目的:评价甲烷对脊髓缺血再灌注大鼠炎症反应时嘌呤能受体P2X配体门控离子通道7(P2X 7R)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路的影响。 方法:清洁级健康成年雄性SD大鼠54只，3月龄，体重350～380 g，采用随机数字表法分为3组( n＝18)：假手术组(S组)、脊髓缺血再灌注组(I/R组)和甲烷组(M组)。S组经右髂总动脉逆行置入Fogarty球囊套管至胸主动脉但不阻断缺血；I/R组采用阻断胸主动脉联合体循环低血压的方法诱导脊髓缺血9 min，然后恢复灌注，建立脊髓缺血再灌注损伤模型；M组于再灌注即刻腹腔注射10 ml/kg甲烷饱和生理盐水。于再灌注12、24和48 h时测定后肢运动-感觉障碍指数(MSDI)；于再灌注48 h时处死大鼠取L 3-5脊髓组织，采用尼氏染色和免疫荧光染色确定脊髓前角和后角正常神经元数量、活化小胶质细胞数量及其表达P2X 7R、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、计caspase-1、IL-1β和IL-18的水平。 结果:与S组比较，I/R组再灌注12、24和48 h时后肢MSDI升高，再灌注48 h时脊髓前后角正常神经元计数减少，活化小胶质细胞计数增加，P2X 7R、NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β和IL-18表达上调( P<0.01)；与I/R组比较，M组再灌注各时点后肢MSDI降低，再灌注48 h时脊髓前后角正常神经元计数增加，活化小胶质细胞计数减少，P2X 7R、NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β和IL-18表达下调( P<0.05)。 结论:甲烷减轻脊髓缺血再灌注大鼠炎症反应的机制与抑制P2X 7R/NLRP3信号通路有关。

目的:评价甲泼尼龙减轻大鼠呼吸机相关性肺损伤(VILI)机制与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 (NLRP3)通路的关系。方法:清洁级雄性SD大鼠60只，体重270~320 g，4~5月龄，采用随机数字表法分为3组( n＝20)：对照组(C组)、机械通气组(V组)和甲泼尼龙组(M组)。C组不行机械通气，自主呼吸空气4 h；V组机械通气(RR 40次/min，V T 40 ml/kg，I∶E 1∶1，PEEP 0，FiO 2 21%)4 h；M组机械通气前20 min静脉注射甲泼尼龙10 mg/kg。机械通气4 h时，收集肺泡支气管灌洗液(BALF)和肺组织，测定BALF IL-1β、IL-18、TNF-α浓度与肺湿重/干重(W/D)比值，观察肺组织病理学结果。Western blot法检测肺组织p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)的表达水平。 结果:与C组比较，V组肺组织W/D比值、BALF IL-1β、IL-18和TNF-α浓度升高，p-p38MAPK、NLRP3、ASC和caspase-1表达上调( P<0.05)，M组差异无统计学意义( P>0.05)；与V组比较，M组肺组织W/D比值、BALF IL-1β、IL-18和TNF-α浓度降低，p-p38MAPK、NLRP3、ASC和caspase-1表达下调( P<0.05)。 结论:甲泼尼龙减轻大鼠VILI的机制可能与抑制p38MAPK/NLRP3通路活性，减轻肺组织炎症反应有关。

目的:观察卡格列净（canagliflozin，Cana）干预治疗高糖诱导人足细胞（human podocyte，HPC）损伤的疗效，并探讨其相关机制。方法:将HPC设为5组：正常组（normal glucose group，NG组）、甘露醇组（mannitol group，MA组）、高糖组（high glucose，HG组）、Cana低剂量（0.3 μmol/L）组、Cana高剂量（1.0 μmol/L）组。Western印迹法检测膜相关反向鸟苷酸激酶2（membrane-associated guanylate kinase inverted-2，MAGI2）、足细胞相关蛋白nephrin、钠-葡萄糖转运蛋白2（sodium-glucose transporter 2，SGLT2）及NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3）、凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD，ASC）、裂解半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（cleaved-caspase1）表达。鬼笔环肽（phalloidin）染色观察HPC骨架变化。2'，7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯（2'，7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate，DCFH-DA）检测细胞活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平。酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测细胞上清中炎性因子白细胞介素（interleukin，IL）-18、IL-1β含量。结果:（1）与NG组比较，HG组MAGI2、nephrin表达水平较低（均 P<0.01），SGLT2表达较高（ P<0.01）；足细胞形态变化及细胞骨架重构显著；细胞ROS水平较高（ P<0.01）；NLRP3、ASC、cleaved-caspase1表达较高（均 P<0.01）；细胞上清中IL-18、IL-1β浓度较高（均 P<0.05）。（2）与HG组比较，Cana组MAGI2、nephrin表达升高（均 P<0.01）；细胞形态变化及细胞骨架重构减轻；SGLT2表达下调（ P<0.05）；细胞ROS水平下调；NLRP3、ASC、cleaved-caspase1表达下调（ P<0.01）；上清中IL-18、IL-1β浓度下调（均 P<0.05）。 结论:卡格列净能有效减轻高糖诱导的HPC损伤及炎性反应，其机制可能与抑制ROS/NLRP3信号通路相关。

目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白（hepatitis B virus X protein，HBx）是否通过调控活性氧（reactive oxygen species，ROS）/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3）信号通路引起足细胞焦亡。方法:采用小鼠肾足细胞过表达 HBx基因来模拟乙型肝炎相关性肾炎的发病机制。将足细胞分为以下5组：空白对照组（不予特殊处理）、阴性对照组（转染对照慢病毒）、HBx过表达组（转染HBx过表达慢病毒）、HBx过表达+NLRP3 siRNA组（共转染HBx过表达慢病毒和NLRP3 siRNA）、HBx过表达+ROS抑制剂组（转染HBx过表达慢病毒和添加ROS抑制剂）。电镜下观察足细胞的形态学改变；二氯二氢荧光素二乙酸酯（dichlorodihydrofluorescein diacetate assay，DCFH-DA）法检测ROS的生成；Hoechst 33342染色观察足细胞细胞核的形态和数量变化；酶联免疫吸附测定试验分别检测胱天蛋白酶1（Caspase-1）酶活性、乳酸脱氢酶、白细胞介素（IL）-1β和IL-18水平；实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测细胞焦亡相关蛋白如NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA和蛋白水平的表达；TUNEL染色和流式细胞术检测焦亡细胞数量；免疫荧光染色检测Desmin和Nephrin的表达。 结果:HBx过表达慢病毒成功感染足细胞后，电镜下观察到细胞发生焦亡相关形态学改变；与阴性对照组相比，HBx过表达组ROS水平显著升高（ P<0.05）；Hoechst 33342染色发现HBx过表达后细胞核浓缩；TUNEL染色和流式细胞术证明HBx过表达后足细胞发生了焦亡；焦亡相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA和蛋白表达显著上调（均 P<0.05）；Caspase-1酶活性、乳酸脱氢酶和Desmin表达水平升高（均 P<0.05）。而 NLRP3敲低或ROS抑制减弱了HBx过表达引起的足细胞焦亡以及相关蛋白表达增加（均 P<0.05）。 结论:ROS/NLRP3通路在HBx过表达引起的足细胞焦亡中起着重要作用。

目的:探究 IKBKB 基因在胃癌细胞中的表达水平与 NLRC5、NF-κB 的作用关系,明确其对胃癌细胞生物学功能影响.方法:采用 pLenti-IKBKB-sgRNA 基因敲除质粒直接对人胃癌 SGC-7901 细胞系进行转染,应用免疫印迹试验(western blot,WB)检测单克隆细胞株中IKBKB 基因敲除的效果,以及 NLRC5、NF-κB 的表达水平.划痕实验和Transwell 迁移实验检测单克隆细胞的迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期.成瘤实验观察单克隆细胞对瘤体生长的影响.在临床胃癌组织和癌旁组织中采用免疫组化染色评估NLRC5、NF-κB、IKBKB 的表达状态.明确 IKBKB 与 NLRC5、NF-κB 的相关性以及临床诊断价值.结果:敲除 IKBKB 基因后人胃癌 SGC-7901 细胞中 NLRC5、NF-κB 的表达水平显著降低,细胞迁移和侵袭能力减弱.细胞发生 G1 期阻滞,降低了 SGC-79013 细胞增殖能力,细胞总凋亡率显著上升.IKBKB 敲除后 NLRC5、NF-κB 表达水平下调影响瘤体的生长发育.NLRC5、NF-κB、IKBKB 在胃癌组织中表达水平高于癌旁组织,NLRC5、NF-κB 与 IKBKB 的表达水平呈正相关.IKBKB、NLRC5、NF-κB 三者联合诊断胃癌 AUC 为 0.921(0.876～0.967).结论:IKBKB 在胃癌细胞与NLRC5、NF-κB 存在相关作用关系,协同促进胃癌的发生和发展.

目的 分析子宫内膜癌患者NLR家族含CARD结构域5(NLRC5)表达与自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达的相关性,并探讨NLRC5、Beclin1、LC3与子宫内膜癌预后的相关性.方法 采集2020年1月—2022年1月安徽医科大学第二附属医院90例子宫内膜癌患者癌组织作为子宫内膜癌组,另取90例正常子宫内膜作为子宫内膜组.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定两组NLRC5、Beclin1、LC3 mRNA的表达.子宫内膜癌组患者术后接受12个月的随访,按照实体瘤疗效标准分为预后良好组(72例)与预后不良组(18例);比较两组NLRC5、Beclin1、LC3 mRNA的表达,采用多因素一般Logistic回归模型分析影响子宫内膜癌预后的因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析NLRC5、Beclin1、LC3对子宫内膜癌患者患者预后的预测价值.结果 子宫内膜癌组与正常子宫内膜组NLRC5、Beclin1和LC3 mRNA相对表达量的比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);子宫内膜癌组NLRC5 mRNA相对表达量较正常子宫内膜组低,Beclin1和LC3 mRNA相对表达量较正常子宫内膜组高.NLRC5与Beclin1(r =-0.565,P＜0.05)、LC3(r =-0.421,P＜0.05)呈负相关;Beclin1与LC3呈正相关(r =0.462,P＜0.05).预后良好、预后不良组的年龄、体质量指数、脉管浸润、肿瘤直径比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);预后不良组FIGO分期、宫体肌层深肌层占比、淋巴结转移、Beclin1、LC3 mRNA相对表达量高于预后良好组,NLRC5 mRNA相对表达量低于预后良好组(P＜0.05);FIGO分期Ⅱ、Ⅲ期[(OR) =3.760(95％CI:1.260,11.223)]、宫体肌层深肌层[(OR) =26.800(95％CI:7.043,101.984)]、有淋巴结转移[(OR) = 11.324(95％CI:3.286,39.019)]及Beclin1[(OR) =68.163(95％CI:2.537,1831.270)]、LC3高表达[(OR) =26.468(95％CI:1.444,485.127)]均是子宫内膜癌预后的危险因素(P＜0.05);NLRC5高表达[(OR) =0.001(95％CI:0.000,0.079)]为保护因素(P＜0.05);ROC曲线分析结果显示,NLRC5敏感性为82.8％(95％CI:0.784,0.923)、特异性为73.9％(95％CI:0.670,0.938);Beclin1敏感性为56.8％(95％CI:0.638,0.853)、特异性为77.8％(95％CI:0.644,0.877);LC3敏感性为57.3(95％CI:0.680,0.815)、特异性为72.2％(95％CI:0.693,0.824);联合敏感性为94.4％(95％CI:0.824,0.971)、特异性为62.5％(95％CI:0.593,0.778).结论 子宫内膜癌患者NLRC5呈低水平表达,NLRC5与自噬相关蛋白Beclin1、LC3呈负相关,3者联合检测可提高子宫内膜癌患者的预后预测价值.

目的 评价右美托咪定对胸部撞击-失血性休克复苏致大鼠急性肺损伤时NLRP3炎症小体的影响.方法 SPF级健康雄性SD大鼠45只,体重200～220 g,采用随机数字表法分为3组(n=15):假手术组(Sham组)、急性肺损伤组(ALI组)和右美托咪定组(Dex组).采用胸部撞击-失血性休克复苏的方法制备大鼠急性肺损伤模型.Dex组于胸部撞击后股静脉输注右美托咪定5μg·kg-1·h-1.于胸部撞击后6 h时经股动脉留取血标本检测大鼠动脉血氧分压并计算氧合指数;ELISA法检测血清IL-1β和IL-18的浓度.股动脉放血处死大鼠并留取肺组织,观察肺组织病理学结果并进行肺损伤评分;采用Western blot法检测NLRP3、caspase-1和ASC的表达;采用比色法测定LDH和MPO活性.结果 与Sham组比较,ALI组和Dex组PaO2和氧合指数降低,肺组织NLRP3、caspase-1和ASC表达上调,肺损伤评分、LDH和MPO活性、血清IL-1β和IL-18浓度升高(P＜0.05);与ALI组比较,Dex组PaO2和氧合指数升高,肺组织NLRP3、caspase-1和ASC表达下调,肺损伤评分、LDH和MPO活性、血清IL-1β和IL-18浓度降低(P＜0.05).结论 右美托咪定减轻胸部撞击-失血性休克复苏致大鼠急性肺损伤的机制与抑制NLRP3炎症小体激活,降低炎性反应有关.

模式识别受体(PRR)初始识别微生物感染和组织损伤相关分子模式进而介导一系列免疫应答反应是固有免疫的基本过程.目前生化研究确定了四种类型的PRR家族:Toll样受体(TLRs)、维甲酸诱导基因样受体(RLRs)、核苷酸寡聚化结构域(NOD)样受体(NLRs)和C型凝集素受体(CLRs).自2010年NLRC5被发现以来,研究已证实NLR含5个CARD结构域(NLRC5)是核受体,主要在人和动物的脑、肺、前列腺等组织中表达,并可调节NF-κB、IFN-Ⅰ信号通路及MHC-Ⅰ基因表达.近年研究发现,NLRC5在过敏性气道炎症、肺癌、肺损伤及呼吸道病毒感染等呼吸系统疾病的发病机制中起重要作用,成为探索呼吸系统疾病发病机制和治疗疾病研究的新位点.