目的:探讨三结构域蛋白27(TRIM27)在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞炎症反应中的作用机制。方法:收集2018—2019年于温州医科大学附属平阳医院接受手术治疗的NSCLC患者的癌组织和正常癌旁组织(距离癌组织5 cm)各10例，利用荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot法检测TRIM27 mRNA和蛋白的表达水平。TRIM27 siRNA敲减实验分为NC TRIM27组、TRIM27 siRNA组、NC TRIM27+TNF-α组、TRIM27 siRNA+TNF-α组；白细胞介素6(IL-6) siRNA敲减实验分为NC IL-6组和IL-6 siRNA组。采用Western blot法检测各组细胞系中TRIM27、肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)、TNFR2以及TNFR相关炎症因子蛋白的表达水平。 结果:不同分期NSCLC组织中TRIM27表达水平(Ⅰ期为2.81±0.58，Ⅱ期为3.32±1.38，Ⅲ期为3.67±1.24)均高于对应正常癌旁组织(分别为1.01±0.15、0.92±0.10和1.05±0.12，均 P<0.05)。NC TRIM27组和NC TRIM27+TNF-α组细胞中TRIM27 mRNA的表达水平分别为0.94±0.12和1.67±0.03，TRIM27蛋白表达水平分别为0.31±0.02和0.38±0.01，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。NC TRIM27+TNF-α组和TRIM27 siRNA+TNF-α组细胞中IL-6 mRNA的表达水平分别为11.35±0.12和5.62±0.15，VCAM-1 mRNA的表达水平分别18.75±0.17和9.35±0.11，STAT3 mRNA表达水平分别16.54±0.10和8.12±0.10，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。NC IL-6组和IL-6 siRNA组细胞中IL-6 mRNA的表达水平分别为1.10±0.07和0.52±0.16，STAT3 mRNA的表达水平分别为1.01±0.01和0.48±0.12，TRIM27 mRNA的表达水平分别为1.03±0.01和0.30±0.11，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:NSCLC组织和细胞中，TRIM27呈高表达，且促进TNF-α基因的表达，可能通过调控TNF-α诱导IL-6/STAT3信号通路促进肺癌炎症反应的发生。

目的 观察富马酸替诺福韦二吡呋酯对慢性重型乙型肝炎患者免疫、炎性反应水平的影响.方法 选取2021年3月—2022年3月海口市人民医院感染性疾病科诊治慢性重型乙型肝炎患者114例,采用随机数字表法分为观察组57例和对照组57例.对照组给予常规支持治疗及恩替卡韦口服治疗,观察组给予常规支持治疗及富马酸替诺福韦二吡呋酯口服治疗.比较2组患者治疗6个月内肝功能指标(ALT、AST、TBil、Alb)、细胞免疫相关指标(CD4+T淋巴细胞比例、CD8+T淋巴细胞比例、CD4+/CD8+比值)、血清炎性相关指标(TGF-β1、IL-6、TRIM5α、SOCS-1、PD-1)水平,以及药物不良反应发生率.结果 治疗6个月后,观察组血清ALT、AST及TBil均低于对照组,Alb高于对照组(t/P=10.632/＜0.001,6.216/＜0.001,6.090/＜0.001,3.943/＜0.001);CD4+T 淋巴细胞比例及 CD4+/CD8+比值均高于对照组,CD8+T淋巴细胞比例低于对照组(t/P=6.229/＜0.001、5.567/＜0.001、3.737/＜0.001);血清TGF-β1、IL-6及PD-1水平均低于对照组,TRIM5α及SOCS-1水平均显著高于对照组(t/P=7.249/＜0.001、5.395/＜0.001、8.658/＜0.001、13.451/＜0.001、7.195/＜0.001).治疗过程中,观察组患者总药物不良反应发生率低于对照组患者(x2/P=4.222/0.040).结论 富马酸替诺福韦二吡呋酯能显著改善慢性重型乙型肝炎患者的肝功能及细胞免疫功能,同时能显著抑制患者体内炎性反应,降低抗病毒药物导致的不良反应发生率.

目的 比较亲水性银离子敷料与磺胺嘧啶银治疗深Ⅱ度烧伤患者的临床疗效.方法 选择2014年4月至2016年4月十堰市太和医院接诊的80例深Ⅱ度烧伤患者,按随机数表法分为观察组和对照组各40例.对照组在创面均匀涂抹1％磺胺嘧啶银霜乳膏,换药频率1次/d,观察组给予亲水性银离子敷料,根据创面形状修剪辅料大小,加以纱布包扎,换药频率3～5 d/次.比较两组患者创面愈合情况及血清炎症因子变化.结果 观察组患者创面愈合时间为(17.58±2.48)d,短于对照组的(22.13±3.42)d,换药次数为(5.02±0.79)次,少于对照组的(7.34±0.84)次,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组患者在7 d、14 d、21 d时创面愈合率分别为(60.23±4.78)％、(82.35±5.14)％、(93.42±2.03)％,均高于对照组的(51.32±5.09)％、(74.23±5.17)％、(88.45±3.49)％,差异均具有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平为(0.43±0.07)pg/mL、(0.63±0.12)pg/mL,均低于对照组的(0.54±0.08)pg/mL、(0.76±0.11)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);两组患者创面分泌物细菌检出阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 亲水性银离子敷料治疗深Ⅱ度烧伤可有效降低患者的炎症因子水平,促进创面愈合,临床治疗效果显著.

目的 分析编码TRI45α蛋白的基因2号外显子单核苷酸基因多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)与艾滋病的相关性,并探讨病毒亚型对此相关性的影响.方法 从331例已确诊但未接受治疗的H-IV-1感染者的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中提取基因组DNA,扩增HIV-1病毒的Gag基因和编码TRIM5α蛋白基因的2号外显子基因并获得基因序列信息,统计单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)和构建Gag基因系统进化树图.以CD4+T淋巴细胞数200个/μL为界值将HIV-1感染者分为快速进展组(CD4 ＜200)和慢速进展组(CD4≥200),并分析比较所有331例样本和各HIV-1亚型中TRIM5α基因多态性与艾滋病的相关性.结果 在全部扩增的331条HIV-1的Gag基因中,有239条Gag基因序列与不同的CRF01_AE亚簇聚集,CRF01_AE亚型感染者占所有感染者的72.2％,其他亚型较少,故不进行相关性分析.我们共发现4个SNP位点(-2GC、127CT、334GT和407GA),其中407GG基因型在所有样本和CRF01_AE感染者的快速进展组和慢速进展组中都有明显的统计学差异(P＜0.05),而407GA基因型只在CRF01_AE感染者中有统计学差异.结论 突变位点-2G/C、127C/T、334G/T和HIV-1的感染无相关性,407G/A突变可能与宿主TRIM5α蛋白抗HIV-1的作用增强相关,而HIV-1病毒型别是研究TRIM5α基因多态性和艾滋病相关性应该考虑的因素.

目的 三结构域家族33(Trim33)在调控成骨细胞分化的过程中起到了非常重要的作用,而在脂肪细胞分化过程中的作用却鲜有报道.文中以Trim33为对象探讨其对脂肪细胞分化的影响.方法 以转染Trim33-pcDNA3.1过表达质粒的骨髓基质细胞ST2细胞作为实验组,以转染pcDNA3.1质粒的骨髓基质细胞ST2细胞作为对照组,将2组细胞进行成脂诱导分化后,利用油红O染色、qRT-PCR及Western blot技术分析2组细胞CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)α、成脂相关因子过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ、脂肪细胞表征因子FABP4、脂肪因子adipsin等脂肪特异性基因表达的变化.结果 与对照组相比,实验组Trim33表达水平显著上升(1.00±0.31 vs 88.51±14.31,P<0.01).成脂诱导5 d后,经油红O染色,转染Trim33-pcDNA3.1过表达质粒,实验组较对照组细胞脂滴数量明显增多.A520结果与染色一致,实验组的A值明显高于对照组(0.69±0.03 vs 0.34±0.03,P<0.01).与对照组比较,实验组PPARγ、C/EBPα、FABP4、adipsin mRNA相对表达[(1.00±0.19)vs(1.79±0.21)、(1.00±0.12)vs(2.28±0.24)、(1.00±0.01)vs(10.30±1.38)、(1.00±0.16)vs(12.50±1.96)]均明显增加(P<0.05).实验组较对照组成脂特异性基因Trim33、PPARγ、C/EBPα、FABP4的蛋白表达上调.结论 Trim33能促进骨髓基质细胞脂堆积并增强脂肪特异性基因的表达.

目的 研究促肝细胞生长素联合恩替卡韦治疗慢性重症乙肝肝纤维化的临床疗效.方法 选取50例慢性重症乙肝肝纤维化患者,随机分成2组,每组25例.2组患者均给予保肝及对症支持治疗,对照组加用恩替卡韦,观察组加用促肝细胞生长素+恩替卡韦,2组疗程均为6个月,比较2组临床疗效、HBV-DNA水平、血清细胞因子及免疫分子、肝纤维化、腹部彩超及不良反应.结果 治疗后,观察组总有效率为96.00％,明显高于对照组的76.00％(P<0.05);2组HBVDNA转阴率和HBeAg血清学转换率较治疗前显著升高(P<0.05),且观察组升高幅度大于对照组(P<0.05);2组白细胞介素-6(IL-6)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、可溶性程序性死亡分子1(sPD-1)较治疗前显著降低(P<0.05),2组干扰素-γ(IFN-γ)、补体C3、补体C4、三基序蛋白5α(TRIM5α)、细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)较治疗前显著升高(P﹤0.05),且观察组变化幅度大于对照组(P<0.05);2组透明质酸酶(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、脯肽酶(PLD)较治疗前显著降低(P<0.05),且观察组降低幅度大于对照组(P<0.05);2组门静脉主干内径、门静脉血流量、脾脏长径、脾脏厚度较治疗前明显降低(P<0.05),2组平均血流速度较治疗前明显升高,除脾脏厚度外,观察组变化幅度大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);2组治疗期间未出现明显不良反应.结论 促肝细胞生长素联合恩替卡韦治疗慢性重症乙肝肝纤维化效果显著,安全性好,具有较高的临床应用价值.

目的:建立相对荧光定量PCR测定HIV-1晚期反转录产物方法,并以其评价hTRIMCyPA对HIV-1的抑制作用.方法:选择HIV-1的LTR区和HIV-1Gag之间的序列设计晚期反转录产物引物,以GAPDH基因为内参基因,建立SYBR GreenⅠ相对荧光定量PCR测定HIV-1晚期反转录产物的体系,并用来评价hTRIMCyPA重组蛋白对HIV-1晚期反转录产物的影响.结果:在建立的荧光定量PCR体系中,晚期反转录产物和内参GAPDH标准曲线的斜率分别为-3.381、-3.289.相关系数R2分别为0.9929、0.9937,均>0.99,表明二者的线性较好,晚期反转录产物基因及参照基因GAPDH基因扩增效率相同,可用于相对定量分析.hTRIMCyPA表达组HIV-1相对晚期反转录产物量明显少于空载体组.结论:本研究建立的定量HIV-1特异性反转录产物相对荧光定量PCR检测方法简单、高效和成本低廉,并且hTRIMCyPA对HIV-1反转录具有明显抑制作用.

alpha-突触核蛋白(alpha-synuclein,α-syn)异常累积与聚集是帕金森病的重要致病因素之一.目前,已有的降低细胞内α-syn的方法多是从抑制新蛋白质合成角度进行,而无法干预已经存在并产生毒性的蛋白质.该研究旨在探索一种可以降解α-syn的新方法,从而挽救α-syn造成的细胞损伤.本研究依据Trim-Away方法设计了2种针对α-syn降解的肽段,即Pep1和Pep2,并将其过表达至HEK293T以及SH-SY5Y细胞中.Western印迹检测和免疫荧光分析以及免疫共沉淀结果表明,Pep1和Pep2可以在上述细胞系中表达,并与α-syn形成复合物,协助胞内蛋白酶体系统降解α-syn (P＜0.05,P＜0.0001).进一步的细胞活力以及细胞毒性结果显示,Pep1和Pep2可以挽救α-syn引起的细胞活力的下降(P＜0.0001),并且可以缓解α-syn造成的细胞毒性的增加(P＜0.0001).总之,本文的结果提示,肽段可以协助胞内蛋白酶体系统降解α-syn,并缓解α-syn造成的细胞损伤.本研究为短肽的研发、应用以及帕金森病的干预提供新的思路.

目的 MiR-515-5p是一种抑癌基因,其在结直肠癌(CRC)中的作用及机制有待于研究.文章探讨miR-515-5p过表达对CRCHT-29细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制. 方法 采用qRT-PCR法检测81例CRC癌组织和癌旁组织以及结肠上皮细胞NCM460和CRC细胞系(SW620、HCT116、HT-29和SW480)中miR-515-5p的表达水平.通过双荧光素酶报告基因实验检测miR-515-5p和三结构域蛋白31(TRIM31)的靶向关系.将miR-515-5p mimic及其阴性对照(mimic NC)和TRIM31过表达质粒载体(pcDNA3.1-TRIM31)及其空白载体(Vector)转染至HT-29细胞中,分为blank组(未转染质粒)、mimic NC+Vector组(共转染mimic NC和Vector质粒)、miR-515-5p mimic组(转染miR-515-5p mimic)、pcDNA3.1-TRIM31组(转染过表达质粒pcDNA3.1-TRIM31)和mimic+pcDNA3.1-TRIM31组(共转染miR-515-5p mimic和过表达质粒pcDNA3.1-TRIM31);qRT-PCR检测细胞中miR-515-5p与TRIM31 mRNA表达水平;CCK-8法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测细胞中TRIM31、PI3K(p110α)、p-AKT(Ser473)和AKT等蛋白表达水平. 结果 CRC癌组织及细胞系中miR-515-5p的表达水平显著低于CRC癌旁组织和结肠上皮细胞(P<0.01).双荧光素酶报告基因实验证实,TRIM31是miR-515-5p靶基因.过表达miR-515-5p可明显上调HT-29细胞中miR-515-5p表达水平,抑制细胞增殖、迁移和侵袭能力,并下调TRIM31 mRNA及TRIM31、PI3K和p-AKT蛋白表达水平(P<0.01).而过表达TRIM31可显著上调HT-29细胞中TRIM31 mRNA和蛋白表达,促进细胞增殖、迁移和侵袭,并上调PI3K和p-AKT蛋白表达水平(P<0.01).平板克隆形成实验结果显示,与blank组细胞克隆数[(126.67±8.08)个/孔]或mimic NC+Vector组细胞克隆数[(123.33±6.51)个/孔]比较,mimic组HT-29细胞克隆数[(50.00±11.53)个/孔]明显降低(P<0.01),而pcDNA3.1-TRIM31组HT-29细胞克隆数[(197.33±20.21)个/孔]明显增加(P<0.01);与mimic组比较,mimic+pcDNA3.1-TRIM31组HT-29细胞克隆数[(152.33±7.64)个/孔]又明显增加(P<0.01).此外,过表达TRIM31可显著逆转miR-515-5p mimic对HT-29细胞增殖和侵袭的抑制作用(P<0.01). 结论 miR-515-5p在人CRC癌组织和细胞系中低表达,过表达miR-515-5p可抑制HT-29细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与靶向TRIM31调控PI3K/AKT信号通路有关.

Anti-vascular endothelial growth factor(VEGF)drugs have revolutionized the treatment of neovascular eye diseases,but responses are incomplete in some patients.Recent evidence shows that integrins are involved in the pathogenesis of neovascular age-related macular degeneration and diabetic retinopathy.JP1,derived from an optimized seven-amino-acid fragment of JWA protein,is a polypeptide specifically targeting integrin αVβ3.In this study we evaluated the efficacy of JP1 on laser-induced choroidal neovascularization(CNV)and retinal vascular leakage.CNV mice received a single intravitreal(IVT)injection of JP1(10,20,40 μg)or ranibizumab(RBZ,10 μg).We showed that JP1 injection dose-dependently inhibited laser-induced CNV;the effect of RBZ was comparable to that of 20 μg JP1;a combined IVT injection of JP1(20 μg)and RBZ(5 μg)exerted a synergistic effect on CNV.In the 3rd month after streptozotocin injection,diabetic mice receiving IVT injection of JP1(40 μg)or RBZ(10 μg)once a week for 4 weeks showed significantly suppressed retinal vascular leakage.In both in vivo and in vitro experiments,JP1 counteracted oxidative stress and inflammation via inhibiting ROS/NF-κB signaling in microglial cells,and angiogenesis via modulating MEK1/2-SP1-integrin αVβ3 and TRIM25-SP1-MMP2 axes in vascular endothelial cells.In addition,intraperitoneal injection of JP1(1,5 or 10 mg)once every other day for 3 times also dose-dependently inhibited CNV.After intraperitoneal injection of FITC-labeled JP1(FITC-JP1)or FITC in laser-induced CNV mice,the fluorescence intensity in the CNV lesion was markedly increased in FITC-JP1 group,compared with that in FITC group,confirming that JP1 could penetrate the blood-retinal barrier to target CNV lesion.We conclude that JP1 can be used to design novel CNV-targeting therapeutic agents that may replace current invasive intraocular injections.