目的 探究六味地黄汤抑制肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)的干预作用及机制.方法 将 30只SPF级SD大鼠随机均分为假手术组、模型组、阳性药物组、中药高剂量组和中药低剂量组,每组 6 只.除假手术组外,其余各组采用左侧输尿管结扎术制备RIF模型.造模结束后,假手术组和模型组予以蒸馏水灌胃,阳性药物组予以醋酸泼尼松片 0.2 mg/kg灌胃,中药低、高剂量组分别予以六味地黄汤 0.5、1 mg/kg灌胃,疗程为 21 d.治疗结束后,采用HE染色法评估肾间质损伤,Masson染色法检测肾间质胶原蛋白沉积和纤维化,RT-PCR测定肾间质转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、针对半身不遂同源物 2的重组母体(recombinant mothers against decapentaplegic homolog 2,Smad2)、Smad3、Smad7 的mRNA表达,Western blot测定肾间质TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的蛋白表达.结果 与假手术组相比,模型组的病理呈现系膜增生、间质增宽、胶原蛋白大面积沉积和明显纤维化,且TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7 的mRNA和蛋白表达均增加(P<0.05).与模型组相比,阳性药物组和中药低、高剂量组的病理表现均减轻,且TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05).与中药低剂量组相比,阳性药物组和中药高剂量组的TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7 的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05).结论 六味地黄汤能够减轻RIF大鼠的肾间质纤维化程度,且高剂量效果更佳,其机制可能与调控TGF-β及Smad家族蛋白表达有关.

目的:观察骨形成蛋白4 （BMP4）对人视网膜微血管内皮细胞（hRMEC）中糖酵解水平的影响。方法:实验研究。将体外培养的hRMEC分为正常组、4-羟基壬烯醛（HNE）组（4-HNE组）、4-HNE+BMP4处理组（BMP4组）。4-HNE组细胞培养基中加入10 μmmol/L 4-HNE；BMP4组细胞培养基中加入10 μmmol/L 4-HNE刺激6 h后，再加入100 ng/ml重组人BMP4。采用流式细胞仪检测各组细胞内活性氧（ROS）水平；噻唑蓝比色法检测4-HNE对细胞生存力的影响；细胞划痕实验、Transwell小室法测定4-HNE对细胞迁移能力的影响。采用实时定量聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法检测正常组、4-HNE组细胞中BMP4、SMAD同源物9 （SMAD9） mRNA、蛋白相对表达量。采用Seahorse XFe96细胞能量代谢分析仪测定正常组、4-HNE组、BMP4组细胞内糖酵解代谢水平。组间比较采用单因素方差分析。结果:正常组、4-HNE组、BMP4组hRMEC内ROS水平分别为21±1、815±5、810±7。与正常组比较，4-HNE组、BMP4组ROS水平显著升高，差异有统计学意义（ F=53.40、50.30， P<0.001）。正常组、4-HNE组细胞生存力分别为1.05±0.05、1.28±0.05；迁移率分别为（0.148±0.005）%、（0.376±0.015）%；穿过小孔的细胞数分别为（109.0± 9.6）、（318.0±6.4）个。与正常组比较，4-HNE组细胞生存力、细胞迁移率、穿过小孔细胞数量明显提高，差异均有统计学意义（ F=54.35、52.84、84.35， P<0.05）。4-HEN组细胞中BMP4、SMAD9 mRNA相对表达量分别为1.680±0.039、1.760±0.011；与正常组比较，差异有统计学意义（ F=53.66、83.54， P<0.05 ）。正常组、4-HEN组细胞中BMP4、SMAD9蛋白相对表达量分别为0.620±0.045、0.860±0.190和0.166±0.049、0.309±0.038；与正常组比较，差异有统计学意义（ F=24.87、53.84， P<0.05 ）。正常组、4-HNE组、BMP4组细胞内糖酵解、糖酵解能力、糖酵解储备水平分别为1.21±0.12、2.84±0.24、1.78±0.36，2.59± 0.11、5.34±0.32、2.78±0.45和2.64±0.13、5.20±0.28、2.66±0.33；与正常组比较，差异均有统计学意义（4-HNE组： F=86.34、69.75、58.45， P<0.001；BMP4组： F=56.87、59.35、58.35， P<0.05）。4-HNE组、BMP4组细胞内糖酵解、糖酵解能力、糖酵解储备水平比较，差异均无统计学意义（ F=48.32、56.33、55.01， P>0.05）。 结论:BMP4通过糖酵解诱导hRMEC的增生和迁移。

目的 研究红芪多糖(HPS)对糖尿病肾病(DN)db/db小鼠肾组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、smad同源物3重组蛋白(smad3)、smad7在肾组织表达的影响.方法 根据体质量将雄性db/db小鼠随机分为模型组(0.9％NaCl 0.2 mL·d-1)、阳性对照组(22.75 mg·kg-1·d-1厄贝沙坦)和高、中、低剂量实验组(200、100、50 mg·kg-1·d-1 HPS),每组10只;另取10只同周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠作为正常组(0.9％NaCl 0.2 mL·d-1).6组小鼠每天灌胃1次,连续给药12周.于治疗前及治疗后第4、8、12周末检测小鼠血糖水平,用蛋白质印迹法检测TGF-β1、smad3、smad7蛋白的表达水平.结果 治疗后,模型组小鼠血糖水平均较正常组显著升高(均P＜0.01);高、中剂量实验组小鼠的血糖水平均较模型组显著下降(P＜0.05,P＜0.01).正常组、模型组、阳性对照组和高、中剂量实验组的TGF-β1蛋白相对表达水平分别为0.71±0.16、1.66±0.18、1.00±0.17、0.88±0.15 和 1.23±0.15,smad3 蛋白相对表达水平分别为0.89±0.32、2.26±0.35、1.24±0.31、1.05±0.30 和 1.67±0.35,smad7 蛋白相对表达水平分别为 1.66±0.03、0.60±0.03、1.10±0.07、1.48±0.08 和 0.97±0.09.高、中剂量实验组的上述指标与模型组相比,在统计学上差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 HPS可以通过调控血糖水平,抑制TGF-β1、smad3及升高smad7的表达,改善肾纤维化,延缓DN发展进程.

目的:探讨肾衰营养胶囊对肾性骨病模型大鼠的改善作用及其对骨形态发生蛋白(BMP)-7/Smads信号通路的影响,阐明肾性骨病模型大鼠肾功能和骨代谢与肾性骨病的关系.方法:选取50只SPF级SD大鼠,随机选取10只大鼠作为对照组,另外40只大鼠建立肾性骨病模型.将30只造模成功大鼠分为模型组、阳性对照组和肾衰营养胶囊组,每组各10只.对照组和模型组大鼠采用生理盐水灌胃,阳性对照组大鼠给予0.01 mg·kg-1骨化三醇灌服,肾衰营养胶囊组大鼠给予1.2 g·kg-1肾衰营养胶囊灌服,均灌胃12周.采用HE染色观察各组大鼠股骨组织病理形态表现,全自动生化分析仪和化学发光法检测各组大鼠血清中肾功能和钙磷代谢指标,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠股骨组织中BMP-7和Smad1/5/8 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组大鼠股骨组织中BMP-7、磷酸化BMP-7(p-BMP-7)、Smad1/5/8和磷酸化Smad1/5/8(p-Smad1/5/8)蛋白表达水平.结果:HE染色,对照组大鼠骨小梁排列正常,成骨细胞和类骨质面积未发生改变;模型组大鼠骨小梁宽度和平均类骨质面积增加,成骨细胞数量减少;阳性对照组和肾衰营养胶囊组大鼠骨小梁宽度及平均类骨质面积减小,成骨细胞数量增加.与对照组比较,模型组大鼠血尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平均升高(P<0.05);与模型组比较,阳性对照组和肾衰营养胶囊组大鼠BUN及Scr水平均降低(P<0.05);与阳性对照组比较,肾衰营养胶囊组大鼠BUN和Scr水平均降低(P<0.05).与对照组比较,模型组大鼠血清中钙离子(Ca2+)水平降低(P<0.05),磷离子(P3-)、甲状旁腺激素(PTH)和碱性磷酸酶(ALP)水平均升高(P<0.05);与模型组比较,阳性对照组和肾衰营养胶囊组大鼠血清中Ca2+水平升高(P<0.05),P3-、PTH和ALP水平均降低(P<0.05);与阳性对照组比较,肾衰营养胶囊组大鼠血清中Ca2+水平升高(P<0.05),P3-、PTH和ALP水平均降低(P<0.05).RT-qPCR法,与对照组比较,模型组大鼠股骨组织中BMP-7 和Smad1/5/8 mRNA表达水平降低(P<0.05);与模型组比较,阳性对照药组和肾衰营养胶囊组大鼠股骨组织中BMP-7及Smad1/5/8 mRNA表达水平升高(P<0.05);与阳性对照组比较,肾衰营养胶囊组大鼠股骨组织中BMP-7和Smad1/5/8 mRNA表达水平升高(P<0.05).Western blotting法,与对照组比较,模型组大鼠股骨组织中BMP-7、p-BMP-7、Smad1/5/8和p-Smad1/5/8蛋白表达水平均降低(P<0.05);与模型组比较,阳性对照组和肾衰营养胶囊组大鼠股骨组织中BMP-7、p-BMP-7、Smad1/5/8 和p-Smad1/5/8蛋白表达水平均升高(P<0.05);与阳性对照组比较,肾衰营养胶囊组大鼠股骨组织中BMP-7、p-BMP-7、Smad1/5/8和p-Smad1/5/8蛋白表达水平均升高(P<0.05).结论:肾衰营养胶囊可改善肾性骨病模型大鼠的肾功能和钙磷代谢紊乱,促进骨髓基质细胞增殖,改善骨代谢情况,其机制可能与激活BMP-7/Smads信号通路有关.

目的 探讨降气化痰推拿法对慢性哮喘幼鼠气道重塑的治疗作用及潜在机制.方法 将50只SPF级雌性BALB/c小鼠随机分为对照组(A组)、模型组(B组)、推拿组(C组)、地塞米松组(D组)、推拿+地塞米松组(E组),每组10只.其中除A组外,其余小鼠均制备哮喘模型.第16天开始,C、D、E组进行相应推拿、地塞米松、推拿+地塞米松治疗,B组注射等量生理盐水;第22天开始,各组连续激发7 d.比较各组的肺功能、血清白介素4(interleukin 4,IL-4)水平、肺组织病理改变以及肺组织转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3 mRNA和蛋白表达水平.结果 肺能功方面,与A组相比,各组给药后的气道狭窄指数明显升高、肺顺应性下降,且C、D、E组的气道狭窄指数低于B组,肺顺应性高于B组.在高浓度乙酰胆碱(6.250 g·L-1,12.500 g·L-1,25.000 g·L-1)给药时,E组的气道狭窄指数明显低于C、D组,且C组低于D组,C组肺顺应性低于D组(P＜0.05);炎性水平方面,与A组相比,各组IL-4水平、炎症细胞浸润程度均升高,且C、D、E组均低于B组,E组低于C、D组,差异具有统计学意义(P＜0.05);HE染色结果显示,A组肺组织无明显炎性改变,B组炎性细胞浸润严重,C组、D组、E组轻微炎症浸润,且E组浸润程度低于C、D组;与A组相比,各组气道壁厚度和气道平滑肌厚度升高,且、D、E组均低于B组,E组低于C、D组;与A组相比,各组TGF-1β、Smad3 mRNA和蛋白水平均升高,且C、D、E组均低于B组,E组低于C、D组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 降气化痰推拿法能够有效改善慢性哮喘幼鼠的气道重塑,降低炎性反应水平,减轻炎性浸润,其机制可能与下调TGF-β1/Smad3通路表达相关.

目的 探究骨形态发生蛋白5(BMP5)对人肝癌细胞生物学行为的影响及机制.方法 将正常人肝细胞系L02与人肝癌细胞系Hep3B、Huh7置于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养,采用RT-qPCR法检测正常人肝细胞系L02与人肝癌细胞系Hep3B、Huh7中BMP5 mRNA表达.将肝癌细胞系Hep3B、Huh7分为对照(NC)组及低、中、高剂量组,低、中、高剂量组分别用1、10、100 ng/mL浓度的重组人骨形态发生蛋白5(rh-BMP5)处理细胞,通过CCK-8法检测细胞增殖,Annexin-V/PI流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,Western blotting法检测增殖细胞核抗原PCNA和SMAD通路关键蛋白及其磷酸化(SMAD3、p-SMAD3)表达.结果 与正常肝细胞系L02相比,BMP5在肝癌细胞系Hep3B、Huh7中表达升高(P均<0.05).与NC组相比,中、高剂量组rh-BMP5可促进Hep3B、Huh7细胞增殖和PCNA表达上调(P均<0.05),高剂量组100 ng/mL的rh-BMP5处理肝癌细胞24及48 h细胞凋亡率降低、迁移率增高(P均<0.05).高剂量组与NC组相比,p-SMAD3表达升高(P<0.05).结论 BMP5在肝癌细胞系中高表达,可能通过增强SMAD3活化促进肝癌细胞Hep3B、Huh7的增殖、迁移并抑制凋亡.

目的:基于缺血再灌注后心衰心气虚型大鼠模型心动周期、心肌病理切片、心肌半乳糖凝集素3(Gal-3)转化生长因子-β(TGF-β),Smad同源物3重组蛋白(Smad3)蛋白表达情况,探讨铁皮石斛对模型大鼠心肌纤维化的干预效果.方法:采用冠状动脉左前降支进行结扎术建立心衰心气虚型大鼠模型,将大鼠分为正常组,模型组,缬沙坦组(9.43 mg·kg-1),铁皮石斛组(10 mg·kg-1)共4组,每组10只,正常组和模型组给予等体积生理盐水.通过动物高分辨超声仪记录各组大鼠心动周期左室舒张末期内径(LVEDD),左室收缩末期内径(LVESD),左心射血分数(LVEF),左心室短轴缩短率(LVFS)变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒测定Ⅰ型胶原羧基端前肽(PICP),Ⅲ型胶原羧基端前肽(PⅢNP);苏木素-伊红(HE)染色观察心肌细胞形态变化,马松(Masson)染色观察心肌纤维组织、胶原组织变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测4组小鼠心肌半乳糖凝集素3(Gal-3),转化生长因子-β(TGF-β),Smad同源物3重组蛋白(Smad3)蛋白表达情况.结果:与正常组比较,模型组LVEDD,LVEF,LVFS水平明显降低(P＜0.05),LVESD,PICP,PIIINP水平升高(P＜0.05),Gal-3,TGF-β,Smad3蛋白表达水平显著升高(P＜0.01);与模型组比较,缬沙坦组、铁皮石斛组LVEDD,LVEF,LVFS明显升高(P＜0.05),LVESD,PICP,PIIINP水平明显降低(P＜0.05),Gal-3,TGF-β,Smad3蛋白表达水平明显降低(P ＜0.05,P＜0.01),且铁皮石斛组低于缬沙坦组(P＜0.05);HE染色结果显示,铁皮石斛组心肌细胞形态明显改善,Masson染色结果显示,铁皮石斛组心肌纤维组织、胶原组织形态明显改善.结论:铁皮石斛可有效抑制缺血再灌注后心衰心气虚症候大鼠心肌纤维化,机制可能为降低Gal-3,TGF-β,Smad3蛋白表达有关.

目的:探讨miR-145、骨形成蛋白1/赖氨酰氧化酶(BMP1/LOX)信号通路与高血压左心室肥厚及心功能的相关性.方法:选取青海省第五人民医院收治确诊的高血压患者60例,依据超声心动图检查结果将其分为高血压左心室肥厚组(实验组,30例)和对照组(30例),通过实时荧光定量PCR(qPCR)对血浆中的miR-145进行检测,Western bloting法检测BMP1/LOX信号通路相关蛋白的表达,并分析其表达与左心室肥厚及心功能的相关性.结果:miR-145及BMP1/LOX信号通路相关蛋白Ⅰ型胶原A1(COL1A1)、BMP1、LOX、Smad同源物5重组蛋白(Smad5)在实验组的表达均较对照组低(P＜0.05);实验组的室间隔厚度、左室舒张末期内径、左室收缩末期内径、LVMI、左心室壁厚度均大于对照组(P＜0.05).miR-145、BMP1、LOX蛋白与左心室相关指标均呈负相关关系(P＜0.05);COX回归分析得出收缩压、饮酒、年龄、腹型肥胖、BMP1、LOX、Smad5及miR-145是高血压左心室肥厚患者的影响因素(P＜0.05);miR-145、BMP1、LOX预测高血压左心室肥厚的ROC曲线下面积分别是0.868、0.815、0865.结论:miR-145、BMPI/LOX信号通路相关蛋白在高血压左心室肥厚均呈低表达,且其表达水平与高血压左心室肥厚及心功能密切相关.

目的 通过对hsa-miR-340-5p的靶基因进行预测和生物信息学分析,探讨其靶基因所发挥的生物学功能及参与的信号传导通路.方法 应用RNAcentral和miRBase数据库在线对比分析miR-340-5p序列在不同物种之间的保守性.运用在线数据库DIANA-microT、Target Scan、miRWalk和miRDB分别预测hsa-miR-340-5p的靶基因,随后使用Venny2.1绘制韦恩图得到交集靶基因的集合,并对其交集靶基因的集合进行基因本体论(GO)功能注释分析、京都基因与基因组百科全书信号通路(KEGG Pathway)富集分析、蛋白互作(PPI)网络构建及关键(hub)基因筛选.结果 通过对比序列分析发现,miR-340-5p的成熟碱基序列在8个不同的物种中高度保守.采用4个miRNA靶基因在线数据库预测后,发现与hsa-miR-340-5p存在结合位点的交集靶基因集合共有92个,占其预测靶基因总和的1.9％.GO功能注释分析发现,hsa-miR-340-5p交集靶基因集合主要富集在核质、黏着斑、细胞间连接等细胞组分,同时,还参与了RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录和蛋白质结合等多种生物学过程和分子功能.KEGG Pathway富集分析发现,hsa-miR-340-5p所结合的交集靶基因集合主要富集在癌症中的蛋白多糖、癌症通路、人类嗜T细胞病毒Ⅰ型(HTLV-I)感染等7个信号通路中.基于hsa-miR-340-5p交集靶基因集合的PPI网络构建,筛选出了度(degree)值前10位的hub基因,分别是:母体抗生物皮肤生长因子同源物(SMAD)2、无翅型MMTV整合位点家族成员(WNT)3、激活素A的1C型受体(ACVR1C)、F-框蛋白(FBXO)30、重组人缺陷于清选蛋白neddylation蛋白1域含1(DCUN1D1)、PH结构域相互作用蛋白(PHIP)、CUB和Sushi多结构域(CSMD)3、分拣连接蛋白(SNX)9、人免疫缺陷病毒Ⅰ增强子结合蛋白(HIVEP)2、RWD结构域蛋白(RWDD)2A.结论 hsa-miR-340-5p调控的靶基因参与了癌症、炎症等疾病的多种生物学过程.