目的:观察Wnt诱导分泌蛋白-2(WISP-2)对胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响并探讨其分子机制。方法:选取2015年6月到2018年6月收集的112例胃癌组织和对应的癌旁组织作为研究对象。采用免疫组织化学观察胃癌组织和癌旁组织中WISP-2蛋白的表达。采用携带WISP-2基因和空载体的慢病毒感染胃癌细胞株MKN-28，建立WISP-2过表达细胞株(WISP-2组)和对照细胞株(对照组)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析两组细胞的增殖能力；采用异种肿瘤移植模型分析两组细胞在体内的生长；采用流式细胞术分析两组细胞的凋亡水平；采用Transwell分析两组细胞的迁移能力。采用蛋白质印迹法(Western blot)分析两组细胞WISP-2蛋白、凋亡相关蛋白与迁移相关蛋白的表达。采用 t检验和方差分析。 结果:胃癌组织中WISP-2蛋白的表达水平(89.43±7.51)较癌旁组织中WISP-2蛋白表达水平(193.42±12.09)显著下调，差异有统计学意义( t＝6.019， P<0.05)。WISP-2组细胞增殖(1.21±0.14)明显低于对照组(1.79±0.21)，差异有统计学意义( t＝2.916， P<0.05)。WISP-2组细胞在裸鼠中的肿瘤体积[(1 029.32±101.58) mm 3]明显小于对照组[(1 930.60±198.44) mm 3]，差异有统计学意义( t＝3.001， P<0.05)。WISP-2组细胞凋亡水平(21.45±4.91)较对照组(3.41±0.56)显著增加，差异有统计学意义( t＝2.819， P<0.05)。WISP-2组细胞迁移数量[(231.23±19.32)个]明显低于对照组细胞迁移数量[(98.21±10.32)个]，差异有统计学意义( t＝4.013， P<0.05)。WISP-2组细胞半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)蛋白表达水平(1.94±0.34、1.53±0.19)较对照组Caspase-3和bax表达水平(0.98±0.24、0.55±0.10)显著增加，差异有统计学意义( t＝2.193、3.018， P<0.05)。WISP-2组细胞黏着斑激酶(FAK)蛋白表达水平(0.58±0.10)较对照组细胞FAK蛋白表达水平(1.27±0.17)显著下降，差异有统计学意义( t＝2.990， P<0.05)。 结论:WISP-2蛋白在胃癌组织中低表达，参与胃癌细胞增殖、凋亡和迁移。

目的:探讨不同浓度人重组WNT1诱导信号通路蛋白2(WISP2)对人肝癌细胞(HepG2)脂质代谢的影响及相关作用机制。方法:分别用不同浓度(0、0.4、1和2 μg/L)人重组WISP2作用于HepG2细胞48 h，Cell-Titer发光法测定细胞活力，酶法检测各组HepG2细胞内三酰甘油(TG)及总胆固醇(TC)含量，同时应用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及免疫印迹法(western blot)检测HepG2细胞内脂质合成、分解、转运相关基因mRNA和蛋白表达水平。结果:与对照组比较，各浓度人重组WISP2处理组均未降低HepG2细胞的活性；人重组WISP2处理上调HepG2细胞TG、TC含量，0.4、1、2 μg/L人重组WISP2处理组TG的含量分别为未处理组的1.254±0.039、1.216±0.028、1.174±0.014倍( F＝6.791， P＝0.006)，TC含量分别为未处理组的1.264±0.057、1.394±0.101、1.392±0.077倍( F＝7.045， P＝0.005)。进一步研究发现，与对照组比较，加入人重组WISP2明显增加HepG2细胞脂质合成蛋白甾醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)及二酰基甘油酰基转移酶(DGAT2)mRNA表达(均 P<0.05)，显著上调SREBP1、ACC及脂肪酸合成酶(FAS)蛋白水平的表达(均 P<0.05)；但对低密度脂蛋白受体(LDLR)、载脂蛋白B(ApoB)、载脂蛋白E(ApoE)这类脂质转运蛋白及关键的脂质分解蛋白——脂肪三酰甘油脂肪酶(ATGL)的表达无明显影响。 结论:rh-WISP2能显著增加肝细胞脂质含量，促进脂质合成增加可能是其作用的关键机制。

目的 探讨小分子干扰RNA(siRNA)沉默Wnt诱导分泌蛋白3(WISP3)基因对子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响.方法 培养子宫内膜癌HEC-1A细胞,将其随机分为siRNA-WISP3组、siRNA-对照序列组和空白对照组,应用实时荧光定量PCR技术检测3组细胞中WISP3基因表达,MTT法检测3组细胞转染后增殖能力,流式细胞术检测3组细胞凋亡情况,Transwell法检测3组细胞迁移和侵袭的能力.结果 siRNA-WISP3组细胞中WISP3 mRNA相对表达量显著低于siRNA-对照序列组和空白对照组,差异有显著性(F=95.134,P＜0.01).与siRNA-对照序列组和空白对照组相比,siRNA-WISP3组细胞24、48、72和96 h时细胞增殖能力显著降低,差异有统计学意义(F=23.684～93.472,P＜0.05).siRNA-WISP3组细胞凋亡率显著高于siRNA-对照序列组和空白对照组,差异有统计学意义(F=130.685,P＜0.01).与siRNA-对照序列组和空白对照组相比,siRNA-WISP3组迁移细胞数和侵袭细胞数均降低,差异均有统计学意义(F=13.914、16.632,P＜0.05).结论 特异性下调子宫内膜癌HEC-1A细胞中WISP3基因表达可抑制细胞增殖、迁移和侵袭能力,加速细胞凋亡,有望成为子宫内膜癌基因治疗的潜在靶位.

目的 观察进行性假性类风湿样骨发育不良 ( progressive pseudorheumatoid dysplasia, PPD) 患者的临床特征及影像学表现, 并筛查致病基因WISP3的突变类型.方法 抽取所有受试对象的静脉血5 mL,抗凝保存于-80 ℃冰箱, 利用常规方法抽提基因组DNA.使用Sanger测序技术对4个家系的先证者致病基因WISP3进行检测, 再对其父母亲进行突变位点检测.结果 4个家系先证者中均发现WISP3基因纯合突变或复合杂合突变, 其中家系1中的突变位点p. Cys209MetfsX21、家系2突变位点p. Tyr116X、家系3突变位点p. Cys114Trp和家系4的突变位点p. Cys223Gly均为首次报道的新发现位点.结论 PPD是一种少见的常染色体隐性遗传性疾病, 临床特点及典型的影像学表现有助于诊断.首次发现了WISP3基因4个新突变位点, 开展WISP3基因检测有助于PPD确诊.

目的 应用人脐带来源的间充质干细胞(MSCs)通过尾静脉输注到放射性肺损伤小鼠体内,观察MSCs对肺组织中Wnt基因/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路的影响.方法 将C57小鼠分为正常组、照射组和治疗组.照射组和治疗组小鼠均经直线加速器进行X射线(13 Gy,3.68 Gy/min)一次性全肺照射,之后治疗组通过尾静脉注射MSCs(5×105/只),正常组和照射组给予尾静脉注射生理盐水.在放射线照射后7 d、30 d、60 d分别获取各组小鼠的肺组织标本,提取蛋白及mRNA,并进行HE染色病理组织学检测,蛋白印迹法检测肺组织内Wnt/β-catenion信号通路中的β-catenin、磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK-3β)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)和进展期T细胞淋巴瘤常见重排蛋白1(FRAT1)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测Wnt诱导的分泌型蛋白1(WISP-1)的mRNA表达.结果 与照射组相比,输注MSCs的治疗组小鼠放射性肺损伤程度明显减轻;照射组β-catenin、p-GSK-3β/GSK-3β、FRAT1蛋白和WISP-1的mRNA表达在各个时间点均明显高于正常组,差异有统计学意义(P<0.01);治疗组β-catenin蛋白表达在各个时间点较照射组下降,其中30 d和60 d下降明显,差异有统计学意义(P<0.01),p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达在7 d、30 d和60 d较照射组均明显下降,差异有统计学意义(P<0.01),FRAT1蛋白表达在各个时间点均较照射组下降,其中7 d和30 d下降明显,差异有统计学意义(P<0.01),WISP-1的mRNA表达在7 d、30 d和60 d均较照射组明显下降,差异有统计学意义(P<0.01).结论 MSCs可抑制放射线照射后小鼠肺组织内Wnt/β-catenin信号通路的活化.

目的 探讨进行性假性类风湿性发育不良症(PPRD)的早期诊断.方法 回顾5例确诊PPRD患儿的临床资料以及基因检测结果.结果 5例患儿中男1例、女4例,发病年龄3~5岁,确诊时年龄8~12岁.均存在手指指间关节增大,1例走路时步态异常,4例存在跛行,病程中均有关节疼痛和活动受限.5例患儿炎症指标均正常.X线检查示5例患儿均出现手指关节干骺端膨大,骨密度降低;脊柱椎体前端变尖变扁,部分椎间隙变窄,1例椎体呈子弹头样改变.5例患儿均存在WISP3基因突变,1例为c.397_404del CAAGTGTT(纯合);2例为NM_19829.1:c.700T>C,p.Trp234Arg(母亲杂合),NM_19829.1:c.1054T>C,p.Ser352Pro(父亲杂合)复合杂合突变;另2例为c.589+2T>C(母亲杂合),c.667T>G,p.Cys223Gly(父亲杂合)复合杂合突变.除c.667T>G和c.589+2T>C外,余3个为未报道的新突变位点.结论 PPRD的临床特点为多关节的非炎症性膨大和运动障碍;放射学特征性改变为关节骨骺端增大、发育异常和椎体变尖变扁;在临床特点和放射学典型改变基础上,结合WISP3基因检测可以明确诊断.该研究发现了3种新的WISP3基因突变位点.

进行性假性类风湿发育不良(progressive pseudorheumatoid dysplasia,PPD)是一种罕见疾病,本文将北京大学第三医院收治的1例长期误诊为强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)的PPD患者报道如下.1 病例资料 患者男,56岁,职业教师,常住山东沿海地区,主因“髋关节痛40余年、多关节痛伴活动受限28年”入院治疗.

目的 探讨Wnt诱导分泌型蛋白-1(WISP-1)、WISP-2及WISP-3在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床意义.方法 选取2016年1月至2018年1月期间于本院就诊且符合条件的116例NSCLC患者,取其癌组织标本为观察组,取其癌旁正常肺组织为对照组,采用PT-PCR法检测两组WISP-1、WISP-2及WISP-3 mRNA表达情况,采用免疫组化法检测两组WISP-1、WISP-2及WISP-3蛋白阳性表达,并分析其与临床病理参数的相关性.结果 观察组WISP-1、WISP-3 mRNA相对表达量分别为(-2.81±0.64)、(-3.54±1.41),显著高于对照组的(-6.45±2.45)、(-6.15±2.72);WISP-2 mRNA相对表达量为(2.51±1.08),显著低于对照组的(4.95±2.36),差异均有统计学意义(P＜0.05).观察组WISP-1、WISP-3阳性表达(69.83％,67.24％)显著高于对照组(31.90％,18.10％),WISP-2阳性表达(46.55％)显著低于对照组(84.48％),差异均有统计学意义(P＜0.05).NSCLC组织中WISP-1阳性表达与病理类型、年龄、是否淋巴结转移相关;WISP-2阳性表达与病理类型、吸烟、TNM分期、组织学分化程度、是否淋巴结转移相关;WISP-3阳性表达与组织学分化程度、TNM分期、年龄相关.结论 WISP-1、WISP-2、WISP-3与NSCLC发生发展密切相关,其中WISP-1、WISP-3可能是致癌基因,其蛋白产物可作为临床干预治疗的重要靶蛋白;WISP-2可能是抑癌基因,可考虑作为临床诊断及预后预测的参考指标.

目的:探索急性重离子辐射后早期差异表达的基因,以期查找出可提示重离子辐射的潜在基因标志物.方法:采用8～10周龄C57BL6雌性小鼠,随机分为照射组(12.5 Gy)和空白对照组(0Gy),分组进行重离子全肺野照射或假照,于照射后2、24h提取肺组织,借助基因芯片进行全基因组转录水平分析;予以实验动物梯度剂量照射,观察重离子敏感基因在照后第7天的量效关系.结果:小鼠肺组织经重离子照射后2h,Trp53inp1、Phlda3、Ddit41、Gtse1、Sesn2、Bbc3、Mdm2、Ptp4a1、Pmaip1与Osgin1等基因mRNA表达水平出现与辐射相关的显著增加;而同一时间点,Wisp2、IL33、Dido1、Efcab4a、Myo1f等5个基因显著下调.在照射后24 h,Phlda3、Ddit41、Trp53inp1、Gtse1、Sesn2、Exoc4、Ephx1、Thyn1、Ei24等9个基因表达水平也出现了显著上升;而Gpihbp1、S1a、Hist1h3ah、Stc1、Cd2等5个基因则出现显著下调.急性期重离子辐射敏感基因在7d梯度剂量照射实验被证实呈显著剂量依赖性上升趋势.结论:研究发现Trp53inp1、Phlda3、Sesn2、Gtse1与Ddit41等5个可作为检测肺组织受到高线性能量传递射线辐射后发生应激反应的潜在基因标志物,这些应激反应辐射敏感基因仍有待在基因表达水平和蛋白水平的进一步验证.

目的 探讨一氧化氮合酶(NOS)不同亚型在食管上皮的表达及其与胃食管反流病(GERD)病情严重程度的相关性.方法 收集2015年1月～2017年1月在本院接受住院治疗的GERD患者80例作为观察组,同期在本院进行健康体检(包括胃镜)的正常人50例作为对照组.对比两组研究对象食管上皮组织中nNOS、iNOS的表达量,血清胃肠道功能指标、氧化应激指标的含量,食管上皮中增殖基因的表达量,进一步采用Pearson检验评估GERD病变食管上皮中nNOS、iNOS表达量与病情严重程度的相关关系.结果 观察组患者病变食管上皮中nNOS、iNOS mRNA的表达量均明显高于正常对照组(P<0.05);观察组患者血清中胃肠道功能指标胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)、胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)、胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)的含量均明显低于正常对照组,血清中氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)的含量低于正常对照组,脂质过氧化物酶(LPO)、丙二醛(MDA)的含量高于正常对照组(P<0.05);观察组患者病变食管上皮中增殖基因Ki-67、WISP2 mRNA的表达量高于正常对照组,Caspase-3 m RNA的表达量低于正常对照组(P<0.05).经Pearson检验发现,GERD患者病变食管上皮中nNOS、iNOS表达量与其病情严重程度直接相关.结论 GERD患者病变食管上皮中存在nNOS、iNOS异常高表达,且其具体表达程度与病情严重程度直接相关,是导致疾病发生发展的重要原因之一.