目的:挖掘中国人群非综合征型颅缝早闭患者的常见致病基因。方法:收集2018年3月至2020年12月复旦大学附属华山医院面向全国招募并入组的非综合征型颅缝早闭患者，设计临床问卷收集患者一般情况信息。在PubMed中输入关键词craniosynostosis、gene panel，提取1995年1月至2017年5月所有相关文献并设计基因面板。基因文库在Illumina HiSeq X平台上进行测序，并进行生物信息学分析及致病分析。结果:在PubMed和Ovid数据库中共查阅得到文献237篇，样本总量为3 375例患者，其中1 822例(54%)检测到相应突变，涉及21个致病基因。以突变检出率不低于0.4%为界，本研究挑选了12个热点基因：FGFR2、TWIST1、FGFR3、EFNB1、FGFR1、SKI、POR、RAB23、TCF12、MSX2、SMAD3和ERF构成基因面板，进行了二代测序。本研究共招募非综合征型颅缝早闭患者109例，其中男性62例，女性47例；入组平均年龄2.1岁；均无家族史；父亲平均生育年龄28.3岁；母亲平均生育年龄26.7岁。在19例患者的基因序列中发现了14个不同的致病或可能致病的突变位点，突变率为17.4%(19/109)。这14个突变位点分布在5个基因上，分别是FGFR2、TWIST1、TCF12、EFNB1、FGFR3。而这14个突变可以被分类为5个错义突变、3个无义突变、1个剪接突变、1个移码突变和4个框内缺失突变，其中有11个位点未见报道。这11个位点，主要集中于TWIST1和TCF12两个基因，突变类型包括：3个功能缺失、4个移码缺失、3个错义突变、1个移码插入，其中7个为新发突变。结论:TWIST1和TCF12两大基因是中国人群非综合征型颅缝早闭患者的常见致病基因。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-597靶向Rab23对肝癌细胞增殖、凋亡和周期的影响及其分子机制。方法:选取南阳市中心医院2017年5月到2019年5月收集的126例肝癌和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析正常肝细胞LO2、肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721和Huh7中miR-597表达水平；采用慢病毒在肝癌细胞系HepG2构建对照miRNA和miR-597过表达细胞系，分别为对照组和观察组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成实验和异体移植瘤实验分析肿瘤细胞的增殖能力；采用流式细胞术分析细胞周期和凋亡水平；采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-597的靶基因；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测靶蛋白表达水平。组间计量资料比较采用 t检验。 结果:肝细胞LO2中miR-597表达水平(1.09±0.15)明显高于肝癌细胞HepG2、SMMC-7721和Huh7 (0.37±0.14、0.45±0.16、0.58±0.14)，差异有统计学意义( t＝4.011、3.714、3.281， P<0.05)。对照组细胞吸光度值(2.87±0.26)明显高于观察组(1.53±0.22)，差异有统计学意义( t＝3.091， P<0.05)。对照组细胞克隆形成率[(71.23±8.29)%]明显高于观察组[(38.54±4.98)%]，差异有统计学意义( t＝5.220， P<0.05)。对照组小鼠体内肿瘤体积[(1 284.59±209.32) mm 3]明显高于观察组[(799.58±109.43) mm 3]，差异有统计学意义( t＝5.530， P<0.05)。对照组小鼠肿瘤重量[(3.98±0.29) g]明显高于观察组[(1.42±0.19) g]，差异有统计学意义( t＝3.218， P<0.05)。对照组细胞S期比例[(34.21±4.58)%]明显高于观察组[(44.58±5.87)%]，差异有统计学意义( t＝4.719， P<0.05)。对照组细胞G 2期比例[(32.14±4.28)%]低于观察组[(20.37±4.29)%]，差异有统计学意义( t＝3.612， P<0.05)。对照组细胞凋亡率[(3.76±1.09)%]明显低于观察组[(24.54±3.68)%]，差异有统计学意义( t＝4.006， P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶报告基因结果显示，Rab23是miR-597的靶基因。对照组细胞Rab23蛋白表达水平(1.48±0.18)明显高于观察组(0.79±0.15)，差异有统计学意义( t＝2.976， P<0.05)。 结论:miR-597通过Rab23调控肝癌细胞的增殖、周期和凋亡。

目的:探讨Ras相关结合蛋白23（RAB23）在食管鳞状细胞癌（简称食管鳞癌）细胞侵袭和迁移中的作用和机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应检测16例配对食管鳞癌及癌旁正常组织中RAB23 mRNA的表达。比较基因表达综合（GEO）数据库的GSE20347数据集中食管鳞癌和配对癌旁正常组织RAB23 mRNA的表达水平。免疫组织化学检测106例配对食管鳞癌和癌旁正常组织、33例淋巴结阳性与10例淋巴结阴性患者原发灶与淋巴结组织中RAB23蛋白含量。在食管鳞癌KYSE30和KYSE150细胞中瞬时敲降RAB23表达（转染si-RAB23-1和si-RAB23-9）或者稳定敲降RAB23表达（转染sh-RAB23），采用Western blot法验证RAB23敲降效率，采用细胞计数试剂盒8法和裸鼠皮下成瘤实验检测食管鳞癌细胞的增殖能力，采用Transwell实验和裸鼠尾静脉-肺转移实验检测食管鳞癌细胞的侵袭和迁移能力，采用细胞黏附实验检测食管鳞癌细胞的黏附能力，采用转录组测序技术分析RAB23敲降后对细胞转录谱的影响，并通过Western blot检测验证相关信号通路。结果:16例食管鳞癌组织中RAB23 mRNA表达水平为0.009 7±0.008 9，高于癌旁正常组织［0.003 2±0.003 7， P=0.006］。对GEO数据库GSE20347数据集中食管鳞癌和配对癌旁正常组织表达谱的生信分析显示，食管鳞癌组织中RAB23 mRNA表达水平为4.30±0.25，高于癌旁正常组织（4.10±0.17， P=0.037）。106例食管鳞癌组织中，51例RAB23低表达，55例RAB23高表达；而配对癌旁正常组织中，82例RAB23低表达，24例RAB23高表达，食管鳞癌组织中RAB23表达水平高于配对癌旁正常组织（ P＜0.001）。33例淋巴结阳性食管鳞癌组织中，1例RAB23低表达，32例RAB23高表达；10例淋巴结阴性的食管鳞癌组织中，3例RAB23低表达，7例RAB23高表达。淋巴结阳性食管鳞癌组织中RAB23表达水平高于淋巴结阴性食管鳞癌组织（ P=0.024）。33例阳性淋巴结组织中，1例RAB23低表达，32例RAB23高表达，而10例阴性淋巴结组织中均为RAB23低表达。阳性淋巴结组织中RAB23表达水平高于阴性淋巴结组织（ P＜0.001）。瞬时或稳定敲降RAB23后，KYSE30细胞体外和体内的增殖能力无明显变化，KYSE30细胞的细胞侵袭和迁移能力下降，而KYSE150细胞仅侵袭能力下降，迁移能力无明显变化。sh-RAB23组KYSE30细胞黏附细胞的数量为（313.75±89.34）个，少于sh-NC组［（1 030.75±134.29）个， P＜0.001］。sh-RAB23组KYSE150细胞的黏附细胞数为（710.5±31.74）个，也少于sh-NC组［（1 005.75±61.09）个， P＜0.001］。转录组测序分析显示，敲降RAB23后，si-RAB23-1组和si-RAB23-9组KYSE30细胞中黏着斑相关信号通路均被削弱，sh-RAB23组KYSE30和KYSE150细胞中p-FAK和p-paxillin表达水平降低。 结论:RAB23在食管鳞癌组织中高表达，与淋巴结转移有关。敲低RAB23表达后能够削弱黏着斑相关信号通路，进而抑制食管鳞癌细胞的侵袭、迁移和黏附。

目的 基于生物信息学方法筛选调控Rab23表达以及影响头颈部鳞状细胞癌预后相关的MicroiRNA(miRNA)并验证,为进一步探讨头颈部鳞状细胞癌的发生和侵袭作用机制提供新的研究思路和方法.方法 依据miRWalk数据库筛选调控Rab23表达的潜在miRNA,根据TCGA公共数据库和miRWalk数据库筛选影响头颈部鳞状细胞癌生存期的差异表达miRNA,双重筛选交集后确定调控Rab23表达及影响头颈部鳞状细胞癌预后相关的miRNA分子,再通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹和双荧光素酶实验进行结果验证.结果 筛选出250个差异表达miRNA,其中8个是潜在调控Rab23表达的miRNA.hsa-miR-363-3p是既能调控Rab23表达,又可显著影响头颈部鳞状细胞癌预后的miRNA.RT-qPCR、蛋白免疫印迹实验证实hsa-miR-363-3p与Rab23在肿瘤细胞和转染细胞模型中呈负调控;双荧光素酶实验验证hsa-miR-363-3p能够靶向作用于Rab23基因.结论 hsa-miR-363-3p参与靶向调控Rab23表达,可能参与了头颈部鳞状细胞癌的侵袭和转移的作用机制.

目的 探讨Rab11在儿童脓毒症不同时期和严重脓毒症中的表达及其与儿童脓毒症发生发展的关系.方法 选取2015年9月至2017年4月我院PICU收治的脓毒症患儿(40例)、严重脓毒症患儿(20例)作为研究对象,选取同期健康体检的40例儿童作为健康对照组.采用Western blot技术测定血液中白细胞Rab11的表达水平;其中,脓毒症组分别于疾病的初期、极期以及恢复期3次抽取血液标本测定.将脓毒症患儿3个不同时期及严重脓毒症患儿血液中白细胞Rab11的表达水平进行比较,并将上述血液中白细胞Rab11的表达水平与健康对照组儿童血液中白细胞Rab11的表达水平进行比较.采用Spearman相关分析,评价脓毒症患儿极期Rab11表达水平与患儿同期检测的血液中白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞计数及血清C-反应蛋白、降钙素原水平的相关性,并对原发病为重症肺炎、支气管扩张合并肺部感染、胆道感染、尿路感染、坏死性小肠结肠炎、重症肠道病毒感染所致的脓毒症患儿极期Rab11的表达水平进行比较.结果 脓毒症患儿在脓毒症初期、极期,严重脓毒症患儿血液中白细胞Rab11的表达水平明显低于健康对照组(分别为0.54倍、0.23倍和0.07倍),差异有统计学意义(P<0.05),而脓毒症恢复期血液中白细胞Rab11的表达水平与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);脓毒症患儿极期血液中白细胞Rab11的表达水平与外周血白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞计数不相关,而与血清C-反应蛋白(r=-0.58,P=0.014)和降钙素原(r=-0.63,P=0.003)水平呈负相关;原发病为重症肺炎、支气管扩张合并肺部感染、胆道感染、尿路感染、坏死性小肠结肠炎、重症肠道病毒感染所致的脓毒症患儿极期血液中,白细胞Rab11的表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 血液中白细胞Rab11在儿童脓毒症不同时期的表达差异,可以作为儿童脓毒症病情严重程度的预测指标.

The small Rab GTPases are key regulators of membrane vesicle trafficking.Ovaries of Periplaneta americana (Linnaeus) (Blattodea:Blattidae) have small molecular weight GTP/ATP-binding proteins during early and late vitellogenic periods of oogenesis.However,the identification and characterization of the detected proteins have not been yet reported.Herein,we cloned a cDNA encoding Rab5 from the American cockroach,P.americana,ovaries (PamRab5).It comprises 796 bp,encoding a protein of 213 amino acid residues with a predicted molecular weight of 23.5 kDa.PamRab5 exists as a single-copy gene in the P.americana genome,as revealed by Southern blot analysis.An approximate 2.6 kb ovarian mRNA was transcribed especially at high levels in the previtellogenic ovaries,detected by Northern blot analysis.The muscle and head tissues also showed high levels of PamRab5 transcript.PamRab5 protein was localized,via immunofluorescence labeling,to germline-derived cells of the oocytes,very early during oocyte differentiation.Immunoblotting detected a ～25 kDa signal as a membrane-associated form revealed after application of detergent in the extraction buffer,and 23 kDa as a cytosolic form consistent with the predicted molecular weight from amino acid sequence in different tissues including ovary,muscles and head.The PamRab5 during late vitellogenic periods is required to regulate the endocytotic machinery during oogenesis in this cockroach.This is the first report on Rab5 from a hemimetabolan,and presents an inaugural step in probing the molecular premises of insect oocyte endocytotic trafficking important for oogenesis and embryonic development.

目的:观察电针对骨癌痛-吗啡耐受大鼠痛行为的影响,探讨电针抗骨癌痛大鼠吗啡耐受效应的作用机制.方法:通过胫骨内接种MRMT-1乳腺癌细胞(3×104个)诱发骨癌痛,联合腹腔注射盐酸吗啡注射液(10mg· kg-1·d-1,分两次注射,连续注射11d)建立骨癌痛-吗啡耐受大鼠模型.第1部分:23只健康雌性SD大鼠随机分为假手术组(n=6)、骨癌痛组(n=9)、吗啡耐受组(n=8).第2部分:61只健康雌性SD大鼠随机分为假手术组(n=11)、骨癌痛组(n=11)、吗啡耐受组(n=13)、电针组(n=13)和假电针组(n=13).成功诱导吗啡耐受后1d(接种癌细胞后第22天)电针,于每日第1次吗啡腹腔注射后即刻电针,穴位选用双侧“足三里”和“昆仑”,每次30 min,每日1次,连续治疗7d.于癌细胞接种前和接种后10、11、21、22、24、26和28 d时检测大鼠患侧机械缩足阈(PWTs);胫骨X线及HE染色观察胫骨组织形态;免疫荧光组织化学法(IHC)检测大鼠蓝斑核(LC)内μ阿片受体(MOR)、Rab5阳性细胞表达及其共表达情况.结果:癌细胞接种后10 d,骨癌痛组、吗啡耐受组、电针组和假电针组大鼠PWTs均显著低于同期假手术组(P＜0.01);接种后21 d(即吗啡持续注射后11d),4组大鼠PWTs均显著低于同期假手术组(P＜0.01);接种后22～28 d(即电针1～7 d),电针组大鼠患侧PWTs显著高于同期骨癌痛组、吗啡耐受组和假电针组(P＜0.01).X线结果显示骨癌痛大鼠左侧胫骨近端上1/3处骨皮质破坏,呈不连续状,且局部软组织可见明显肿胀.HE染色结果显示,假手术组大鼠胫骨结构完整,骨髓腔内未见MRMT-1癌细胞;骨癌痛组和吗啡耐受组骨髓腔内见大量MRMT-1癌细胞.IHC结果显示:骨癌痛组、吗啡耐受组大鼠LC内MOR、Rab5阳性细胞率及MOR+/Rab5+阳性率均低于假手术组(P＜0.01);吗啡耐受组大鼠LC内Rab5阳性细胞率及MOR+/Rab5+阳性率均低于同期骨癌痛组(P＜0.05);电针组大鼠LC内MOR、Rab5阳性细胞率及MOR+/Rab5+阳性率均显著高于同期骨癌痛组、吗啡耐受组和假电针组(P＜0.01).结论:电针可缓解骨癌痛-吗啡耐受大鼠的机械痛阈,部分翻转吗啡耐受现象;该效应可能与其提高大鼠LC内MOR表达、促进MOR内吞有关.

目的 探讨microRNA-582-5p(miR-582-5p)在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达及其对A549细胞增殖、侵袭的影响,以及对Rab27a基因的靶向调控作用.方法 采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测33例行手术治疗的NSCLC患者的癌组织、对应癌旁组织以及A549细胞株、人正常支气管肺上皮细胞株BEAS-2B中miR-582-5p的表达水平.采用miR-582-5p inhibitor(anti-miR-582-5p)和miR-582-5p mimics(mim-miR-582-5p)转染A549细胞,另分别转染miRNA inhibitor无关系列(antiNC)和miRNA mimics无关系列(mim-NC)作阴性对照.采用双荧光素酶报告实验验证Rab27a与miR-582-5p的关系.采用MTT法和Transwell小室法检测各组细胞增殖、侵袭能力;采用QPCR和Western blotting检测各组A549细胞中Rab27a mRNA和蛋白水平.结果 NSCLC组织和癌旁组织中miR-582-5p表达水平分别为0. 26±0. 09和0. 83±0. 10; A549细胞株和BEAS-2B细胞株中miR-582-5p表达水平分别为0. 63±0. 08和1. 17±0. 09,差异均有统计学意义(P＜0. 05).anti-miR-582-5p组A549细胞24、48、72、96 h后的增殖率分别为(115. 68±4. 34)％、(130. 48±5. 48)％、(138. 95±5. 55)％、(147. 03±5. 69)％,明显高于anti-NC组; mim-miR-582-5p组A549细胞24、48、72、96 h后的增殖率分别为(91. 31±4. 18)％、(86. 74±3. 23)％、(79. 45±3. 20)％、(75. 22±4. 09)％,明显低于mim-NC组,差异均有统计学意义(P＜0. 05).Transwell小室结果显示,anti-miR-582-5p组A549细胞侵袭数为189±19,明显高于anti-NC组; mim-miR-582-5p组A549细胞侵袭数为55±8,明显低于mim-NC组,差异均有统计学意义(P＜0. 05).miR-582-5p可抑制野生型Rab27a 3'-UTR报告基因载体的荧光素酶活性,而对突变型Rab27a 3'-UTR的荧光素酶活性无影响.anti-miR-582-5p组A549细胞Rab27a mRNA和蛋白表达水平分别为2. 01±0. 29和0. 85±0. 12,高于anti-NC组; mimi-miR-582-5p组A549细胞Rab27a mRNA和蛋白表达水平分别为0. 35±0. 08和0. 21±0. 05,明显低于mim-NC组,差异均有统计学意义(P＜0. 05).结论 上调miR-582-5p表达可抑制Rab27a表达,从而抑制肺癌A549细胞增殖、侵袭活性,miR-582-5p有望成为肺癌新的治疗靶点.

目的 探讨miR-802和RAB23在食管鳞癌中的表达水平及其临床意义.方法 选取2014年3月～2015年2月于笔者医院进行食管癌根治手术的标本120例为食管鳞癌组,另选取癌旁正常组织为对照组(120例).采用实时荧光定量PCR法检测食管鳞状癌组织及癌旁组织中miR-802与RAB23 mRNA相对表达量,免疫组化法检测食管鳞状细胞组织中RAB23蛋白表达,根据检测结果将miR-802分为高表达组与低表达组,RAB23分为阳性表达组与阴性表达组,并分析miR-802、RAB23表达与患者临床病理参数的关系,采用Pearson法分析miR-802与RAB23的相关性,Kaplan-Meier法对食管鳞癌患者的生存情况进行分析,并采用Log-Rank法检测不同表达组间生存差异.结果 与正常组比较,食管鳞癌组miR-802表达水平显著降低(P＜0.05),而RAB23 mRNA表达水平显著升高(P＜0.05);免疫组化组显示食管鳞癌组RAB23蛋白阳性表达显著高于正常组(P＜0.05);临床病理分析结果显示miR-802与组织分化程度、TNM分期、浸润程度显著相关(P＜0.05),RAB23与淋巴结转移、TNM分期及组织分化程度显著相关(P＜0.05);Pearson相关性分析显示miR-802与RAB23呈显著负相关(P＜0.05);Kap-lan-Meier曲线显示miR-802高表达组PFS、OS均显著高于低表达组(P＜0.05),RAB23阴性表达组PFS、OS均显著高于阳性表达组(P＜0.05).结论 miR-802在食管鳞癌组织中低表达,RAB23高表达,二者呈负相关,且与患者病情进展及预后有关,可作为早期判断食管鳞癌病情以及评定患者预后的指标.

目的 探讨microRNA-802(miR-802)和RAB23在前列腺癌中的表达水平及临床意义.方法 选取在海南省第三人民医院泌尿外科手术切除的前列腺癌标本60例,并选取其相对应癌旁组织作为对照,用免疫组织化学检测miR-802和RAB23的表达水平,分析miR-802和RAB23表达水平与前列腺癌患者临床病理参数间的关系及与前列腺癌患者预后.结果 miR-802和RAB23在前列腺癌组织中的阳性率分别为73.33％ 和70.00％,高于癌旁组织中的33.33％ 和28.33％(P<0.05).miR-802和RAB23表达水平与年龄和术前PSA无关(P>0.05);与Gleason评分相关,评分越高,表达率越低(P<0.05);与病理分期相关,表达高则病理分期早(P<0.05).miR-802和RAB23表达水平阴性组3年生存率及生存期均高于miR-802和RAB23表达水平阳性组(P<0.05).结论 miR-802和RAB23 mRNA在前列腺癌组织中的表达阳性率高于癌旁组织,阴性表达能获得较好的预后.