目的:分析探讨结缔组织病（CTD）合并长节段横贯性脊髓炎（LETM）患者的临床特征与预后。方法:选2006年1月至2016年12月北京协和医院神经内科和风湿免疫科住院的40例合并LETM的CTD患者，根据是否出现视神经脊髓炎谱系疾病（NMOSD），将患者分为CTD-LETM-NMOSD者和CTD-LETM-非NMOSD者，回顾性分析患者一般资料、临床特征、自身抗体、影像学表现、治疗、预后和转归，采用Kaplan-Meier曲线分析疾病复发率。结果:40例患者中，系统性红斑狼疮24例，原发性干燥综合征16例。CTD-LETM-NMOSD者28例（70.0%），CTD-LETM-非NMOSD者12例（30.0%）。CTD-LETM-NMOSD者抗SSA抗体阳性率（75.0% 比 5/12， P<0.05）、抗水通道蛋白4（AQP4）抗体（AQP4-IgG）阳性率（89.3% 比 0， P<0.05）显著高于CTD-LETM-非NMOSD者。两者间CTD类型、CTD病程、脊髓炎首发比例、抗Sm抗体、抗U 1核糖核蛋白抗体、抗双链DNA抗体、抗SSB抗体、抗核糖体核蛋白P抗体、抗磷脂抗体、脑脊液特异性寡克隆区带及影像学特点均差异无统计学意义。Kaplan-Meier曲线显示，CTD-LETM-NMOSD者疾病复发率高于CTD-LETM-非NMOSD者［75.0%（21/28）比 3/12， P<0.01］。 结论:CTD合并LETM可分为两个亚型，即NMOSD和非NMOSD，前者抗SSA抗体、抗AQP4抗体阳性率及复发率均高于后者，提示其发病机制可能存在差异，前者可能是CTD与NMOSD共病，而后者可能是CTD继发神经系统损害。

目的 探讨艾拉莫德治疗原发性干燥综合征(primary Sj(o)gren's syndrome,pSS)的有效性和安全性.方法 对30例pSS患者进行单中心、开放、自身对照的16周临床研究.采用流式细胞术检测患者外周血CD19+CD27+记忆性B细胞的百分率,观察患者的临床症状和体征、实验室指标、欧洲抗风湿病联盟干燥综合征疾病活动指数(the European league against rheumatism Sj(o)gren's syndrome disease activity index,ESSDAI)评分及欧洲抗风湿病联盟干燥综合征患者报告指数(the European league against rheumatism Sj(o)gren's syndrome patient reported index,ES-SPRI)评分.同时将36只7周龄非肥胖型糖尿病(non-obese diabetic,NOD)小鼠随机分为空载体溶液组、10 mg/kg艾拉莫德组、20 mg/kg艾拉莫德组,每组12只,适应1周后分剂量灌胃处理,每日1次连续灌胃8周,流式细胞术检测小鼠脾脏中CD19+ CD27+记忆B细胞比例.结果 经艾拉莫德治疗16周后,患者ESSDAI评分及ESSPRI评分均有所改善,免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)、血沉、类风湿因子及外周血CD19+ CD27+记忆性B细胞的百分率均较治疗前降低(均有P＜0.05).治疗过程中出现胃肠道不良反应、轻度肝功能异常各2例,全身皮疹1例,未出现与药物相关的严重不良反应.动物实验证实艾拉莫德灌胃8周后10 mg/kg艾拉莫德组、20 mg/kg艾拉莫德组小鼠脾脏中CD19+ CD27+记忆B细胞所占比例与空载体组相比降低(均有P＜0.05).结论 艾拉莫德可改善pSS患者病情,降低免疫球蛋白水平、调节B细胞亚群、耐受性好、安全性高.

目的 探讨pSS合并中枢神经系统(CNS)病变的临床特点,以提高对该病的诊疗水平.方法 总结2012-2016年于我院确诊pSS-CNS病变的38例患者的临床资料,按EULAR SS疾病活动指数(ESSDAI)评分,将CNS病变分为高度活动组及中度活动组,进行回顾性对比分析.计数资料比较采用x2检验或Fisher确切概率法检验,计量资料比较采用t检验.结果①pSS患者CNS病变发生率2.93％(38/1 296),以CNS病变为首发表现的有32％(12/38),复发率39％(15/38);②pSS患者的CNS病变最常见为肢体无力、语言障碍、感觉障碍、视力减退等,影像学为多灶性病变,16例患者中94％(15/16)存在脑脊液指标异常,其中脑脊液中免疫球蛋白(Ig)G升高达50％(8/16),此外,CNS病变高度活动组与中度活动组相比,患者肺部受累、血小板减少、高滴度ANA(1∶1 000)阳性率升高,差异有统计学意义(x2值分别为4.7、5.0、5.3,P值均＜0.05);③61％(23/38)患者经过大剂量甲泼尼龙及免疫治疗好转或缓解,37％(14/38)无效,3％(1/38)死亡,对治疗无效的患者予间充质干细胞移植或免疫吸附治疗有一定疗效.结论 ①pSS-CNS病变临床表现多样,部分以CNS病变为首发,发病率低,复发率高;②影像学及脑脊液检测对诊断具有重要意义;③肺部受累、血小板减少、高滴度ANA与CNS病变活动度有关;④大部分患者对大剂量激素及免疫抑制治疗有效,对于治疗无效的患者可考虑间充质干细胞移植或免疫吸附治疗.

目的 Sj16蛋白是从日本血吸虫分泌物中分离出的一种具有免疫调节功能的蛋白质,具有诱导器官移植免疫耐受的潜力.但是,在用传统方法合成时,其表达量低,可溶性较差,影响了其生物活性.该实验拟优化Sj16AA的合成方法,为进一步研究其功能提供条件.方法 在Sj16蛋白的DNA序列基础上,进行特定位点的突变修饰,同时针对大肠杆菌表达系统优化密码子.将修饰后的Sj16AA基因定向克隆入pMal-c2X质粒,转入BL21(DE3)菌表达,摸索不同条件下Sj16AA的表达情况.结果 成功制备目的基因片段与载体的连接产物pMal-c2X-Sj16M,转化后的BL21/DE3菌经IPTG诱导可表达与MBP融合的蛋白(约58 kDa),抗MBP抗体能特异性识别该蛋白.结论 相较于传统合成方法,经优化的Sj16AA蛋白表达量较高,可溶性较好,能够更好地应用于器官移植免疫相关的基础和临床研究.

制备可溶性表达的重组日本血吸虫信号传导蛋白14-3-3 (rSj 14-3-3)并优化表达条件,分析其免疫学特性和免疫诊断价值.成功构建了BL21/pET30a-rSj 14-3-3表达菌株,最佳的表达体系为细菌生长至OD600为0.6～1.0时加入IPTG至最佳终浓度0.1 mmol/L,28℃诱导16h.上清液中可溶性的rSj14-3-3蛋白纯化后的浓度为2.804 mg/mL.以rSj 14-3-3为抗原,间接ELISA检测显示,48份急性与35份慢性血吸虫病患者血清的抗体阳性率分别为95.6％和92.0％;与27份华支睾吸虫和15份钩虫患者血清的交叉反应率分别为7.4％和6.7％;与30份健康人血清假阳性反应率为0％.抗rSj14-3-3兔血清及所制备的多抗可被纯化出的rSj14-3-3蛋白及血吸虫成虫抗原(AWA)和排泄分泌物(ESA)中的天然Sj14-3-3分子的反应,且多抗效价达1∶1 280 000.本研究成功表达并纯化出rSj14-3-3蛋白,优化了其诱导表达条件,且此蛋白具有较高的抗原特异性.

目的:分析唾液腺干燥综合征(Sj?gren's syndrome,SS)继发黏膜相关淋巴组织(mucosa associated lym-phoid tissue,MALT)淋巴瘤(SS-MALT淋巴瘤)的临床病理特点,并探索联合应用组织病理形态、蛋白表达和分子表型检测在唾液腺SS-MALT淋巴瘤病理诊断和预后评估中的应用价值.方法:在1997年1月至2016年12月就诊于北京大学口腔医院并经病理确诊为唾液腺SS的260例患者中收集到16例SS-MALT淋巴瘤患者,另选取12例无唾液腺SS病史的MALT淋巴瘤(非SS-MALT淋巴瘤)患者作为对照,回顾性分析患者临床资料并随访.同时,应用苏木精-伊红染色、免疫组织化学、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和荧光原位杂交技术(fluo-rescence in situ hybridization,FISH)观察组织病理变化,检测轻链限制性表达、免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)基因重排、染色体易位及基因异常,评价其在病理诊断和预后判断中的作用.结果:SS进展为MALT淋巴瘤的恶变率约为6.15％,恶变时间为3～240个月不等,其中有2例因发生高级别转化而死亡.SS-MALT淋巴瘤镜下表现为腺泡不同程度的萎缩破坏,以中心细胞样细胞为主的淋巴细胞弥漫浸润并破坏上皮岛.SS-MALT淋巴瘤组CD20和Pax5均为阳性(阳性率100％);Ki-67指数≤10％者占50％,＞10％者占50％;AE1/AE3染色显示有残存腺上皮(93.75％).全部病例肿瘤细胞CD3ε均为阴性,CD138染色显示有数量不等的浆细胞.37.5％的SS-MALT淋巴瘤患者检测到κ和λ轻链限制性表达.SS-MALT淋巴瘤组中免疫球蛋白重链(immunoglobulin heavy chain,IgH)-FR1、IgH-FR2、IgH-FR3、免疫球蛋白κ链(immunoglobulin kappa chain,IgK)-A、IgK-B 的阳性检出率分别为33.3％、53.3％、33.3％、20.0％、26.7％,联合应用IgH和IgK的阳性检出率达93.3％.MALT1双色分离探针阳性率36.4％,IGH双色分离探针阳性率27.3％,BCL6双色分离探针阳性率27.3％;三种探针共同使用的基因异常检出率为72.7％.结论:唾液腺SS-MALT淋巴瘤的病理诊断缺乏特异性的组织形态特点和蛋白表型,联合应用组织形态观察、免疫组织化学、PCR和FISH技术有助于该疾病的精准病理诊断.同时,虽然SS-MALT淋巴瘤一般被认为是惰性淋巴瘤,预后较好,但也应定期复诊和长期随访,以便早发现复发和高级别化的线索,提高患者的生存率.

吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)是一种以影响周围神经系统为主的异常免疫介导的急性获得性脱髓鞘疾病,GBS被认为是单相病程的疾病,但据文献报道1％～6％的患者可出现复发,称为复发性吉兰-巴雷综合征(recurrent guillain-barre syndrome,RGBS)[1].原发性干燥综合征(primary Sj(o)gren's syndrome,pSS)是一种系统性自身免疫疾病,约20％的pSS患者可出现神经系统并发症,其中以周围神经系统的受累较为常见[2].RGBS和pSS同属免疫相关疾病,同时合并少见.现报道1例RGBS合并pSS患者,表现为反复发作GBS 16 y,后来发现合并pSS,患者每次发病时,在经过静脉注射丙种球蛋白(IVIG)治疗后症状明显好转.本文通过回顾文献,重点讨论RGBS和pSS之间的潜在机制.

目的:通过蛋白芯片技术筛选血清中的2个结果蛋白做免疫组化(Immunohistocry,IH)研究,检测其在干燥综合征(Sj?gren's syndrome,SS)患者唇腺组织、系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)患者皮损及狼疮性肾炎(Lupus nephritis,LN)患者肾脏组织中的表达情况.方法:收集2004年1月-2013年12月就诊于风湿免疫科患者的组织蜡块43例,按照不同疾病、不同部位将组织蜡块分为SS组16例、非SS对照组10例、SLE皮损组9例、LN组8例.采用免疫组织化学染色法检测骨桥蛋白和铁调素在SS患者、SLE患者皮损和LN患者肾脏组织中的表达.使用Fromowitz的综合计分法进行结果判定.阳性率的比较采用四格表确切概率法.结果:骨桥蛋白和铁调素在SS唇腺组织的表达均高于非SS唇腺组织,两种蛋白在SLE皮损中未液化的少量基底层细胞中见阳性表达、狼疮肾组织中肾小管上皮细胞见阳性表达.结论:骨桥蛋白与铁调素可在干燥综合征患者唇腺组织、系统性红斑狼疮患者皮损及狼疮性肾炎患者的肾小管中表达.