目的:评价结核分枝杆菌PstS1和HspX蛋白的体液和细胞免疫反应性，为结核病免疫学诊断和疫苗候选抗原的筛选提供参考。方法:利用分子克隆表达和Ni 2＋亲和层析技术纯化获得重组目的蛋白PstS1和HspX。收集健康志愿者和结核分枝杆菌感染志愿者血液样本及其背景流行病学资料，以重组PstS1和HspX蛋白作为抗原，进行酶联免疫吸附试验(ELISA)和酶联免疫斑点试验(ELISPOT)分别检测特异性IgG抗体和分泌IFN-γ的抗原特异性T淋巴细胞。对数据进行统计学分析，评价重组PstS1和HspX蛋白的体液和细胞免疫反应性。 结果:重组PstS1和HspX蛋白均能特异性刺激结核分枝杆菌感染者体内较多的效应T细胞分泌IFN-γ，结核分枝杆菌感染组与健康对照组的检测结果差异有统计学意义( P<0.01)；重组PstS1和HspX蛋白作为ELISPOT诊断抗原的特异度和灵敏度分别为92.11%(35/38)和65.96%(31/47)，68.42%(26/38)和91.49%(43/47)。重组PstS1和HspX蛋白也具有一定的体液免疫反应性，但仅HspX蛋白特异性抗体水平在结核分枝杆菌感染组与健康对照组间的差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:重组PstS1和HspX蛋白均具有较好的细胞免疫反应性，属于细胞免疫优势抗原。两者均具有较好的细胞免疫诊断性能，同时也是较好的潜在抗结核疫苗候选抗原。

目的 建立全血中13种麻痹性贝类毒素(PSTs)的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)的检测方法.方法 用1%乙酸︰乙腈(1︰3,v︰v)溶液提取全血中的13种PSTs,采用UPLC BEH Amide色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)分离,电喷雾(ESI)正、负离子多反应监测(MRM)模式检测,基质匹配曲线外标法定量.结果 13种PSTs在1～100 ng/mL质量浓度范围内线性关系良好,相关系数(r2)>0.995,检出限为0.5～2 ng/mL,定量限为1～4 ng/mL,回收率为65.55%～114.12%.结论 本方法灵敏度高,具有良好的重现性,可以准确定性定量13种PSTs,适用于全血中PSTs的快速检测.

目的 探讨水油微球与热灭活BCG(heat-killed BCG,HKBCG)或无细胞BCG(acellular BCG,ABCG)复合佐剂对结核杆菌融合蛋白PstS1-LEP免疫原性的影响.方法 制备水油微球/HKBCG、水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗,经皮下注射免疫BALB/c小鼠3次,间隔2周,末次免疫后2周采血,处死小鼠并无菌摘脾;ELISA法检测小鼠血清抗PstS1-LEP的IgG、IgG1和IgG2a抗体,ELISPOT法检测小鼠脾淋巴细胞经PstS1-LEP刺激分泌IFNγ、IL-4和IL-17的斑点形成细胞数(spots forming cell,SFC).结果 水油微球/HKBCG、水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗免疫小鼠诱导PstS1-LEP特异性IgG、IgG1和IgG2a水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05);水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗免疫小鼠的IFNγ-SFC、IL-17-SFC及IL-17-SFC/IL-4-SFC均高于水油微球/HKBCG复合佐剂PstS 1-LEP疫苗,而两种疫苗免疫小鼠的IL-4-SFC、IFNγ-SFC/IL-4-SFC和IFNγ-SFC/IL-17-SFC比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗诱导偏向Th1和Th17型细胞免疫,IFNγ-SFC、IL-4-SFC和IL-17-SFC的两两比值显示,水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗更有利于诱导Th17型细胞免疫漂移.

Amycolatopsis mediterranei U32 is an important industrial strain for the production of rifamycin SV.Rifampicin,a derivative of rifamycin SV,is commonly used to treat mycobacterial infections.Although phosphate has long been known to affect rifamycin biosynthesis,phosphate transport,metabolism,and regulation are poorly understood in A.mediterranei.In this study,the functional phosphate transport system pstSCAB was isolated by RNA sequencing and inactivated by insertion mutation in A.mediterranei U32.The mycelium morphology changed from a filamentous shape in the wild-type and pstS1+ strains to irregular swollen shape at the end of filamentous in the △pstS1 strain.RT-PCR assay revealed that pstSCAB genes are co-transcribed as a polycistronic messenger.The pstSCAB transcription was significantly activated by nitrate supplementation and positively regulated by GInR which is a global regulator of nitrogen metabolism in actinomycetes.At the same time,the yield of rifamycin SV decreased after mutation (△pstS1) compared with wild-type U32,which indicated a strong connection among phosphate metabolism,nitrogen metabolism,and rifamycin production in actinomycetes.

将结核分枝杆菌 (Mycobacterium tuberculosis, Mtb) 多个B细胞预测表位串联表达 (命名为B102) , 并初步评价其作为诊断抗原的血清学诊断价值.将MtbPstS1、ESAT6、CFP10、Ag85B、Ag85A及PPE54等6个蛋白的11个B细胞预测表位串联, 加入合适的连接臂后全基因合成;将多表位片段插入带有TRX标签的表达质粒中, 在大肠杆菌BL21 (DE3) 中诱导表达, 并利用Ni2+-Chelating亲和层析和DEAE阴离子交换层析纯化目的蛋白;利用Western blotting (WB) 技术对目的蛋白抗原性进行鉴定, 并建立Mtb抗体检测竞争法ELISA技术, 初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力.目的蛋白以包涵体形式存在, 其表达量约占菌体总蛋白的31.25％, 经纯化及复性后蛋白B102可溶性存在, 浓度为3.124mg/mL, 纯度为96.71％;WB实验表明目的蛋白能与Mtb阳性血清相应抗体发生反应.对60份Mtb阳性血清及60份Mtb阴性血清进行检测得出其灵敏度为90.00％, 特异性为93.33％, 阳性预测值为93.10％, 阴性预测值为90.32％, 符合率为91.67％, McNemer检验的结果提示与"金标准"诊断结果无差异, Kappa=0.833, 提示两种方法诊断结果一致性优异.原核表达与层析纯化可以获取抗原性优异的Mtb多表位诊断抗原, 作为诊断抗原可以应用于Mtb的血清学检测中.

目的 研究屎肠球菌和粪肠球菌的多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)及其应耐药性,为防控院内感染提供基础数据. 方法 收集2013年1月-2016年12月包头地区同一医院来源的粪肠球菌58株和屎肠球菌74株,随机抽取粪肠球菌菌株29株和屎肠球菌菌株37株为实验菌株,采用聚合酶链反应(PCR)法及基因测序技术分别检测粪肠球菌看家基因(gdh、gyd、stS、gki、xpt、aroE、yqiL)和屎肠球菌看家基因(adk,atpA,ddl,gdh,gyd,purK,pstS);将测序结果与相应菌群数据库比较,获得屎肠球菌、粪肠球菌菌株的序列型(STs).采用VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定仪及药敏系统鉴定肠球菌并同步测定9种抗菌药物(氨苄西林、青霉素、四环素、红霉素、左氧氟沙星、环丙沙星、万古霉素、庆大霉素、链霉素)MIC值. 结果 粪肠球菌分离株总分为10个ST型,其中13株等位基因谱相同,为ST179,占44.83％;屎肠球菌分离株分为10个ST型,其中14株等位基因谱相同,为ST78,占40.00％.屎肠球菌对红霉素耐药率最高,为100％;粪肠球菌对四环素耐药率最高,为72.4％.两类肠球菌均未检出万古霉素耐药分离株.粪肠球菌庆大霉素耐药和链霉素敏感株中ST179均占45.83％,屎肠球菌庆大霉素耐药和链霉素耐药菌中ST78均占34.23％. 结论 屎肠球菌、粪肠球菌的优势菌型分别为ST78和ST179.针对性使用肠球菌优势菌型敏感药物,严格抗生素管理,是提高粪肠球菌感染治愈率,有效控制院内感染的优先措施.

目的 通过生物信息学在线分析软件对鸟结核分枝杆菌(Mycobacterium avium tuberculosis,MAV)MAV-2753 蛋白和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)38ku蛋白进行预测分析.方法 从BLAST获取MAV-2753和38ku蛋白的氨基酸序列;利用Protparam tool分析蛋白的氨基酸数量、等电点和相对分子质量,氨基酸组成及比例,分子式及脂肪指数;利用SPOMA、SWISS-MODEL在线预测软件预测蛋白的二、三级结构;使用TMHMM Server2.0预测跨膜区;使用PortScale进行疏水性预测分析;使用SignlP5.0进行信号肽预测分析;应用ISoftBerry在线分析网址进行亚细胞定位;采用NetPHos3.1Server进行磷酸化位点分析;运用String在线分析软件进行蛋白质相互作用分析;运用NetNGIyc 1.0 Server、NetGlycate 1.0 Server进行糖基化、赖氨酸化分析预测;通过IEDB在线预测软件进行B细胞抗原表位的预测分析.结果 MAV-2753基因编码蛋白为Catalase-peroxidase,分子质量单位为81ku;由748个氨基酸组成,相对等电点为4.9;正电荷残基(ArG+Lys)为 73,负电荷残基(Asp+Gly)为107;脂肪系数为72.59,总平均亲水性为-0.455,预测为疏水蛋白;无跨膜区;有60个磷酸化位点.亚细胞定位于胞外.38ku蛋白由pstS1基因编码,由374个氨基酸组成,相对等电点为5.14,分子质量单位为38ku;正电荷残基(ArG+Lys)为17,负电荷残基(Asp+Gly)为26;不稳定系数为25.56,脂肪系数为86.79,总平均亲水性为0.066,预测为亲水性蛋白.该蛋白无跨膜区,有60个磷酸化位点,亚细胞定位于胞外.结论 MAV-2753、38ku蛋白有着多个磷酸化、糖基化位点,表明与其他细胞间存在信号传递,蛋白空间结构稳定,有多个B细胞优势表位,可为MAC肺病与肺结核的血清学诊断、疫苗开发奠定基础.