目的:观察电磁场干预对异位骨化(HO)大鼠模型的抗异位骨化效应并探讨相关作用机制。方法:采用随机数字表法将72只雄性SD大鼠分为对照组、模型组及观察组。采用钳夹、切断跟腱等方式将模型组、观察组大鼠制成HO动物模型，对照组术中仅暴露跟腱组织，未给予钳夹、切断处理。观察组大鼠于制模后每天给予2次50 Hz、1 mT正弦交变电磁场暴露干预，每次持续2 h。于术后3 d、14 d、1个月及3个月时每组各取6只大鼠，提取跟腱组织进行大体、组织学及免疫组化染色观察，并采用Western blot或RT-PCR方法检测标本中母亲DPP同源物7(Smad7)、母亲DPP同源物3(Smad3)、磷酸化母亲DPP同源物3(p-Smad3)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)及组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)等蛋白或基因表达情况；于术后1个月、3个月时对各组大鼠患肢跟腱部位进行X线检查以了解异位骨化形成情况。结果:术后各时间点对照组大鼠各项检测指标(包括跟腱大体外观、HE染色、免疫组化染色以及X线检查等)均无明显变化；与模型组比较，观察组异位骨化形成被明显抑制。模型组及观察组MMP-9基因表达量均显著高于对照组( P<0.05)，且随时间延长呈上升趋势；TIMP-1基因表达量均显著低于对照组( P<0.05)，且随时间延长呈下降趋势。与模型组比较，观察组术后各时间点MMP-9表达量均明显降低( P<0.05)，TIMP-1表达量均明显升高( P<0.05)。与模型组比较，观察组术后各时间点Smad7蛋白含量均明显增加，p-Smad3蛋白含量均明显减少。 结论:50 Hz、1 mT正弦交变电磁场干预对HO大鼠模型具有明确的抗异位骨化效应，其作用机制可能与促进Smad7表达，阻止Smad3磷酸化，从而抑制转化生长因子-β(TGF-β)/Smad信号转导通路，促进MMP-9/TIMP-1重新恢复动态平衡有关。

目的:探讨衰老相关肺纤维化与免疫功能的关系及细菌溶解产物对老年小鼠肺纤维化的影响。方法:24只老年健康雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(N组)、肺纤维化组(M组)、肺纤维化＋细菌溶解产物干预组(P组)，M、P组于气管内注射博来霉素(5 mg/kg)建立小鼠肺纤维化模型，N组注射生理盐水，P组建模后经口注入细菌溶解产物0.4 ml，1次/d，造模28 d后取肺组织和血液。通过苏木精-伊红(HE)和马松三色(Masson)染色检测小鼠肺组织病理变化并进行Ashcroft评分，免疫组化检测肺组织CD4＋、CD8＋表达，酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测小鼠血清干扰素-γ(INF-γ)、白细胞介素-13(IL-13)和免疫球蛋白A(IgA)蛋白含量，实时定量反转聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测肺组织INF-γ、IL-13 mRNA的含量，蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测肺组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和组织型金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)蛋白表达水平。结果:P组小鼠在细菌溶解产物干预下肺纤维化程度较M组明显减轻；与N组比较，M组CD4＋T细胞表达明显减少，CD8＋T细胞表达明显增加( P<0.05)，IgA含量减少( P<0.05)；与M组比较，P组CD4＋T细胞表达明显增加，CD8＋T细胞表达明显减少( P<0.05)，IgA含量升高( P<0.05)；细菌溶解产物干预后，IFN-γ的mRNA和蛋白表达水平升高( P<0.05)，而IL-13的mRNA和蛋白表达水平降低( P<0.05)；与N组相比，M组MMP-9和TIMP-1的蛋白表达显著上调( P<0.05)，细菌溶解产物干预后MMP-9和TIMP-1蛋白表达降低( P<0.05)。 结论:免疫机制参与了肺纤维化的形成，细菌溶解产物可以通过调节机体的免疫平衡状态，从而在一定程度上减轻博来霉素诱导的老年小鼠肺纤维化。

目的:研究大鼠百草枯（paraquat，PQ）中毒后不同时期输注骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSC）治疗肺纤维化的疗效并探讨可能的机制。方法:于2018年10至12月，采用全骨髓贴壁培养法分离、提纯SPF级SD大鼠的BMSC培养至第三代（P3）。对P3 BMSC进行表面抗原CD29、CD90、CD45、CD34检测并进行成骨和成脂诱导分化培养，分别以碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、茜素红染色和油红O染色观察ALP、钙结节和脂肪滴形成情况。随机选择36只SPF级SD雄性大鼠随机分成6组，分别是空白对照组（NC组，注射等量的生理盐水），百草枯模型组（PQ组，腹腔注射20%PQ溶液18 mg/kg），BMSC-A组、BMSC-B组、BMSC-C组和BMSC-D组（分别于PQ染毒后3 h、3 d、7 d和14 d注射BMSC悬浮液1×10 6 cells/只）。28 d后处死，计算各组大鼠的肺脏器系数，碱水解法计算肺组织中羟脯氨酸（hydroxyproline，HYP）含量，HE染色及Masson染色观察肺损伤及肺纤维化情况，ELISA法检测血清中转化生长因子β1（TGF-β1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）等细胞因子的水平。 结果:成功分离并获得高纯度BMSC，P3 BMSC阳性表达CD29、CD90，阴性表达CD34、CD45，并具有成骨、成脂分化潜能。HE染色和Masson染色显示，NC组大鼠肺泡结构完整，均匀；PQ组肺泡结构严重破坏，大量的胶原纤维和成纤维细胞沉积；与PQ组比较，各BMSC组肺损伤程度明显减轻，以BMSC-A组和BMSC-B组减轻程度明显。与NC组比较，PQ组大鼠的肺脏器系数、肺组织中HYP含量及血清中的TGF-β1及TIMP-1水平增高，差异均有统计学意义（ P<0.05），而TNF-α、MMP-9差异无统计学意义（ P>0.05）；与PQ组比较，BMSCA、B组的肺脏器系数、血清中TGF-β1、TIMP-1降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与PQ组比较，BMSC-C、BMSC-D组的肺脏各系数血清中TGF-β1、TIMP-1降低，差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:早期注射BMSC对于减缓百草枯导致的肺纤维化效果更好，其机制可能是BMSC通过降低体内TGF-β1水平，调节TIMP-1/MMP-9的平衡，进而减轻炎症损伤、增加细胞外基质的降解而减轻肺纤维化。

目的 探讨益气活血通脉颗粒治疗调控小胶质细胞表达MMP-9与TIMP1蛋白介导脑缺血再灌注损伤的作用机制.方法 采用BV2小胶质细胞进行氧糖剥夺和复氧实验,设置模型组、空白组、MMP-9 siRNA组、益气活血通脉颗粒组、MMP-9 siRNA+益气活血通脉颗粒组.除空白组外,其余4组均置于氧糖剥夺罐进行氧糖剥夺/复氧实验.CCK8检测各组细胞增殖能力.Western blot检测各组小胶质细胞中MMP-9与TIMP1蛋白表达水平.结果 与空白组比较,模型组小胶质细胞存活率明显降低(P<0.01),与模型组比较,MMP-9 siRNA组、益气活血通脉颗粒组与MMP-9 siRNA+益气活血通脉颗粒组小胶质细胞存活率升高(P<0.05或P<0.01).与空白组比较,模型组小胶质细胞MMP-9蛋白表达水平升高(P<0.01),TIMP1蛋白表达水平降低(P<0.01),MMP-9 siRNA组、益气活血通脉颗粒组与MMP-9 siRNA+益气活血通脉颗粒组MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01),TIMP1蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01).结论 益气活血通脉颗粒能够调节MMP-9/TIMP1平衡,有助于抵抗缺氧复氧导致的小胶质细胞损伤.

目的 探讨补肾活血方(巴戟天、菟丝子、沙苑子、党参、茯苓等)对肾虚血瘀型子宫内膜增生症(Endometrial hyperplasia,EH)大鼠的作用及机制.方法 将 90 只SD大鼠随机分为正常组、模型组、米非司酮组(12 mg·kg-1)及补肾活血方低、中、高剂量组(1.2、2.4、4.8 g·kg-1),每组 15 只.采用灌胃羟基脲及戊酸雌二醇,联合尾静脉注射高分子右旋糖苷法复制肾虚血瘀型EH大鼠模型.造模成功后,各组按照设定剂量灌胃给药,每日 1 次,连续 21 d.实验结束后,采用生化法检测各组大鼠血清环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、皮质醇(CORT)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH)的水平以及全血黏度、血液流变学、凝血功能等指标;ELISA法检测血清雌激素(E2)、卵泡雌激素(FSH)、黄体生成素(LH)、一氧化氮(NO)、内皮素 1(ET-1)的水平;HE染色法观察子宫内膜组织病理形态变化,并测量子宫内膜厚度;免疫组化法检测子宫内膜组织中基质金属蛋白酶 9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制物 1(TIMP-1)蛋白表达水平;Western Blot法检测子宫内膜组织中MMP-9、TIMP-1、B细胞淋巴瘤 2(Bcl-2)、Bcl-2 相关X蛋白(Bax)、第 10 号染色体缺失性磷酸酶-张力蛋白同源物基因(PTEN)蛋白表达水平.结果 与正常组比较,模型组大鼠血清CORT、ACTH、cAMP、T3、T4、TSH、ET-1 水平及ET-1/NO比值均明显降低(P＜0.05,P＜0.01),cGMP、E2、FSH、LH、NO水平均明显升高(P＜0.05,P＜0.01);血液流变学各项指标及纤维蛋白原(FIB)含量均明显升高(P＜0.05),凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)均明显延长(P＜0.05);子宫指数及子宫内膜厚度显著升高(P＜0.01);子宫内膜组织MMP-9、Bcl-2蛋白表达显著上调(P＜0.01),TIMP-1、PTEN、Bax蛋白表达显著下调(P＜0.01).与模型组比较,补肾活血方组大鼠血清CORT、ACTH、cAMP、T3、T4、TSH、ET-1 水平及ET-1/NO比值均明显升高(P＜0.05,P＜0.01);cGMP、E2、FSH、LH、NO水平均明显降低(P＜0.05,P＜0.01);血液流变学各项指标及FIB含量均明显降低(P＜0.05,P＜0.01),TT、PT、APTT均明显缩短(P＜0.05);子宫指数及子宫内膜厚度均明显降低(P＜0.05,P＜0.01);子宫内膜组织MMP-9、Bcl-2 蛋白表达显著下调(P＜0.05,P＜0.01),TIMP-1、PTEN、Bax蛋白表达显著上调(P＜0.05,P＜0.01).结论 补肾活血方能够改善肾虚血瘀型EH大鼠的症状和体征,保护子宫内膜血管内皮功能,以缓解子宫内膜增生,其作用机制与恢复MMP-9/TIMP-1 平衡,上调Bax、PTEN表达,抑制Bcl-2 表达有关.

目的:基于高效液相色谱法和体外实验探究红景天-鬼箭羽药对(下称"天羽"药对)抗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的配伍规律及作用机制.方法:通过高效液相色谱法测定"天羽"药对的单煎液以及不同配伍比例的合煎液(2∶1,1∶1,1∶2)中红景天苷的含量.通过体外实验CCK-8、PCR和Western Blot法检测肿瘤坏死因子α诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(human fibroblast-like synoviocyte rheumatoid arthritis,HFLS-RA)增殖、mRNA及蛋白表达.结果:"天羽"药对不同配伍比例(2∶1,1∶1,1∶2)的合煎液中红景天苷的含量均高于红景天单煎液,且配伍比例为1∶1时红景天苷的含量最高.CCK-8实验结果表明,"天羽"药对可对HFLS-RA细胞的增殖起到抑制作用.PCR和Western blot实验结果表明,"天羽"药对可显著降低HFLS-RA细胞中p-PI3K、p-AKT、MMP1、MMP3和MMP9 mRNA和蛋白的表达,增加TIMP1 mRNA和蛋白表达.结论:"天羽"药对可有效抑制HFLS-RA细胞增殖,其最佳的配伍比例为1∶1,作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路,进而调节MMPs/TIMPs平衡有关.

目的 真武汤在治疗慢性心力衰竭(Heart Failure,HF)过程中能够改善心律失常,旨在从p38-MAPK通路调控肥大心肌结构重构和电重构角度探讨真武汤治疗HF相关心律失常的作用机制.方法 用Ang Ⅱ诱导H9c2心肌细胞构建心肌肥大模型,实验共分6组:正常组(N),模型组(M)和真武汤低剂量组(D)、中剂量组(Z)、高剂量组(G)及抑制剂组(S).正常组(N)用含有胎牛血清的高糖培养基培养,模型组(M)用含有10-6mol/L浓度的血管紧张素Ⅱ(Angio-tensin Ⅱ,Ang Ⅱ)培养基处理,低(D)、中(Z)、高(G)剂量组分别予2％、4％、8％体积分数的真武汤含药血清及Ang Ⅱ培养基共同处理,抑制剂组(S)用含有p38MAPK抑制剂SB203580的培养基处理.处理48 h后,镜下观察各组心肌细胞的生长情况,通过酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)法测心肌肥大标志物ANP的含量,用β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老情况,采用Western blot法检测各组心肌细胞缝隙连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)、p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38 Mitogen-ctivated Protein Kinase,p38-MAPK)、基质金属蛋白酶 2(Matrix Metalloproteinase 2,MMP2)、基金金属蛋白酶 9(Matrix Metalloproteinase 9,MMP9)、金属蛋白酶组织抑制剂(Tissue Inhibitor of Metalloprotei-nase1,TIMP1)、p53蛋白的表达情况,采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)定量分析各组心肌细胞ANP、Cx43、p-Cx43、p38-MAPK、MMP2、MMP9、TIMP1的mRNA转录水平,免疫荧光检测Cx43蛋白的表达和分布情况.结果 高剂量的真武汤能够减轻肥大心肌细胞的表面积,中低剂量无明显效果;真武汤能够降低心肌肥大标志物ANP及其mRNA的水平,且其效果与剂量呈正相关;真武汤能改善肥大细胞的衰老情况,效果与抑制剂相似;真武汤能够降低肥大心肌细胞 Cx43、p38-MAPK、MMP2、MMP9、p53、p-Cx43 蛋白的表达水平及 Cx43、p38-MAPK、MMP2、MMP9的mRNA转录水平,且能够增加TIMP1的表达水平及其mRNA转录水平,效果与剂量有关;真武汤能够缓解肥大细胞表面Cx43的分布紊乱及减少该蛋白在细胞侧-侧移位分布.结论 真武汤可能通过p38信号通路调控心肌肥大细胞的衰老和纤维化,调节细胞外基质的代谢平衡,维持心肌细胞上Cx43数量、磷酸化水平和分布定位,改善缝隙连接重构,实现对HF心肌结构重构和电重构的统一调节,达到治疗心力衰竭及相关心律失常的目的.

[目的]探究补肾祛瘀法对中、重度宫腔粘连的抗纤维化作用及经血中细胞外基质降解相关因子的影响.[方法]将124例肾虚血瘀证中、重度宫腔粘连并拟行宫腔镜宫腔粘连分离术(TCRA)的患者随机分为研究组和对照组,每组各62例.2组患者均给予TCRA治疗,对照组术后给予黄体酮+戊酸雌二醇片治疗,研究组在对照组的基础上联合补肾祛瘀方(以归肾汤加减)治疗,共治疗3个月经周期.观察2组患者治疗前后月经情况、阴道彩色多普勒超声检查指标、肾虚血瘀证评分和宫腔粘连评分的变化情况,检测2组患者治疗前后的血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板源性生长因子(PDGF)、结缔组织生长因子(CTGF)以及基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA、基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)mRNA、磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)mRNA、Ⅰ型胶原A1蛋白(COL1A1)mRNA的表达水平,并评估2组患者的临床疗效和安全性.[结果](1)疗效方面:治疗3个月经周期后,研究组患者的总有效率为93.55%(58/62),对照组为80.65%(50/62),组间比较,研究组的疗效明显优于对照组(P＜0.05).(2)月经情况方面,治疗后,2组患者的月经经量、周期、经期均较治疗前明显改善(P＜0.05),且研究组患者治疗后的月经经量、周期、经期的恢复情况均明显优于对照组(P＜0.05).(3)阴道彩色多普勒超声检查方面,治疗后,2组患者的子宫血流指数(FI)、搏动指数(PI)、阻力指数(RI)、宫腔容积、子宫内膜厚度等均较治疗前明显改善(P＜0.05),其中,研究组患者治疗后的FI、宫腔容积、子宫内膜厚度均明显高于对照组,PI、RI均明显低于对照组(P＜0.05或P＜0.01).(4)宫腔粘连评分和肾虚血瘀证评分方面,治疗后,2组患者的宫腔粘连评分和肾虚血瘀证评分均较治疗前明显下降(P＜0.05),且研究组患者治疗后的宫腔粘连评分和肾虚血瘀证评分均明显低于对照组(P＜0.01).(5)相关因子表达方面,治疗后,2组患者的VEGF、TGF-β1、PDGF、CTGF水平均较治疗前明显下降(P＜0.05),且研究组患者治疗后的VEGF、TGF-β1、PDGF、CTGF水平均明显低于对照组(P＜0.01).(6)相关蛋白基因表达方面,治疗后,2组患者经血中MMP-9、PI3K mRNA相对表达量均较治疗前明显上升(P＜0.05),COL1A1 mRNA相对表达量均较治疗前明显下降(P＜0.05),其中研究组患者治疗后经血中MMP-9、PI3K mRNA相对表达明显高于对照组(P＜0.05或P＜0.01).(7)安全性方面,对照组的不良反应总发生率为25.81%(16/62),研究组为16.13%(10/62);组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05),且经对症处理后,2组患者的不良反应症状均消失,同时研究过程中未见与服用中药相关的不良反应.[结论]补肾祛瘀方联合西药治疗宫腔粘连TCRA术后患者较单用西药治疗效果更佳,加用补肾祛瘀方可进一步促进患者月经恢复,改善子宫内膜血流循环,增加子宫内膜厚度,调节患者体内纤维化因子表达,并可上调PI3K、MMP-9 mRNA表达,恢复患者细胞外基质(ECM)平衡,预防宫腔再粘连,且临床使用安全.

目的 观察推拿法对家兔骨骼肌钝挫伤后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)以及Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)表达的影响,探讨推拿法对骨骼肌钝挫伤的修复作用机制.方法 将15 只健康成年新西兰兔随机分为空白组、模型组和推拿法组,每组5 只.使用自制改良重力锤打击装置对模型组和推拿法组家兔建立骨骼肌钝挫伤模型.推拿法组家兔于造模成功后第7 天给予法干预,滚动频率 140次/min,2 次/d,3 min/次,连续干预3d.干预结束后第3 天进行取材,HE和Masson染色观察股四头肌病理形态,Western blot法检测股四头肌组织中MMP-9、TIMP-1、TGF-β1、COL-Ⅰ表达情况.结果 HE染色显示,模型组肌细胞形态大小不均,细胞边界模糊,间隙显著增宽,结缔组织增多,炎细胞浸润明显;推拿法组肌细胞结构相对完整,见少量炎细胞浸润,结缔组织减少.Masson染色显示,模型组肌纤维形态多样且不规整,间隙增宽,部分肌纤维融合成片状,胶原纤维沉积明显;推拿法组肌纤维结构、形态变化及胶原纤维增生程度均明显轻于模型组.模型组家兔股四头肌组织中 MMP-9、TIMP-1、TGF-β1、COL-Ⅰ蛋白相对表达量均明显高于空白组(P 均<0.05),推拿法组家兔股四头肌组织中MMP-9、TIMP-1、TGF-β1、COL-Ⅰ蛋白相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05).结论 推拿法能通过下调MMP-9、TIMP-1、TGF-β1、COL-Ⅰ的表达,抑制胶原蛋白沉积,调控细胞外基质的生降平衡,进而抑制骨骼肌纤维化,促进骨骼肌损伤修复.

目的 观察补肺活血颗粒治疗慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)稳定期的临床疗效并探讨其作用机制.方法 选取2019 年 1 月—2021 年 10 月期间在上海市宝山区中西医结合医院门诊及住院部的76 例COPD稳定期患者为研究对象,按随机、对照、双盲的研究方法分为对照组和治疗组,每组各38 例.对照组予以沙美特罗替卡松+安慰剂治疗,治疗组予以沙美特罗替卡松+补肺活血颗粒治疗.治疗 8 周后,观察比较两组患者临床疗效、不良反应,治疗前后第 1 秒用力呼气容积(Forced Expiratory Volume in the first second,FEV1)、用力肺活量(Forced Vital Capacity,FVC)、FEV1/FVC比值、中医证候积分、慢性阻塞性肺疾病评估测试(COPD assessment test,CAT)评分、基质金属蛋白酶-9(Matrix Metalloproteinase-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-1,TIMP-1)、MMP-9/TIMP-1 比值水平.结果 治疗后治疗组总有效率 84.2%(32/38)高于对照组总有效率60.5%(23/38),差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后两组患者中医证候积分及CAT评分均较治疗前降低,差异有统计学意义(P＜0.05).且治疗组低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后治疗组FVC、FEV1、FEV1/FVC均较治疗前升高,差异有统计学意义(P＜0.05);且治疗组FVC、FEV1、FEV1/FVC均较对照组同期升高,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后两组患者 MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1 水平较治疗前降低,差异有统计学意义(P＜0.05);且治疗组低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).两组患者治疗期间均未发生严重不良反应.结论 补肺活血颗粒可减轻COPD稳定期患者临床症状,改善肺功能,调节基质金属蛋白酶平衡,抑制气道重塑,临床疗效显著,且安全可靠.