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Gremlin-2基因rs4454537基因多态性及血清25(OH)D3水平异常对绝经后妇女骨质疏松的影响
编辑人员丨1天前
目的 研究Gremlin-2基因rs4454537基因多态性及血清25-羟维生素D3[25(OH)D3]水平异常对绝经后妇女骨质疏松的影响.方法 选取邢台市人民医院2020年2月至2023年10月收治的绝经后骨质疏松患者160例为研究组,并选取同期健康体检的绝经女性160例为对照组,比较两组妇女骨密度及25(OH)D3水平,并分析两者相关性.采用TaqMan探针法检测患者血液中Gremlin-2基因rs4454537位点基因多态性,比较两组基因分布情况、不同基因型患者血清25(OH)D3水平以及骨密度差异,并分析绝经后妇女骨质疏松的影响因素.结果 研究组的25(OH)D3表达水平以及正位骨密度(BMD)、T值均低于对照组(P<0.05).Pearson 法分析显示 25(OH)D3 表达水平与 BMD 呈正相关性(r=0.638,P<0.05).Gremlin-2 基因 rs4454537位点存在3种基因型:TT、TC和CC,研究组的T等位基因、TT基因型频率低于对照组(x2=19.643,P<0.001,x2=18.321,P<0.001).不同基因型患者骨密度、25(OH)D3水平差异有统计学意义,其中TT型患者的骨密度、25(OH)D3水平明显高于TC、CC基因型患者(均P<0.05).Logistic回归分析结果显示,Gremlin-2基因rs4454537位点基因型、25(OH)D3水平是绝经后骨质疏松的独立影响因素(P<0.01).结论 Gremlin-2基因rs4454537位点基因多态性以及血清25(OH)D3水平与绝经后妇女骨质疏松密切相关,其中TT基因型患者血清25(OH)D3水平处于较高水平,可能降低骨质疏松发生风险.
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编辑人员丨1天前
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基于TaqMan-MGB荧光探针的实时荧光PCR法检测玉树藏族自治州鼠疫耶尔森菌rpsL基因耐药突变
编辑人员丨1天前
鼠疫是由鼠疫耶尔森菌(以下简称鼠疫菌)引起的一种烈性传染病,发病急、传播快且病死率极高。历史上发生过3次鼠疫大流行,导致上亿人口死亡。近20年来全球鼠疫疫情呈上升趋势,2000 - 2018年,世界卫生组织(WHO)共收到来自美洲、非洲和亚洲21个国家报告的2万多起鼠疫病例 [1]。我国动物间鼠疫一直较为活跃,且除个别年份外,几乎每年都有人间鼠疫发生。2019年11月,北京市首先出现2例内蒙古自治区输入性肺鼠疫病例,随后内蒙古自治区又报道2例腺鼠疫病例,提示这一甲类传染病仍对人们的生命安全具有极大的潜在威胁 [2,3,4]。链霉素是WHO鼠疫手册 [5]和我国《鼠疫诊疗方案(试行)》(卫办应急发[2011]第18号) [6]中治疗鼠疫的首选药物。但值得注意的是,2021年Dai等 [7]发现国内1株鼠疫菌因编码核糖体蛋白S12的rpsL基因第128 bp位点的碱基发生了突变,从而产生了对链霉素的高度耐药性。为此,本研究应用基于TaqMan-MGB荧光探针的实时荧光PCR法(简称MGB荧光探针法),选取鼠疫流行较为严重的玉树藏族自治州(以下简称玉树州)鼠疫自然疫源地内分离的鼠疫菌,检测链霉素耐药位点rpsL基因第128 bp位点碱基的突变情况,判断当地菌株的耐药情况,为鼠疫疫情的防控提供参考。
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编辑人员丨1天前
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湖北十堰地区非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体基因突变情况分析
编辑人员丨1天前
目的:探讨湖北十堰地区非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变情况及其与患者临床病理特征的关系。方法:回顾性分析2017年11月至2020年1月就诊于湖北医药学院附属国药东风总医院的173例NSCLC患者资料。通过突变扩增阻滞系统(ARMS)-TaqMan探针法检测NSCLC组织中EGFR基因突变情况,同时收集患者的临床病理资料,分析EGFR基因突变状态与患者临床病理特征之间的关系。结果:173例样本中76例发生EGFR基因突变,突变率为44.5%。其中第18号外显子突变率为6.6%(5/76),均为G719X突变;第19号外显子突变率为46.1%(35/76),均为Del突变;第20号外显子突变率为1.3%(1/76),为EGFR基因20ins突变;第21号外显子突变率为44.7%(34/76),其中33例为EGFR基因L858R突变,1例为EGFR基因L861Q突变;1例为第19号外显子Del合并第20号外显子T790M双重突变。不同性别、吸烟史、病理分型的患者EGFR突变率比较差异均有统计学意义(均 P<0.05),女性患者高于男性患者[59.7%(46/77)比31.3%(30/96), χ2=14.08, P<0.001 ],有吸烟史的患者低于无吸烟史患者[27.1%(13/48)比52.9%(63/119), χ2=9.22, P<0.001],腺癌患者高于非腺癌患者[50.7%(75/148)比4.0%(1/25), χ2=18.92, P<0.001 ]。EGFR突变情况与患者年龄无相关性。 结论:湖北十堰地区NSCLC患者中EGFR突变主要集中在第19号外显子Del及第21号外显子L858R,且易发生在腺癌、女性及无吸烟史的患者。
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编辑人员丨1天前
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检测orfA基因拷贝数鉴定布鲁氏菌种型的实时荧光定量PCR方法研究
编辑人员丨1天前
目的:建立实时荧光定量PCR方法检测布鲁氏菌基因组内IS711转座酶基因(orfA基因)的拷贝数,并应用于布鲁氏菌种与生物型的鉴定。方法:构建基于Taqman探针法实时荧光定量PCR技术的orfA基因拷贝数的检测体系。设计bcsp31基因和orfA基因的引物和探针,应用实时荧光定量PCR方法同时检测同一菌株相同DNA浓度下的bcsp31基因和orfA基因含量,获得2个基因的循环数(CT值),再根据bcsp31基因和orfA基因CT值的差异,换算出待检测布鲁氏菌菌株基因组内orfA基因的拷贝数。同时,将布鲁氏菌16M菌株DNA进行2倍递减稀释,验证检测体系的稳定性。结果:当16M菌株DNA浓度相差2倍时,实时荧光定量PCR方法同时检测bcsp31基因和orfA基因,测得的CT值差值均值均为1.00,95%置信区间为0.95~1.05,标准差为0.17,变异系数为0.17。应用该检测体系检测30株布鲁氏菌菌株DNA中orfA基因的拷贝数,发现羊种生物1~3型菌株分别有6、9和7个拷贝数;猪种生物2型菌株有10个拷贝数,与其他4个猪种生物型(1、3~5)菌株拷贝数不同;绵羊附睾种菌株有37个拷贝数;8个牛种生物型(1~7、9)菌株拷贝数稳定在5~6个。结论:成功建立了一种检测布鲁氏菌orfA基因拷贝数的实时荧光定量PCR方法,该方法能够鉴定部分布鲁氏菌种与生物型菌株。
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编辑人员丨1天前
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胱天蛋白酶募集域蛋白9基因多态性与急性胰腺炎易感性的相关性研究
编辑人员丨1天前
目的:探讨胱天蛋白酶募集域蛋白9(Card 9)基因多态性与AP患病风险的相关性。方法:收集2019年6月至2020年2月间上海市松江区中心医院收治的70例AP患者的临床资料,同时选取70例健康体检者作为对照组。采用TaqMan探针法检测所有受试者Card 9基因rs10870077 C>G、rs4077515 A>G、rs10781499 A>G、rs141992399 C>G、rs139265120 A>G突变。应用实时荧光定量PCR检测血清Card 9 mRNA表达,电化学发光法分别检测血清IL-6、降钙素原水平,散色比浊法检测CRP水平。结果:AP患者Card 9基因rs10870077 C>G突变(CG基因型)占比显著高于对照组(50.0%比31.4%),差异有统计学意义( P<0.05)。rs4077515AG、rs10781499AG基因型占比与对照组差异无统计学意义。rs141992399 C>G、rs139265120 A>G突变率特别低。rs10870077 CG基因型AP患者血清Card 9 mRNA表达量显著高于对照组(6.20±2.82比3.90±1.96),差异有统计学意义( P<0.05),而rs4077515AG、rs10781499AG基因型AP患者血清Card 9 mRNA水平与对照组差异无统计学意义。rs10870077 CG基因型AP患者血清IL-6水平较rs10870077 CC、GG基因型显著升高[(614.7±1531.8)ng/L比(372.5±1127.9)、(385.5±598.7)ng/L],而CRP水平较GG基因型显著降低[(34.84±50.64)mg/L比(55.30±87.02)mg/L],降钙素原水平较GG基因型显著升高[(1.98±4.70)μg/L比(0.77±1.12)μg/L],差异均有统计学意义( P值均<0.05)。 结论:Card 9基因rs10870077 C>G突变可上调Card 9 mRNA表达,增加血清IL-6水平,该突变可能是AP发生的高风险因素。
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编辑人员丨1天前
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SARS-CoV-2 Omicron变异株TaqMan探针法荧光定量RT-PCR的建立及应用
编辑人员丨1天前
目的:开发和评估一种快速、简单和经济的替代测序的Omicron变异株荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)。方法:针对SARS-CoV-2 ORF1ab保守区域、Omicron变异株S基因高频共同突变位点设计引物和TaqMan探针,建立Omicron株RT-qPCR检测方法,用经全基因组测序确定型别的样本进行验证,并对该方法的特异度和敏感度进行评估。结果:本研究建立的RT-qPCR分型法可以将Omicron变异株与包括早期A型流行株、Alpha和Delta变异株在内的SARS-CoV-2毒株进行区分,结果与全基因组测序结果一致,符合率为100.00%(28/28);与其他6种呼吸道病毒及柯萨奇病毒A组16型无交叉反应;该方法RNA标准品在10 9~10 3拷贝/μl之间呈良好的线性关系,相关系数 R2均大于0.99,检测敏感度为10 3拷贝/μl。 结论:本研究设计的针对Omicron变异株的RT-qPCR敏感度高且特异度好,在任何可以进行PCR检测的实验室中都容易开展,可极大地促进对Omicron变异株的传播监测。
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编辑人员丨1天前
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云南省大理地区白、汉族人群蛋白去乙酰化酶基因多态性与2型糖尿病的关系
编辑人员丨1天前
目的:探讨大理地区白、汉族人群蛋白去乙酰化酶(HDAC)基因多态性与2型糖尿病(T2DM)的关系。方法:选取大理白族自治州人民医院2019年5月至2021年3月确诊的白、汉族T2DM患者148例为研究对象(T2DM组),同时选取2019年5月至2020年12月健康体检的白、汉族人群100例为对照组(NC组)。特定基因单的变异采用Taqman MGB探针法对易感基因进行检测。聚合酶链反应(PCR)法用于易感基因位点的扩增,易感基因的全序列采用测序的方法进行。结果:白族组与汉族组rs2530223基因型、rs11741808基因型、rs2547547基因型和rs1741981基因型分布频率差异均无统计学意义(均 P > 0.05);4个位点基因型血脂水平差异均有统计学意义( t=-1.06、-0.19、0.39、-2.12、-2.04、0.16、1.47、< 0.01、-0.16、-3.17、-2.93、0.69、-2.58、-2.33,均 P < 0.05);不同状态下胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)差异均有统计学意义(均 P < 0.05);白族NC组与T2DM组、汉族NC组与T2DM组比较,各基因型频率及等位基因频率分布差异均无统计学意义(均 P > 0.05);logistic回归分析显示,该多态性不是T2DM的独立风险因子。 结论:HDAC基因多态性与T2DM、肥胖及血脂紊乱等的关系在白族与汉族人群中存在差异。
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编辑人员丨1天前
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微RNA-146a通过Toll样受体信号途径在RAW264.7细胞痛风性关节炎模型炎症反应中的研究
编辑人员丨1天前
目的:探讨微RNA(miR)-146a参与原发性痛风性关节炎发生的可能机制。方法:①培养RAW264.7细胞,给予单钠尿酸盐(MSU)晶体刺激建立痛风炎症模型,经200 μm/ml的MSU晶体刺激后,分别在0、3、6、12 h时间点收集细胞及上清液,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR,TaqMan探针法)检测miR-146a,RT-qPCR检测:白细胞介素-1受体相关激酶(IRAK)1、肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)6、NF-κB、IL-1β、TNF-α mRNA,ELISA检测培养上清液IL-1β浓度,蛋白质印迹法检测TRAF 6、NF-κB、IL-1β蛋白表达水平。②用Lipofectamine 2000将miR-146a模拟物(mimic)、miR-146a抑制物(inhibitor)及两者相应对照物分别转染至RAW246.7细胞,将其设置为miR-146a mimic组、miR-146a mimic对照组(mimic control)、miR-146a抑制物组、miR-146a抑制物对照组(inhibitor control),分别用200 μg/ml的MSU晶体刺激各组细胞6 h后,分别检测各组miR-146a、IRAK 1、TRAF 6、NF-κB、IL-1β mRNA和TRAF 6、NF-κB、IL-1β蛋白表达水平。采用SPSS 21.0统计软件进行分析,近似正态分布定量资料以 ± s描述,组间比较采用独立样本 t检验和重复测量方差分析。 结果:① MSU晶体刺激RAW264.7细胞后,实验组在3、6、12 h miR-146a的表达水平较对照组降低( t=-10.234,-17.059,-26.204, P均<0.01),实验组在6、12 h IL-1β蛋白浓度表达水平较对照组升高( t=7.552,9.007, P<0.01);分别检测2组IRAK1、TRAF 6、NF-κB、TNF-α、IL-1β mRNA的表达水平:刺激组在3、6 h IRAK 1、TRAF 6、NF-κB、IL-1β mRNA的表达水平较对照组升高( t=9.847,6.147, P<0.01; t=3.49,3.32, P<0.05; t=3.643,8.471, P<0.05; t=8.726,49.68, P<0.01),实验激组在3个时间点的TNF-α mRNA的表达水平均较对照组升高( t=4.691,11.115,12.816, P<0.01)。分别检测TRAF 6、NF-κB、IL-1β的蛋白表达水平:实验组6、12 h的TRAF6、NF-κB蛋白相对表达较对照组升高( t=8.052,8.119, P<0.01; t=22.454,5.845, P<0.01),实验组在3个时间点IL-1β蛋白表达较对照组均升高( t=18.561,4.74,8.432, P<0.01)。②转染后检测miR-146a mRNA表达,mimics组较mimics control组明显升高( t=31.769, P<0.01);inhibitor组较inhibitor control组明显降低( t=-4.22, P<0.05)。③ miR-146a mimic组经200 μg/ml MSU晶体刺激6 h后,mimic组IRAK1、TRAF6、NF-κB、IL-1β mRNA的表达水平较mimic control组均降低( t=-14.754,-21.201,-19.381,-17.323, P<0.01),TRAF6、NF-κB、IL-1β蛋白表达水平较mimic control组也降低( t=-3.137,-32.974,-18.789, P<0.05),inhibitor组结果正好相反。 结论:①过表达miR-146a可降低IRAK 1、TRAF 6、NF-κB、IL-1β表达,抑制MSU晶体介导的炎症,而抑制miR-146a表达可使炎症加重,提示miR-146a参与负反馈调节痛风炎症。② miR-146a可能靶向NF-κB信号通路参与了痛风性关节炎的自发性缓解。
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编辑人员丨1天前
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VEGF基因多态性与手足口病脑炎易患性关系研究
编辑人员丨1天前
目的:探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因多态性与手足口病脑炎易感性关系。方法:采用病例对照的方式,通过Taqman探针法测定手足口病中145例普通患儿和91例脑炎患儿的VEGF基因启动子区+405G/C、-460T/C、+936T/C位点的多态性分布,并进行对比分析。结果:VEGF+405G/C位点中,脑炎组和普通组的基因型分布均为GG、GC和CC,两组基因型比较无显著差异( χ2=3.882, P=0.144),脑炎组G、C等位基因频率43.96%、56.04%,普通组G、C等位基因频率为53.45%、46.55%,脑炎组C等位基因频率显著高于普通组,差异有统计学意义( χ2=4.03, P=0.047);VEGF-460T/C位点中,脑炎组和普通组的基因型分布均为TT、TC和CC,两组基因型比较无显著差异( χ2=3.948, P=0.139),脑炎组的T、C等位基因频率为78.57%、21.43%,普通组T、C等位基因频率为70.34%、29.66%,脑炎组T等位基因频率显著高于普通组,差异有统计学意义( χ2=3.851, P=0.049);VEGF+936T/C位点中,脑炎组和普通组的基因型分布均为TT、TC和CC,组间差异无统计学意义( χ2=1.272,0.530),两组的T、C等位基因频率比较差异无统计学意义( χ2=0.395, P=0.597)。 结论:VEGF+405C基因、-460T基因可能是手足口病脑炎的易患基因,干预和阻断VEGF可能成为手足口病脑炎的一种治疗新靶点。
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编辑人员丨1天前
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肺炎支原体肺炎患儿口咽部常见细菌及临床意义
编辑人员丨1天前
目的:了解肺炎支原体肺炎(MPP)患儿口咽部常见细菌及临床意义。方法:回顾性分析。选取中国医科大学附属盛京医院小儿呼吸内科2016年12月至2017年6月住院治疗的134例MPP患儿为研究对象,选取同期同医院42例健康儿童为健康对照组。采用荧光定量聚合酶链反应Taqman探针法检测入组儿童口咽部常见细菌[肺炎链球菌(SP)、卡他莫拉杆菌(CTA)、流感嗜血杆菌(HI)]。首先比较MPP患儿及健康儿童口咽部细菌检出情况,再将134例MPP患儿根据年龄(<1岁、1~<3岁、3~<6岁及6~14岁)、有无细菌检出[肺炎支原体(MP)、MP+细菌]及检出菌种不同(MP+SP、MP+CTA及MP+HI)进行分组比较。采用秩和检验及 χ2检验对相关临床资料进行分析。 结果:134例MPP患儿检出细菌79例(58.96%),42例健康儿童检出细菌17例(40.48%),差异有统计学意义( χ2=4.404, P<0.05)。与MP组相比,MP+细菌组外周血中白细胞(WBC)水平[8.5(6.7,12.0)×10 9/L比7.8(5.8,9.3)×10 9/L, Z=-2.232]、C反应蛋白(CRP)水平[19.2(7.2,35.0) mg/L比8.4(3.4,24.6) mg/L, Z=-2.810]、乳酸脱氢酶(LDH)水平[286(244,365) U/L比250(210,302) U/L, Z=-2.474]及大叶性肺炎比例[40.51%(32/79例)比18.18%(10/55例), χ2=7.510]、胸腔积液比例[13.92%(11/79例)比3.64%(2/55例), χ2=3.917]、难治性肺炎支原体肺炎(RMPP)比例[34.18%(27/79例)比18.18%(10/55例), χ2=4.151]均较高;总热程[10(7,12) d比8(6,10) d, Z=-2.706]及抗生素使用时间[16(13,19) d比12(9,16) d, Z=-3.747]均较长,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。MP+SP组外周血中WBC高于MP+HI组[12.20(7.80,17.30)×10 9/L比6.75(5.37,9.44)×10 9/L],差异有统计学意义( Z=11.574, P<0.05);MP+SP组[56.67%(17/30例)]大叶性肺炎发生率高于MP+CTA组[0(0/3例)]和MP+HI组[18.75%(3/16例)],差异有统计学意义( χ2=9.770, P<0.05)。 结论:MPP患儿口咽部更易发生细菌定植或感染,当WBC、CRP及LDH均明显升高,影像表现为大片实变影或有胸腔积液时,提示可能混合细菌感染,热程更长,难治性MPP比例增高,且常见的混合细菌为SP。
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编辑人员丨1天前
