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TRIM25 inhibits HBV replication by promoting HBx degradation and the RIG-I-mediated pgRNA recognition
编辑人员丨1周前
Background::The hepatitis B virus (HBV) vaccine has been efficiently used for decades. However, hepatocellular carcinoma caused by HBV is still prevalent globally. We previously reported that interferon (IFN)-induced tripartite motif-containing 25 (TRIM25) inhibited HBV replication by increasing the IFN expression, and this study aimed to further clarify the anti-HBV mechanism of TRIM25.Methods::The TRIM25-mediated degradation of hepatitis B virus X (HBx) protein was determined by detecting the expression of HBx in TRIM25-overexpressed or knocked-out HepG2 or HepG2-NTCP cells via Western blotting. Co-immunoprecipitation was performed to confirm the interaction between TRIM25 and HBx, and colocalization of TRIM25 and HBx was identified via immunofluorescence; HBV e-antigen and HBV surface antigen were qualified by using an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kit from Kehua Biotech. TRIM25 mRNA, pregenomic RNA (pgRNA), and HBV DNA were detected by quantitative real-time polymerase chain reaction. The retinoic acid-inducible gene I (RIG-I) and pgRNA interaction was verified by RNA-binding protein immunoprecipitation assay.Results::We found that TRIM25 promoted HBx degradation, and confirmed that TRIM25 could enhance the K90-site ubiquitination of HBx as well as promote HBx degradation by the proteasome pathway. Interestingly, apart from the Really Interesting New Gene (RING) domain, the SPRY domain of TRIM25 was also indispensable for HBx degradation. In addition, we found that the expression of TRIM25 increased the recognition of HBV pgRNA by interacting with RIG-I, which further increased the IFN production, and SPRY, but not the RING domain is critical in this process.Conclusions::The study found that TRIM25 interacted with HBx and promoted HBx-K90-site ubiquitination, which led to HBx degradation. On the other hand, TRIM25 may function as an adaptor, which enhanced the recognition of pgRNA by RIG-I, thereby further promoting IFN production. Our study can contribute to a better understanding of host-virus interaction.
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编辑人员丨1周前
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新型载体preS1-tp融合蛋白介导乙型肝炎病毒靶向定位序列小干扰RNA有效抑制乙型肝炎病毒复制和cccDNA合成
编辑人员丨1周前
目的:使用preS1-tp融合蛋白作为新型的载体,介导针对乙型肝炎病毒(HBV)核心蛋白羧基端核定位信号(NLS)区的小干扰RNA(siRNA)进入感染HBV的肝细胞,从而抑制HBV复制和共价闭合环状DNA的形成。方法:以慢病毒感染系统为基础,建立表达人牛磺胆酸钠共转运蛋白多肽的HepG2.2.15细胞;针对HBV NLS区设计合成siRNA;表达纯化preS1-tp融合蛋白,检测其进入细胞和与DNA结合的能力;以preS1-tp融合蛋白为载体,介导NLS siRNA递送至HepG2.2.15-牛磺胆酸钠共转运蛋白多肽细胞中,观察其对HBV复制和共价闭合环状DNA水平的影响。多组间比较采用方差分析,计量资料用 t检验分析组间差异。 结果:成功构建HepG2.2.15-牛磺胆酸钠共转运蛋白多肽细胞株并合成筛选出显著抑制HBV复制的HBV NLS siRNA。纯化并大量表达preS1-tp融合蛋白,以该融合蛋白为载体靶向输送HBV NLS siRNA,结果显示,融合蛋白可以有效靶向输送siRNA至HepG2.2.15-牛磺胆酸钠共转运蛋白多肽细胞,不仅可有效抑制细胞中HBV mRNA,HBsAg和HBeAg表达,还能显著降低HBV DNA和共价闭合环状DNA的水平。结论:preS1-tp融合蛋白利用preS1与肝细胞HBV受体结合,tp与核酸结合的双功能特点,将针对HBV NLS的siRNA靶向至感染HBV的靶细胞,靶向阻断rcDNA转运入细胞核,使siRNA发挥抑制HBV复制和共价闭合环状DNA合成的作用,为HBV感染所致慢性乙型肝炎治疗提供新策略,为彻底清除体内HBV提供新的研究视角。
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编辑人员丨1周前
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无均整器模式在左侧乳腺癌改良根治术后深吸气屏气调强放疗中的价值
编辑人员丨1周前
目的:探讨无均整器(FFF)模式在左侧乳腺癌术后深吸气屏气(DIBH)调强放疗中的价值。方法:回顾性病例系列研究。回顾性分析2021年1月年2022年12月于梅州市人民医院改良根治术后行DIBH调强放疗的21例左侧乳腺癌患者临床资料。分别用6 MV FFF模式下制订的计划(FFF组)和6 MV有均整器(FF)模式下制订的计划(FF组)在每例患者的DIBH模式CT上设计7野调强计划。比较两种计划下各靶区和危及器官剂量学参数和生物学参数以及剂量验证结果。结果:21例患者均为女性,年龄[ M( Q1, Q3)]47岁(32岁,61岁)。FF组和FFF组靶区接受95%处方剂量的靶区占比(V 95%)分别为(95.9±0.8)%和(95.7 ±1.9)%( t=2.98, P=0.089),最大剂量分别为(5 401±251)cGy、(5 424±201)cGy ( t=2.85, P=0.181),适形指数分别为0.88±0.05、0.87±0.06( t=0.32, P=0.562),均匀指数分别为1.06±0.01、1.07±0.02( t=2.91, P=0.009),等效均匀剂量(EUD)分别为(51.81±0.21)Gy、(51.97±0.20)Gy ( t=0.51, P=0.309),肿瘤控制率(TCP)分别为(99.68±0.01)%、(99.61±0.02)%( t=0.81, P=0.560)。FFF组和FF组计划均符合要求,所有危及器官受照剂量均在临床可接受范围内,FFF组在左肺[5 Gy照射体积(V 5 Gy)、平均剂量(D mean)、EUD、正常组织并发症发生率(NTCP)]、右肺(V 5 Gy、D mean)、心脏(V 10 Gy、D mean、EUD、NTCP)和右侧乳腺(V 5 Gy、D mean、EUD)的辐射剂量均不同程度低于FF组,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。FFF组和FF组机器跳数分别为(984±132)MU、(751±145)MU( t=-1.25, P<0.001),总出束时间分别为(1.4±0.3)min和(2.2±0.4)min( t=0.68, P<0.001);单个射野出束时间分别为(12±7)s、(16±10)s( t=2.68, P=0.001),FFF组患者每个射野出束时间均25 s以下;γ通过率分别为(97.1±2.8)%、(97.6±2.1)%( t=0.59, P=0.484)。 结论:在左侧乳腺癌调强放疗中,FFF模式对危及器官的辐射剂量较低,并具有更高的剂量率和更短的治疗时间。FFF联合DIBH技术在乳腺癌调强放疗中具有积极的临床意义。
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编辑人员丨1周前
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自动uARC计划在食管癌同步推量放疗中的可行性研究
编辑人员丨1周前
目的:比较联影计划系统中食管癌同步推量自动uARC计划与人工计划的剂量学和放射生物学参数差异,为临床应用提供参考。方法:选取100例同步推量食管癌患者的优质uARC计划,统计靶区和危及器官的剂量学参数均值,建立联影计划系统uRT-TPOIS智能计划的优化目标表。另选取21例食管癌病例作为测试病例,使用uRT-TPOIS计划系统分别设计人工计划和自动uARC计划。比较两种计划靶区的平均剂量D mean、PTV的近似最小剂量D 98%和近似最大剂量D 2%、均匀性指数(HI)、适形指数(CI)、危及器官剂量、平均计划时间、机器跳数(MU)、肿瘤控制概率(TCP)和正常组织并发症概率(NTCP)的差异。符合正态分布的数据采用配对 t检验比较两组数据的差异,不符合的采用非参数Wilcoxon检验。 结果:自动uARC计划的靶区D 98%(PTV 60 Gy: P<0.001,PTV 54 Gy: P=0.001)、CI(PTV 60 Gy: P<0.001,PTV 54 Gy: P=0.002)和处方剂量覆盖靶区体积(V 54 Gy: P<0.001)均优于人工计划,而D mean和HI的差异无统计学意义[PTV 54 Gy(59.32±1.87)∶(59.13±1.64)Gy,(0.19±0.02)∶(0.18±0.02),均为 P>0.05];脊髓D mean和D max均优于人工计划[(13.22±4.27)∶(13.75±4.44)Gy, P=0.020;(36.99±1.67)∶(38.14±1.31)Gy, P=0.011];肺V 20 Gy两者差异无统计学意义( P>0.05),但肺V 5 Gy和V 10 Gy均值人工计划均低于自动计划(均为 P<0.001)。自动计划和人工计划的平均计划时间分别为(11.79±1.71)min和(53.36±8.23)min,两者差异有统计学意义( P<0.001);和人工计划相比,自动计划没有增加跳数[(762.84±74.83)∶(767.41±80.63)MU, P>0.05]。自动计划提高了靶区的TCP值(PTV 60 Gy 89.15%±0.49%∶86.75%±6.46%, P=0.004和PTV 54 Gy 79.79%±3.48%∶77.51%±5.04%, P=0.006),增加了肺的NTCP值(0.46%±0.40%∶0.35%±0.32%, P<0.001)。但心脏和脊髓的NTCP值,两种计划之间的差异无统计学意义(均为 P>0.05)。 结论:使用联影智能计划模块实现食管癌自动uARC计划具有临床可行性,并且能够提高靶区适形性,缩短计划设计时间。
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编辑人员丨1周前
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新生儿钠牛磺胆酸共转运多肽缺陷病合并先天性甲状腺功能减退症1例
编辑人员丨1周前
钠牛磺胆酸共转运多肽(sodium taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)缺陷病是由于SLC10A1基因变异引起的一种遗传性胆汁酸代谢病。本文报道1例新生儿期起病的NTCP缺陷病合并先天性甲状腺功能减退症的患儿,提高临床医生的认识。
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编辑人员丨1周前
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血清胆汁酸谱分析协助钠离子-牛磺胆酸共转运多肽缺陷病诊断和鉴别诊断
编辑人员丨1周前
目的:以钠离子-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)缺陷病为核心,探讨血清胆汁酸谱分析在协助该病诊断及其鉴别诊断中的价值。方法:收集整理并分析2015年4月初至2021年12月底暨南大学附属第一医院儿科诊治的66例胆汁淤积性肝病(CLDs)患者的临床资料,包括NTCP缺陷病患者32例(成人16例,儿童16例)、希特林缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)16例、Alagille综合征8例,胆道闭锁10例。同时设立成人和小儿健康对照组(各15例)。通过超高效液相色谱-串联质谱技术对研究对象血清胆汁酸成分进行定性定量分析,利用统计学SPSS 19.0及GraphPad Prism 5.0软件对数据进行作图和比较。用 t检验、Wilcoxon秩和检验、Kruskal-Wallis H检验等统计学方法,比较NTCP缺陷病与相应健康对照组以及NTCP缺陷病与其他CLDs患儿的临床及胆汁酸谱之间的差异。 结果:与健康对照相比,NTCP缺陷病患者总结合型胆汁酸、总初级胆汁酸、总次级胆汁酸,以及甘氨胆酸、牛磺胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸等水平均升高( P < 0.05);与NTCP缺陷病成人患者相比,NTCP缺陷病患儿血清总结合型胆汁酸和总初级胆汁酸水平均明显升高( P < 0.05);NTCP缺陷病患儿血清牛磺鹅脱氧胆酸、甘氨猪胆酸、牛磺猪胆酸和牛磺α鼠胆酸水平明显升高,但甘氨脱氧胆酸、甘氨石胆酸、石胆酸等胆汁酸降低( P < 0.05);NTCP缺陷病患儿血清中石胆酸、脱氧胆酸和猪脱氧胆酸等次级胆汁酸水平明显高于NICCD、Alagille综合征和胆道闭锁等其他CLDs组( P < 0.05);总初级胆汁酸/总次级胆汁酸、总结合型胆汁酸/总未结合型胆汁酸,以及牛磺胆酸、血清牛磺鹅脱氧胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸等指标可有效鉴别NTCP缺陷病和其他非NTCP缺陷病CLDs患儿。 结论:证实血清胆汁酸谱分析对于协助NTCP缺陷病的诊断和鉴别诊断具有重要参考价值,深化了对NTCP缺陷病等CLDs患者血清胆汁酸谱变化特征的科学认识,为深入理解其发病机制提供了代谢组学依据,同时为后续深入研究提供了线索和思路。
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编辑人员丨1周前
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靶向延伸因子结合蛋白 2 的小分子化合物AM679体外对乙型肝炎病毒的抑制作用
编辑人员丨1周前
目的:探究小分子化合物AM679在乙型肝炎病毒(HBV)复制及感染细胞模型中的抗病毒活性。方法:通过qPCR及蛋白质免疫印迹法验证AM679对延伸因子结合蛋白?2?(EFTUD2)表达的正向调节作用;用AM679(0.5、1、2?nmol/L)处理HepAD38、HepG2-NTCP细胞,设置阴性对照组、阳性对照组及AM679与恩替卡韦联合用药组。通过qPCR检测细胞内外HBV DNA水平变化,以及细胞内HBV RNAs与3.5kb-RNA的表达水平;通过酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)水平。组间均数差异采用 t检验方法进行统计学分析。 结果:AM679处理后的HepAD38、HepG2-NTCP细胞中EFTUD2 mRNA及蛋白表达水平均明显升高,差异有统计学意义( P ?0.001);在两种细胞模型中,HBV DNA、HBV RNAs、HBV 3.5kb-RNA、HBsAg、HBeAg等细胞内外指标均有不同程度的下降,且随AM679浓度的增加、处理时间的延长,上述指标下降更为明显;联合使用AM679与恩替卡韦则具有更显著的抗病毒效果。HepAD38细胞上清液中,2?nmol/L AM679作用第3、9天对HBV DNA抑制抑制率分别为21%对比48%,而AM679联合ETV治疗组,抑制作用最显著(62%), P值均?0.01。沉默EFTUD2后可观察到HBV复制更活跃,AM679的抗病毒活性被显著削弱。 结论:AM679通过靶向调节EFTUD2的表达发挥体外抗HBV活性。
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编辑人员丨1周前
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基于肝脏类器官系统探讨布乐韦肽抑制丁型肝炎病毒复制的体外研究
编辑人员丨1周前
目的:构建丁型肝炎病毒(HDV)感染的肝脏类器官系统,并探讨钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)受体抑制剂布乐韦肽对HDV复制的抑制作用。方法:将由诱导多能干细胞(iPSC)分化的肝细胞样细胞(HLC)接种于倒置胶体晶体聚乙二醇支架(ICC),构建肝脏类器官系统。质粒转染人肝癌细胞(HuH7)后,收获细胞上清中的HDV颗粒,同时提取HepG2.2.15细胞上清液中的乙型肝炎病毒(HBV)颗粒,将HBV和HDV颗粒共同感染肝脏类器官,构建HDV感染的肝脏类器官,同时以未感染HDV的肝脏类器官作为阴性对照组。采用免疫荧光法在激光共聚焦显微镜下观察肝脏类器官单元的结构及丁型肝炎抗原(HDAg)和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的表达。蛋白质印迹法检测肝脏类器官中NTCP和HDAg的蛋白质水平。布乐韦肽Pre组为感染HDV前在肝脏类器官中加入布乐韦肽进行预处理,布乐韦肽Post组为感染24 h后加入布乐韦肽,IFN-α组为感染24 h后加入α干扰素,并设未经药物处理的空白对照组,比较4组的HDV复制情况。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测iPSC分化过程中Nanog同源框(NANOG)、性别决定区Y框(SOX)2、SOX17、叉头框蛋白A2(FOXA2)、肝细胞核因子4α(HNF-4α)、白蛋白、甲胎蛋白、NTCP的mRNA相对表达量,以及药物干预后4组HDV mRNA表达量。统计学分析采用两独立样本 t检验。 结果:iPSC分化为HLC的21 d内,NANOG的mRNA表达量逐渐下降,SOX17、FOXA2的表达量先升后降,HNF-4α、白蛋白、甲胎蛋白、NTCP的表达量逐渐升高。iPSC中NTCP的蛋白质水平为0.118±0.003,低于HLC的1.315±0.073,差异有统计学意义( t=11.92, P<0.001)。HDV感染后肝脏类器官中HDAg的蛋白质水平高于未感染HDV的阴性对照组(1.284±0.128比0.157±0.040),差异有统计学意义( t=23.27, P<0.001)。感染第14天激光共聚焦显微镜下观察到三维球体结构,HDAg与HBsAg高表达。用药干预后第3天,分别与空白对照组(1.000±0.077)比较,IFN-α组(0.453±0.028)和布乐韦肽Pre组(0.136±0.012)的HDV mRNA相对表达量均下降,差异均有统计学意义( t=19.95、33.15,均 P<0.001)。而布乐韦肽Post组(0.968±0.069)与空白对照组的HDV mRNA相对表达量差异无统计学意义( t=0.94, P>0.05)。 结论:iPSC衍生的HLC与ICC构建的肝脏类器官能模拟人体肝脏功能,并成功感染HDV颗粒。经布乐韦肽早期阻断能有效降低HDV感染肝脏类器官系统中病毒的复制水平。
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编辑人员丨1周前
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钠离子-牛磺胆酸共转运多肽在人骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的表达及其对HBV体外感染BMSCs的影响
编辑人员丨1周前
目的:研究体外培养的人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)中钠离子-牛磺胆酸共转运多肽(sodium taurocholate cotransporting polypeptide, NTCP)的表达情况,探索体外培养的BMSCs能否自然感染乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)及NTCP是否是HBV感染BMSCs的一个功能性受体。方法:将HBV阳性血清以不同方法感染BMSCs,检测培养基上清及细胞中HBV DNA、培养基上清中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)等感染指标。NTCP-siRNA转染BMSCs后,再次用HBV阳性血清感染BMSCs,检测各感染指标。Western blot法检测各处理组BMSCs中NTCP的表达情况。结果:HBV可自然感染体外贴壁培养的人BMSCs,但感染效率很低。当HBV感染悬浮状态下的BMSCs时,感染效率显著升高。BMSCs中存在NTCP的表达,且HBV可显著上调NTCP的表达量,特别是对悬浮状态下的BMSCs。当BMSCs中NTCP的表达被NTCP-siRNA沉默后,HBV对BMSCs的感染效率显著下降。结论:体外培养的人BMSCs可被HBV自然感染,且其细胞内表达的NTCP是其感染HBV的一个功能性受体。人BMSCs可作为一种易感、稳定、无需分子修饰的细胞模型,用于研究HBV生命周期的早期阶段以及抗病毒治疗研究。
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编辑人员丨1周前
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宫颈癌腔内联合组织间插植近距离治疗优化算法剂量学分析研究
编辑人员丨1周前
目的:在宫颈癌腔内联合组织间插植近距离治疗(IC/ISBT)中,基于剂量学及生物学模型的帮助,进行图形优化(GO)、模拟退火逆向计划优化算法(IPSA)和混合逆向计划优化算法(HIPO)的比较分析,为宫颈癌IC/ISBT治疗优化方法的选择提供依据。方法:选取65例接受影像引导下IC/ISBT的宫颈癌患者。所有患者后装治疗计划分别采用GO、IPSA、HIPO优化的方式制定3次,处方剂量高危临床靶区体积(HRCTV) D90均为6 Gy。针对3种优化方案的用时、剂量-体积参数及放射生物学差异,采用非参数Friedman检验以及非参数Wilcoxon秩检验进行比较分析。 结果:逆向计划优化耗时均较正向计划耗时短,时间分别是GO 135.03 s、IPSA 46.53 s、HIPO 98.36 s,肿瘤靶区剂量中高剂量照射的 V150%(53.66%)在HIPO计划中略高,而高剂量照射的 V200%(30.29%)在GO计划中更高。GO的适形度指数( CI)(0.91)较其他计划更好,差异具有统计学意义( χ2=69.98, P<0.001)。HIPO计划的膀胱与直肠的 D1 cm 3、 D2 cm 3受照射量较低,小肠受照射量与其他计划差异无统计学意义( P>0.05)。HIPO计划中HRCTV的等效均匀生物有效剂量(EUBED)(12.35 Gy)比GO(12.23 Gy)、IPSA(12.13 Gy)高,膀胱处的EUBED在GO(2.38 Gy)计划中最低,直肠处的EUBED在HIPO(3.74 Gy)计划中最低,小肠的EUBED 3种优化方式未见明显差异( P>0.05)。3种优化计划预测的肿瘤控制率(TCP)差异无统计学意义( P=0.055),HIPO计划预测膀胱与直肠的正常组织并发症概率(NTCP)比GO、IPSA计划低( χ2=12.95~38.43, P<0.01),小肠的NTCP未见明显区别( P>0.05)。 结论:3种优化方法中,两种逆向优化方式均较正向优化耗时短。GO计划较IPSA、HIPO计划更适形。HIPO计划可以增加靶区生物学覆盖剂量,减少膀胱与直肠处的最大物理或生物受照射量和NTCP。推荐优先使用HIPO作为宫颈癌IC/ISBT的优化算法。
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编辑人员丨1周前
