例1，女，3月龄，因“发现血常规异常2 d”就诊，初诊急性B淋巴细胞白血病（B-ALL），KMT2A-USP2融合基因阳性，高危组，应用Interfant-06方案化疗，化疗3个疗程后微小残留病（MRD）及融合基因持续阳性。例2，男，4岁，因“反复下肢痛、发现中性粒细胞减少1个月”就诊，初诊B-ALL，KMT2A-USP2融合基因阳性，中危组，应用中国儿童肿瘤协作组急性淋巴细胞白血病2020方案化疗，化疗第19天、第46天MRD及融合基因阳性，因第46天MRD大于1.00%升为高危组。2例患儿诱导及早期强化治疗后MRD持续阳性，接受28 d贝林妥欧单抗治疗后，MRD与融合基因均转阴。

Objective:Obesity-induced kidney injury contributes to the development of diabetic nephropathy(DN).Here,we identified the functions of ubiquitin-specific peptidase 19(USP19)in HK-2 cells exposed to a combination of high glucose(HG)and free fatty acid(FFA)and determined its association with TGF-beta-activated kinase 1(TAK1).Methods:HK-2 cells were exposed to a combination of HG and FFA.USP19 mRNA expression was detected by quantitative RT-PCR(qRT-PCR),and protein analysis was performed by immunoblotting(IB).Cell growth was assessed by Cell Counting Kit-8(CCK-8)viability and 5-ethynyl-2'-deoxyuridine(EdU)proliferation assays.Cell cycle distribution and apoptosis were detected by flow cytometry.The USP19/TAK1 interaction and ubiquitinated TAK1 levels were assayed by coimmunoprecipitation(Co-IP)assays and IB.Results:In HG+FFA-challenged HK-2 cells,USP19 was highly expressed.USP19 knockdown attenuated HG+FFA-triggered growth inhibition and apoptosis promotion in HK-2 cells.Moreover,USP19 knockdown alleviated HG+FFA-mediated PTEN-induced putative kinase 1(PINK1)/Parkin pathway inactivation and increased mitochondrial reactive oxygen species(ROS)generation in HK-2 cells.Mechanistically,USP19 stabilized the TAK1 protein through deubiquitination.Importantly,increased TAK1 expression reversed the USP19 knockdown-mediated phenotypic changes and PINKl/Parkin pathway activation in HG+FFA-challenged HK-2 cells.Conclusion:The findings revealed that USP19 plays a crucial role in promoting HK-2 cell dysfunction induced by combined stimulation with HG and FFAs by stabilizing TAK1,providing a potential therapeutic strategy for combating DN.

目的 探索 USP19 调控结肠癌细胞侵袭转移的作用和机制.方法 通过组织标本免疫组化染色和生物信息学方法分析验证 USP19 在结肠癌组织中的作用,通过Transwell小室检测 USP19 对结肠癌细胞侵袭、迁移能力的影响,通过基因敲低及过表达实验验证 USP19 相关调控的分子机制.结果 25 对结肠癌临床标本的免疫组化染色和蛋白印迹实验结果均显示 USP19 在结肠癌组织中显著高表达,通过 TCGA数据库预后分析发现 USP19 高表达组的结肠癌患者 10 年总生存率显著低于 USP19 低表达组,提示 USP19 高表达与结肠癌不良预后密切相关.通过细胞实验发现USP19 可促进结肠癌细胞侵袭转移,对其分子机制探索发现 USP19 可通过调控肿瘤细胞上皮-间充质转化(EMT)来增强结肠癌细胞侵袭能力和迁移能力.结论 USP19 在结肠癌侵袭转移相关调控中起关键作用,为结肠癌转移的具体调控机制提供了新的线索和思路.

去泛素化酶(DUBs)通过逆转泛素激活酶(E1)-泛素结合酶(E2)-泛素连接酶(E3)介导的泛素化过程,参与包括DNA复制、DNA损伤修复、炎症、贫血、凋亡、内吞等机体的生理病理过程.USP52,USP25,USP19属DUBs中的泛素特异性水解酶家族(USPs),与不同的伴侣分子相关联,USP52可去泛素化伴侣分子ASF1A,促进组蛋白H3-H4二聚体入核和DNA复制、修复顺利进行,两者高表达可使肿瘤的增殖能力和DNA损伤耐受性增强.USP52(别名PAN2)又可与PAN3形成复合物参与mRNA的代谢.牛痘相关激酶(VRK2)调节USP25的活性,影响后者对伴侣分子TRiC的稳定性,进而影响蛋白错误折叠.USP19(b亚型)和Hsp90,CHIP(E3连接酶)形成复合物调节错误折叠蛋白的命运.本文系统综述了去泛素化酶(DUBs)家族相关成员及其通过与伴侣分子相互作用在肿瘤等疾病的发生发展中所起的作用及其相关研究进展.

目的:探讨USP39在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义.方法:收集2011～2014年郑州大学第一附属医院病理科的118例上皮性卵巢癌组织(54例卵巢浆液性囊腺癌、28例卵巢黏液性囊腺癌、19例卵巢内膜细胞癌、17例卵巢透明细胞癌)及40例卵巢良性肿瘤组织(20例卵巢浆液性囊性瘤、20例卵巢黏液性囊腺瘤)、24例正常卵巢组织的石蜡包埋组织.免疫组化法检测USP39表达,分析其表达与上皮性卵巢癌临床病理特征的相关性.结果:卵巢癌组织中USP39高表达率为72.03％(85/118),与卵巢良性肿瘤(19/40)及正常卵巢组织(5/24)相比,差异有统计学意义(P<0.05).浆液性癌的USP39高表达率是85.19％(46/54),高于其他类型的癌,差异有统计学意义(P=0.032).浆液性囊腺瘤(12/20)与黏液性囊腺瘤(7/20)相比,USP39高表达率无统计学差异(P=0.113).上皮性卵巢癌中,USP39表达与患者年龄、肿瘤大小及肿瘤分化程度无关(P>0.05),而与病理类型、FIGO分期及淋巴结转移显著相关(P<0.05).USP39高表达、FI-GO分期及淋巴结转移是影响上皮性卵巢癌预后的独立危险因素(P<0.05).结论:USP39表达升高与上皮性卵巢癌的发生发展有关,可能成为治疗上皮性卵巢癌的新靶点和评估预后的有力指标.

目的 明确2例畸形流产患儿染色体拷贝数变异,分析引起2p15-p16.1缺失综合征畸形表型的相关基因以及关键区域.方法 应用染色体微阵列分析(chromosomal microarray analysis,CMA)技术对畸形流产儿全基因组拷贝数目进行检测,并用计算机软件及生物信息学方法进行分析.结果 CMA检测到2例患儿的染色体2p15-16.1区段有约255 kb的DNA拷贝数变异,2例患儿表型符合2p15-p16.1微缺失综合征遗传特征,缺失区域包含XPO1和USP34基因.结论 2p15近端73 kb的片段(chr2:61 659 957～61 733 075,hg19)可能是引起2p15-p16.1微缺失综合征畸形表型的关键区域之一,XPO1和USP34为该缺失综合征的候选基因.

随着人民生活水平的改善、病毒性肝炎预防及诊治水平的提高,感染性肝病的发病率逐年下降.近年来生物科技的迅速发展,越来越多的肝病分子生物基础得以明确,遗传性肝病已成为肝病常见的病因之一[1].1989年囊性纤维化致病基因( CFTR)的发现开启了肝病分子机制研究的新篇章.上世纪90 年代相继发现了高胆红素血症( UGT1 A1及ABCC2 )、肝豆状核变性( ATP7 B )、血色病( HFE )、Alagille 综合征( JAG1 )及进行性家族性肝内胆汁淤积症( ATP8 B1、ABCB11及ABCB4)等致病基因[2].基因诊断技术在过去的30年见证了肝病分子机制的巨大突破.近年来国内基因诊断技术快速普及,越来越多的重症或疑难肝病患者不但得以确诊,也受益于针对病因的有效治疗措施.本课题组先后在国内首次报道多种进行性家族性肝内胆汁淤积症( PFIC) [3-5]、Alagille综合征[6]及胆汁酸合成缺陷[7-8].2017 年及2020 年先后首次在国际上报道MYO5 B、USP53 及ZFYVE19 等新基因引起的遗传性肝病[9-11].此外,本课题组在国内首次报道了其他罕见遗传性肝病的新突变或新表型[12-19].本文将阐述肝病基因诊断的意义、肝病基因诊断思路及将来面临的挑战.

目的 研究结肠癌中USP22表达水平与基质金属蛋白酶(MMP)及预后的相关性.方法 选择2017年1月至2018年12月期间在汕头大学医学院第一附属医院接受手术切除治疗的120例结肠癌患者,收集结肠癌组织及癌旁组织.采用免疫组织化学检测USP22的高表达率,采用荧光定量PCR检测USP22、基质金属蛋白酶组织抑制物-2(TIMP-2)、MMP2、MMP7、MMP9的mRNA相对表达量,随访结肠癌患者的无进展生存及总生存情况.结果 结肠癌组织中USP22的高表达率及mRNA相对表达量分别为70.00％、1.91±0.34,均高于癌旁组织(33.33％、1.00±0.21),差异均有统计学意义(P<0.05).TNMⅢ期、术前CEA及CA19-9升高的结肠癌组织中USP22的高表达率及mRNA相对表达量均高于Ⅱ期、术前CEA及CA19-9正常的结肠癌组织,差异均有统计学意义(P<0.05).USP22高表达的结肠癌组织中MMP2、MMP7、MMP9的mRNA相对表达量均高于USP22低表达的结肠癌组织,TIMP2的mRNA相对表达量低于USP22低表达的结肠癌组织,差异均有统计学意义(P<0.05).USP22高表达结肠癌患者累积无进展生存率和累积总生存率均低于USP22低表达的结肠癌患者,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 结肠癌中USP22表达增加与病理进展、MMP表达增加及预后不良有关.

目的:基于网络药理学方法研究银杏二萜内酯葡胺注射液治疗缺血性脑卒中的作用机制.方法:从PubChem下载银杏二萜内酯葡胺注射液的有效成分银杏内酯A、B、K的3D结构,在PharmMapper上传,获取预测的靶点,按可能性打分.将银杏内酯A、B、K的相关靶点对应的基因名称输入STRING数据库,得到蛋白互作(PPI)网络.将基因和化合物信息输入Cytoscape 3.7.1,绘制化合物-靶点药物调控网络.最后使用R语言软件计算,得到基因本体论(gene ontology,GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析.以P＜0.05为差异有统计学意义.结果:3个化合物预测靶点共 217 个,核心靶标主要有 FGF1、UNC45A、USP19、HDAC6、CDKN1B、KPNB1、HSP90AB1、DDX58、PAX6、SNX9、CUL5、CACYBP、RNF8、TRAF4、SIRT3、HDAC7、EZR、MARK1等,可能通过代谢途径、黏附连接、紧密连接、内质网中的蛋白质加工、病毒感染及Rap1、MAPK、PI3K-Akt、Wnt、IL-17、AGE-RAGE等信号通路,影响热休克蛋白结合、泛素(样)蛋白连接酶结合、组蛋白脱乙酰酶活性、组蛋白乙酰转移酶结合、S100蛋白结合、tau蛋白结合等功能,从而参与缺血性脑卒中的一系列生理病理过程.结论:通过网络药理学可以预测银杏二萜内酯葡胺注射液的核心基因靶点、功能及相关信号通路,体现出其多成分、多靶点、多途径的生物学效应.

目的 探讨环状核糖核酸泛素特异性肽酶36(circ USP36)靶向微小核糖核酸-326(miR-326)对高糖诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞损伤的影响.方法 RPE细胞ARPE-19根据高糖、circ USP36干扰表达载体(si-circ USP36)、miR-326抑制剂(anti-miR-326)、阴性对照(NC)等处理方法的不同,分为8个组:对照组(CG)、高糖组(HG)、si-circ USP36组 、si-NC组 、miR-326组 、miR-NC组 、si-circ USP36+anti-miR-326组 、si-circ USP36+anti-miR-NC组,培养细胞24 h.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测circ USP36和miR-326的表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平;双荧光素酶报告实验检测circ USP36和miR-326的靶向关系.结果(1)下调circ USP36对高糖作用的ARPE-19细胞凋亡、氧化应激的影响:与CG组比较,HG组circ USP36、凋亡率和MDA水平升高(tcirc USP36=53.199,t凋亡率=21.092,tMDA=22.867,均P=0.000),miR-326和SOD水平降低(tmiR-326=65.818,tSOD=15.362,均P=0.000);与HG组和si-NC组比较,si-circ USP36组circ USP36(tHG=14.241,tsi-NC=13.967,均P=0.000)、凋亡率(tHG=29.919,tsi-NC=22.849,均P=0.000)和MDA(tHG=14.174,tsi-NC=14.878,均P=0.000)水平降低,而miR-326(tHG=14.241,tsi-NC=13.967,均P=0.000)和SOD(tHG=12.571,tsi-NC=12.133,均P=0.000)水平升高,差异均有统计学意义.(2)circ USP36和miR-326靶向关系验证:过表达miR-326降低circ USP36的野生型荧光素酶载体(WT-circ USP36)的荧光素酶活性(t=11.232,P=0.000),差异有统计学意义,而对突变型荧光素酶载体(MUT-circ USP36)荧光素酶活性的影响无统计学意义(P>0.05).(3)miR-326对高糖作用的ARPE-19凋亡和氧化应激的影响:与miR-NC组相比,miR-326组的miR-326和SOD水平升高(tmiR-326=41.254,P=0.000;tSOD=8.413,P=0.001),细胞凋亡率和MDA水平降低(t凋亡率=17.547,tMDA=15.209,均P=0.000),差异均有统计学意义.(4)抑制miR-326对下调circ USP36处理的高糖作用的ARPE-19凋亡、氧化应激的影响:与si-circ USP36+anti-miR-NC组相比,si-circ USP36+anti-miR-326组的miR-326和SOD水平降低(t miR-326=33.486,tSOD=9.145,均P=0.000),而细胞凋亡率和MDA水平升高(t凋亡率=9.096,P=0.001;tMDA=12.360,P=0.000),差异均有统计学意义.结论 下调circ USP36可通过靶向调控miR-326减缓高糖诱导的RPE细胞凋亡和氧化损伤.