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人类免疫缺陷病毒1型的广谱中和抗体的亲和力成熟与特征及其运用
编辑人员丨3天前
人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染的长期不进展者(LTNP)体内分离到的广谱中和抗体(bNAbs),已被证明可以预防HIV-1感染并降低感染者体内的病毒载量,成为了指导HIV-1疫苗设计和被动免疫治疗的突破口。中和抗体的功能除了与靶向表位有关,其亲和力也极大的影响了抗体的活性。HIV-1 bNAbs通过体内的多轮亲和力成熟获得了较高亲和力,从而实现了广谱度和中和活性的增加。高亲和力HIV-1 bNAbs在治疗过程中能更好的协助机体免疫系统清除病原体,并且使用剂量更少,毒副作用也相对较低。在亲和力成熟的同时,HIV-1 bNAbs表现出了高水平的体细胞超突变(SHM)、插入缺失、较长的重链第三互补决定区等不寻常的特征。这些特征阻碍了通过有效疫苗诱导HIV-1 bNAbs在体内产生并发育成熟,因此了解抗体亲和力成熟过程中发生的突变及其要点,有助于理解中和抗体的活性与特征的关系,并为设计有效的HIV-1潜在免疫原提供参考。
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编辑人员丨3天前
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HBV疫苗接种后高、低、无应答个体B细胞特征的研究进展
编辑人员丨3天前
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染一直以来都是世界范围内严重的公共卫生问题,可导致急、慢性肝脏疾病以及多种并发症。接种HBV疫苗诱导机体B细胞分泌保护性的乙型肝炎病毒表面抗体(hepatitis B surface antibody,HBsAb)是预防HBV感染最重要的措施。研究表明不同个体对HBV疫苗应答的效应不一致,可分为超高/高、正常/中等、低/无应答,对其产生机制的研究可为高滴度HBsAb制备、HBV感染防治等提供参考。本文将对HBV疫苗接种后不同应答效应个体B细胞特征和机制的研究概况与进展进行综述。
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编辑人员丨3天前
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在哺乳动物细胞内基于线性双链DNA"与门"基因线路构建纳米抗体文库
编辑人员丨3天前
目的:在哺乳动物细胞内基于线性双链DNA"与门"基因线路构建纳米抗体文库。方法:应用基于线性双链DNA的"与门"逻辑基因线路构建纳米抗体文库,首先通过PCR扩增将互补决定区(CDR)随机序列引入上、下游线性双链DNA,将其共转染至HEK293T细胞,转染48 h后,经RNA提取、cDNA合成、PCR扩增、高通量测序和数据处理步骤,鉴定"与门"形成的纳米抗体文库序列,对本策略进行了分析与评价。结果:深度测序共测得4 173 356条序列,其中约88.18%的序列为纳米抗体文库序列。文库核酸序列最丰富的序列长度为264 bp,为理论设计长度。后续在264 bp序列中鉴定出22 172种纳米抗体序列,且CDR1~3序列中的核苷酸频率符合NNK模式。结论:本研究开发了一种基于线性双链DNA"与门"逻辑基因线路在哺乳动物细胞中构建纳米抗体文库的新方法。
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编辑人员丨3天前
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微小RNA-139-3p靶向调控性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4减轻心肌细胞氧化应激损伤
编辑人员丨3天前
目的:研究微小RNA(miR)-139-3p对H 2O 2诱导的大鼠心肌细胞系H9c2细胞氧化应激的影响及其可能机制。 方法:分别将miR-139-3p模拟物(mimics)及其阴性对照(miR-NC)、性别决定区相关高迁移率族盒蛋白4(Sox4)过表达载体(pc-Sox4)及其对照(pcDNA3.1)转染H9c2细胞,细胞共分为6组:对照组、H 2O 2组、mimic组(转染mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、pcDNA3.1组(转染mimics和pcDNA3.1)和pc-Sox4组(转染mimics和pc-Sox4),除对照组外的其他细胞均在转染后建立H 2O 2诱导的H9c2细胞氧化应激损伤模型。细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测H9c2细胞活力;比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)的含量;原位缺口末端标记法(TUNEL)染色检测H9c2细胞凋亡;蛋白质印迹法(Western blot)检测Sox4表达;荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-139-3p表达水平;生物信息学网站预测miR-139-3p与Sox4的互补结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证两者之间的靶向关系。各组间差异比较采用方差分析。 结果:H 2O 2组H9c2细胞miR-139-3p水平低于对照组(0.28±0.03比1.00±0.01, t=11.484, P<0.05),miR-139-3p过表达后mimics组细胞活力高于miR-NC组(0.71±0.07比0.44±0.04, t=7.348, P<0.05)、LDH水平低于miR-NC组[(48.21±6.38) U/L比(69.76±7.32) U/L, t=4.759, P<0.05]、细胞凋亡率低于miR-NC组[(21.31±4.02)%比(47.28±5.69)%, t=8.851, P<0.05]。使用TargetScan生物预测网站预测和双荧光素酶报告基因实验证实Sox4是miR-139-3p的靶基因,同时miR-139-3p上调使mimic组Sox4蛋白低于miR-NC组(2.54±0.41比5.38±0.73, t=4.212, P<0.05)。Sox4过表达逆转了miR-139-3p对H 2O 2诱导的细胞损伤的作用,pc-Sox4组Sox4蛋白表达高于pc-DNA3.1组(5.25±0.71比2.61±0.47, t=4.212, P<0.05)、细胞活力低于pc-DNA3.1组(0.45±0.07比0.69±0.08, t=7.788, P<0.05)、LDH水平高于pc-DNA3.1组[(68.62±7.55) U/L比(44.76±5.21) U/L, t=9.368, P<0.05],细胞凋亡率高于pc-DNA3.1组[(41.24±7.36)%比(24.76±4.28)%, t=9.578, P<0.05]。 结论:H 2O 2处理的心肌细胞中miR-139-3p表达下调,miR-139-3p表达上调可通过抑制Sox4减轻H 2O 2诱导的心肌细胞氧化应激损伤。
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编辑人员丨3天前
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大动脉炎患者T细胞受体β链的分布初探
编辑人员丨3天前
目的:探讨大动脉炎患者T细胞受体库的多样性,并分析T细胞受体β链基因表达及V、J基因重排的分布特点。方法:采取8例大动脉炎患者和4名健康对照者的外周血,构建文库后,用Illumina Hiseq X10测序仪进行高通量测序。生物信息学分析所得序列,并与参考序列进行比对,统计V/D/J基因的频率信息,提取互补决定区(CDR)区域序列。评估免疫组库的多样性,进行样本间及样本内对比分析和聚类分析。应用R语言统计学软件分析数据。采用Mann-Whitney U检验。 结果:大动脉炎组和健康对照组β链第三互补决定区(CDR3)的D50指数和香农熵差异均无统计学意义。大动脉炎组和健康对照组的高频率克隆差异均无统计学意义。2组共有21个基因重排片段存在差异。其中TRBV15-TRBJ2-3[0.31(0.27,0.70)]、TRBV26-TRBJ2-6[0.30(0.23,0.57)]、TRBV28-TRBJ1-4[179(139,412)],TRBV28-TRBJ1-6[362(253,419)]等14个V/J基因重排片段在患者组中表达显著高于对照组( Z值分别为2.65,2.08,2.27,2.27,2.27,2.08,2.65,2.08,2.27,2.27,2.08,2.08,2.46,2.22, P值均<0.05);而TRBV10-1-TRBJ1-2[7.49(4.9,12.1)]、TRBV29-1-TRBJ2-2[10.5(4.0,12.8)],TRBV-4-2-TRBJ2-6[3.31(1.8,5.8)]等7个V/J基因重排片段在患者组中表达显著低于对照组( Z值分别为-2.08,-2.27,-2.08,-2.08,-2.27,-2.08,-2.29, P值均<0.05)。 结论:虽然大动脉炎患者外周血T细胞受体库无显著降低的多样性,但大动脉炎患者T细胞受体β链V、J基因表达存在差异,并且有独特的V/J重排亚家族。
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编辑人员丨3天前
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仅具有CDR3的单域抗体NBL42作为纳米抗体亲和力转移的移植框架研究
编辑人员丨3天前
目的:评价前期获得的1株仅具有互补决定区3(CDR3)的单域抗体(sdAbs)NBL42作为纳米抗体亲和力移植通用框架的潜力。方法:采用亲和力转移的方法将分别结合蒜氨酸酶、程序性死亡受体-1(PD-1)、溶菌酶和CD47的4种抗体VHH-A4、VHH-H5、cAb-Lys3和B6H12的CDR3序列移植到NBL42对应的CDR3区。DNA合成获得4种仅具有CDR3的重组sdAbs,镍柱纯化并获得目的蛋白,间接ELISA法检测4种重组纳米抗体与抗原的结合及其热稳定性。用Swiss Model三维建模分析移植前后sdAbs的空间结构。结果:纯化后的4种重组蛋白在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中呈现单一条带,相对分子质量与预期相符。移植后的重组sdAbs NBL42-A4CDR3和NBL42-H5CDR3获得了与蒜氨酸酶和PD-1的特异结合能力,但结合活性降低了约50%,并转变为可溶性表达形式。移植后的重组sdAbs NBL42-L3CDR3和NBL42-B6H12CDR3完全丧失了对原抗原溶菌酶和CD47的结合能力。在热稳定性分析中,移植后的重组sdAbs NBL42-A4CDR3和NBL42-H5/CDR3保留了约50%的剩余结合活性。根据C88Y突变实验和Swiss Model三维建模分析,提示NBL42-FR3中88位半胱氨酸对于亲和力转移可能具有重要作用。结论:NBL42具有作为CDR3移植和亲和力转移框架的潜力。
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编辑人员丨3天前
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慢性淋巴细胞白血病中B细胞受体同型模式的生物学特征和临床意义
编辑人员丨3天前
慢性淋巴细胞白血病(CLL)是西方成人最常见的白血病,尽管CLL在亚洲人种中发病率偏低,但随着人口老龄化,CLL发病率在我国呈上升趋势。CLL细胞与微环境的交互中,B细胞受体免疫球蛋白(B-cell receptor immunoglobulin,BCR IG)对抗原的识别起重要作用,免疫球蛋白重链可变区(IG heavy variable region,IGHV)的突变状态更是判断CLL预后的经典标志物。超过40%的CLL患者间存在IGHV的偏向性使用和高度相似的重链可变区互补决定区3(heavy complementarity-determining region 3,HCDR3)氨基酸片段,此现象称为同型模式BCR。不同亚群的同型模式BCR存在独特的生物学和临床特征。其中IGHV有突变但预后差的#2亚群和发生Richter转化风险高的#8亚群被欧洲CLL研究启动组推荐纳入IGHV突变状态的临床报告之中。本文综述CLL中同型模式BCR的定义、分布、生物学特征和临床意义。
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编辑人员丨3天前
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大容量天然鸡源噬菌体单链抗体库的构建
编辑人员丨2024/6/22
目的 本研究拟构建大容量天然鸡源噬菌体单链抗体库,用于传染病诊断用抗体筛选.方法 选取未经免疫的5周龄白来航鸡包括普通级别和无特定病原体级别、罗曼鸡、洛岛红鸡、洛岛白鸡和贵妃鸡,每个品种各5只,共30只.从法氏囊中提取总RNA,通过反转录合成cDNA.利用聚合酶链式反应技术扩增全套编码抗体可变区的基因序列.通过重叠延伸反应,将重链可变区和轻链可变区基因连接成为单链抗体.将经过回收并酶切纯化的单链抗体克隆到噬菌体载体上,电转化大肠埃希菌TG1感受态细胞.结果 成功构建库容量达1010的鸡源天然单链抗体库细胞库,噬菌体展示库滴度达1012菌落形成单位/mL以上.随机挑选165个单克隆进行菌落PCR鉴定,转化阳性插入率为96.97%(160/165);随机选取72株阳性克隆进行测序,抗体互补决定区3碱基序列及长度存在显著差异,表明构建的抗体库多样性良好.结论 本研究成功构建了大容量鸡源天然单链抗体库,为后续从中筛选出具有应用价值的特异性单链抗体奠定了基础.
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编辑人员丨2024/6/22
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肺癌患者外周血和胸腔积液T细胞受体组库特征分析
编辑人员丨2024/4/27
目的 比较肺癌患者外周血和胸腔积液的T细胞受体(TCR)组库的免疫学特征.方法 收集2020年7月至2021年1月在复旦大学附属中山医院就诊的5例合并恶性胸腔积液肺癌患者的外周血和胸腔积液,分离外周血单个核细胞(PBMC)和胸腔积液单个核细胞(PEMC),提取基因组DNA,采用Illumina MiSeq平台对TCR进行高通量测序,分析TCR组库的多样性等特征.结果 PBMC和PEMC中的TCR克隆型、VJ pairs和互补决定区3(CDR3)序列的多样性和相关性差异均无统计学意义.PBMC中检测到的TCR克隆数量高于PEMC(P<0.05),VJ pairs和CDR3数量与PEMC差异无统计学意义.PBMC和PEMC配对样本的共有VJ pairs数量占总VJ pairs的比例高于共有克隆型和CDR3序列的数量比例(P<0.05),后两者差异无统计学意义.PEMC中高扩增克隆(HEC)数量和占比均高于PBMC.同时鉴定了36个在PBMC和PEMC中差异表达的VJ pairs,其中25个在PEMC中表达升高、9个在PEMC中表达降低.结论 肺癌患者外周血和胸腔积液的TCR组库表现出不同的特征性变化,可能为肺癌重要的免疫病理学特征.
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编辑人员丨2024/4/27
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基于TCR组库分析流程的非小细胞肺癌特征分析
编辑人员丨2024/3/16
目的·探究非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)免疫相关特征,发掘V-J基因中的肿瘤潜在标志物,为建立T细胞受体(T-cell receptor,TCR)-抗原识别预测模型提供基础.方法·收集704例NSCLC样本,用于构建一套系统的TCR组库分析流程,涵盖从原始数据到质控、过滤、TCR序列的识别和提取等上游分析部分,以及组库克隆分布、克隆分型、V-J基因共享性、互补决定区3(CDR3)分布特征以及克隆追踪等下游分析流程.使用Shannon-Weiner指数、Chaol等指数分析样本克隆分布.根据克隆扩增数目进行克隆分型,以探索不同分型间的差异.选取2例甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)样本进行去克隆扩增权重V-J基因共享分析,以探究低频克隆型对V-J基因共享性的影响.最后,通过分析V基因及高频克隆型CDR3分布特征和克隆追踪分析,监测肿瘤免疫前后克隆型频率的变化,寻找潜在的肿瘤标志物.结果·①NSCLC不同组织间克隆分布和克隆分型均存在显著差异,且在不同年龄与性别间存在显著差异.②在V-J基因共享性分析中发现了特定高共享V-J基因,同时在CDR3分布特征分析中存在非正态分布的高克隆V基因与氨基酸高频克隆型.③高频克隆型克隆追踪分析中,观察到NSCLC中高表达或新表达的高频克隆型,提示这些克隆型可作为潜在的肿瘤相关抗原或新抗原结合CDR3参考序列.④通过去克隆扩增权重V-J基因共享分析,发现原本低表达的TRBJ2-5基因表达频率显著增加,提示该基因可能为肿瘤免疫反应的潜在低频关键基因.结论·TRAV21和TRBV6.5基因在NSCLC中高克隆扩增,可作为潜在肿瘤标志物.
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编辑人员丨2024/3/16
