目的:探讨小窝蛋白1（Cav1）对棕榈酸作用下的胰岛β细胞存活的影响。方法:通过慢病毒载体构建Cav1沉默的小鼠胰岛素瘤NIT-1细胞株和小鼠原代胰岛（Cav1-shRNA组），以空载体病毒组作为对照组（Ctrl-shRNA），并设空白对照组，各组均分别加入脱脂牛血清白蛋白和棕榈酸（0.5 mmol/L）处理24 h及48 h，通过四甲基偶氮唑蓝比色法及Hoechst33342/碘化丙啶（PI）双染色法检测细胞活性及细胞凋亡，实时荧光定量PCR、Western blot检测凋亡相关的mRNA及蛋白表达水平。结果采用 t检验和单因素方差分析法进行统计学分析。 结果:与对照组比较，棕榈酸处理组的细胞存活率显著下降（0.89±0.10比0.24±0.04， t=13.49， P<0.01），P18、P19的mRNA和蛋白表达均上调（1.00±0.09比1.30±0.04、1.00±0.04比1.37±0.13， t=5.28、4.71，均 P<0.05；0.87±0.04比1.48±0.05、1.02±0.06比1.41±0.07， t=16.50、7.33，均 P<0.01）；含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）-6、Caspase-9和Caspase-12的mRNA表达水平明显上调（1.00±0.04比1.57±0.08、1.01±0.15比1.57±0.20、1.02±0.19比1.57±0.09， t=11.04、3.88、4.53，均 P<0.05），蛋白表达也明显上调（0.86±0.10比1.28±0.11、0.69±0.01比0.86±0.06、0.70±0.02比1.18±0.01， t=4.89、4.84、37.18，均 P<0.01）。而Cav1-shRNA+棕榈酸组细胞存活率较Ctrl-shRNA+棕榈酸组显著上升（0.53±0.10比0.26±0.08， t=4.71， P<0.01），P19的mRNA和蛋白表达均下调（1.53±0.18比0.66±0.04、1.48±0.05比0.70±0.02， t=8.17、25.09，均 P<0.01）；Caspase-6、Caspase-7、Caspase-9和Caspase-12的mRNA表达水平下调（1.82±0.11比1.03±0.07、1.43±0.24比0.42±0.15、1.41±0.22比0.51±0.18、1.45±0.18比0.42±0.13， t=5.48~10.49，均 P<0.01），蛋白表达也下调（0.99±0.14比0.63±0.11、0.90±0.14比0.62±0.04、0.90±0.02比0.60±0.04、1.30±0.01比0.65±0.04， t=3.50~27.31，均 P<0.01）。 结论:Cav1沉默可以通过影响胰岛β细胞Caspase家族，促进其增殖、减少棕榈酸作用下的β细胞凋亡，保护脂毒性下胰岛β细胞活性。

目的:探讨缺氧条件下胰岛中5-羟色胺的表达水平及其调节机制。方法:将体外培养的人胰岛分为对照组和氯化钴（CoCl 2）处理组，每组设置3个平行组，通过免疫荧光染色检测人胰岛中的5-羟色胺表达水平。将β细胞系NIT-1细胞分为7组：对照组、CoCl 2处理组、缺氧（1% O 2）组、缺氧诱导因子1α（Hif1α）激活剂二甲基乙二酰氨基乙酸（DMOG）组、小干扰RNA对照（sictrl）组、sictrl+CoCl 2组、siHif1α+CoCl 2组，每组设置3个平行组。通过实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western blotting检测5-羟色胺合成限速酶色氨酸羟化酶（Tph1）的表达水平。组间比较采用独立样本 t检验。 结果:在人胰岛中，与对照组相比，CoCl 2处理组5-羟色胺的表达水平显著降低（ P<0.001）。在NIT-1细胞中，与对照组相比，CoCl 2处理和缺氧处理（1% O 2）均显著抑制Tph1表达（ P<0.05），且Hif1α激活剂DMOG提高Hif1α表达（ P<0.05），同时显著抑制Tph1表达（ P<0.05）；与siCtrl组相比，siCtrl+CoCl 2组Tph1表达显著下调（ P<0.05），而siHif1α+CoCl 2组较siCtrl+CoCl 2组Tph1表达显著上调（ P<0.05）。 结论:在缺氧条件下，Hif1α抑制Tph1的表达，从而降低胰岛中5-羟色胺的表达水平。

目的:分析恒压灌注下微通道经皮肾镜碎石术(MPCNL)后并发尿源性脓毒血症的相关危险因素，并建立logistic回归预测模型。方法:回顾性分析2018年12月至2020年12月期间在本院行恒压灌注下MPCNL治疗的56例上尿路结石患者的临床资料，以术后发生尿源性脓毒血症的患者为病例组(26例)，采用巢式病例对照研究方法，以1∶5的比例匹配同期对照组(130例)。采用单因素及多因素logistic回归分析筛选恒压灌注下MPCNL术后尿源性脓毒血症发生的危险因素，建立logistic回归预测模型，用Bootstrap再抽样法(1 000次)进行模型内部验证。采用Hosmer-Lemeshow检验对所建立的预测模型的拟合优度进行评估，采用受试者工作特征(ROC)曲线下面积对该模型的预测效能进行评定。结果:单因素分析结果表明：性别、泌尿系结石手术史、肾积水、术前尿白细胞(WBC)≥2+、术前尿亚硝酸盐(NIT)阳性、术前血中性粒细胞与淋巴细胞比例(NLR)≥2.5与恒压灌注下MPCNL术后尿源性脓毒血症的发生均有相关性(均 P<0.05)；多因素logistic回归分析结果显示：女性( OR＝3.145， P＝0.030)、术前尿WBC≥2+( OR＝2.970， P＝0.047)、术前尿NIT阳性( OR＝14.190， P<0.001)、术前血NLR≥2.5( OR＝4.302， P＝0.008)是恒压灌注下MPCNL患者术后发生尿源性脓毒血症的独立危险因素；Bootstrap方法得出的独立危险因素及 OR值与多因素回归分析相同，提示多因素logistic回归分析得出的独立危险因素及OR值具有可重复性。将多因素logistic回归分析中差异统计学意义的变量进入回归方程，获得的预测模型为 P＝1/1+EXP(－3.612+ 1.146×X1+1.088×X10+2.653×X11+1.459×X13)。Hosmer-Lemshow拟合优度检验提该预测模型拟合度为优度( χ2＝1.565， P＝0.667)，ROC曲线下面积为0.827(95% CI：0.732~0.922， P<0.001)。 结论:女性、术前尿WBC(≥2+)、术前尿NIT(阳性)、术前血NLR(≥2.5)是恒压灌注下MPCNL术后尿脓毒血症发生的独立危险因素，据此所建立的预测模型有一定的风险评估价值。

目的:探讨尿肝素结合蛋白(U-HBP)、尿白细胞介素6(U-IL-6)及尿白细胞计数(U-WBC)辅助诊断细菌性尿路感染(UTI)的临床效能差异。方法:回顾性分析济宁市中医院2017年1月至2019年1月收治的314例细菌性UTI患者(UTI组)、122例非细菌性UTI患者(非UTI组)及80例体检健康者(健康组)的临床资料，比较三组的性别、年龄、U-HBP、U-IL-6、U-WBC、尿白细胞酯酶(U-LE)及尿亚硝酸盐(U-NIT)水平，采用受试者工作特征(ROC)曲线评价U-HBP、U-IL-6及U-WBC的诊断效能，计算最佳cut-off值。结果:①三组患者的U-HBP、U-WBC、U-LE及U-NIT水平比较，差异均有统计学意义( P<0.05)；三组U-IL-6水平比较，差异无统计学意义( P>0.05)；其中UTI组的U-HBP和U-WBC水平显著高于非UTI组、健康组( P<0.05)；②ROC曲线分析结果显示，U-HBP用于细菌性UTI的诊断准确性最高，且特异度和灵敏度良好，最佳cut-off值为65.28 ng/mL，总体诊断效能优于U-WBC、U-IL-6( P<0.05)。 结论:U-HBP用于细菌性UTI辅助诊断具有良好效能，同时不推荐将U-IL-6作为实验室诊断指标。

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)通过自分泌运动因子(ATX)/溶血磷脂酸(LPA)信号对糖稳态的损伤作用及相关机制.方法 利用基因芯片数据库分析HBV对ATX表达的影响.Western blotting检测HBV细胞株HepG2215、稳定表达HBV反式调节蛋白HBx和PreS2的HBx-HepG2和PreS2-HepG2细胞、对照组HepG2细胞的ATX蛋白表达水平.双萤光素酶报告基因检测HBx和PreS2对ATX启动子作用.构建稳定表达HBx和Pre-S2的小鼠分泌胰岛素细胞HBx-NIT、PreS2-NIT,检测两者对胰岛素分泌的影响.利用rAAV8-1.3HBV经尾静脉注射C57BL/6小鼠复制HBV小鼠模型,NC为注射同体积生理盐水的C57BL/6小鼠.小鼠按2 g/kg腹腔注射葡萄糖进行糖耐量试验(GTT).采用液相色谱-质谱联用法、酶联免疫吸附试验和血糖分析仪分别检测小鼠血清LPA、血清胰岛素和血糖浓度.结果 HepG2215细胞ATX蛋白相对表达量高于HepG2(P＜0.05).PreS2与ATX启动子共转染组萤光素酶活性高于ATX启动子转染组(P＜0.05),HBX与ATX启动子共转染组的萤光素酶活性高于ATX启动子转染组(P＜0.05).HBx-HepG2细胞ATX蛋白相对表达量高于HepG2细胞(P＜0.05),PreS2-HepG2细胞高于HepG2细胞(P＜0.05).添加不同浓度LPA后NIT细胞胰岛素分泌表达量比较,差异有统计学意义(P＜0.05).1～3 μmol/L LPA相对表达量与胰岛素分泌呈负相关(r=-0.990,P＜0.05).HBx-NIT细胞添加Ki16425前的胰岛素水平低于NIT细胞(P＜0.05),PreS2-NIT细胞低于NIT细胞(P＜0.05).NIT、HBx-NIT和PreS2-NIT细胞添加Ki16425后的胰岛素水平较添加前高(P＜0.05).实验组血清LPA相对表达量、平均空腹血糖浓度、注射葡萄糖后的60、120 min平均血糖浓度和血糖浓度曲线下面积(AUC)平均值较对照组高(P＜0.05).实验组注射葡萄糖后15 min血清胰岛素浓度、血清胰岛素水平的AUC值较对照组低(P＜0.05).用HBV小鼠GTT血糖AUC绘制的ROC曲线显示,曲线面积为 0.770(95％CI:0.556,0.984),特异性为 60.00％(95％CI:0.122,0.738),敏感性为 90.00％(95％CI:0.555,0.998).用HBV小鼠空腹血糖浓度绘制的ROC曲线显示,曲线面积为0.865(95％CI:0.703,1.027),特异性为80.00％(95％CI:0.444,0.975),敏感性为60.00％(95％CI:0.262,0.878).实验组胰岛β细胞功能指数、胰岛素敏感指数均小于对照组,胰岛素抵抗指数大于对照组(P＜0.05).结论 HBV反式调节蛋白HBx和Pre-S2上调ATX的表达,增强ATX/LPA信号,导致胰岛素分泌抑制,糖耐量异常,糖稳态受损.

目的 探讨肝细胞生长因子调节的酪氨酸激酶底物(HGS)对胰岛素表达和分泌的影响.方法 检测HGS,胰岛素和胰升血糖素在小鼠胰岛中的分布.检测不同浓度葡萄糖(5.5、11.1及16.7 mmol/L)培养24 h后NIT-1细胞HGS表达水平和胰岛素的分泌.观察siRNA沉默 HGS表达后48 h NIT-1细胞胰岛素的表达和分泌的变化. 结果 HGS免疫阳性细胞特异性分布于小鼠胰腺的胰岛,并与胰岛素共定位于胰岛β细胞中,未见 HGS和胰高血糖素阳性荧光双标细胞.不同浓度葡萄糖培养NIT-1细胞24 h,5.5 mmol/L组为(25.07 ± 0.93)μIU/mg,11.1 mmol/L组为(32.28 ± 0.93)μIU/mg, 16.7 mmol/L组为(41.77 ± 1.39)μIU/mg,NIT-1细胞分泌胰岛素水平逐渐增加(P＜0.01).各组 HGS蛋白水平也随葡萄糖浓度增加而逐渐增加(P＜0.05).siRNA沉默HGS表达后NIT-1细胞内胰岛素的表达水平无明显变化,但胰岛素分泌水平减少(P＜0.05). 结论 HGS选择性表达于胰岛β细胞中,并调节胰岛素的分泌.

目的 探讨尿液肝素结合蛋白(U-HBP)浓度对尿路感染(UTI)的诊断价值及临床意义.方法 病例对照研究.收集2016年6月至12月期间复旦大学附属华山医院北院就诊的119例UTI患者、18例疑似UTI患者、58例非UTI患者、52名健康体检者的尿液标本.采用酶联免疫吸附法检测尿液中肝素结合蛋白(U-HBP)浓度;尿液细菌定量培养鉴定检测病原菌;尿干化学分析仪检测尿白细胞酯酶(U-LE)、尿亚硝酸盐(U-NIT)水平;尿液沉渣分析仪检测尿液白细胞计数(U-WBC)水平.各组总体水平差异采用Kruskal-Wallis H检验.两个独立样本的比较采用Mann-Whitney U检验.Spearman相关检验分析U-HBP、U-LE和U-WBC的相关性.应用ROC曲线分析法评价U-HBP、U-LE、U-NIT和U-WBC水平在UTI诊断中的价值.结果 UTI组、疑似UTI组、非UTI组和健康体检组之间的U-HBP、U-LE、U-NIT及U-WBC浓度水平差异有统计学意义(HU-HBP=166.73、HU-LE=126.88、HU-NIT=47.92及HU-WBC=144.05,P<0.05).U-HBP、U-LE、U-NIT和U-WBC水平诊断尿路感染的曲线下面积(AUC)分别为0.948、0.836、0.671和0.897.当U-HBP的浓度在69.20 ng/ml时,对UTI的诊断灵敏度及特异度分别为89.9%(107/119)和89.1%(114/128).当U-LE的水平在4+时,对UTI的诊断灵敏度及特异度分别为76.5%(91/119)和81.3%(104/128).当U-NIT的水平在1+时,对UTI的诊断灵敏度及特异度分别为36.1%(43/119)和97.7%(125/128).当U-WBC计数为233.6个/μl时,对UTI的诊断灵敏度及特异度分别为82.4%(98/119)和82.8%(106/128).U-WBC与U-HBP相关系数r=0.896(P<0.05),U-LE与U-HBP相关系数r=0.798(P<0.05).结论 U-HBP对尿路感染的诊断价值高于U-LE、U-NIT及U-WBC.U-HBP浓度有可能作为判断尿路感染的新型感染标志物.

背景:mTOR 复合物是调控胰岛 β 细胞质量与功能的关键蛋白,Deptor 是复合物中的共有组分,Deptor的丢失是否会影响胰岛β细胞的胰岛素分泌功能,目前尚缺乏相关研究.目的:利用siRNA干扰技术沉默小鼠胰岛素瘤NIT-1细胞DEPTOR基因的表达,探讨其对胰岛素瘤细胞分泌功能的影响及背后的机制.方法:设计合成3对针对DEPTOR 基因的siRNA序列,利用脂质体法将siRNA转染至NIT-1细胞.实验组设为6组:①空白转染组(NIT-1细胞,转染复合液仅加Lipofectamin);②阴性对照转染组(NC-FAM);③阳性对照转染组(GAPDH);④siRNA deptor 1组(脂质体介导的转染复合+siRNA deptor385);⑤siRNA deptor 2 组(脂质体介导的转染复合+siRNA deptor766);⑥siRNA deptor 3 组(脂质体介导的转染复合+siRNA deptor1275).荧光显微镜下观察转染效率;QPCR检测DEPTOR mRNA的相对表达量;ELISA胰岛素试剂盒检测NIT-1细胞胰岛素分泌情况;Western blot检测DEPTOR下游关键蛋白的表达.结果与结论:①在荧光显微镜下观察,siRNA能有效转入到NIT-1细胞内,呈绿色点状荧光;②PCR检测干扰后DEPTOR mRNA的相对表达量,发现设计合成3对siRNA序列中有两对siRNA序列(siDEPTOR385 and siDEPTOR766)对DEPTOR基因有干扰效果,干扰效果与阴性对照差异有显著性意义(P ＜ 0.05);③ELISA胰岛素测定结果显示,在NIT-1细胞中沉默DEPTOR后,有效转染组细胞的胰岛素分泌显著升高(P ＜ 0.05);④Western-blot检测结果显示,Deptor下游关键蛋白S6、4EBP-1磷酸化明显增加,AKT磷酸化略有减少;⑤结果说明,利用RNAi技术在NIT-1细胞上可以有效地沉默DEPTOR 基因的表达,并促进细胞胰岛素的分泌,该现象可能与mTORC1通路的激活相关.

目的 了解高糖、高脂环境对胰岛β细胞功能和Toll受体3(TLR3)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、补体C3及补体C4表达的影响.方法 培养小鼠胰岛β细胞株(NIT-1)经高糖高脂刺激后,应用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测TLR3 mRNA的表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中 TNF-α 、IL-1β 、IL-6 、CRP 、补体C3及补体C4的表达.结果 高糖高脂刺激后,胰岛β细胞增殖被抑制,TLR3 mRNA 、TNF-α 、IL-1β 、IL-6 、CRP 、补体C3及补体C4的表达明显增加;并且高糖高脂(GZ)组胰岛β细胞损伤和炎症因子过表达程度明显高于高糖(G)组和高脂(Z)组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 高糖高脂可能通过激活T LR3信号通路等途径产生大量炎症因子和免疫因子,抑制胰岛β细胞增殖,导致胰岛β细胞功能障碍,并且糖、脂协同作用明显大于单独的糖、脂毒性.

目的:研究蛇床子素在棕榈酸(PA)诱导下对于NIT-1细胞的保护作用.方法:将NIT-1细胞分为空白组、PA组、PA+蛇床子素组,培养3d后,置于流式细胞仪测定凋亡率,通过RT-PCR测定脂代谢相关基因PPARα、UCP-2和内质网应激相关基因CHOP及GRP78 mRNA的表达,并通过Western Blot测定凋亡相关蛋白Caspase3、Bax、Bcl-2和内质网应激相关蛋白eIF2α、p-eIF2α的表达.结果:蛇床子素能降低棕榈酸诱导的细胞凋亡率,增加PPARα、UCP-2 mRNA的表达,降低CHOP及GRP78 mRNA的表达.另外,蛇床子素能够使凋亡相关蛋白Caspase3、Bax的表达下降,抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白增加,并降低eIF-2α的磷酸化水平.结论:蛇床子素对棕榈酸诱导的NIT-1细胞损伤有保护作用,这种保护作用可能和PPARα和内质网应激通路有关.