5(DRB1 *11)阳性的AA患者分亚型,以了解HLA基因在AA及全秃/普秃(AT/AU)易感性或抗性中的作用。

目的：:探讨组织相容性抗原Ⅱ类（MHC-Ⅱ）基因反义RNA是否可调控脐血细胞MHC-Ⅱ类基因的表达及降低脐血细胞的免疫原性和脐血细胞移植时发生移植物抗宿主反应（GVHR）的程度。方法：:应用分子克隆技术构建了含人HLA-DR β基因的逆转录病毒表达载体，经过狭缝杂交、电泳、酶切分析鉴定，获得了HLA-DR β基因反义RNA重组体，用lipofectin（脂质体）将重组体导入包装细胞PA317。结果：:产重组病毒的细胞PA317的病毒滴度可达1×10 5cfu/ml。用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）可从转染的脐血干细胞中扩增出DR-β基因cDNA，说明反义RNA重组体目的基因已有效表达。用流式细胞仪测定转染的脐血细胞HLA-DR抗原阳性细胞率为28%（对照组为45%），其抑制率为38.2%。 结论：:导入脐血干细胞的HLA-DR基因反义RNA重组体成功地降低了其HLA-DR抗原的表达程度，为临床上降低脐血移植的GVHR提供r理论依据和实验基础。

目的 分析新冠肺炎康复者恢复期血浆中人类白细胞抗原(HLA)抗体以及MHC Ⅰ类链相关基因A(MI-CA)抗体的阳性率情况.方法 采用Luminex平台技术同步筛查HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗体和MICA抗体.利用单抗原特异性试剂鉴定HLA-Ⅰ类抗体和Ⅱ类抗体特异性.不同组抗体筛查阳性率比较采用卡方检验.结果 共收集到新冠肺炎康复者标本88份,HLA-Ⅰ类抗体、Ⅱ类抗体和MICA抗体阳性率分别为18.19％、19.32％、10.23％;HLA-Ⅰ类抗体、Ⅱ类抗体均阴性为64份(72.73％).对照组随机献血者标本为95例,HLA-Ⅰ类抗体、Ⅱ类抗体和MICA抗体阳性率分别为8.42％、13.68％、10.53％;HLA-Ⅰ类抗体、Ⅱ类抗体均阴性为76份(80.00％).2组间HLA-Ⅰ类抗体、Ⅱ类抗体以及MICA抗体阳性率差异均无统计学意义.每例新冠肺炎康复者恢复期血浆筛查阳性标本HLA抗体特异性针对的抗原表位不同,大多数抗体针对多个等位基因的抗原表位.结论 新冠肺炎康复者恢复期血浆中存在一定比例的HLA抗体,筛选HLA抗体有助于提高输注安全性.

目的:探讨内毒素全身注射所致的角膜改变.方法:使用抗单核细胞、巨噬细胞和MHC-Ⅱ类抗原阳性细胞的单克隆抗体,用标准的ABC方法于内毒素注射前、后制备的角膜平片上进行免疫组织化学染色.结果:发现在正常角膜中央区实质内有散在分布的巨噬细胞,越近角膜缘分布越密集,MHC-Ⅱ类抗原阳性细胞则仅存在于角膜缘;内毒素注射后,中央区角膜单核巨噬细胞增多,这些细胞于角膜实质内发生了一系列形态学改变,MHC-Ⅱ类抗原阳性细胞仅见于注射后早期的中央区角膜内皮面.结论:内毒素诱导的角膜中巨噬细胞的增多可能是机体应激状态下的重要防御机制,角膜实质中MHC-Ⅱ类抗原的缺如则对维持角膜局部免疫微环境的稳定性有重要意义.

目的:探讨角膜热烧伤后角膜溃烂溶解穿孔以及眼内炎症的免疫学机制.方法:在大鼠角膜上制作热烧伤模型,在烧伤后的不同阶段,制备角膜,虹膜、脉络膜巩膜复合体以及视网膜平片,采用标准的ABC免疫组化方法,观察眼局部T淋巴细胞亚群,巨噬细胞、树突细胞,MHC-Ⅱ类抗原阳性细胞的动态变化.结果:烧伤后早期,角膜及虹膜即有T淋巴细胞浸润,以CD3阳性细胞为主,MHG-Ⅱ类抗原阳性细胞也轻度增多;当角膜溶解穿孔阶段,T淋巴细胞浸润达到高峰,在T淋巴细胞亚群中,CD4明显多于CD8阳性细胞;同时,巨噬细胞、树突细胞、MHC-Ⅱ类抗原阳性细胞也大量出现.细胞密集分布于角膜缘,在溃疡溶解处,可见MHC-Ⅱ类抗原阳性细胞及少至中等量CD3阳性淋巴细胞.Ⅱ类抗原阳性细胞在形态学上也发生了些变化,由初期的园形变为多形性,且大小不一.当烧伤恢复期病变稳定时,各种阳性细胞逐渐减少.结论:免疫反应参与了严重角膜烧伤的发病过程,在角膜溶解穿孔的发生中起重要作用.