报告1例青春期女性患儿，于出生后1月开始反复口腔溃疡，11岁时出现皮疹伴间断发热，抗核抗体和抗双链DNA抗体等多种自身抗体阳性，补体下降，诊断SLE。经全外显子测序（WES）发现RELA基因c.1084G>T（p.E362X）杂合突变，其父母均未携带，为新发突变，与RNA测序（RNA-seq）结果一致，被判定为致病突变。应用小剂量激素和羟氯喹治疗，病情控制良好。本文探讨了RELA基因突变的表型谱及其在SLE中可能的致病机制，携带基因突变的SLE患儿需要更精准的个体化治疗。

目的:对临床分离的致关节感染的两株皮疽诺卡菌（ Nocardia farcinica）进行全基因组测序并分析其耐药性。 方法:2020年1月收集两株导致老年患者膝关节感染的皮疽诺卡菌菌株，采用全基因组测序对细菌进行鉴定，根据CLSI M24推荐的微量肉汤稀释法和E-test法进行药物敏感性分析，通过ABRicate工具比对获得性耐药和毒力基因，Snippy等生物信息学工具进行同源性等基因特征分析。结果:本研究的临床分离株均为皮疽诺卡菌，对头孢曲松、头孢吡肟、头孢噻肟、甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲噁唑（TMP/SMX）耐药，对亚胺培南、利奈唑胺和含有酶抑制剂类抗生素阿莫西林/克拉维酸敏感。携带A类β内酰胺酶基因 far-1、RNA聚合酶结合蛋白基因 RbpA、多耐药外排泵转录激活因子基因 MtrA和调节转录因子基因 vanR-O，分别介导对β内酰胺抗生素、利福平、大环内酯类药物和万古霉素的耐药性。不含有获得性TMP/SMX耐药基因，二氢叶酸还原酶家族基因存在多个错义突变，均携带与结核分枝杆菌同源的 icl、 mbtH、 phoP、 relA毒力基因，SNP同源分析表明两株皮疽诺卡菌具有很近的亲缘关系，两株菌仅存在10个SNP位点、6个复合基因和1段基因缺失变异。 结论:全基因测序技术有助于研究诺卡菌的分子特征和耐药机制；皮疽诺卡菌对TMP/SMX耐药现象需要重视，参与二氢叶酸代谢途径的酶基因突变有可能是TMP/SMX耐药的原因之一。

目的 探讨基因间长链非编码RNA-p21(lincRNA-p21)在酒精性肠道损伤中的作用.方法 将15只C57BL/6Cnc小鼠适应性喂养一周,随机取10只,随机分为lincRNA-p21过表达组和对照组各5只,分别于尾静脉注射lincRNA-p21-over-AAV8-U6-GFP病毒、control-AAV8-U6-GFP病毒;以5只Trp53cor1基因敲除C57BL/6小鼠(lincRNA-p21-/-)为突变组,以5只C57BL/6Cnc小鼠作为野生组.各组分别予含5%酒精的液体饲料连续喂养4周,最后3天同时予40%酒精5 g/kg灌胃,建立酒精性损伤模型.模型构建成功后,处死小鼠,留取小肠组织,采用RT-qPCR法检测小肠组织lincRNA-p21表达;HE染色,观察小肠组织病理形态变化;免疫组化法检测小肠组织紧密连接蛋白claudin-1、ZO-1表达;取盲肠内容物,提取其微生物DNA,并进行16S扩增子测序,分析菌群多态性和组成等.结果 lincRNA-p21过表达组小肠组织lincRNA-p21相对表达量高于对照组(t=5.31,P<0.05);突变组lincRNA-p21相对表达量低于野生组(t=3.95,P<0.01).HE染色显示,各组均出现肠道损伤,肠黏膜可见粒细胞、单核细胞浸润.与对照组比较,lincRNA-p21过表达组肠道损伤较重,肠绒毛空泡化增多,肠黏膜细胞结构较紊乱,肠壁水肿和肠壁隐窝损伤较重;与野生组比较,突变组肠绒毛空泡化减少,肠黏膜细胞结构较条理,肠壁水肿和肠壁隐窝损伤较轻.lincRNA-p21过表达组claudin-1、ZO-1相对表达量均低于对照组(t分别为20.84、7.57,P均<0.01);突变组claudin-1、ZO-1相对表达量均高于野生组(t分别为5.53、6.69,P均<0.01).肠道菌群测序结果显示,lincRNA-p21过表达组与对照组、突变组与野生组肠道优势菌群均为厚壁菌门或拟杆菌门.lincRNA-p21过表达组肠道菌群中放线菌门丰度高于对照组(t= 4.21,P<0.01);突变组肠道菌群中蓝藻菌门丰度低于野生组(t=2.62,P<0.05).KEGG分析发现,lincRNA-p21过表达和基因敲减对酒精暴露小鼠肠道菌群功能的影响涉及氨基酸代谢、脂质代谢、营养物质消化吸收以及细胞生长和死亡等方面.结论 lincRNA-p21过表达能够加重酒精性肠道损伤,而敲减lincRNA-p21则可减轻酒精性肠道损伤,其机制可能与增加或减轻肠道屏障损伤以及改变肠道菌群结构有关.

中枢神经系统肿瘤是神经外科常见疾病.随着分子遗传学的发展,2016年世界卫生组织中枢神经系统肿瘤分类第4版修订版引入分子分型,根据组织学形态和分子遗传学特征进行修订,其中胶质瘤根据是否存在IDH基因突变和1p/19q共缺失重新分类;室管膜瘤根据是否存在RELA基因融合定义新的肿瘤实体;中枢神经系统胚胎性肿瘤尤其是髓母细胞瘤增加分子分型诊断.结合肿瘤分子遗传学特点,有利于临床更好地认识肿瘤的发生与发展,并促进治疗水平的提高,但也应意识到,组织学形态仍是病理学诊断的基石.

目的 探讨胃肠间质瘤(GIST)中核转录因子RelA和RelB表达、c-Kit/PDGFRA基因突变及与临床病理特征之间的关系.方法 回顾性分析132例GIST患者的临床病理资料,采用免疫组化法检测RelA和RelB表达情况,采用直接测序法检测c-Kit和PDGFRA基因突变情况,分析RelA、RelB表达和c-Kit/PDGFRA基因突变与GIST临床病理特征之间的关系.结果 RelA、RelB在组织标本中的阳性表达率分别为65.2％(86/132)、54.5％(72/132).NIH危险度分级为高危患者的RelA阳性表达率为76.0％,高于非高危患者的58.5％(P = 0.041);而RelB表达与NIH危险度分级无关(P＞0.05).RelA和RelB表达与性别、年龄、肿瘤原发部位、肿瘤大小、肿瘤坏死及肿瘤溃疡均无关(P＞0.05).82例(62.1％)患者检测到c-Kit和PDGFRA热点突变,c-Kit基因突变者74例(56.1％),PDGFRA基因突变者8例(6.1％).c-Kit/PDGFRA基因突变患者的RelA阳性表达率为70.7％,高于野生型患者的56.0％(P = 0.085);而RelB表达与c-Kit/PDGFRA基因突变状态无关(P＞0.05).肿瘤直径>10 cm的患者c-Kit/PDGFRA基因突变率为78.6％,高于肿瘤直径≤10 cm者的57.7％(P =0.043).NIH高危者c-Kit/PDGFRA基因突变率为76.0％,高于非高危者的53.7％(P = 0.01).CD34阳性、DOG-1阳性患者的c-Kit/PDGFRA基因突变率分别为70.8％、64.1％,高于相应阴性患者的44.2％ (P = 0.003)和0 (P = 0.038).MBP和Desmin阳性患者的c-Kit/PDGFRA基因突变率分别为52.5％和30.8％,低于相应阴性患者的76.9％(P=0.005)和69.8％(P＜0.001).结论 RelA阳性或c-Kit/PDGFRA基因突变型患者危险度分级较高,预后可能更差.CD34和DOG-1阳性可能作为c-Kit/PDGFRA基因突变型GIST初步诊断的阳性指标,而MBP和Desmin阳性可能作为排除性诊断指标.

目的:探究三氧化二砷(arsenic trioxide,As 2 O3)作用于结直肠癌的靶基因.方法:利用pharmGKB数据库和drugbank5.0数据库分别提取三氧化二砷的直接靶基因,利用STRING10.5数据库筛选与三氧化二砷已知靶基因互相作用的蛋白,利用webGestalt数据库对互作蛋白进行通路分析和GO注释,运用cBioProtal数据库和The Human Protein Atlas数据库对重点通路的核心基因进行变异和表达分析.结果:pharmGKB数据库和drugbank5.0数据库共提取出11个直接靶基因,STRING10.5数据库筛选出384个互作蛋白,webGestalt数据库的GO注释这384个靶基因主要集中于19类分子功能,在前10条通路中筛选出3条与结直肠癌有关的通路,3个核心基因在结直肠癌中存在点突变和基因缺失,其中NF-κB1和RELA在结直肠癌组织中存在高表达.结论:三氧化二砷可能通过N F-Bκ信号通路治疗结直肠癌.

目的:利用CRISP/Cas9技术敲除C57BL/6小鼠中的RelB基因,为核因子(nuclear factor,NF)-κB转录因子蛋白家族的RelB基因与肿瘤转移等方面的研究提供RelB基因敲除实验动物模型.方法:利用基因编辑技术CRISPR/Cas9系统,设计并构建针对目的基因RelB第4外显子sgRNA,同时利用T7 RNA聚合酶体外转录Cas9 mRNA.取C57BL/6小鼠受精卵体外注射sgRNA和Cas9 mRNA后,进行胚胎移植,实现靶基因敲除.待小鼠出生后提取DNA并进行PCR鉴定,获得F0代,后与野生型交配后繁殖,取样提取DNA,测序分析鉴定后获得F1代小鼠,并在蛋白质水平和基因组水平分别验证敲除效果.结果:获得了4个在RelB基因突变的首建鼠,并得到了稳定遗传的RelB基因敲除小鼠.基因组测序结果示,敲除实验组中RelB的mRNA出现无义突变,令其mRNA翻译终止.与对照组相比,敲除实验组检测不到RelB蛋白表达.同时,Western blot结果显示,NF-κB家族中其他成员RelA、p50和p52的蛋白表达不受影响.结论:成功获得特异性敲除RelB的C57BL/6小鼠,为RelB在肿瘤转移、耐药中的研究提供了重要工具.

目的:研究致龋菌变形链球菌luxS基因在口腔细菌混合培养形成牙菌斑生物膜中的作用.方法:将变形链球菌野生株(UA159)及其2种luxS基因突变株(luxS基因高表达株和luxS基因缺陷株)分别与口腔细菌嗜酸乳杆菌(ATCC4356)按照1∶1比例接种于牛心脑浸液培养基,体外混合培养不同时间,包括生物膜形成过程中的初期(4 h)、中期(14 h)、晚期(24h),通过MTr法检测混合菌在生物膜形成的量.通过激光共聚焦显微镜观察混合细菌24h形成的生物膜结构,实时定量PCR检测变形链球菌相关基因(ftf,smu630,brpA,gbpB,gtfB,vicR,comDE和relA)的表达.采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:变形链球菌野生株及其2种luxS基因突变株与嗜酸乳杆菌混合培养14 h后,生物膜的量分别为0.481±0.024、0.591±0.023和0.279±0.019;24h后,混合细菌形成生物膜的量趋势与该时间点一致,变形链球菌高表达株高于野生株,而缺陷株明显降低;但4h后形成的生物膜组间无显著差异.激光共聚焦显微镜结果表明,高表达株和野生株的集聚程度更高,形成生物膜的结构更加紧密;而缺陷株生物膜菌间结构比较稀疏.以变形链球菌野生株和嗜酸乳杆菌混合形成的生物膜中相关基因的表达为标准,高表达株相关基因的表达均增加,缺陷株表达均降低,且各组间存在显著差异(P＜0.05).结论:变形链球菌luxS基因影响与具核梭杆菌混合培养形成的牙菌斑生物膜,为进一步研究该基因在生物膜中的作用及其调控机制提供了依据.

细菌对利福平耐药是由于rpoB基因突变,从而影响药物的结合位点所致.rpoB主要编码细菌RNA聚合酶的β亚单位,rpoB特定位点突变的作用不仅影响细菌对利福平的敏感性并可导致其他后果.最近一项全基因组研究发现,对万古霉素具有异质耐药性的金黄色葡萄球菌最显著的遗传标记是rpoB481残基的特异性突变.同时,该位点的突变对达托霉素和各种β内酰胺类抗生素的活性也有不利影响.此外,残基481和RelA128的特异性改变与MRSA持续感染有关,并能增加细菌产生荚膜及其在小鼠模型中的毒力减弱,同时对先天性免疫应答元素的敏感性降低.

目的 探索mazG基因参与调控mazEF毒素-抗毒素系统(TAs)介导的细菌生长抑制与程序性死亡的分子机制,明确MazG蛋白真正的生理功能.方法 以大肠杆菌MC4100为原型,通过relA基因的回复突变,获得relA野生型的菌株MC4200.通过同源重组的方法,构建大肠杆菌mazG、mazEF、mazEFG基因敲除菌株,测试mazG基因在不同基因背景菌株中过表达对细菌存活率的影响;通过rifampicin、H2O2及serine hydroxamate(SHT)等胁迫条件处理细菌,研究mazG及mazEFG操纵子缺失菌株的生长曲线与存活率;克隆大肠杆菌mazG基因,构建诱导型过表达质粒pET28a-mazG及突变体pET28a-mazG E38A,在BL21菌株中表达纯化MazG蛋白,通过酶学实验验证了MazG蛋白的去磷酸酶活性;测试突变体过表达对细菌存活率的影响.结果 mazG过表达对大肠杆菌MC4200的生长无显著影响,但对mazEFG基因敲除株具有显著抑制作用;MazG的细胞毒性依赖于其NTP-PPase酶活性;mazEF的存在会显著抑制mazG的表型;mazEF/mazG/mazEFG敲除不影响大肠杆菌正常环境下的生长曲线;在胁迫条件下,mazG敲除菌株的存活率与mazEFG的敲除菌株基本一致,显著高于野生型.结论 mazG基因参与mazEF诱导的细菌程序性死亡调控,并对细菌的生长抑制具有重要作用.本研究为TAs的研究提供了新的角度,有助于进一步理解TAs在细菌生长与死亡调节中的作用机制.