目的 研究Gremlin-2基因rs4454537基因多态性及血清25-羟维生素D3[25(OH)D3]水平异常对绝经后妇女骨质疏松的影响.方法 选取邢台市人民医院2020年2月至2023年10月收治的绝经后骨质疏松患者160例为研究组,并选取同期健康体检的绝经女性160例为对照组,比较两组妇女骨密度及25(OH)D3水平,并分析两者相关性.采用TaqMan探针法检测患者血液中Gremlin-2基因rs4454537位点基因多态性,比较两组基因分布情况、不同基因型患者血清25(OH)D3水平以及骨密度差异,并分析绝经后妇女骨质疏松的影响因素.结果 研究组的25(OH)D3表达水平以及正位骨密度(BMD)、T值均低于对照组(P＜0.05).Pearson 法分析显示 25(OH)D3 表达水平与 BMD 呈正相关性(r=0.638,P＜0.05).Gremlin-2 基因 rs4454537位点存在3种基因型:TT、TC和CC,研究组的T等位基因、TT基因型频率低于对照组(x2=19.643,P＜0.001,x2=18.321,P＜0.001).不同基因型患者骨密度、25(OH)D3水平差异有统计学意义,其中TT型患者的骨密度、25(OH)D3水平明显高于TC、CC基因型患者(均P＜0.05).Logistic回归分析结果显示,Gremlin-2基因rs4454537位点基因型、25(OH)D3水平是绝经后骨质疏松的独立影响因素(P＜0.01).结论 Gremlin-2基因rs4454537位点基因多态性以及血清25(OH)D3水平与绝经后妇女骨质疏松密切相关,其中TT基因型患者血清25(OH)D3水平处于较高水平,可能降低骨质疏松发生风险.

鼠疫是由鼠疫耶尔森菌（以下简称鼠疫菌）引起的一种烈性传染病，发病急、传播快且病死率极高。历史上发生过3次鼠疫大流行，导致上亿人口死亡。近20年来全球鼠疫疫情呈上升趋势，2000 - 2018年，世界卫生组织（WHO）共收到来自美洲、非洲和亚洲21个国家报告的2万多起鼠疫病例 [1]。我国动物间鼠疫一直较为活跃，且除个别年份外，几乎每年都有人间鼠疫发生。2019年11月，北京市首先出现2例内蒙古自治区输入性肺鼠疫病例，随后内蒙古自治区又报道2例腺鼠疫病例，提示这一甲类传染病仍对人们的生命安全具有极大的潜在威胁 [2,3,4]。链霉素是WHO鼠疫手册 [5]和我国《鼠疫诊疗方案（试行）》（卫办应急发[2011]第18号） [6]中治疗鼠疫的首选药物。但值得注意的是，2021年Dai等 [7]发现国内1株鼠疫菌因编码核糖体蛋白S12的rpsL基因第128 bp位点的碱基发生了突变，从而产生了对链霉素的高度耐药性。为此，本研究应用基于TaqMan-MGB荧光探针的实时荧光PCR法（简称MGB荧光探针法），选取鼠疫流行较为严重的玉树藏族自治州（以下简称玉树州）鼠疫自然疫源地内分离的鼠疫菌，检测链霉素耐药位点rpsL基因第128 bp位点碱基的突变情况，判断当地菌株的耐药情况，为鼠疫疫情的防控提供参考。

目的:探讨湖北十堰地区非小细胞肺癌（NSCLC）患者表皮生长因子受体（EGFR）基因突变情况及其与患者临床病理特征的关系。方法:回顾性分析2017年11月至2020年1月就诊于湖北医药学院附属国药东风总医院的173例NSCLC患者资料。通过突变扩增阻滞系统（ARMS）-TaqMan探针法检测NSCLC组织中EGFR基因突变情况，同时收集患者的临床病理资料，分析EGFR基因突变状态与患者临床病理特征之间的关系。结果:173例样本中76例发生EGFR基因突变，突变率为44.5%。其中第18号外显子突变率为6.6%（5/76），均为G719X突变；第19号外显子突变率为46.1%（35/76），均为Del突变；第20号外显子突变率为1.3%（1/76），为EGFR基因20ins突变；第21号外显子突变率为44.7%（34/76），其中33例为EGFR基因L858R突变，1例为EGFR基因L861Q突变；1例为第19号外显子Del合并第20号外显子T790M双重突变。不同性别、吸烟史、病理分型的患者EGFR突变率比较差异均有统计学意义（均 P<0.05），女性患者高于男性患者[59.7%（46/77）比31.3%（30/96）， χ2＝14.08， P<0.001 ]，有吸烟史的患者低于无吸烟史患者[27.1%（13/48）比52.9%（63/119）， χ2＝9.22， P<0.001]，腺癌患者高于非腺癌患者[50.7%（75/148）比4.0%（1/25）， χ2＝18.92， P<0.001 ]。EGFR突变情况与患者年龄无相关性。 结论:湖北十堰地区NSCLC患者中EGFR突变主要集中在第19号外显子Del及第21号外显子L858R，且易发生在腺癌、女性及无吸烟史的患者。

目的:建立实时荧光定量PCR方法检测布鲁氏菌基因组内IS711转座酶基因（orfA基因）的拷贝数，并应用于布鲁氏菌种与生物型的鉴定。方法:构建基于Taqman探针法实时荧光定量PCR技术的orfA基因拷贝数的检测体系。设计bcsp31基因和orfA基因的引物和探针，应用实时荧光定量PCR方法同时检测同一菌株相同DNA浓度下的bcsp31基因和orfA基因含量，获得2个基因的循环数（CT值），再根据bcsp31基因和orfA基因CT值的差异，换算出待检测布鲁氏菌菌株基因组内orfA基因的拷贝数。同时，将布鲁氏菌16M菌株DNA进行2倍递减稀释，验证检测体系的稳定性。结果:当16M菌株DNA浓度相差2倍时，实时荧光定量PCR方法同时检测bcsp31基因和orfA基因，测得的CT值差值均值均为1.00，95%置信区间为0.95~1.05，标准差为0.17，变异系数为0.17。应用该检测体系检测30株布鲁氏菌菌株DNA中orfA基因的拷贝数，发现羊种生物1~3型菌株分别有6、9和7个拷贝数；猪种生物2型菌株有10个拷贝数，与其他4个猪种生物型（1、3~5）菌株拷贝数不同；绵羊附睾种菌株有37个拷贝数；8个牛种生物型（1~7、9）菌株拷贝数稳定在5~6个。结论:成功建立了一种检测布鲁氏菌orfA基因拷贝数的实时荧光定量PCR方法，该方法能够鉴定部分布鲁氏菌种与生物型菌株。

目的:探讨胱天蛋白酶募集域蛋白9(Card 9)基因多态性与AP患病风险的相关性。方法:收集2019年6月至2020年2月间上海市松江区中心医院收治的70例AP患者的临床资料，同时选取70例健康体检者作为对照组。采用TaqMan探针法检测所有受试者Card 9基因rs10870077 C>G、rs4077515 A>G、rs10781499 A>G、rs141992399 C>G、rs139265120 A>G突变。应用实时荧光定量PCR检测血清Card 9 mRNA表达，电化学发光法分别检测血清IL-6、降钙素原水平，散色比浊法检测CRP水平。结果:AP患者Card 9基因rs10870077 C>G突变(CG基因型)占比显著高于对照组(50.0%比31.4%)，差异有统计学意义( P<0.05)。rs4077515AG、rs10781499AG基因型占比与对照组差异无统计学意义。rs141992399 C>G、rs139265120 A>G突变率特别低。rs10870077 CG基因型AP患者血清Card 9 mRNA表达量显著高于对照组(6.20±2.82比3.90±1.96)，差异有统计学意义( P<0.05)，而rs4077515AG、rs10781499AG基因型AP患者血清Card 9 mRNA水平与对照组差异无统计学意义。rs10870077 CG基因型AP患者血清IL-6水平较rs10870077 CC、GG基因型显著升高[(614.7±1531.8)ng/L比(372.5±1127.9)、(385.5±598.7)ng/L]，而CRP水平较GG基因型显著降低[(34.84±50.64)mg/L比(55.30±87.02)mg/L]，降钙素原水平较GG基因型显著升高[(1.98±4.70)μg/L比(0.77±1.12)μg/L]，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。 结论:Card 9基因rs10870077 C>G突变可上调Card 9 mRNA表达，增加血清IL-6水平，该突变可能是AP发生的高风险因素。

目的:开发和评估一种快速、简单和经济的替代测序的Omicron变异株荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)。方法:针对SARS-CoV-2 ORF1ab保守区域、Omicron变异株S基因高频共同突变位点设计引物和TaqMan探针，建立Omicron株RT-qPCR检测方法，用经全基因组测序确定型别的样本进行验证，并对该方法的特异度和敏感度进行评估。结果:本研究建立的RT-qPCR分型法可以将Omicron变异株与包括早期A型流行株、Alpha和Delta变异株在内的SARS-CoV-2毒株进行区分，结果与全基因组测序结果一致，符合率为100.00%(28/28)；与其他6种呼吸道病毒及柯萨奇病毒A组16型无交叉反应；该方法RNA标准品在10 9~10 3拷贝/μl之间呈良好的线性关系，相关系数 R2均大于0.99，检测敏感度为10 3拷贝/μl。 结论:本研究设计的针对Omicron变异株的RT-qPCR敏感度高且特异度好，在任何可以进行PCR检测的实验室中都容易开展，可极大地促进对Omicron变异株的传播监测。

目的:探讨大理地区白、汉族人群蛋白去乙酰化酶（HDAC）基因多态性与2型糖尿病（T2DM）的关系。方法:选取大理白族自治州人民医院2019年5月至2021年3月确诊的白、汉族T2DM患者148例为研究对象（T2DM组），同时选取2019年5月至2020年12月健康体检的白、汉族人群100例为对照组（NC组）。特定基因单的变异采用Taqman MGB探针法对易感基因进行检测。聚合酶链反应（PCR）法用于易感基因位点的扩增，易感基因的全序列采用测序的方法进行。结果:白族组与汉族组rs2530223基因型、rs11741808基因型、rs2547547基因型和rs1741981基因型分布频率差异均无统计学意义（均 P > 0.05）；4个位点基因型血脂水平差异均有统计学意义（ t=-1.06、-0.19、0.39、-2.12、-2.04、0.16、1.47、< 0.01、-0.16、-3.17、-2.93、0.69、-2.58、-2.33，均 P < 0.05）；不同状态下胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）差异均有统计学意义（均 P < 0.05）；白族NC组与T2DM组、汉族NC组与T2DM组比较，各基因型频率及等位基因频率分布差异均无统计学意义（均 P > 0.05）；logistic回归分析显示，该多态性不是T2DM的独立风险因子。 结论:HDAC基因多态性与T2DM、肥胖及血脂紊乱等的关系在白族与汉族人群中存在差异。

目的:探讨微RNA（miR）-146a参与原发性痛风性关节炎发生的可能机制。方法:①培养RAW264.7细胞，给予单钠尿酸盐（MSU）晶体刺激建立痛风炎症模型，经200 μm/ml的MSU晶体刺激后，分别在0、3、6、12 h时间点收集细胞及上清液，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR，TaqMan探针法）检测miR-146a，RT-qPCR检测：白细胞介素-1受体相关激酶（IRAK）1、肿瘤坏死因子受体相关因子（TRAF）6、NF-κB、IL-1β、TNF-α mRNA，ELISA检测培养上清液IL-1β浓度，蛋白质印迹法检测TRAF 6、NF-κB、IL-1β蛋白表达水平。②用Lipofectamine 2000将miR-146a模拟物（mimic）、miR-146a抑制物（inhibitor）及两者相应对照物分别转染至RAW246.7细胞，将其设置为miR-146a mimic组、miR-146a mimic对照组（mimic control）、miR-146a抑制物组、miR-146a抑制物对照组（inhibitor control），分别用200 μg/ml的MSU晶体刺激各组细胞6 h后，分别检测各组miR-146a、IRAK 1、TRAF 6、NF-κB、IL-1β mRNA和TRAF 6、NF-κB、IL-1β蛋白表达水平。采用SPSS 21.0统计软件进行分析，近似正态分布定量资料以 ± s描述，组间比较采用独立样本 t检验和重复测量方差分析。 结果:① MSU晶体刺激RAW264.7细胞后，实验组在3、6、12 h miR-146a的表达水平较对照组降低（ t=-10.234，-17.059，-26.204， P均<0.01），实验组在6、12 h IL-1β蛋白浓度表达水平较对照组升高（ t=7.552，9.007， P<0.01）；分别检测2组IRAK1、TRAF 6、NF-κB、TNF-α、IL-1β mRNA的表达水平：刺激组在3、6 h IRAK 1、TRAF 6、NF-κB、IL-1β mRNA的表达水平较对照组升高（ t=9.847，6.147， P<0.01； t=3.49，3.32， P<0.05； t=3.643，8.471， P<0.05； t=8.726，49.68， P<0.01），实验激组在3个时间点的TNF-α mRNA的表达水平均较对照组升高（ t=4.691，11.115，12.816， P<0.01）。分别检测TRAF 6、NF-κB、IL-1β的蛋白表达水平：实验组6、12 h的TRAF6、NF-κB蛋白相对表达较对照组升高（ t=8.052，8.119， P<0.01； t=22.454，5.845， P<0.01），实验组在3个时间点IL-1β蛋白表达较对照组均升高（ t=18.561，4.74，8.432， P<0.01）。②转染后检测miR-146a mRNA表达，mimics组较mimics control组明显升高（ t=31.769， P<0.01）；inhibitor组较inhibitor control组明显降低（ t=-4.22， P<0.05）。③ miR-146a mimic组经200 μg/ml MSU晶体刺激6 h后，mimic组IRAK1、TRAF6、NF-κB、IL-1β mRNA的表达水平较mimic control组均降低（ t=-14.754，-21.201，-19.381，-17.323， P<0.01），TRAF6、NF-κB、IL-1β蛋白表达水平较mimic control组也降低（ t=-3.137，-32.974，-18.789， P<0.05），inhibitor组结果正好相反。 结论:①过表达miR-146a可降低IRAK 1、TRAF 6、NF-κB、IL-1β表达，抑制MSU晶体介导的炎症，而抑制miR-146a表达可使炎症加重，提示miR-146a参与负反馈调节痛风炎症。② miR-146a可能靶向NF-κB信号通路参与了痛风性关节炎的自发性缓解。

目的:探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因多态性与手足口病脑炎易感性关系。方法:采用病例对照的方式，通过Taqman探针法测定手足口病中145例普通患儿和91例脑炎患儿的VEGF基因启动子区＋405G/C、-460T/C、＋936T/C位点的多态性分布，并进行对比分析。结果:VEGF＋405G/C位点中，脑炎组和普通组的基因型分布均为GG、GC和CC，两组基因型比较无显著差异( χ2＝3.882， P＝0.144)，脑炎组G、C等位基因频率43.96%、56.04%，普通组G、C等位基因频率为53.45%、46.55%，脑炎组C等位基因频率显著高于普通组，差异有统计学意义( χ2＝4.03， P＝0.047)；VEGF-460T/C位点中，脑炎组和普通组的基因型分布均为TT、TC和CC，两组基因型比较无显著差异( χ2＝3.948， P＝0.139)，脑炎组的T、C等位基因频率为78.57%、21.43%，普通组T、C等位基因频率为70.34%、29.66%，脑炎组T等位基因频率显著高于普通组，差异有统计学意义( χ2＝3.851， P＝0.049)；VEGF＋936T/C位点中，脑炎组和普通组的基因型分布均为TT、TC和CC，组间差异无统计学意义( χ2＝1.272，0.530)，两组的T、C等位基因频率比较差异无统计学意义( χ2＝0.395， P＝0.597)。 结论:VEGF＋405C基因、-460T基因可能是手足口病脑炎的易患基因，干预和阻断VEGF可能成为手足口病脑炎的一种治疗新靶点。

目的:了解肺炎支原体肺炎(MPP)患儿口咽部常见细菌及临床意义。方法:回顾性分析。选取中国医科大学附属盛京医院小儿呼吸内科2016年12月至2017年6月住院治疗的134例MPP患儿为研究对象，选取同期同医院42例健康儿童为健康对照组。采用荧光定量聚合酶链反应Taqman探针法检测入组儿童口咽部常见细菌[肺炎链球菌(SP)、卡他莫拉杆菌(CTA)、流感嗜血杆菌(HI)]。首先比较MPP患儿及健康儿童口咽部细菌检出情况，再将134例MPP患儿根据年龄(<1岁、1~<3岁、3~<6岁及6~14岁)、有无细菌检出[肺炎支原体(MP)、MP+细菌]及检出菌种不同(MP+SP、MP+CTA及MP+HI)进行分组比较。采用秩和检验及 χ2检验对相关临床资料进行分析。 结果:134例MPP患儿检出细菌79例(58.96%)，42例健康儿童检出细菌17例(40.48%)，差异有统计学意义( χ2＝4.404， P<0.05)。与MP组相比，MP+细菌组外周血中白细胞(WBC)水平[8.5(6.7，12.0)×10 9/L比7.8(5.8，9.3)×10 9/L， Z＝-2.232]、C反应蛋白(CRP)水平[19.2(7.2，35.0) mg/L比8.4(3.4，24.6) mg/L， Z＝-2.810]、乳酸脱氢酶(LDH)水平[286(244，365) U/L比250(210，302) U/L， Z＝-2.474]及大叶性肺炎比例[40.51%(32/79例)比18.18%(10/55例)， χ2＝7.510]、胸腔积液比例[13.92%(11/79例)比3.64%(2/55例)， χ2＝3.917]、难治性肺炎支原体肺炎(RMPP)比例[34.18%(27/79例)比18.18%(10/55例)， χ2＝4.151]均较高；总热程[10(7，12) d比8(6，10) d， Z＝-2.706]及抗生素使用时间[16(13，19) d比12(9，16) d， Z＝-3.747]均较长，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。MP+SP组外周血中WBC高于MP+HI组[12.20(7.80，17.30)×10 9/L比6.75(5.37，9.44)×10 9/L]，差异有统计学意义( Z＝11.574， P<0.05)；MP+SP组[56.67%(17/30例)]大叶性肺炎发生率高于MP+CTA组[0(0/3例)]和MP+HI组[18.75%(3/16例)]，差异有统计学意义( χ2＝9.770， P<0.05)。 结论:MPP患儿口咽部更易发生细菌定植或感染，当WBC、CRP及LDH均明显升高，影像表现为大片实变影或有胸腔积液时，提示可能混合细菌感染，热程更长，难治性MPP比例增高，且常见的混合细菌为SP。