目的:探讨与多发性骨髓瘤（MM）患者长生存相关的骨髓免疫微环境特征。方法:在中山大学附属第一医院明确诊断为新诊断MM并接受新药诱导续贯自体造血干细胞移植以及免疫调节剂维持治疗的随访队列中，在2019年8月至2020年5月横断面研究期间，通过高通量NanoString技术比较16例无进展生存≥5年患者［长生存组，其中微小残留病（MRD）持续阴性亚组9例、MRD持续阳性亚组7例］与5例疾病进展患者（疾病进展组）骨髓中免疫细胞亚群及770个与免疫相关标志物的RNA表达。通过细胞特征性基因表达水平综合计算各免疫细胞功能分值，从而间接得出各免疫细胞亚群比例。统计学分析主要采用Mann-Whitney U检验、Kruskal Wallis秩和检验。 结果:（1）长生存组患者骨髓中中性粒细胞比例较疾病进展组显著增加［功能分值：13.61（13.33，14.25）比12.93（12.58，13.38）； Z=2.31， P=0.021］；与MRD持续阴性长生存亚组相比，MRD持续阳性长生存亚组患者骨髓肥大细胞显著增多［功能分值：7.09（6.49，8.57）比6.03（5.18，6.69）； H=2.18， P=0.029］。（2）相比疾病进展组，长生存组显著上调基因4个（CTSG、IFIT2、S100B、CHIT1），显著下调基因6个（C4B、TNFRSF17、CD70、IRF4、C2、GAGE1）；相比MRD持续阴性长生存亚组，MRD持续阳性长生存亚组显著上调基因CMA1，下调基因10个（ISG15、OAS3、MX1、IFIT2、DDX58、SIGLEC1、CXCL10、IL1RN、SERPING及TNFSF10），其中前5个基因均为干扰素反应通路相关基因。 结论:骨髓中性粒细胞增多、肥大细胞增多可能与移植后MM患者长生存相关。干扰素反应通路激活可能是MRD持续阴性长生存MM患者骨髓免疫微环境的特征之一。

目的:筛选并分析唾液酸结合Ig样凝集素15(Siglec-15)在胃癌细胞中的候选靶基因及其下游信号通路并进行患者预后相关性分析。方法:构建干扰Siglec-15基因的最佳慢病毒转染至人胃腺癌AGS细胞株获得沉默组(AGS-shSiglec-15)，以及空载体慢病毒转染获得的AGS细胞对照组(AGS-NC)，各取三个样本进行转录组测序。根据测序数据筛选差异表达基因，通过GO分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析和GESA分析进行基因的功能注释和信号通路的鉴定。构建蛋白与蛋白相互作用网络图(PPI)，进行可视化分析并获取关键互作蛋白，并对靶蛋白进行生存期分析。结果:共鉴定出符合筛选标准的255个差异表达蛋白编码基因，包括119个上调基因和136个下调基因。经GO、KEGG和GSEA分析表明，差异表达基因(DEGs)主要参与甲型流感、Toll样受体信号传导途径、钙信号传导途径、NOD样受体信号传导途径、病毒蛋白与细胞因子和细胞因子受体的相互作用等进程。同时筛选出10个Siglec-15相关基因的靶蛋白，其中钙黏蛋白23(CDH23)[ HR＝1.31(1.05~1.63)， P<0.05]、蛋白网络成分协调蛋白(USH1C)[ HR＝1.25(1.05~1.48)， P<0.05]、干扰素调节因子7(IRF7)[ HR＝1.7(1.41~2.05)， P<0.001]、MX2[ HR＝1.63(1.33~2.00)， P<0.01]、干扰素调节因子9(IRF9)[ HR＝1.30(1.09~1.54)， P<0.01]高表达的胃癌患者总生存率(OS)较差。而RSAD2(RSAD2)[ HR＝0.78(0.61~1.00)， P<0.05]、CC基序趋化因子配体5(CCL5)[ HR＝0.66(0.55~0.78)， P<0.01]、CXC趋化因子配体(CXCL8)[ HR＝0.65(0.53~0.79)， P<0.01]、XIAP相关因子1(XAF1)[ HR＝0.77(0.65~0.92)， P<0.01]、干扰素调节因子6(IRF6)[ HR＝0.51(0.41~0.63)， P<0.01]高表达的患者具有较好的OS。 结论:沉默Siglec-15基因在胃癌细胞中有明显差异表达基因并参与多种生物学进程和信号通路调节，可能作为胃癌的潜在新免疫检查点标志物及治疗靶点。

慢性阻塞性肺疾病（慢阻肺）是目前全球唯一病死率呈上升趋势的重大慢性疾病，药物治疗只能减轻症状和降低急性加重风险，其发病机制仍未明了，且缺乏有效的干预药物。唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素9（Siglec-9）主要表达于单核/巨噬细胞、中性粒细胞的抑制性唾液酸聚糖受体，可调控巨噬细胞极化和气道炎症，其基因多态性与慢阻肺急性加重表型有关，靶向巨噬细胞Siglec-9有望成为精准治疗慢阻肺的新途径。

目的:建立儿童干扰素刺激基因（ISG）表达检测方法，确立参考值范围，初步探讨其临床应用价值。方法:纳入2017年11月至2021年9月就诊于北京协和医院儿科的Ⅰ型干扰素病患者作为疾病组，同时纳入健康儿童作为对照组。疾病组共纳入18例患儿，其中男性8例，女性10例，共采集血液样本25份，首次检测的中位年龄为8.5岁。对照组共纳入28名健康儿童，年龄1~18岁，中位年龄10.5岁，其中男性15名，女性13名。分别提取疾病组和对照组外周血总RNA并逆转录为互补DNA（cDNA）。以β肌动蛋白基因（β-Actin）和鸟氨酸脱羧酶抗酶基因（OAZ）为内参，采用实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测干扰素诱导的四肽重复蛋白1基因（IFIT1）、干扰素α诱导蛋白27基因（IFI27）、干扰素诱导蛋白44样基因（IFI44L）、干扰素刺激基因15（ISG15）、唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素1基因（SIGLEC1）、含有S-腺苷甲硫氨酸结构域2基因（RSAD2）的相对表达量，以6个ISG的中值为干扰素评分（IS）。去除正常对照中表达明显异常的样本，将其他样本的cDNA混合作为参照，重新检测各样本并计算IS，将大于对照 xˉ+2 s的IS结果判断为异常。用独立样本 t检验或Mann-Whitney U检验比较组内和组间IS的差异。 结果:对照组IS均值为1.046，标准差0.755，IS截断值为2.556。18例Ⅰ型干扰素病患者组IS异常的有15例（15/18），IS均值为27.010。与对照组相比，干扰素疾病患者组IS明显升高（ t=4.247， P=0.000 1）。该检测方法的准确度为91.30%（42/46），精密度为7.47%（0.084/1.124），敏感度为15/18，特异度为96.43%（27/28）。 结论:本研究通过ISG表达的检测并计算IS，为临床筛查以及动态监测Ⅰ型干扰素疾病变化提供了新的可靠的手段。

目的:通过整合生物信息学分析筛选与肺栓塞相关的遗传和表观遗传表达差异。方法:以2019年就诊与新疆医科大学第三附属医院肺栓塞患者及健康体检者4例作为研究对象，利用高通量测序技术及甲基化芯片技术检测、筛选并整合外周血差异基因组和表观基因组数据来识别致肺栓塞发病的甲基化驱动基因及差异表达基因，行GO及KEGG富集分析。结果:将肺栓塞组和健康对照组间DNA甲基化和基因表达数据进行共表达分析，基因上游区域差异甲基化与基因表达呈负相关，其中共筛选出基因上游区域显著甲基化基因有8个，采用独立样本的T检验及Pearson相关性分析，肺栓塞组中TSS1500显著甲基化基因有6个，分别为TSPO2、C1QA、AQP1、TNFSF9、MIA、STAB1，对应基因的差异表达倍数log2FC分别是1.298，1.629，1.024，2.746，2.539，1.060，基因表达与基因甲基化之间的相关度分别是-0.908，-0.900，-0.824，-0.784，-0.783，-0.779，两组间甲基化差异分别是-0.049，-0.053，-0.048，-0.057，-0.050，-0.053（ P<0.05）。TSS200区域显著甲基化基因有3个，分别为TSPO2，SLCP9A3，SIGLEC1，基因表达差异倍数log2FC分别是1.298，-2.252，1.866，基因表达与基因甲基化之间的相关度分别是-0.860，-0.774，-0.739，两组间甲基化差异分别是-0.051，0.027，-0.048（ P<0.05）。肺栓塞组中在TSS区域有TSPO2、C1QA、AQP1、TNFSF9、MIA、STAB1、SIGLEC1共7个基因呈现低甲基化高表达状态。SLC9A3基因呈现高甲基化低表达。GO功能分析中，在补体活化、免疫反应、激活蛋白级联等得到显著富集。在KEGG信号通路中，免疫系统、细菌感染以及信号分子及相互作用方面得到显著富集，从而调控肺栓塞的发生。 结论:基于DNA甲基化和基因表达的联合分析，发现了肺栓塞发生发展的新思路，后续可进行更加深入的研究。

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) has become the third-leading cause of death worldwide, which is a severe economic burden to the healthcare system. Chronic bronchitis is the most common condition that contributes to COPD, both locally and systemically. Neutrophilic inflammation predominates in the COPD airway wall and lumen. Logically, repression of neutrophilia is an essential fashion to COPD treatment. However, currently available anti-neutrophilic therapies provide little benefit in COPD patients and may have serious side effects. Thus, there is an urgent need to explore an effective and safe anti-neutrophilic approach that might delay progression of the disease. Sialic acid-binding immunoglobulin-like lectin (Siglec)-9 is a member of the Siglec cell surface immunoglobulin family. It is noteworthy that Siglec-9 is highly expressed on human neutrophils and monocytes. Ligation of Siglec-9 by chemical compounds or synthetic ligands induced apoptosis and autophagic-like cell death in human neutrophils. Furthermore, administration of antibody to Siglec-E, mouse functional ortholog of Siglec-9, restrained recruitment and activation of neutrophils in mouse models of airway inflammation in vivo. Given the critical role that neutrophils play in chronic bronchitis and emphysema, targeting Siglec-9 could be beneficial for the treatment of COPD, asthma, fibrosis, and related chronic inflammatory lung diseases.

目的 探究半乳糖对人原代肺动脉内皮细胞上唾液酸特异性Ig样凝集素-9(sialic-acid-binding immunoglobulin-like lectin 9,Siglec-9)聚糖配体表达的影响及作用机制.方法 采用流式细胞术确定内皮细胞表面Siglec-9聚糖配体的表达并鉴定该聚糖配体末端糖苷键类型;分别用左旋葡萄糖、葡萄糖、N-乙酰基葡萄糖、甘露糖、N-乙酰基甘露糖、半乳糖、唾液酸、蔗糖处理内皮细胞48 h,采用流式细胞术检测内皮细胞Siglec-9聚糖配体的表达;将内皮细胞分为对照组和半乳糖组(n=3),Western blot、流式细胞术、免疫荧光分析半乳糖对内皮细胞Siglec-9聚糖配体表达的影响;α2-3,6,8唾液酸酶处理内皮细胞后,Western blot检测半乳糖对内皮细胞Siglec-9聚糖配体恢复时间的影响;半乳糖处理内皮细胞后,Western blot检测分析细胞内唾液酸合成关键酶(GNE、NANS、NANP、CMAS、NPL以及ST3Gals)表达水平,并用RT-qPCR验证相关蛋白的mRNA表达;siRNA敲低NANP、CMAS及ST3Gal-Ⅲ,Western blot检测内皮细胞Siglec-9聚糖配体水平变化;巨噬细胞与内皮细胞共培养实验分析Siglec-9聚糖配体的增加对巨噬细胞的凋亡与吞噬能力的影响.结果 内皮细胞上表达有Siglec-9聚糖配体且该配体为末端结构为α2-3连接的唾液酸糖蛋白;与对照组比较,半乳糖组内皮细胞上该聚糖配体表达水平显著增加(P＜0.01),但半乳糖的添加对该配体的自我恢复时间无影响;与对照组比较,半乳糖处理的内皮细胞中NANP、CMAS、ST3Gal-Ⅲ表达水平升高(P＜0.05,P＜0.01),且RT-qPCR验证结果与其一致;抑制内皮细胞中NANP、CMAS、ST3Gal-Ⅲ的表达后,内皮细胞Siglec-9聚糖配体水平下降(P＜0.01).共培养实验中,与未处理组比较,半乳糖处理的内皮细胞促进巨噬细胞凋亡增加(P＜0.01),并导致其吞噬能力减弱(P＜0.05).结论 半乳糖通过NANP-CMAS-ST3Gal-Ⅲ通路上调内皮细胞上Siglec-9聚糖配体水平,从而抑制巨噬细胞活性.

目的:探讨新型免疫检查点SIGLEC9及SIGLEC9+T细胞在宫颈癌中的表达情况及SIGLEC9与临床相关性分析.方法:前瞻性收集 2022年 5月至 2023年 10月,于新疆医科大学第一附属医院行手术治疗或病理活检的宫颈癌患者的宫颈组织石蜡标本 132例作为宫颈癌组,选取同期收治的良性子宫肌瘤行子宫全切患者的正常宫颈组织石蜡标本 58例作为正常对照组;同时收集行手术治疗或病理活检的宫颈癌患者的外周血 108例为宫颈癌组,选取同期健康人群的外周血 86例为正常对照组.使用生物信息学技术和免疫组织化学染色、流式细胞术及双重免疫荧光染色检测SIGLEC9及SIGLEC9+T细胞在宫颈癌中的表达情况,并与临床指标进行相关性分析.结果:免疫组织化学染色及双重免疫荧光染色结果显示SIGLEC9及SIGLEC9+T细胞在宫颈癌组织中高表达(P<0.05);流式细胞术结果显示SIGLEC9+CD4+T和SIGLEC9+CD8+T细胞在宫颈癌外周血中表达增高(P<0.05).SIGLEC9高表达与肿瘤直径、FIGO分期、淋巴结转移、HPV感染情况相关(P<0.05).结论:新型免疫检查点SIGLEC9在宫颈癌组织中高表达,且在宫颈癌组织中SIGLEC9+T细胞浸润较多.SIGLEC9为宫颈癌的免疫逃逸机制提供新的研究方向,并为宫颈癌的免疫治疗提供新的治疗靶点.

目的:探讨唾液酸结合Ig样凝集素15(SIGLEC-15)基因对三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭过程的影响。方法:分别设计特异性靶向人源性和鼠源性SIGLEC-15基因的3个单链引导RNA(sgRNA)序列，利用CRISPR/Cas9技术获得稳定敲除SIGLEC-15基因的MDA-MB-231单克隆细胞[sg-control(对照组)、sg-SIGLEC-15-1、sg-SIGLEC-15-2和sg-SIGLEC-15-3共4组]和稳定敲除SIGLEC-15基因的小鼠三阴性乳腺癌4T1细胞[NC(对照组)、KO1、KO2和KO3共4组]。采用qRT-PCR、Western blot实验检测8组单克隆细胞SIGLEC-15基因mRNA和蛋白表达水平，以评估SIGLEC-15基因的敲除效率。通过EdU增殖实验、划痕愈合实验、Transwell迁移实验和侵袭实验来评估SIGLEC-15基因敲除对MDA-MB-231细胞增殖、迁移侵袭功能的影响。将SIGLEC-15基因敲除的4T1细胞注射到BALB/c雌性小鼠皮下脂肪垫中，每2天1次评估小鼠的肿瘤体积，24 d后处死小鼠，测量肿瘤的体积和重量。SIGLEC-15的mRNA表达量、蛋白表达量、细胞增殖率、细胞划痕愈合率、迁移细胞数、侵袭细胞数、移植瘤体积和重量的2组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析和重复测量方差分析，多组间两两比较采用Tukey法。结果:NC、KO1、KO2和KO3这4组单克隆细胞株中SIGLEC-15基因的mRNA表达量分别为1.00±0.06、0.19±0.02、0.15±0.01和0.16±0.02，组间比较差异有统计学意义(F＝405.807，P<0.001)。KO1、KO2和KO3这3组中SIGLEC-15蛋白的表达量也明显低于NC组(t＝74.832、103.210、71.850，P<0.001)。sg-control、sg-SIGLEC-15-1、sg-SIGLEC-15-2和sg-SIGLEC-15-3这4组单克隆细胞中SIGLEC-15基因的mRNA表达量分别为1.00±0.02、0.20±0.02、0.14±0.01和0.21±0.01，组间比较差异有统计学意义(F＝1 836.010，P<0.001)。SIGLEC-15基因敲除的这3组细胞中SIGLEC-15蛋白的表达量也明显低于sg-control组(t＝23.810、24.370、23.960，P<0.001)。sg-control和sg-SIGLEC-15-2组的细胞增殖率分别为(42.88±0.90)%和(42.35±0.92)%，组间比较差异无统计学意义(t＝0.713，P＝0.515)；2组的划痕愈合率[(62.33±0.72)%比(31.89±0.29)%，t＝68.150，P<0.001]、迁移细胞数[(225.70±4.50)比(104.70±5.69)，t＝28.880，P<0.001]、侵袭细胞数[(157.00±2.00)比(57.33±4.16)，t＝37.380，P<0.001]比较，差异均有统计学意义。WT(注射未经任何处理的4T1细胞)、NC组和KO(KO2)组这3组小鼠乳腺癌移植瘤体积比较，差异有统计学意义(组间比较，F＝13 859.000，P<0.001；不同时间点比较，F＝3 444.021，P<0.001；交互作用，F＝351.700，P<0.001)，KO组移植瘤的肿瘤体积显著低于WT组与NC组(P均<0.001)。3组的瘤体重量分别为(750.08±21.99)mg、(758.60±18.70)mg和(443.80±14.52)mg，组间比较差异有统计学意义(F＝462.000，P<0.001)。结论:在三阴性乳腺癌细胞中，SIGLEC-15基因可能和肿瘤细胞体外迁移和侵袭能力有关，其作用机制值得深入研究。

目的 比较18种中药多糖与唾液酸特异性Ig样凝集素-9(sialic-acid-binding immunoglobulin-like lectin,Siglec-9)的亲和力以及抗炎能力,探讨中药多糖发挥抗炎作用的新机制.方法 选择18种不同药性的中药用水提醇沉法提取多糖,苯酚硫酸法检测多糖含量,高效液相色谱法检测多糖的单糖组成,红外光谱法检测中药多糖结构.通过竞争性ELISA法检测多糖与Siglec-9的亲和力,并研究中药多糖对LPS诱导巨噬细胞炎症反应以及R848诱导中性粒细胞NETosis的影响,利用髓系细胞特异性敲除Siglec-E(Lyz2-cre:Siglec-E flox/flox)小鼠来源的原代巨噬细胞和腹腔中性粒细胞进一步明确多糖结合Siglec-9产生抗炎作用的机制.结果 中药多糖的糖含量均在55％以上,主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等组成,但单糖构成比各不相同.红外光谱检测4种代表性中药多糖均有典型的多糖吸收峰,柴胡和蒲公英多糖具有葡萄糖醛酸结构.枸杞和黄芪多糖与Siglec-9的亲和力,对LPS诱导的巨噬细胞炎症反应和R848诱导的中性粒细胞NETosis反应无显著抑制作用.柴胡和蒲公英多糖与Siglec-9亲和力较强(P<0.01),能够显著抑制上述炎症反应,但其抗炎作用在髓系细胞特异性敲除Siglec-E基因小鼠来源的巨噬细胞和中性粒细胞中消失.结论 中药多糖与Siglec-9的亲和力有潜力成为研究中药抗炎作用的新的现代药理学机制.