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慢病毒介导Wnt蛋白5a基因过表达对骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死大鼠的影响
编辑人员丨6天前
目的:探讨Wnt信号通路蛋白5a(Wnt5a)基因过表达对骨髓间充质干细胞(BMSC)移植治疗心肌梗死的影响及分子机制。方法:结扎雄性SD大鼠冠脉前降支制备心肌梗死动物模型,按数字表法分为实验组(40只)和假手术组(20只),4周后超声检测大鼠血流动力学指标变化;分离大鼠BMSC并在体外培养纯化,建立Wnt5a稳定沉默(sh-Wnt5a)和过表达的(oe-Wnt5a)BMSC细胞株,采用划痕实验检测Wnt5a沉默和过表达对细胞迁移能力的影响;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)技术检测心肌梗死大鼠模型组血清中胰岛素样生长因子1(IGF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、干细胞因子(SCF)和肝细胞生长因子(HGF)的含量;BMSC移植治疗心肌梗死大鼠,实验共分4组:心肌梗死对照组,生理盐水组、BMSC组和oe-Wnt5a组。移植治疗4周后,超声检测血流动力学变化后取材大鼠心肌,冰冻切片、苏木精-伊红(HE)染色后检测大鼠心肌梗死的面积;采用蛋白质印迹法(Western blot)技术检测移植后大鼠心肌组织中Wnt5a、桩蛋白(Paxillin)、干细胞因子受体(C-KIT)、Ca 2+依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和钙敏感受体(CaSR)蛋白的表达,两组和多组间比较分别采用 t检验和单因素方差分析。 结果:(1)成功建立Wnt5a稳定沉默和过表达的BMSC细胞模型。sh-Wnt5a组细胞迁移率显著低于对照组(6.67±1.02比18.71±3.02, t=6.542, P<0.01),oe-Wnt5a组细胞迁移率显著高于对照组(43.33±7.95比18.71±3.02, t=5.014, P<0.01)。(2)ELISA结果显示,BMSC组及oe-Wnt5a组的血清中IGF-1、VEGF、SCF和HGF的浓度明显高于心肌梗死组[(5 473.20±474.55)、(1 237.85±173.90)、(548.09±77.06)、(136.14±37.41) pg/ml比(3 799.20±384.99)、(652.32±95.34)、(352.78±65.89)、(62.92±12.93) pg/ml, t=4.745、5.114、3.337、3.204, P<0.05];oe-Wnt5a组的血清中IGF-1、VEGF、SCF和HGF的浓度明显高于BMSC组[(6 264.31±498.87)、(1 445.75±179.58)、(663.22±79.71)、(238.15±62.09) pg/ml比(5 473.20±474.55)、(1 237.85±173.90)、(548.09±77.06)、(136.14±37.41) pg/ml, t=3.990、5.441、3.799、3.437, P<0.05]。(3)移植治疗4周,大鼠心功能血流动力学有所改善。BMSC组的Wnt5a、Paxillin、C-KIT、和CaSR蛋白显著高于心肌梗死组(33.37±7.34、86.71±13.12、57.67±11.23、96.45±11.45比14.19±5.26、61.62±10.76、26.81±7.89、64.01±7.75, t=3.679、3.561、3.895、4.064, P<0.05);oe-Wnt5a组的Wnt5a、Paxillin、C-KIT、CAMKⅡ和CaSR蛋白表达显著高于心肌梗死组(60.33±10.12、90.22±15.42、86.44±12.45、73.30±11.34、108.69±14.43比14.19±5.26、61.62±10.76、26.81±7.89、47.66±9.87、64.01±7.75, t=7.007、2.635、7.007、2.954、4.725, P<0.05)。Wnt5a和C-KIT蛋白表达显著高于BMSC组(60.33±10.12、86.44±12.45比33.37±7.34、57.67±11.23, t=3.735、2.972, P<0.05)BMSC组和Oe-Wnt5a的心梗面积小于心肌梗死组(20.98±1.46、14.14±3.11比32.79±3.96, t=4.825、6.415, P<0.05),Oe-Wnt5a组的梗死面积小于BMSC组(14.14±3.11比20.98±1.46, t=3.448, P<0.05)。 结论:Wnt5α基因过表达能有效促进BMSC的迁移及细胞因子的表达,过表达Wnt5a的BMSC移植治疗心肌梗死大鼠比单独移植BMSC疗效更显著。
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编辑人员丨6天前
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中医药干预慢传输型便秘鼠SCF/C-kit及其级联信号通路研究进展
编辑人员丨2024/6/22
中医药治疗慢传输型便秘具有疗效好、层次多、靶点丰富、多通路及双向调节等优势,随着相关实验研究逐渐深入,可知干细胞因子(SCF)/C-kit及其级联信号通路PI3K/AKT、磷脂酶C-γ、MAPKs等是其关键通路.为进一步阐明相关机制,本文梳理近年中医药干预慢传输型便秘鼠SCF/C-kit及其级联信号通路的实验研究现况,总结得出其机制可能是恢复慢传输型便秘鼠结肠黏膜的正常结构和功能、调节信号通路相关蛋白含量及基因表达、维持Cajal间质细胞的数量和功能、调节肠神经递质及水通道蛋白含量、减少炎症因子释放.探讨中医药干预慢传输型便秘鼠SCF/C-kit及其级联通路的具体作用靶点和机制,以期为今后开展更深层次研究提供参考.
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编辑人员丨2024/6/22
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基于SCF/C-kit信号通路探讨黄连解毒汤对脑出血急性期模型大鼠胃损伤的影响
编辑人员丨2024/4/27
目的:观察黄连解毒汤对脑出血急性期模型大鼠胃损伤的干预作用,并从干细胞因子/酪氨酸激酶受体(SCF/C-kit)信号通路方面探索其作用机制.方法:选择健康SD雄性10周龄大鼠进行实验.取部分大鼠采用自体血注入法制作脑出血模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、莫沙必利组和黄连解毒汤组,每组24只;另取24只大鼠仅进针不注入自体血,作为假手术组;另取24只常规饲养大鼠作为正常组.黄连解毒汤组大鼠予黄连解毒汤颗粒剂悬浊液54 mg/d灌胃,莫沙必利组大鼠予莫沙必利悬浊液0.27 mg/d灌胃,其余各组均灌胃给予生理盐水.分别于给药24 h、4 d、7 d后,随机取每组8只大鼠,处死取材.采用苏木精-伊红(HE)染色法观察各组各时期大鼠胃组织损伤情况并进行病理损伤评分,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组各时期大鼠胃组织SCF、C-kit mRNA表达水平,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组各时期大鼠胃组织SCF、C-kit蛋白相对表达量.结果:正常组与同期假手术组大鼠胃黏膜病理评分、胃组织SCF、C-kit mRNA及蛋白表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05);正常组、假手术组上述指标不同时间点组内比较,差异均无统计学意义(P>0.05).模型组大鼠胃黏膜各观察时点病理评分均明显高于同期正常组、假手术组(P<0.01),胃组织SCF、C-kit mRNA及蛋白相对表达量均明显低于同期正常组、假手术组(P<0.01).黄连解毒汤组、莫沙必利组大鼠各观察时点胃黏膜病理评分均明显低于同期模型组(P<0.01),给药7 d时评分均明显低于同组给药24 h、4 d时(P<0.05,P<0.01);黄连解毒汤组大鼠各观察时点胃黏膜病理评分均明显低于同期莫沙必利组(P<0.01).黄连解毒汤组、莫沙必利组大鼠各观察时点胃组织SCF、C-kit mRNA及蛋白相对表达量均明显高于同期模型组(P<0.01),给药7 d时上述指标相对表达量均明显高于同组给药24 h、4 d时(P<0.05,P<0.01);黄连解毒汤组大鼠各观察时点上述指标相对表达量均明显高于同期莫沙必利组(P<0.01).结论:脑出血急性期常继发急性胃黏膜损伤,黄连解毒汤对脑出血急性期胃黏膜损伤有一定的保护作用,其可能通过调控SCF/C-kit信号通路保护胃黏膜,有效减轻胃黏膜损伤.
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编辑人员丨2024/4/27
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温胃阳汤对功能性消化不良大鼠肥大细胞活化及SCF/c-Kit信号通路的影响
编辑人员丨2024/3/16
目的:基于肥大细胞活化及干细胞因子(stem cell factor,SCF)/受体酪氨酸激酶c-Kit信号通路探讨温胃阳汤治疗大鼠功能性消化不良的作用机制.方法:将60只SD大鼠随机分为空白组,模型组,雷尼替丁组及温胃阳汤低、中、高剂量组,每组10只.空白组大鼠不予造模,其他各组采用夹尾刺激加不规则喂养复合番泻叶法建立大鼠功能性消化不良模型,模型建立后,空白组及模型组灌胃给予生理盐水,温胃阳汤低、中、高剂量组和雷尼替丁组则分别用温胃阳汤(0.743 g/mL、1.485 g/mL和2.970 g/mL)及盐酸雷尼替丁胶囊(3 g/L)灌胃.治疗结束后,以碳墨推进法测定小肠推进率;采用甲苯胺蓝染色观察大鼠十二指肠组织肥大细胞并计数;ELISA测定大鼠十二指肠中肥大细胞类胰蛋白酶(mast cell tryptase,MCT)和组胺(histamine,HA)的含量;RT-qPCR检测十二指肠中SCF和c-Kit mRNA的表达;Western blot和免疫组化检测十二指肠中SCF和c-Kit蛋白的表达水平.结果:与模型组相比,温胃阳汤治疗显著提高大鼠的小肠推进率(P<0.05);ELISA结果显示,温胃阳汤治疗可减少大鼠十二指肠黏膜组织肥大细胞数量及MCT和HA含量(P<0.05);Western blot和免疫组化结果表明,温胃阳汤治疗可上调大鼠十二指肠组织c-Kit和SCF蛋白的表达水平(P<0.05),增加SCF和c-Kit阳性细胞数(P<0.05);RT-qPCR结果显示,WW-YD治疗可上调大鼠十二指肠组织c-Kit和SCF mRNA的表达(P<0.01).而且,小肠推进率分别与MCT和HA含量呈负相关,与SCF和c-Kit的表达呈正相关.结论:温胃阳汤能促进大鼠十二指肠动力,其作用机制可能与抑制大鼠十二指肠MCT和HA的生成,及激活SCF/c-Kit信号通路有关.
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编辑人员丨2024/3/16
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利那洛肽联合普芦卡必利对IBS-C小鼠氧化应激状态及SCF/c-kit信号通路的影响
编辑人员丨2023/12/9
目的 探究利那洛肽联合普芦卡必利通过调控干细胞因子(SCF)/c-kit信号通路对便秘型肠易激综合征(IBS-C)小鼠氧化应激损伤的修复作用.方法 从 50 只C57BL/6 野生型小鼠中随机选取 10 只作为对照组,其余 40 只采用冰水灌胃法构建IBS-C小鼠模型.造模成功后,将 40 只小鼠随机分为模型组(不进行其他处理)、利那洛肽组(给予利那洛肽)、普芦卡必利组(给予普芦卡必利)及联合给药组(同时给予利那洛肽和普芦卡必利),每组各 10 只.治疗 14 d后,观察各组的粪便颗粒数和粪便含水量变化,采用墨汁灌胃法检测各组的胃残留率和小肠推进率,采用免疫组织化学染色法检测各组结肠组织中胃动素(MOT)和生长抑素(SS)水平,采用ELISA法检测各组血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)和总抗氧化能力(TAOC)水平,采用蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法检测结肠组织中SCF、c-kit的蛋白和mRNA的相对表达量.结果 与模型组相比,各给药组的粪便颗粒数和粪便含水量均显著增多,胃残留率均显著降低,小肠推进率均显著升高,结肠组织中MOT、SS水平均显著降低,血清MDA、ROS水平均显著降低,血清SOD、TAOC水平均显著升高,结肠组织中SCF、c-kit的蛋白和mRNA的相对表达量均显著升高(P均<0.05).与利那洛肽组、普芦卡必利组相比,联合给药组的胃残留率均显著降低,小肠推进率均显著升高(P均<0.05).结论 利那洛肽联合普芦卡必利治疗可有效降低IBS-C模型小鼠的胃残留率,升高小肠推进率,并减轻其氧化应激损伤,这可能与SCF/c-kit信号通路的激活有关.
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编辑人员丨2023/12/9
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中医药治疗功能性消化不良相关信号通路的研究进展
编辑人员丨2023/11/25
功能性消化不良(FD)是一种广泛流行的功能性胃肠疾病,其症状常反复发作,病程较长,严重影响患者生活质量.目前西医治疗上并没有取得突破性进展,主要采用促胃肠动力药、抑酸药、抗抑郁/焦虑药物和心理治疗等对症治疗,且存在一定的不足与问题,而中医药在治疗FD方面具有独特优势.通过检索国内外文献发现,目前有关中医治疗FD的作用机制与多种信号通路转导有关,对相关信号通路以及分子机制的研究逐渐成为重点.其中主要以SCF/c-Kit信号通路、5-HT信号通路、CRF信号通路、AMPK信号通路、TRPV1 信号通路、NF-κB信号通路、RhoA/ROCK2/MYPT1 信号通路等为主,此系列信号通路能够促进胃肠动力、减轻焦虑、加速胃排空、降低内脏高敏感及改善十二指肠微炎症治疗FD.该文对中医药通过调控相关信号通路治疗FD研究进行综述,为进一步对中医药靶向治疗FD的研究提供参考和支持.
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编辑人员丨2023/11/25
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"朴实方"对慢传输型便秘小鼠结肠Cajal细胞及SCF/c-Kit信号通路的影响
编辑人员丨2023/11/25
目的:观察朴实方对慢传输型便秘(STC)模型小鼠结肠Cajal间质细胞(ICC)及干细胞因子(SCF)/酪氨酸激酶受体(c-Kit)信号通路的影响,探索朴实方治疗STC的作用机制.方法:50只ICR小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(普芦卡必利,每日灌胃给药量为0.3 mg/kg)和朴实方高、低剂量组(每日灌胃给药量分别为17.0、8.5 g/kg),每组10只.除正常组外,其余各组小鼠采用复方地芬诺酯混悬液连续灌胃2周构建STC模型.造模成功后各给药组每日分别予相应药物灌胃,正常组和模型组每日灌胃给予同体积生理盐水,各组均连续灌胃2周.干预完成后,使用活性炭灌胃法测定各组小鼠肠道推进率,苏木精-伊红(HE)染色比较各组小鼠结肠组织学特征,酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组小鼠血清SCF含量,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测各组小鼠结肠组织c-Kit蛋白、SCF蛋白表达情况,酶联实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组小鼠结肠组织c-Kit mRNA、SCF mRNA表达.结果:模型组小鼠肠道推进率明显低于正常组(P<0.01),各给药组小鼠肠道推进率均明显高于模型组(P<0.01).模型组小鼠结肠肌层厚度降低,腺体数量减少且充血、水肿,各给药组小鼠结肠组织病理改变较模型组减轻,以朴实方高剂量组和阳性对照组改善更为显著.模型组小鼠血清SCF含量和结肠组织c-Kit mRNA、SCF mRNA及c-Kit、SCF蛋白相对表达量均明显低于正常组(P<0.01);朴实方高、低剂量组及阳性对照组小鼠血清SCF含量明显高于模型组(P<0.01),结肠组织c-Kit mRNA、SCF mRNA及c-Kit、SCF蛋白相对表达量均明显高于模型组(P<0.05,P<0.01).上述指标各给药组组间比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论:朴实方可以提高STC模型小鼠肠道推进率,改善小鼠结肠组织病理,其可能通过上调结肠组织中c-Kit和SCF的表达,激活SCF/c-Kit信号通路,促进结肠ICC增殖,增强肠道蠕动,从而改善STC模型小鼠便秘状态.
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编辑人员丨2023/11/25
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仁青常觉通过干细胞因子/细胞生长因子受体信号通路对胃动力低下大鼠的影响
编辑人员丨2023/11/11
目的 探索仁青常觉通过干细胞因子(SCF)/细胞生长因子受体(c-kit)基因信号通路对胃动力低下大鼠的效应及机制.方法 无特定病原体(SPF)级SD大鼠30只,用随机数字表法分为5组(每组 6 只):模型组;阳性对照(西沙必利 0.4 mg/ml)组;仁青常觉低剂量(0.1 g/kg)组;仁青常觉中剂量(0.2 g/kg)组;仁青常觉高剂量(0.4 g/kg)组.建立胃动力低下大鼠模型,检测小肠推进率.酶联免疫吸附试验测定血液SCF的浓度;并对5-羟色胺(5-HT)和c-kit蛋白的表达进行免疫组织化学检测.结果 与阳性对照组相比,模型组大鼠仁青常觉高剂量组大鼠小肠活动推进率、5-HT蛋白、血清中SCF含量及c-kit蛋白质均明显增高(P<0.01).结论 高剂量仁青常觉治疗可以缓解大鼠胃动力低下的情况.其机制可能与信号通路SCF/c-kit有关.
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编辑人员丨2023/11/11
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增液承气汤加减通过SCF/c-kit信号通路对慢性传输型便秘的作用机制研究
编辑人员丨2023/11/4
目的:探讨增液承气汤加减对慢性传输型便秘治疗的作用及其作用机制.方法:健康SD大鼠60 只,应用复方地芬诺酯片灌胃构建慢性传输型便秘模型大鼠,造模成功后随机分成模型组、增液承气汤加减高、中、低剂量组(剂量分别为38.88、19.44、9.72 mg/kg)、阳性药组(12.5%的伊托必利混悬液,54 mg/kg),每组10 只.另取未经造模的10 只SD大鼠作为正常组.正常组和模型组大鼠给予等量的超纯水,各组大鼠连续灌胃7d.给药期间每日定期监测大鼠体质量变化、活动状态、摄食量、饮水量;给药结束后测定大鼠排便情况、肠道传输功能;ELISA法检测血清中5-HT、VIP、SP水平;Western Blotting法检测大鼠结肠组织SCF、c-kit的表达水平.结果:与模型组比较,增液承气汤加减高、中、低剂量组和阳性药组大鼠在给药期间体质量增长明显(P<0.05),摄食量增加(P<0.05),饮水量增加(P<0.05);大鼠首粒黑便排出时间明显缩短(P<0.05),血清中5-HT、VIP、SP水平明显降低(P<0.05);12h大便数量、粪便含水量、肠管总长度、碳末推进长度、碳末推进率均明显升高(P<0.05);SCF、c-kit蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05).结论:增液承气汤加减可剂量依赖性地改善大鼠慢性传输型便秘,其机制可能与SCF/c-kit信号通路有关.
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编辑人员丨2023/11/4
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从慢传输型便秘大鼠结肠c-kit/SCF的基因表达及信号传导通路探讨四磨汤的调节机制
编辑人员丨2023/8/6
目的:研究四磨汤对慢传输结肠的c-kit/SCF的基因表达及信号传导通路影响,探索理气中药改善结肠动力的作用机制.方法:选取120只SD大鼠,随机分为正常组30只,造模组90只,造模组饲喂含复方苯乙哌啶的饲料,造模成功后,将90只大鼠再随机分为3组,一组为空白对照组,一组为盐水对照组(安慰剂组),一组为四磨汤治疗组,每组30只.停药7d后,分别从四组中各抽取10只大鼠,测首例黑便排出时间.结肠肌电检测,验证“四磨汤”对STC大鼠结肠肌电的影响效应.通过Realtime-PCR检测,分别检测c-kit和SCF的mRNA在STC结肠组织中的表达情况.计算机辅助图像分析表达情况.结果:四磨汤组大鼠首粒黑便排出时间较对照组和安慰剂组明显缩短(P<0.05);较正常组有所延长(P>0.05).四磨汤组大鼠肌电频率、振幅、频率变异系数、振幅变异系数与正常组相比无统计学意义(P>0.05),模型组大鼠肌电频率低于正常组(P<0.05),振幅、频率变异系数、振幅变异系数高于正常组,有统计学意义(P<0.05).c-kit mRNA相对含量四磨汤组高于对照组及安慰剂组(P<0.05),低于正常组(P>0.05).SCF mRNA相对含量四磨汤组高于对照组及安慰剂组(P<0.05),低于正常组(P>0.05).结论:STC模型大鼠的结肠c-kit和SCF基因表达下调,c-kit/SCF系统受损.四磨汤能够显著提高c-kit mRNA、SCF mRNA相对含量,显著抑制造模药物对大鼠结肠慢波的影响,是通过调节c-kit,SCF基因表达及相应的信号通路来治疗慢传输型便秘的.
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编辑人员丨2023/8/6
