目的:观察微小RNA(miRNA，miR)-193a-5p靶向调控Ras相关结构域家族蛋白2(RASSF2)表达抑制炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素(IL)-1β水平及其对心力衰竭模型大鼠心脏功能的影响。方法:取60只12～16周龄的清洁级Wistar大鼠(30只雄鼠，30只雌鼠)。2.5%戊巴比妥钠(35mg/kg)麻醉大鼠，暴露大鼠心脏后，随机选择15只大鼠进行缝合(对照组)，15只注射磷酸盐缓冲液(PBS)为PBS组，15只注射空白AAV质粒载体为AAV组，15只注射AAV-miR-193a-5p为miR-193a-5p组。PBS组、AAV组和miR-193a-5p组的大鼠冠状动脉左前降支行冠状动脉结扎构建心力衰竭模型。术后4周，彩色多普勒超声心动图检测舒张期和收缩期左心室后壁厚度(LVPWT)、室间隔厚度(IVST)、左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室收缩末期内径(LVESd)和左心室射血分数(LVEF)。应用双荧光素酶报告基因实验探索miR-193a-5p是否与RASSF2的3’非翻译区相互作用。结果:术后4周，与对照组比较(4.79±0.33)，PBS组(1.57±0.16)和AAV组(1.66±0.18) miR-193a-5p表达降低，而miR-193a-5p组(9.02±0.76) miR-193a-5p表达增高( P<0.05)。与对照组[IVST：(1.88±0.15) mm；LVPWT：(1.93±0.22) mm；LVEDd：(5.44±0.79) mm；LVEF：(52.72±4.98)%]和miR-193a-5p组[IVST：(1.97±0.16) mm；LVPWT：(2.09±0.21) mm；LVEDd：(5.98±0.81) mm；LVEF：(48.83±4.17)%]比较，PBS组[IVST：(2.69±0.28) mm；LVPWT：(2.74±0.36) mm；LVEDd：(6.87±0.84) mm；LVEF：(37.45±3.55)%]和AAV组[IVST：(2.63±0.25) mm；LVPWT：(2.68±0.34) mm；LVEDd：(6.93±0.90) mm；LVEF：(36.10±3.42)%]左心室IVST、LVPWT和LVEDd显著增高，LVEF显著降低( P<0.05)，对照组与miR-193a-5p组间差异无统计学意义( P>0.05)。与对照组[TNF-α：(2.01±0.18) μg/L；IL-1β：(8.76±1.48) ng/L；RASSF2：(1.23±0.21)]和miR-193a-5p组[TNF-α：(2.23±0.21) μg/L；IL-1β：(8.90±1.54) ng/L；RASSF2：(1.30±0.25)]比较，PBS组[TNF-α：(5.67±0.52) μg/L；IL-1β：(11.34±2.55) ng/L；RASSF2：(7.44±0.89)]和AAV组[TNF-α：(5.88±0.58) μg/L；IL-1β：(10.99±2.49) ng/L；RASSF2：(7.89±0.97)]血清TNF-α、IL-1β和RASSF2显著增高( P<0.05)，而对照组与miR-193a-5p组间差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:通过上调心力衰竭模型大鼠miR-193a-5p表达可抑制RASSF2蛋白表达，并显著抑制炎性因子TNF-α与IL-1β水平，进而提高心力衰竭模型大鼠心脏功能。

由PTPN11基因编码的含Src同源2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2(Src homology 2 domain-con-taining protein tyrosine phosphatase,SHP2)是细胞关键调节因子蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phospha-tase,PTP)家族的一员,在多种恶性肿瘤中高表达.一方面,SHP2通过介导RAS-MAPK,PI3K-AKT和JAK-STAT等信号通路调节肿瘤细胞的生理功能.另一方面,在肿瘤微环境中,SHP2与免疫抑制受体[如程序性死亡受体 1(programmed death-1,PD-1)、细胞毒性 T 淋巴细胞相关抗原 4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4,CTLA-4)等]结合,调节免疫细胞的功能,造成免疫微环境的抑制性.因此,SHP2在肿瘤中具有调节肿瘤细胞和免疫微环境的双重功能,提示其为极具价值的肿瘤治疗靶点.近年来,大量具有成药潜力的SHP2抑制剂进入临床试验,为肿瘤靶向治疗提供新的可能.目前SHP2抑制剂的研究已经取得一定成果,但仍存在较多耐药性、非特异性和毒性等问题.因此,需进一步研究SHP2抑制剂的成药性和靶向策略.本文对S HP2参与信号通路的调控机制和其在肿瘤和免疫微环境中的作用进行总结,并对S H P2抑制剂及其临床研究进展进行综述.

目的 联合矮小同源盒基因2(Short stature homeobox gene 2,SHOX2)、RAS相关结构域家族 1 亚型 A(RAS association domain family 1,isoform A,RASSF1A)及癌胚抗原(Carci-noembryonic antigen,CEA)构建预测肺癌发生的列线图模型,并确定该模型的预测价值.方法 选择2020年1月至2022年12月在新疆医科大学第一附属医院就诊的88例肺癌患者及肺良性肿瘤患者219名.比较两组患者的人口统计学和临床特征信息以及支气管肺泡灌洗液(Bron-choalveolar lavage fluid,BALF)中SHOX2和RASSF1A基因的甲基化水平.进行单因素分析及多因素Logistic回归分析筛选出影响肺癌发生的变量构建列线图,并评估其预测效能.结果 肺癌患者中SHOX2阳性36例(41.4％),RASSF1A阳性30例(34.5％).肺癌患者CEA、细胞角蛋白 19 片段(Cytokeratin 19 fragment,CYFRA21-1)、鳞状上皮细胞癌抗原(Squamous cell carcino-ma antigen,SCCA)、胃泌素释放肽前体(Pro-gastrinreleasing peptide,Pro-GRP)水平与肺良性肿瘤患者比较差异有统计学意义(P＜0.05).Logistic回归分析显示,SHOX2、RASSF1A和CEA为肺癌发生的独立危险因素(P＜0.05),基于上述独立风险因素所构建的列线图模型显示出良好的区分能力(AUC=0.926),具有较好的一致性且获益良好.结论 联合SHOX2、RASSF1A和CEA构建的列线图模型对肺癌发生具有较高的预测价值,可为肺癌的早期诊断提供依据.

目的 基于Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路探讨茯苓酸(PA)对慢性肾衰竭(CRF)大鼠肾功能、纤维化的影响及潜在机制.方法 以雄性SD大鼠为对象,以5/6肾切除术建立CRF大鼠模型,将造模成功的大鼠分为模型组,PA低、中、高剂量组(5、10、20 mg/kg PA)和PA高剂量+ROCK通路激活剂溶血磷脂酸(LPA)组(20 mg/kg PA+1 mg/kg LPA),每组15只;另取15只大鼠仅切口暴露肾脏但不切除,作为假手术组.各药物组大鼠灌胃和/或尾静脉注射相应药液,每天1次,连续12周.实验期间,观察各组大鼠一般情况;末次给药后,检测各组大鼠的血清肾功能指标(血尿素氮、血清肌酐、尿酸)水平,观察其肾组织病理学改变,并进行肾小管损伤评分和肾纤维化区域面积量化,检测其肾组织中氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)]、炎症因子(肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6)水平,结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ)阳性表达率,以及通路相关蛋白(RhoA、ROCK1)、纤维化相关蛋白(转化生长因子β1、裸角质层同源物2、α-平滑肌肌动蛋白)表达水平.结果 与假手术组比较,模型组大鼠饮食减少,体型瘦小,精神萎靡且反应迟钝,肾小球减少、萎缩,肾小管扩张且结构杂乱,间质可见大量炎症细胞浸润;其血清肾功能指标水平,肾小管损伤评分、肾纤维化面积占比、肾组织MDA和炎症因子水平、CTGF和collagen Ⅰ阳性表达率、通路相关蛋白和纤维化相关蛋白的表达水平均显著升高,SOD水平显著降低(P＜0.05).与模型组比较,PA各剂量组大鼠的一般情况和肾组织病理损伤均有不同程度好转,上述各定量指标均显著改善,且呈剂量依赖性(P＜0.05).LPA可显著逆转PA对上述指标的改善作用(P＜0.05).结论 PA能改善CRF大鼠肾功能并减轻肾组织纤维化,上述作用可能与抑制RhoA/ROCK信号通路的激活有关.

目的:探究矮小同源盒基因(SHOX2)和 Ras 相关结构域蛋白家族 1A(RASSF1A)基因甲基化与非小细胞肺癌(NSCLC)浸润、转移的关系.方法:采用甲基化特异性 PCR 法(MSP)分析 NSCLC及其相应癌旁组织中SHOX2 和RASSF1A基因启动子区甲基化状态,分析其甲基化状态与患者临床病理特征的关系.结果:NSCLC 癌组织中 SHOX2 和 RASSF1A 基因启动子区甲基化率分别为 68.97%(80/116)、33.62%(39/116),明显高于癌旁正常组织中的 12.93%(15/116)、10.34%(12/116)(P<0.05);SHOX2 和RASSF1A基因甲基化分布情况与 NSCLC 患者性别、年龄、吸烟史、肿瘤直径、分化程度无关(P>0.05),与其TNM分期、病理分型、淋巴结转移以及患者生存时间有关(P<0.05),TNM 分期中Ⅲa+Ⅲb期患者SHOX2 基因甲基化率明显高于Ⅰ+Ⅱ期患者(P<0.05),鳞癌患者基因甲基化率明显高于腺癌患者(P<0.05),有淋巴结转移患者基因甲基化率明显高于无淋巴结转移患者(P<0.05),生存时间<2 年患者基因甲基化率明显高于生存时间≥2 年患者(P<0.05);TNM 分期中Ⅲa+Ⅲb 期患者RASSF1A基因甲基化率明显高于Ⅰ+Ⅱ期患者(P<0.05),腺癌患者基因甲基化率明显高于鳞癌患者(P<0.05),有淋巴结转移患者基因甲基化率明显高于无淋巴结转移患者(P<0.05),生存时间<2 年患者基因甲基化率明显高于生存时间≥2 年患者(P<0.05).结论:SHOX2 和 RASSF1A 基因启动子区甲基化可能是 NSCLC 发生浸润以及转移的原因之一,检测 SHOX2 和 RASSF1A 基因启动子区甲基化可为NSCLC的诊断及预后评估提供参考价值.

目的 探讨Ras相关结构域蛋白家族1A(ras association domain family 1A,RASSF1A)基因甲基化和鳞状上皮细胞癌抗原(squamous cell carcinoma antigen,SCC)联合检测对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者术后转移评价的价值. 方法 选择2014年1月至2015年6月在龙岩市第二医院就诊的57例NSCLC患者,测定患者术前血浆RASSF1A基因甲基化、血清SCC水平,同时检测患者术后肿瘤组织RASSF1A基因甲基化水平.出院后随访12个月,根据随访结果分为转移组和非转移组,分析两组血浆及组织RASSF1A基因甲基化阳性率、术前血清SCC水平与术后转移的关系. 结果 发生转移的患者术前血清SCC水平、术后组织和术前血浆RASSF1A甲基化阳性率均高于未发生转移的患者,差异有统计学意义(P<0.05).根据肿瘤组织RASSF1A基因甲基化、术前血清SCC水平对NSCLC患者术后转移判定的ROC曲线,NSCLC患者肿瘤组织RASSF1A基因甲基化、术前血清SCC水平符合预测NSCLC术后转移的条件.将SCC水平4.05 ng/mL、RASSF1A甲基化阳性作为危险分层界值,绘制Kaplan-Meier生存曲线显示,高危组与低危组两组术后转移比较差异具有统计学意义(P<0.05). 结论 NSCLC患者肿瘤组织RASSF1A基因甲基化、术前血清SCC水平越高,发生术后转移的风险越高,检测NSCLC患者肿瘤组织RASSF1A基因甲基化、术前血清SCC水平对NSCLC患者危险分层及术后转移评估具有一定的临床价值.

目的 银屑病是一种慢性、炎症性皮肤病,Yes相关蛋白(YAP)在银屑病皮损中表达升高,并可通过促进细胞增殖、抑制凋亡等作用在银屑病中促进其发生、发展,然而其上游负性调控因子RAS相关结构域家族1A(RASSF1A)在银屑病病程中的作用及对YAP表达的影响尚不明确.方法 免疫组织化学检测银屑病患者皮损组织中RASSF1A表达,用10 ng/mL 的M5(IL-1α、IL-17、IL-22、TNF-α、Oncostatin M)刺激原代人表皮角质形成细胞(KC)及人永生化角质形成细胞系HaCaT 48 h制作银屑病细胞模型,外用咪喹莫特的方式建立银屑病鼠模型,qPCR、Western blot及免疫荧光分别检测RASSF1A及YAP的表达.结果 免疫组织化学显示银屑病患者皮损中RASSF1A的表达强度较正常皮肤降低;在银屑病细胞模型中,qPCR及Western blot结果显示YAP mRNA及蛋白的表达升高,且这一趋势在HaCaT细胞中更明显,免疫荧光显示,在KC细胞制作的银屑病细胞模型中RASSF1A蛋白表达强度降低,YAP蛋白的表达强度升高;在银屑病动物模型中,免疫组织化学显示RASSF1A的表达强度较对照组降低、YAP的表达强度较对照组升高,Western blot同样证实银屑病模型组RASSF1A蛋白表达降低、YAP蛋白表达升高.结论 在银屑病中RASSF1A及YAP的表达呈相反趋势,研究药物增加RASSF1A的表达有望通过抑制YAP表达达到治疗银屑病的目的.

目的 观察化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠Hippo信号通路哺乳动物不育系20样激酶2 (MST2)、RAS相关区域家族亚型A(RASSF1A)、含WW结构域的人同源重组蛋白1(SAV1)表达的影响,探讨其可能的作用机制.方法 采用联合造模法制备CAG大鼠模型,成模大鼠随机分为模型组、维酶素组和化浊解毒方高、中、低剂量组,每组10只,同时设正常组10只.正常组和模型组给予蒸馏水灌胃,维酶素组给予维酶素混悬液灌胃,化浊解毒方高、中、低剂量组给予相应剂量药液灌胃,连续12周.HE染色观察大鼠胃黏膜组织病理变化,RT-qPCR和Western blot分别检测大鼠胃黏膜组织RASSF1A、SAV1、MST2 mRNA和蛋白的表达.结果 与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜组织RASSF1A、SAV1、MST2 mRNA和蛋白表达明显降低(P＜0.05);与模型组比较,化浊解毒方高、中剂量组和维酶素组大鼠胃黏膜组织RASSF1A、SAV1、MST2mRNA和蛋白表达均明显升高(P＜0.05),其中化浊解毒方高剂量组升高最明显.结论 化浊解毒方具有干预CAG大鼠和延缓癌变进展的作用,其机制可能与上调模型大鼠抑癌基因RASSF1A、SAV1、MST2的表达相关.

目的:探讨夏枯草黄酮对骨关节炎(OA)大鼠软骨细胞凋亡及Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)通路的影响.方法:通过切断大鼠前交叉副韧带、内侧副韧带,摘除内侧半月板构建OA大鼠模型,将造模成功大鼠随机分为OA组、夏枯草黄酮低、中、高剂量组和RhoA通路抑制剂(Y-27632)组;另取12只大鼠仅剪开皮肤暴露关节腔,作为假手术组;假手术组和OA组大鼠均给予生理盐水灌胃,夏枯草黄酮低、中、高剂量组分别给予6.125,12.250,24.500 mg/kg夏枯草黄酮灌胃,Y-27632组给5 mg/kg的Y-27632灌胃;1次/d,连续8周.末次给药后24 h,检测大鼠压痛阈值、热痛阈值,酶联免疫吸附法检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平,苏木精-伊红(HE)染色法观察大鼠关节软骨形态,一步法原位末端标记(TUNEL)法检测大鼠软骨细胞凋亡,蛋白免疫印迹法检测大鼠软骨组织凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及RhoA/ROCK通路蛋白的表达.结果:假手术组大鼠关节软骨结构清晰,排列规整,表层光滑无缺损,各层细胞分布均匀;OA组大鼠关节软骨表层粗糙且不完整,纤维化明显,各层细胞排列紊乱;夏枯草黄酮各剂量组、Y-27632组大鼠表层结构相对正常,但部分区域仍存在细胞紊乱现象;夏枯草黄酮高剂量组与Y-27632组两组间大鼠骨关节软骨形态差异不明显.与假手术组比较,OA组大鼠压痛阈值及热痛阈值显著降低,Mankin's评分、血清TNF-α及IL-1β水平、软骨细胞凋亡数、软骨组织Caspase-3、RhoA、ROCK蛋白表达显著升高(P＜0.05);与OA组比较,夏枯草黄酮低、中、高剂量组压痛阈值及热痛阈值显著升高,Mankin's评分、血清TNF-α及IL-1β水平、软骨细胞凋亡数、软骨组织Caspase-3、Rho A、ROCK蛋白表达显著降低,且呈现夏枯草黄酮剂量依赖性(P＜0.05);夏枯草黄酮高剂量组和Y-27632组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论:夏枯草黄酮通过抑制OA大鼠软骨细胞凋亡改善大鼠关节软骨损伤,可能与抑制RhoA/ROCK信号通路有关.

目的 系统分析支气管抽吸物(包括支气管肺泡灌洗液和冲洗液)中矮小同源盒2(SHOX2)和Ras相关结构域家族蛋白1A(RASSF1A)DNA甲基化对肺癌的诊断效能.方法 检索PubMed、Embase、The Cochrane Library、Web of Science、Clinical Trail、CNKI、万方数据库发表的关于SHOX2和RASSF1A甲基化对肺癌诊断价值的文献,检索日期截至2021年5月11日,进行数据提取和质量评价,使用Stata 16.0软件进行Meta分析.结果 本研究共纳入20篇文献,中文文献8篇,英文文献12篇.Meta分析结果显示:SHOX2甲基化诊断肺癌合并后的灵敏度、特异度、阳性似然比、阴性似然比和曲线下面积(AUC)分别为0.73、0.90、7.50、0.30和0.86.RASSF1A甲基化诊断肺癌合并后的灵敏度、特异度、阳性似然比、阴性似然比和AUC分别为0.51、0.96、14.10、0.50和0.82.SHOX2和RASSF1A甲基化联合诊断肺癌合并后的灵敏度、特异度、阳性似然比、阴性似然比和AUC分别为0.78、0.87、5.80、0.26、0.90.结论 支气管抽吸物中SHOX2和RASSF1A甲基化对肺癌的诊断价值较高,对CT检查可疑肺癌的患者,其可能是肺癌早期筛查的重要手段.