T细胞受体(TCR)序列可作为分辨T细胞特异性的唯一标签,因其多样性的特征,在特定时间内个体循环系统中所有TCR构成的TCR组库可以反映个体的抗肿瘤免疫状态.单细胞TCR测序技术能够在单细胞水平上检测编码TCR双链的基因序列和表达量等信息,包括获得TCR的α链和β链的配对信息,从而在细胞水平上更为准确地探索TCR组库的异质性,还可结合其他技术将TCR序列与基因组、转录组、蛋白质组等多组学信息成套配对,精准展现细胞水平上的多角度信息.因该技术具有高通量、高分辨率的优势而被广泛应用于肿瘤免疫治疗相关研究,为探索TME中T细胞功能、发展T细胞受体工程化T细胞(TCR-T)疗法、预测免疫检查点抑制剂(ICI)疗效等提供重要依据,成为重要的筛选工具,期待该技术的发展使更多肿瘤患者受益.

目的:构建新型冠状病毒感染儿童T细胞受体(T cell receptor，TCR)β链免疫组库，分析新冠病毒感染患儿和健康儿童TCR免疫组库差异。方法:收集新冠病毒Delta变异株感染儿童和健康对照儿童全血样本各五份，RNA质检和文库构建后，进行高通量测序，分析新冠病毒感染患儿和健康儿童TCR免疫组库克隆扩增和多样性指数的差异，统计TCRβ的VJ基因的使用频率，采用非配对T检验统计方法分析。结果:成功利用高通量测序技术构建新冠病毒感染儿童TCRβ免疫组库，与健康儿童相比，新冠病毒感染儿童的TCR免疫组库多样性指数(9.78±1.23)显著低于健康儿童(13.40±2.12)( P<0.05)，TCR克隆扩增指数(0.18±0.07)显著高于健康儿童(0.06±0.06)( P<0.05)。针对TCRβ免疫组库VJ基因使用频率初步比较发现，在新冠病毒感染儿童中，最常见的V基因和J基因分别是TRBV28和TRBJ2-1。 结论:利用高通量测序技术构建新冠病毒感染儿童TCRβ免疫组库，并发现新冠病毒感染儿童特征性的TCRβ免疫组库，阐述新冠病毒感染的T细胞免疫组库特征，对其他病毒感染后快速TCRβ免疫组库的构建具有重要参考意义。

目的:探讨大动脉炎患者T细胞受体库的多样性，并分析T细胞受体β链基因表达及V、J基因重排的分布特点。方法:采取8例大动脉炎患者和4名健康对照者的外周血，构建文库后，用Illumina Hiseq X10测序仪进行高通量测序。生物信息学分析所得序列，并与参考序列进行比对，统计V/D/J基因的频率信息，提取互补决定区（CDR）区域序列。评估免疫组库的多样性，进行样本间及样本内对比分析和聚类分析。应用R语言统计学软件分析数据。采用Mann-Whitney U检验。 结果:大动脉炎组和健康对照组β链第三互补决定区（CDR3）的D50指数和香农熵差异均无统计学意义。大动脉炎组和健康对照组的高频率克隆差异均无统计学意义。2组共有21个基因重排片段存在差异。其中TRBV15-TRBJ2-3[0.31（0.27，0.70）]、TRBV26-TRBJ2-6[0.30（0.23，0.57）]、TRBV28-TRBJ1-4[179（139，412）]，TRBV28-TRBJ1-6[362（253，419）]等14个V/J基因重排片段在患者组中表达显著高于对照组（ Z值分别为2.65，2.08，2.27，2.27，2.27，2.08，2.65，2.08，2.27，2.27，2.08，2.08，2.46，2.22， P值均<0.05）；而TRBV10-1-TRBJ1-2[7.49（4.9，12.1）]、TRBV29-1-TRBJ2-2[10.5（4.0，12.8）]，TRBV-4-2-TRBJ2-6[3.31（1.8，5.8）]等7个V/J基因重排片段在患者组中表达显著低于对照组（ Z值分别为-2.08，-2.27，-2.08，-2.08，-2.27，-2.08，-2.29， P值均<0.05）。 结论:虽然大动脉炎患者外周血T细胞受体库无显著降低的多样性，但大动脉炎患者T细胞受体β链V、J基因表达存在差异，并且有独特的V/J重排亚家族。

目的 为评估肾移植术后急性排斥患者的免疫状态,提高受者及移植物术后早期及远期存活率,本研究动态地检测急性排斥患者T细胞受体(TCR)的免疫组库变化.方法 结合多重PCR扩增和高通量测序技术,动态分析肾移植过程中不同时间点的TCR β链互补决定区3(CDR3)的多样性和图谱特征.结果 急性排斥患者的TCR CDR3的多样性在肾移植术后1d降至最低,在急性排斥发生前其多样性较术后1d上升,甚至超过术前水平.急性排斥反应发生前受者特异性上调的CDR3氨基酸序列被筛选出来.此外,急性排斥反应发生前存在TRB V、TRB J基因亚家族的偏向取用,这可能与T细胞介导的对移植肾抗原的免疫识别和应答有关.结论 肾移植术后急性排斥患者的免疫图谱的多样性降低,且TCR β链V和J亚家族呈现偏向取用的现象.

该文采用高通量测序(high-throughput sequencing,HTS)技术分析早期乳腺癌患者化疗前后外周-血-T细胞TCR β CDR3(T-cell receptor beta chain complementarity determining region 3)组库的组成及动态变化特征,初步探讨化疗对T细胞的可能影响及化疗前后患者T细胞的应答功能状态.以病理活检确诊为T1N0M0期乳腺癌患者为研究对象,选取进行6期TAC[多西他赛(docetaxel,T)、吡柔比星(pirarubicin,A)、环磷酰胺(cyclophosphamide,C)]化疗方案.化疗的3例志愿患者(P1、P2、P3)分别于化疗前、第3期化疗后、第6期化疗后采集外周血分选出单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),提取其总DNA;利用多重PCR建立TCR β CDR3组库进行HTS;采用Immuno SEQ和IMGT-High-V-quest系统对TCR β CDR3序列进行组成和特征分析.结果表明:(1)P1、P2、P3在第3期化疗后的CDR3组库多样性[用反辛普森指数(1/DS)表示]相比化疗前均升高;第6期化疗后,P1和P3相比第3期化疗后CDR3组库多样性降低,但P2相比第3期化疗后CDR3组库多样性升高;(2)P1和P3在第3期化疗后CDR3组库高频克隆(大于1％)较化疗前出现降低,而第6期化疗后CDR3组库高频克隆相比第3期化疗后明显升高;P2第3期化疗后和化疗前相比CDR3组库高频克隆无变化,但第6期化疗后明显降低;(3)P1和P2化疗前后出现部分TRBV基因取周丢失与重新取用,P3的TRB V基因取用未发生明显改变;P2和P3化疗后部分TRBV与 TRBJ优势配对消失.早期乳腺癌患者TAC化疗的前、中、后期,其外周血T细胞TCR β CDR3组库表现出个体化的多样性和特征性改变,可能与TAC对个体T细胞的抑制或杀伤相关.监测CDR3组库的组成及动态变化可为化疗对T细胞的影响及化疗前后“个体化”的T细胞免疫状态评估提供基础.

T淋巴细胞受体(TCRs)在抗原识别免疫应答中作用重要,其多样性与宿主免疫反应及肿瘤预后判断密切相关.目的:采用高通量测序技术研究前列腺癌组织和癌旁组织中T细胞受体(TCR)克隆多样性及其克隆序列.方法:收集5例PC患者的癌组织和癌旁组织,提取DNA后经多重PCR技术对TCR β链CDR3区进行扩增.用Illumina MiSeq进行测序,经过数据处理和比对分析,比较前列腺癌组织TCR CDR3组库的组成特征.结果:前列腺癌组织具有更高程度的克隆百分比和较高的高度扩增克隆比HEC(HEC:频率＞样本总读数的0.5％的TCR克隆),并获得了24对在癌组织样本中差异表达的V-J基因组合、16对在癌旁组织样本中差异表达的V-J基因组合.结论:前列腺癌组织与癌旁组织均存在差异性的V-J基因组合以及高克隆表达的HEC,其中癌组织样品具有更高的HEC.PC发生发展对免疫学研究提供了新的数据,对PC免疫监视、T细胞受体变异标志等研究提供了参考,对以后继续研究打下了基础.

目的 分析HBsAg和HBsAb双阳性乙型肝炎患者与其他HBV感染者间T细胞受体(TCR)组库β链互补决定区3(CDR3)克隆型差异性.方法 以11例HBsAg和HBsAb双阳性乙型肝炎患者为病例组,10例自然痊愈(HBsAb+)者为对照组1,10例HBsAg阳性但HBsAb阴性乙型肝炎患者为对照组2.用Illumina HiseqX10测序仪对全血DNA的CDR3序列进行高通量测序,建立CDR3免疫组库,并进行CDR3克隆型及多样性分析.结果 病例组任意两样本CDR3克隆型重叠率为6.28％ (0.25％,13.10％);对照组1为10.49％(6.20％,17.30％);对照组2为2.60％(0.13％,13.69％),病例组与对照组1相比差异有统计学意义(P=0.008),对照组1与对照组2组相比差异有统计学意义(P=0.001),病例组与对照组2相比差异无统计学意义.经过病例组与2个对照组分别比较得到:克隆型TRBV7-2/TRBD1/TRBJ2-1频率病例组高于对照组1(P=0.029),克隆型TRBV7-3/TRBD1/TRBJ2-7频率病例组低于对照组1(P=0.031).病例组与对照组1相比,V基因型TRBV5-8频率差异有统计学意义(P=0.047);病例组与对照组2之间,有14种克隆型频率差异有统计学意义,V基因型TRBV28频率差异有统计学意义(P=0.028).3组样本的TCR β链CDR3多样性差异无统计学意义(P＞0.05).结论 克隆型TRBV7-2/TRBD1/TRBJ2-1和TRBV7-3/TRBD1/TRBJ2-7,V基因型TRBV5-8可能与HBsAg和HBsAb双阳性相关,而TCR β链CDR3多样性与HBsAg和HBsAb双阳性无明显关系.

目的 探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者化疗前后高通量测序在T细胞受体(TCR)β链抗原互补决定区3(CDR3)的免疫学特征.方法 选取2019-08-10-2019-12-23郑州大学第一附属医院收治的初治DLBCL患者11例为患者组,另选取10名健康体检者为对照组.收集DLBCL患者化疗前后和对照组的外周血标本,获得淋巴细胞的RNA并进行逆转录.利用特异性引物获得TCR可变区多核苷酸并进行高通量测序获得序列信息;基于序列信息分析TCR多样性以及表达的差异.使用SPSS 23.0对数据进行统计学分析,采用非参数检验比较各组间差异.结果 患者组CDR3数量98 840(80 281～129 120)低于对照组162 674(105 725～184 212),差异有统计学意义,P=0.049.患者组CDR3种类31 288(24 726～41 048)低于对照组59 202(43 507～72 309),差异有统计学意义,P=0.001.患者组V基因51(50～52)低于对照组54(52～54),差异有统计学意义,P=0.003.V-J配对患者组652(627～664)低于对照组710(692～722),差异有统计学意义,P=0.001.患者组TCR CDR3库的多样性也明显降低,达到完全缓解(CR)的患者基线TCR CDR3库多样性高于部分缓解(PR).患者组共享的CDR3氨基酸序列有较高的表达,且治疗后出现频率降低.进一步研究发现,化疗可引起DLBCL患者T细胞克隆型频率的变化,并观察到CR的患者具有更低的相似性指数,即化疗后TCRCDR3库出现更多的克隆型改变.结论 DLBCL患者具有独特的TCR CDR3库,化疗可诱导患者TCR CDR3库重构.DLBCL患者存在疾病相关的TCR克隆型,可为指导个体化治疗提供理论依据.

目的 研究慢性乙型肝炎(CHB)患者经核苷(酸)类似物(NUCs)治疗前后肝内T细胞受体(TCR)文库变化特征.方法 选取10例接受替比夫定(LdT)治疗的CHB患者,根据治疗104周后是否发生HBeAg血清学转换分为两组.通过高通量测序分析LdT治疗前后肝穿刺组织中TCRβCDR3区,并分析TCR文库特征及其与血清学参数相关性.结果 经过104周NUCs治疗,发生HBeAg血清学转换的CHB患者肝内TCR文库不重复VJ组合(151.0比71.0,P=0.043)、CDR3克隆型(223.0比109.0,P=0.043),以及标准化香农熵(0.58比0.17,P=0.043)均表现为文库多样性显著下降,同时这些患者治疗前后HBsAg的变化程度与消失克隆型变化呈正相关(r=0.9,P=0.037).结论 CHB患者口服NUCs治疗可引起肝内TCR文库发生有利于特定T细胞克隆增生的变化,这对于促进HBeAg血清学转换有重要意义,提示在NUCs抗病毒治疗的基础上联合免疫治疗可能会更有助于HBV的控制.

目的 采用免疫组库测序的方法分析新生儿脓毒症患者外周血T细胞受体(T cell receptor,TCR)β链互补决定区3(complementarity determining region 3,CDR3)的多样性,探讨新生儿脓毒症的可能发病机制.方法 12例新生儿脓毒症确诊患儿为病例组,9例胎龄、出生体重及日龄相匹配的健康足月儿为对照组.采用Omega公司核酸纯化试剂盒(SQ Blood DNA KitⅡ)从外周血样品中提取DNA,对TCRβ链CDR3进行多重PCR扩增,然后对产物进行高通量测序,分析其TCRβ链CDR3多样性及表达的差异.结果 病例组和对照组的TCRβ链CDR3长度和类型相似,且均呈高斯分布.采用D50和香农-威纳指数作为多样性的评价指标,显示病例组TCRβ链CDR3多样性低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).针对TCRβ链V片段48个基因的使用频率进行比较,其中TRBV10-3、TRBV2和TRBV20-1的使用频率病例组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);对TCRβ链J片段13个基因的使用频率进行比较,其中TRBJ2-3、TRBJ2-5和TRBJ2-7的使用频率病例组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 新生儿脓毒症患者外周血TCRβ链CDR3多样性发生了明显改变,提示这可能与新生儿脓毒症的免疫发病机制有关.