目的 通过探讨苦参及其炮制品对湿热型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型小鼠的治疗作用及其可能的作用机制,为苦参炮制品的临床合理应用提供参考.方法 在持续高温高湿环境下,配合高糖高脂饲料及蜂蜜水,建立湿热型小鼠模型,进而通过自由饮用含3％葡聚糖硫酸钠(DSS)的蒸馏水,建立湿热型UC小鼠模型.实验分为空白组、模型组、阳性药组(美沙拉嗪300 mg/kg)、生苦参组、麸炒苦参组、米泔制苦参组(均按5 g/kg剂量给药)、麦麸辅料组、米泔水辅料组,UC造模同时给予灌胃给药,连续10 d.每日观察小鼠的一般情况、体质量、粪便性状及隐血情况,进行一般疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分,给药结束后处死小鼠,摘取结肠并测量长度,苏木精-伊红(HE)染色观察病理切片,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清中巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1 β(in-terleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)以及结肠组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR,RT-PCR)和 Western blot 法检测结肠组织中 Toll 样受体 4(toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、核因子 κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)mRNA 及蛋白表达.结果 与模型组比较,苦参及其炮制品组DAI评分降低;结肠长度缩短程度减小(P＜0.01),结肠病变程度减轻,淋巴细胞浸润程度减轻;血清中MIF、TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-8含量降低(P＜0.01),IL-10含量升高(P＜0.01);结肠组织中 MDA 含量降低(P＜0.01),SOD 水平升高(P＜0.01);TLR4、MyD88,NF-κBp65 mRNA 及蛋白表达降低(P＜0.01).麦麸辅料和米泔水辅料组较模型组差异无统计学意义(P＞0.05).麸炒苦参组、米泔制苦参组较生苦参组作用更明显(P＜0.05,P＜0.01).结论 苦参及其炮制品具有治疗湿热型UC的作用,经麸炒或米泔制后效果更好,其作用机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,抗氧化应激、抗炎有关.

目的 探讨麦冬多糖(OJP)对烟曲霉菌性角膜炎(AFK)小鼠的治疗作用及机制.方法 通过对小鼠角膜注射烟曲霉菌(AF)悬浮液建立AFK模型,将54只建模成功的AFK小鼠随机分为5组:模型组(n=11)、低剂量组(n=11)、中剂量组(n=11)、高剂量组(n=11)和激动剂组(n=10);取未建模的小鼠作为对照组(n=10).低剂量组、中剂量组和高剂量组小鼠分别用50 μL浓度为5,10,20 g/L的OJP溶液滴眼.激动剂组小鼠用50μL浓度为20g/L的OJP溶液滴眼,同时用0.25 mg/kg的Toll样受体4(TLR4)激动剂CRX-527溶液灌胃.对照组和模型组小鼠分别用50 μL生理盐水滴眼.各组小鼠均给药1周.治疗结束24 h后,在裂隙灯显微镜下进行角膜炎症评分.采用苏木素伊红(HE)染色观察角膜形态;采用ELISA法检测角膜组织上清液中促炎因子白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6水平;采用qRT-PCR分析角膜IL-1 β、TNF-α、IL-6、TLR4、髓样分化因子 88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)p65 的 mRNA 水平;采用 Western blot分析角膜 TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白相对表达.结果 与对照组比较,模型组大鼠的角膜炎症评分升高(P＜0.05),角膜出现明显病变,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均升高(P＜0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均升高(P＜0.05).与模型组比较,低剂量组、中剂量组和高剂量组大鼠的角膜炎症评分降低(P＜0.05),角膜病变减轻,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均降低(P＜0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均降低(P＜0.05).与低剂量组比较,中剂量组和高剂量组大鼠的角膜炎症评分降低(P＜0.05),角膜病变减轻,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均降低(P＜0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均降低(P＜0.05).与高剂量组比较,激动剂组大鼠的角膜炎症评分升高(P＜0.05),角膜病变加重,角膜IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达和mRNA水平均升高(P＜0.05),角膜TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA水平和蛋白表达均升高(P＜0.05).结论 OJP可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路减轻AFK小鼠角膜炎症损伤.

目的 观察柴胡皂苷d(SSd)预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤(HIRI)炎性反应和Toll样因子受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)传导通路的影响.方法 随机数字表法将24只雄性SD大鼠分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)和SSd预处理组(SSd组),每组8只.SSd组在术前连续5 d腹腔注射2mg/kg SSd,Sham组和I/R组腹腔注射等量浓度的二甲基亚砜(DMSO).随后,I/R组和SSd组采用Pringle法阻断第一肝门1 h,Sham组只行开腹、关腹手术和肝门解剖等操作.术后6 h,采集大鼠的血清及肝标本.生化检测血清的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)值;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β水平;苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织细胞损伤和坏死情况;实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肝脏TLR4、TNF-α及IL-1β的相对表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测TLR4、MyD88和NF-κB在3组肝组织的表达差异.结果 血清学指标:I/R组ALT、AST、TNF-α及IL-1β 高于 Sham 组[(1 526.16±147.42)U/L 比(71.32±10.21)U/L、(2 705.17±127.81)U/L 比(189.78±20.04)U/L、(48.60±23.03)pg/ml 比(6.67±1.72)pg/ml、(119.18±40.35)pg/ml 比(5.55±3.61)pg/ml,t=27.85、54.99、5.13、7.93,P＜0.01];而 SSd 组上述指标低于 I/R 组[(402.79±67.54)U/L 比(1 526.16±147.42)U/L、(658.89±88.35)U/L 比(2 705.17±127.81)U/L、(11.38±5.08)pg/ml 比(48.60±23.03)pg/ml、(24.82±5.98)pg/ml 比(119.18±40.35)pg/ml,t=19.59、37.25、4.63、6.54,P＜0.01],差异有统计学意义.HE染色观察肝组织病理改变及评分:给予SSd干预后,SSd组肝脏组织损伤轻于I/R组,Suzuki评分差异有统计学意义(5.40±1.67 比 8.00±0.71,t=3.20,P＜0.01).进一步通过 RT-qPCR 结果发现,I/R 组 TLR4、TNF-α 及 IL-1β 的 mRNA 相对表达量明显高于 Sham 组(2.45±0.32 比 1.00±0.00、1.96±0.17 比1.00±0.00、1.63±0.19 比 1.00±0.00,t=4.63、7.93、5.74,P＜0.01),而 SSd 组 TLR4、TNF-α 及IL-1β 的 mRNA 相对表达量低于 I/R 组(1.92±0.20 比 2.45±0.32、1.55±0.05 比 1.96±0.17、1.24±0.07 比 1.63±0.19,t=3.45、3.97、3.36,P＜0.05),差异均有统计学意义.Western blot 结果提示,I/R 组的 TLR4、MyD88 和 NF-κB 蛋白的表达高于 Sham 组(t=27.95、8.67、4.26,P＜0.01),而SSd 组的 TLR4、MyD88 和 NF-κB 蛋白的表达水平则低于 SSd 组(t=3.69、9.43、2.86,P＜0.05),差异有统计学意义.结论 SSd预处理可以显著降低大鼠HIRI的炎症反应,其作用机制可能与下调TLR4/NF-κB信号转导通路蛋白的表达有关.

目的:观察消肿止痛合剂(Xiaozhong-Zhitong mixture,XZZT)对小鼠小胶质细胞(BV2细胞)M2极化和Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路的影响.方法:将BV2细胞分为空白组、模型组[脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)+缺氧]、TAK-242(TLR4抑制剂)组(LPS+缺氧+TAK-242)、XZZT组(LPS+缺氧+XZZT)和TAK-242+XZZT组(LPS+缺氧+TAK-242+XZZT)共5组.流式细胞术检测BV2细胞的早期凋亡及细胞周期;免疫荧光染色检测M1型标志物诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和M2型标志物CD206的阳性表达;Western blot检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白TLR4、MyD88、NF-κB p65、磷酸化p65(phosphorylated p65,p-p65)、磷酸化转化生长因子β活化激酶1(phosphorylated transforming growth factor-β-activated kinase 1,p-TAK1)和磷酸化NF-κB抑制蛋白激酶α/β(phosphorylated IκB kinase α/β,p-IKKα/β)水平;RT-qPCR检测白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-10、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA表达水平.结果:与模型组相比,XZZT组中BV2细胞早期凋亡率显著降低(P<0.01),生长周期阻滞于S期的细胞比例显著升高(P<0.01),TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-IKKα/β、p-p65和p-TAK1蛋白水平显著降低(P<0.05或P<0.01),IL-1β、TNF-α、TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01),IL-10的mRNA表达水平显著升高(P<0.05).与TAK-242组相比,TAK-242+XZZT组iNOS平均阳性面积百分率显著降低,CD206平均阳性面积百分率显著升高(P<0.01).结论:XZZT具有诱导小鼠小胶质细胞M2极化的作用,其机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关.

目的:探讨白藜芦醇(RES)对葡聚糖硫酸钠盐(DSS)诱导溃疡性结肠炎(UC)小鼠的治疗效果，及其对Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MYD88)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的调控机制。方法:将90只BALB/c小鼠的体重通过SPSS生成随机数后，参照其大小排序分为对照(CON)组、模型(DSS)组、白藜芦醇低(RES-L，10 mg/kg)、中(RES-M，50 mg/kg)、高(RES-H，100 mg/kg)剂量组、柳氮磺砒啶(SASP)组。记录小鼠状况，测算疾病活动指数(DAI)，实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠上皮组织中TLR4、MYD88、NF-κB p65 mRNA和蛋白的表达；酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠结肠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)的含量，并用Graph Pad Prism 8统计软件分析。结果:DSS组TLR4、MYD88、NF-κB p65显著高于CON组(0.315±0.046比0.082±0.011、0.279±0.025比0.085±0.012、0.244±0.026比0.052±0.011， t＝8.352、12.045、11.476， P<0.05)，差异有统计学意义，RES-H的TLR4、MYD88、NF-κB p65显著低于DSS组(0.105±0.016比0.311±0.045、0.094±0.012比0.295±0.021、0.103±0.015比0.245±0.026， t＝9.174、7.285、11.163， P<0.05)，差异有统计学意义；RES-H组TNF-α、IL-1β、IL-6显著低于DSS组(154.105±6.184比303.408±31.209、93.522±7.271比306.305±40.926、140.509±2.795比263.705±11.116， t＝8.174、8.865、18.622， P<0.05)，差异有统计学意义，RES-H组IL-10高于DSS组(110.708±4.154比93.846±3.232， t＝5.565， P<0.05)，差异有统计学意义。 结论:RES通过调节TLR4/MYD88/NF-κB p65信号通路活化达到治疗UC的目的。

目的:初步探讨铜绿假单胞菌外膜囊泡(outer membrane vesicles，OMVs)对巨噬细胞炎症反应的调节作用及其分子机制。方法:体外培养铜绿假单胞菌( P. aeruginosa)提取OMVs，不同浓度OMVs刺激RAW264.7细胞后，酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)、实时荧光定量PCR(quantitative real time PCR，qRT-PCR)分别检测细胞上清中白细胞介素(interleukin，IL)-8及其mRNA的表达水平，并通过Western blot法检测细胞内核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)抑制蛋白(inhibitor of NF-κB，IκB)磷酸化水平；siRNA沉默Toll样受体4(Toll-like receptor 4，TLR4)后，检测细胞中IL-8的分泌水平；最后通过髓样分化因子(myeloid differentiation factor88，MyD88)抑制剂以及NF-κB抑制剂BAY11-7082预处理后OMVs刺激细胞，并检测细胞中IL-8的变化水平。 结果:不同浓度的OMVs(1、5、10 μg/mL)刺激处理RAW264.7细胞后，细胞内IL-8及其mRNA表达水平较未刺激组(0 μg/mL OMVs)均明显增高[IL-8(1、5、10 μg/mL OMVs)：(31.54±4.25)pg/mL、(82.04±10.20)pg/mL、(136.30±16.03)pg/mL比(16.42±6.14)pg/mL， t值分别为7.23，8.92和10.76， P值均<0.05; mRNA(1、5、10 μg/mL OMVs)：(1.25±0.09)，(2.34±0.12)、(4.25±0.43)比(1.00±0.07)， t值分别为5.24，7.98和9.63， P值均<0.05]，且呈一定的剂量依赖性。siRNA沉默TLR4后细胞中IL-8分泌水平较对照组显著降低[(46.07±18.23)pg/mL比(115.50±22.02)pg/mL， t＝9.25， P<0.05]。而通过MyD88抑制剂以及NF-κB抑制剂预处理后，RAW264.7细胞内IL-8的分泌水平较处理前也明显减少[MyD88抑制剂预处理后：(54.04±12.02)pg/mL比(134.02±18.01)pg/mL, t＝9.72， P<0.05；NF-κB抑制剂预处理后：(51.03±17.01)pg/mL比(142.01±22.02)pg/mL， t＝7.21， P<0.05]。 结论:铜绿假单胞菌OMVs能够通过TLR4以及NF-κB途径诱导巨噬细胞RAW264.7分泌IL-8。

目的:研究肾安汤通过调节TLR4/NF-κB信号通路对顺铂诱导的大鼠肾损伤的保护作用，探讨其作用机制。方法:将60只SD大鼠按体重分为空白组、模型组、阳性对照组、肾安汤高剂量组、肾安汤中剂量组、肾安汤低剂量组，每组10只。除空白组外，其余各组采用腹腔注射顺铂7.5 mg/kg制备急性肾损伤大鼠模型。造模后，肾安汤高、中、低剂量组分别灌胃肾安汤水煎液0.698、1.395、2.790 g/ml，阳性对照组灌胃盐酸贝那普利混悬液5 mg/kg，1次/d，连续灌胃14 d。采用HE染色观察各组大鼠肾组织病理学改变，采用ELISA法检测各组大鼠血清BUN、肌酐(Cr)、胱抑素C(Cys-c)及TNF-α、IL-6水平，Western-blot法检测肾组织TLR-4、NF-κB p65、髓样分化因子(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF-6)蛋白表达。结果:与模型组比较，肾安汤低、中、高剂量组大鼠一般生长情况明显改善，肾脏系数降低( P<0.05)；肾安汤低、中、高剂量组大鼠血清BUN、Cr、Cys-c、TNF-α、IL-6水平降低( P<0.05)，肾组织中TLR-4[(0.54±0.07)、(0.52±0.09)、(0.41±0.04)比(0.86±0.06)]、NF-κB p65[(0.74±0.02)、(0.72±0.06)、(0.67±0.05)比(0.93±0.03)]、MyD88[(0.86±0.02)、(0.82±0.03)、(0.61±0.02)比(1.04±0.03)]、TRAF-6[(0.65±0.04)、(0.58±0.08)、(0.54±0.07)比(0.90±0.06)]蛋白表达下调( P<0.05)，且具有一定的浓度依赖性。 结论:肾安汤可通过抑制TLR4/NF-κB信号通路，减轻顺铂诱导的大鼠肾损伤病理改变，从而保护大鼠肾功能。

目的:探讨理筋正骨手法联合热补针对新西兰大白兔膝关节炎软骨损伤、免疫平衡及肝X受体α（LXRα）/NF-κB通路的影响。方法:将60只大白兔按随机数字表法分为正常组、模型组、理筋正骨组、热补针组、联合组，每组12只。除正常组外，其余各组建立膝关节炎模型，理筋正骨组采用理筋正骨手法干预，热补针组采用热补针干预，联合组采用理筋正骨手法联合热补针干预。采用测痛仪检测各组大白兔痛阈值；HE染色观察软骨损伤形态；ELISA法检测关节面软骨组织中前列腺素E 2（PGE 2）、IL-1β、β-内啡肽（β-EP）水平；PCR检测滑膜组织LXRα、NF-κB mRNA水平；Western blot法检测滑膜组织TLR4、髓样分化因子（MyD88）、干扰素调节因子-7（IRF-7）、NF-κB P65蛋白表达。 结果:与模型组比较，热补针组、理筋正骨组、联合组大白兔痛阈值升高（ P<0.05）；关节面软骨组织PGE 2、IL-1β水平降低（ P<0.05），β-EP水平升高（ P<0.05）；滑膜组织LXRα mRNA水平升高（ P<0.05），NF-κB mRNA水平降低（ P<0.05）；滑膜组织TLR4、MyD88、IRF-7、NF-κB P65蛋白表达降低（ P<0.05）。 结论:理筋正骨手法联合热补针可降低膝关节炎模型大白兔PGE 2、IL-1β水平，提高β-EP水平，改善疼痛及软骨组织形态，其机制可能与调控LXRα/NF-κB通路，减少炎症反应，维持免疫平衡有关。

Background::Electroacupuncture (EA) has been shown to attenuate airway inflammation in asthmatic mice; however, the underlying mechanism is not fully understood. Studies have shown that EA can significantly increase the inhibitory neurotransmitter γ-aminobutyric acid (GABA) content in mice, and can also increase the expression level of GABA type A receptor (GABAAR). Furthermore, activating GABAAR may relieve inflammation in asthma by suppressing toll-like receptor 4 (TLR4)/myeloid differentiation factor 88 (MyD88)/nuclear factor-kappa B (NF-κB) signaling pathway. Therefore, this study aimed to investigate the role of GABAergic system and TLR4/MyD88/NF-κB signaling pathway in asthmatic mice treated with EA.Methods::A mouse model of asthma was established, and a series of methods including Western blot and histological staining assessment were employed to detect the level of GABA, and expressions of GABAAR and TLR4/MyD88/NF-κB in lung tissue. In addition, GABAAR antagonist was used to further validate the role and mechanism of GABAergic system in mediating the therapeutic effect of EA in asthma.Results::The mouse model of asthma was established successfully, and EA was verified to alleviate airway inflammation in asthmatic mice. The release of GABA and the expression of GABAAR were significantly increased in asthmatic mice treated with EA compared with untreated asthmatic mice ( P < 0.01), and the TLR4/MyD88/NF-κB signaling pathway was down-regulated. Moreover, inhibition of GABAAR attenuated the beneficial effects of EA in asthma, including the regulation of airway resistance and inflammation, as well as the inhibitory effects on TLR4/MyD88/NF-κB signaling pathway. Conclusion::Our findings suggest that GABAergic system may be involved in mediating the therapeutic effect of EA in asthma, possibly by suppressing the TLR4/MyD88/NF-κB signaling pathway.

目的:观察复方肿节风雾化剂对慢性咽炎模型大鼠的影响，探讨其作用机制。方法:将60只SD大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、阳性药物组及复方肿节风雾化剂低、中、高剂量组，每组10只。除正常组外，其余各组采用咽部注射A族乙型溶血性链球菌(group A beta-hemolytic streptococcus, GAS)法建立细菌性慢性咽炎大鼠模型。造模成功后，复方肿节风雾化剂低、中、高剂量组分别用2.33、4.66、9.32 g/kg复方肿节风雾化剂进行超声雾化，正常组与模型组予同体积生理盐水雾化，阳性药物组腹腔注射氨苄西林钠0.93 g/kg，1次/d，连续干预14 d。采用HE染色法检测咽部黏膜病理形态学改变，ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平，采用免疫组化染色法检测咽部黏膜组织TLR-4、髓样细胞分化因子88(myeloid differentiation factor88, MyD88)、NF-κB p65蛋白表达，RT-qPCR法检测咽部黏膜组织TLR-4、MyD88、NF-κB p65 mRNA表达。结果:HE染色显示，复方肿节风雾化剂各剂量组随药物剂量升高，炎性细胞浸润情况逐步缓解；与模型组比较，阳性药物组及复方肿节风雾化剂低、中、高剂量组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低( P<0.05)，咽黏膜组织TLR-4、MyD88、NF-κB p65蛋白积分光密度值降低( P<0.05)；阳性药物组及中、高剂量组大鼠咽黏膜组织TLR-4[(1.17±0.41)、(2.44±1.06)、(1.25±0.34)比(3.87±1.43)]、MyD88[(1.15±0.53)、(1.75±0.36)、(1.09±0.14)比(2.44±0.19)]、NF-κB p65[(1.97±0.51)、(2.64±0.26)、(2.31±0.44)比(5.08±0.34)]mRNA表达降低( P<0.05)。 结论:复方肿节风雾化剂可通过抑制慢性咽炎模型大鼠TLR-4、MyD88、NF-κB p65表达来降低炎性细胞因子水平，从而发挥抗炎作用。