目的:运用基于目的基因捕获的高通量测序技术对新生儿进行常见遗传病基因检测，了解新生儿常见遗传病的发病率及相关基因致病变异的携带率和变异类型，探讨该技术在新生儿遗传病筛查中的应用价值。方法:收集2019年6月至2020年4月广东地区出生的1 793例新生儿足跟血，采用基于目的基因捕获的高通量测序技术对138个新生儿常见遗传病相关基因的外显子区域进行检测，变异致病性的解读基于《遗传变异分类标准与指南(2017)》，其中已知致病和可能致病纳入阳性变异，采用Sanger测序技术对阳性变异位点进行验证，并采用计数方法对检测结果进行分析。结果:1 793例新生儿中，男978例，女815例；共筛出阳性158例，阳性率为8.81%，检测出阳性病种11种。在阳性病种中，常染色体隐性耳聋1A型41例(2.29%)，Gilbert综合征或Crigler-Najjar综合征40例(2.23%)，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症33例(1.84%)，家族性高胆固醇血症19例(1.06%)，钠牛磺胆酸共转运多肽缺陷病18例(1.00%)，线粒体非综合征型耳聋2例(0.11%)，Citrin缺乏症2例(0.11%)，全羧化酶合成酶缺乏症、β-珠蛋白生成障碍性贫血、异染性脑白质营养不良各1例(各占0.06%)。972例携带1个或多个基因的阳性变异位点，共涉及85种疾病，其中携带率较高的疾病为Gilbert综合征或Crigler-Najjar综合征(359例，20.02%)、常染色体隐性耳聋1A型(302例，16.84%)和钠牛磺胆酸共转运多肽缺陷病(291例，16.22%)，其高频变异位点为 UGT1A1基因c.211G>A位点、 GJB2基因c.109G>A位点和 SLC10A1基因c.800C>T位点。 结论:广东地区新生儿常见遗传病为常染色体隐性耳聋1A型、Gilbert综合征或Crigler-Najjar综合征、G6PD缺乏症、家族性高胆固醇血症和钠牛磺胆酸共转运多肽缺陷病，且存在人群高频携带位点；探索性地对新生儿常见遗传病进行基因筛查，可为新生儿基因筛查的开展积累数据和经验。

目的:使用preS1-tp融合蛋白作为新型的载体，介导针对乙型肝炎病毒（HBV）核心蛋白羧基端核定位信号(NLS)区的小干扰RNA(siRNA)进入感染HBV的肝细胞，从而抑制HBV复制和共价闭合环状DNA的形成。方法:以慢病毒感染系统为基础，建立表达人牛磺胆酸钠共转运蛋白多肽的HepG2.2.15细胞；针对HBV NLS区设计合成siRNA；表达纯化preS1-tp融合蛋白，检测其进入细胞和与DNA结合的能力；以preS1-tp融合蛋白为载体，介导NLS siRNA递送至HepG2.2.15-牛磺胆酸钠共转运蛋白多肽细胞中,观察其对HBV复制和共价闭合环状DNA水平的影响。多组间比较采用方差分析，计量资料用 t检验分析组间差异。 结果:成功构建HepG2.2.15-牛磺胆酸钠共转运蛋白多肽细胞株并合成筛选出显著抑制HBV复制的HBV NLS siRNA。纯化并大量表达preS1-tp融合蛋白，以该融合蛋白为载体靶向输送HBV NLS siRNA，结果显示，融合蛋白可以有效靶向输送siRNA至HepG2.2.15-牛磺胆酸钠共转运蛋白多肽细胞，不仅可有效抑制细胞中HBV mRNA，HBsAg和HBeAg表达，还能显著降低HBV DNA和共价闭合环状DNA的水平。结论:preS1-tp融合蛋白利用preS1与肝细胞HBV受体结合，tp与核酸结合的双功能特点，将针对HBV NLS的siRNA靶向至感染HBV的靶细胞，靶向阻断rcDNA转运入细胞核，使siRNA发挥抑制HBV复制和共价闭合环状DNA合成的作用，为HBV感染所致慢性乙型肝炎治疗提供新策略，为彻底清除体内HBV提供新的研究视角。

目的:探讨加味茵陈蒿汤治疗α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导的胆汁淤积小鼠肝损伤的作用机制.方法:24只雄性SPF级C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(Normal组)、ANIT造模组(ANIT组)、加味茵陈蒿汤组(JWYCH组)、熊去氧胆酸组(UDCA组),每组6只.Normal组与ANIT组灌胃给予饮用水,持续10d;JWYCH组灌胃给予加味茵陈蒿颗粒剂水溶液,UDCA组灌胃给予熊去氧胆酸悬液,持续10d.第7天,小鼠用ANIT油溶液(50 mg/kg)造模.末次给药后,采用全自动生化仪检测小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆汁酸(TBA)及总胆红素(TBiL)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织形态学变化;采用RT-qPCR检测肝组织法尼醇X受体(FXR)、成纤维细胞生长因子15(FGF15)、FGF受体4(FGFR4)mRNA表达;Western blot检测肝组织FGF15、FXR、磷酸化FXR(p-FXR)、FGFR4、外排型转运体[胆盐输出泵(BSEP)、多药耐药相关蛋白2(MRP2)]、摄取型转运体[钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)、有机阴离子转运多肽2(OATP2)]蛋白表达.结果:血清肝功能生化学指标显示,与 Normal 组相比,ANIT 组 ALT、ALP、AST、TBA、TBiL 水平明显升高(P＜0.05);JWYCH 组和 UDCA 组 ALT、ALP、AST、TBA、TBiL水平明显低于ANIT组(P＜0.05);与UDCA组相比,JWYCH组的TBA水平明显下降(P＜0.05).肝组织病理结果显示,光镜下ANIT组可见胆管内胆栓形成,其汇管区以及胆管周国可见大量炎性细胞浸润,提示造模成功;JWYCH组、UDCA组病理损伤较ANIT组有明显改善.Western blot结果显示,与Normal组比较,ANIT组FGF15、FXR、p-PXR、FGFR4、BSEP、MRP2蛋白表达均明显减少(P＜0.05),提示造模成功;与 ANIT组比较,JWYCH组和 UDCA 组 FGF15、FXR、p-PXR、FGFR4、BSEP、MRP2 蛋白表达明显增加(P＜0.05,P＜0.01),而 NTCP、OATP2表达明显减少(P＜0.05).RT-qPCR结果显示,与Normal组比较,ANIT组小鼠肝组织FXR、FGF15、FGFR4的mRNA表达明显降低(P＜0.05);与ANIT组比较,UDCA组和JWYCH组FXR、FGF15、FGFR4的mRNA表达明显增加(P＜0.05);与UDCA组相比较,JWYCH组FGF15、FGFR4的mRNA表达明显增加(P＜0.05).结论:加味茵陈蒿汤能降低总胆汁酸水平,改善胆汁淤积和肝组织损伤.其作用机制可能是通过上调肝细胞FGF15、FGFR4表达,上调FXR和p-FXR水平,从而下调其下游摄取型转运体(NTCP、OATP2)水平以及上调外排型转运体(BSEP、MRP2)水平.

钠离子牛磺胆酸共转运多肽(sodium-taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)缺陷病是一种溶质载体家族 10 成员 1(solute carrier family 10 member 1,SLC10A1)双等位基因突变引起的胆汁酸代谢障碍性疾病,分布具有区域和种族差异,其中SLC10A1 c.800C>T(p.Ser267Phe)是我国的高频突变.NTCP缺陷病患儿主要表现为病理性黄疸,少部分有生长、运动和神经系统发育迟缓的表现,成年患者临床症状和体征不明显,生化检查提示血清总胆汁酸水平升高、部分伴有转氨酶和25-羟维生素D3 水平降低.NTCP缺陷病性高胆汁酸血症需与乙型肝炎病毒感染、丁型肝炎病毒感染、自身免疫性肝炎及妊娠期肝内胆汁淤积症等鉴别,妊娠合并NTCP缺陷病性高胆汁酸血症对母胎的影响迄今少有相关报道.综述NTCP缺陷病的分子遗传机制、临床表现、实验室检查、诊断、治疗及其对母胎的影响,为该病患者的明确诊断和正确干预提供依据.

目的 探讨茵栀黄颗粒治疗小鼠胆汁淤积症的作用及其机制.方法 将8 周龄C57BL/6 小鼠给予含 1%胆酸的饲料2 周,构建小鼠胆汁淤积症模型,将小鼠分为对照组、模型组、熊去氧胆酸(0.1 g/kg)组以及茵栀黄颗粒(5、10、20 g/kg)组,各组分别ig相应药物,对照组和模型组大鼠ig同体积生理盐水,连续给药 4 周.分别给予收集小鼠血清,全自动生化仪测定肝功能相关指标,超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)测定胆汁酸成分;收集小鼠肝组织,苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏组织病理变化;RT-qPCR检测肝组织炎症因子和胆汁酸代谢关键基因的mRNA表达水平;Western blotting检测肝组织胆汁酸代谢关键蛋白的表达情况;收集小鼠盲肠内容物,Illumina Miseq 测序平台对 V3～V4 可变区进行扩增和测序,对小鼠肠道菌群结构进行分析.结果 与模型组相比,茵栀黄颗粒各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)水平均显著降低(P＜0.05、0.01、0.001);且能够显著改善小鼠肝组织损伤.与模型组相比,茵栀黄颗粒各剂量组小鼠肝脏白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA 表达水平均显著降低,白细胞介素-1β(IL-1β)、胆固醇 7-羟化酶(CYP7A1)、胆盐输出泵(Bsep)、牛磺胆酸钠共转运蛋白(Ntcp)、胆汁酸转运蛋白多药耐药相关蛋白 2(Mrp2)、UDP葡糖醛酸基转移酶 1 家族多肽A1(Ugt1a1)mRNA表达水平均显著升高(P＜0.05、0.01、0.001),并影响胆汁酸代谢关键蛋白的mRNA和蛋白表达.16S rDNA测序显示,茵栀黄颗粒组小鼠肠道菌群中乳杆菌属相对丰度显著升高,罗斯氏菌属和Allobaculum属相对丰度显著降低.胆汁酸代谢组学发现,茵栀黄颗粒能够降低多种次级胆汁酸的含量.结论 茵栀黄颗粒改善胆汁淤积的作用机制可能与调控肠道菌群组成影响胆汁酸代谢有关.

目的 观察茵陈蒿汤防治大鼠非酒精性脂肪性肝病 (NAFLD) 的效果及其对肝组织钠离子牛磺胆酸共转运多肽 (NTCP) 表达的影响, 探讨茵陈蒿汤防治NAFLD的机制.方法 将45只SD大鼠随机分为3组各15只, 模型组、干预组每天给予高脂饲料灌胃进行NAFLD造模, 同时干预组每天给予茵陈蒿汤10 m L/kg灌胃, 对照组每天给予普通饲料喂养.12周后分批处死, 取大鼠腹主动脉血及肝脏组织;生化分析仪检测丙氨酸转氨酶 (ALT) 、天门冬氨酸转氨酶 (AST) 、总胆汁酸 (TBA) 、甘油三酯 (TG) , HE染色观察肝组织病理变化; Real time PCR、Western blotting法分别检测肝脏组织中NTCP mRNA及蛋白表达.结果 与对照组比较, 模型组血清ALT、AST、TBA、TG水平均升高 (P均<0. 05) ;干预组血清ALT、AST、TBA、TG水平均较模型组下降 (P均<0. 05) , 而与对照组间差异无统计学意义 (P均> 0. 05) .HE染色显示, 模型组肝组织可见空泡样变性、炎性细胞浸润和棕黄色胆汁颗粒, 而干预组较模型组肝组织脂肪变性、炎性细胞浸润均有一定程度缓解.与对照组比较, 模型组肝组织中NTCP mRNA及蛋白表达水平均下调 (P均<0. 05) ;干预组肝组织中NTCP mRNA及蛋白表达水平均较模型组上调 (P均<0. 05) , 而与对照组间差异无统计学意义 (P均> 0. 05) .结论 茵陈蒿汤可能通过上调NTCP基因表达, 减轻肝细胞内胆汁淤积, 进而改善肝脏功能, 减轻NAFLD大鼠肝脏病理损害.

胆汁淤积性肝病(cholestasis liver disease,CSLD)是因胆汁生成、分泌及排泄障碍导致肝内外胆汁淤积的临床常见疾病,中医药基于"湿、热、瘀"的病因病机干预CSLD具有特色及优势.故本文回顾古今医家关于CSLD"湿、热、瘀"病因病机特点的论述,结合CSLD现代医学特征与分子生物学研究,发现从"湿、热、瘀"论治CSLD可调控胆汁酸代谢的关键靶点,通过激活法尼酯衍生物X受体(farnesoid X receptor,FXR),下调牛磺胆酸钠共转运多肽(sodium taurocholate co-transport polypeptide,NTCP)、诱导胆盐输出泵(bile salt output pump,BSEP),并激活G蛋白偶联胆汁酸受体5(G-protein coupled-receptor kinase,TGR5),抑制NF-κB信号通路,调节细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)及AMP依赖性蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)的途径,以恢复机体正常的胆汁酸及胆汁代谢,发挥利胆、抗炎、调节多项相关肝功能指标的药理学作用,可为中医应用清湿祛瘀法治疗CSLD提供理论支持,为中医防治CSLD提供思路.

钠牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)缺陷病是由于溶质转运蛋白家族 10 成员 1(SLC10A1)基因突变引起的一种遗传性胆汁酸代谢病,为一种常染色体隐性遗传病,NTCP 缺陷病患者体内血浆中结合胆汁盐进入肝细胞的主要转运体的功能受到影响[1-2].主要临床表现为高胆汁酸、皮肤瘙痒和脂肪吸收不良,导致全面生长迟缓和脂溶性维生素缺乏等.目前,国内外相关文献报道并不多见,长期预后及临床表现不明确.湖北省天门市第一人民医院收治并确诊为NTCP 缺陷病患儿2 例,现将其临床资料报道如下,以提高临床医生对该病的认识.