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乳腺癌细胞N-乙酰转移酶10高表达诱导铂类药物耐药的作用机制
编辑人员丨6天前
目的:探讨在乳腺癌细胞中高表达的N-乙酰转移酶10(NAT10)引起对铂类抗肿瘤药的耐药效应,并揭示其潜在机制。方法:实验分为野生型组(MCF-7野生型细胞未经任何处理)、NAT10过表达组(h-NAT10质粒转染至MCF-7细胞)和NAT10敲低组(sh-NAT10质粒转染至MCF-7细胞)。采用Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力,采用免疫共沉淀实验检测NAT10与多聚ADP核糖转移酶1(PARP1)的相互作用,并检测过表达或敲低NAT10的表达对PARP1乙酰化水平和半衰期的影响,通过免疫组化染色和免疫沉淀实验检测乙酰化的PARP1招募相关DNA损伤修复相关蛋白的情况,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:Transwell实验显示,NAT10过表达组细胞侵袭数为(483.00±46.90)个,NAT10敲低组细胞侵袭数为(469.00±40.50)个,与MCF-7野生型细胞[(445.00±35.50)个]比较,差异均无统计学意义(均 P>0.05)。在10 μmol/L奥沙利铂作用下,NAT10过表达组细胞侵袭数为(502.00±45.60)个,NAT10敲低组细胞侵袭数为(105.00±20.50)个,与野生型细胞[(219.00±31.50)个]比较,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。在10 μmol/L奥沙利铂作用下,与野生型细胞比较,NAT10过表达可以增强PARP1与NAT10的结合,而使用NAT10抑制剂Remodelin则抑制了二者的相互结合。高表达NAT10诱导PARP1乙酰化后,PARP1与X射线修复交叉互补蛋白1(XRCC1)的结合增加,敲低NAT10的表达后,降低了PARP1和XRCC1的结合。高表达NAT10增强了PARP1与DNA连接酶3(LIG3)的结合,而敲低NAT10的表达则会降低PARP1与LIG3的结合。在10 μmol/L奥沙利铂处理后的细胞中,NAT10过表达细胞中γH2AX表达水平为0.38±0.02, NAT10敲低细胞中γH2AX表达水平为1.36±0.15,与野生型细胞(1.00±0.00)比较,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。在10 μmol/L奥沙利铂处理后的细胞中,NAT10过表达组细胞凋亡率为(6.54±0.68)%,NAT10敲低组细胞凋亡率为(12.98±2.54)%,与野生型细胞[(9.67±0.37)%]比较,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:NAT10高表达增强了NAT10与PARP1的结合,并促进PARP1的乙酰化,进而延长了PARP1的半衰期,从而增强PARP1招募DNA损伤修复相关蛋白到损伤位点,促进DNA损伤修复,最终使乳腺癌细胞存活。
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编辑人员丨6天前
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124例年龄≤60岁上尿路尿路上皮癌患者的胚系基因检测结果分析与解读
编辑人员丨6天前
目的:分析年龄≤60岁上尿路尿路上皮癌(UTUC)患者的胚系致病性突变,探讨胚系致病性突变携带者的临床病理特征。方法:回顾性分析复旦大学附属肿瘤医院2008年9月至2023年2月接受胚系基因检测的124例年龄≤60岁UTUC患者的临床资料。男86例,女38例;年龄55.0(49.8,58.0)岁;原发肿瘤位于肾盂81例(65.3%),位于输尿管34例(27.4%),二者兼有9例(7.3%)。低级别UTUC 13例(10.5%),原位癌8例(6.5%)。12例(9.7%)有膀胱癌病史,12例(9.7%)有其他恶性肿瘤病史。取患者外周血标本,行全基因组外显子测序或靶向测序寻找UTUC相关的胚系突变。按照美国医学遗传学与基因组学/美国分子病理学协会(ACMG/AMP) 2015版指南,对胚系基因检测数据进行解读,分析胚系致病性突变率,并探究胚系致病性突变携带者的临床病理特征。进一步与东亚健康人群的胚系致病性突变率比较,分析与UTUC致病风险相关的胚系突变。结果:本研究124例中,28例(22.6%)共检测到31个胚系致病性突变。有胚系致病性突变患者与无胚系致病性突变患者的年龄[54.0(47.0,58.0)岁与56.0(50.8,58.0)岁]、性别(男/女:21/7岁与65/31岁)、有膀胱癌病史(0与12/96)、T分期(T 3~4期:12/28与41/96)、组织学高级别比例(26/28与85/96)的差异均无统计学意义( P>0.05)。31个胚系致病性突变位于22个基因上,分别为BRCA2(4例,12.9%)、MSH2(3例,9.7%)、RAD54L(2例,6.5%)、BRCA1(2例,6.5%)、BRIP1(2例,6.5%)、NOTCH3(2例,6.5%)、XRCC2(1例,3.2%)、VEGFA(1例,3.2%)、TBX3(1例,3.2%)、RET(1例,3.2%)、PRKN(1例,3.2%)、PALB2(1例,3.2%)、NTRK1(1例,3.2%)、NCOA3(1例,3.2%)、MSH6(1例,3.2%)、LRP1B(1例,3.2%)、KMT2D(1例,3.2%)、KMT2A(1例,3.2%)、FANCA(1例,3.2%)、BARD1(1例,3.2%)、ARID1A(1例,3.2%)和AR(1例,3.2%)基因。对124例患者的胚系致病性突变率与东亚健康人群的胚系致病性突变率进行比较,结果显示BRCA2 ( OR=11.9, 95% CI 3.8 ~37.7, P<0.001)、MSH2( OR=11.9, 95% CI 3.2~44.5, P<0.001)、RAD54L( OR=14.2, 95% CI 2.7~73.8, P=0.002)和BRCA1 ( OR=11.8, 95% CI 2.4~59.1, P=0.003)基因的胚系致病性突变可显著增加UTUC的发病风险。 结论:本研究年龄≤60岁UTUC患者的胚系致病性突变率为22.6%,携带BRCA2、MSH2、RAD54L或BRCA1基因的胚系致病性突变可显著增加UTUC的发病风险。
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编辑人员丨6天前
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XRCC1基因多态性对接受奥沙利铂为基础辅助化疗的Ⅲ期结直肠癌患者预后及安全性的影响
编辑人员丨6天前
目的:探讨X射线修复交叉互补1(XRCC1)基因多态性对接受奥沙利铂为基础辅助化疗的Ⅲ期结直肠癌患者预后及安全性的影响。方法:回顾性分析2012年3月至2019年12月郑州大学第一附属医院胃肠外科218例R0切除术后接受奥沙利铂为基础辅助化疗的Ⅲ期结直肠癌患者的临床资料。其中男125例,女93例,年龄18~78岁。留取患者的外周血及外周血单核细胞(PBMC)分别用来进行XRCC1多态性基因分型及XRCC1基因的mRNA表达分析。通过Kaplan-Meier生存分析方法分析基因型和预后的相关性,通过χ2检验分析方法探讨基因型和不良反应的相关性。结果:218例结直肠癌患者的中位随访时间为4.9(0.3~7.3)年,中位无疾病生存期(DFS)为4.4年,中位总生存期(OS)为5.5年。XRCC1基因rs1799782位点的分布频率为:GG基因型占62.4%(136/218),GA型占33.0%(72/218),AA型占4.6%(10/218),最小等位基因频率为0.21,3种基因型分布频率符合哈迪温伯格平衡( P=0.905)。后续的分析将GA和AA型患者合并,GG基因型和GA/AA基因型患者的DFS[ M(95% CI)]分别为5.2(4.5~5.9)年和3.8(3.2~4.4)年,差异有统计学意义(χ2=6.943, P=0.008)。两种基因型患者的OS[ M(95% CI)]分别为6.0(5.3~6.7)年和4.5(3.9~5.1)年,差异有统计学意义(χ2=5.538, P=0.010)。GA/AA基因型患者的PBMC中XRCC1基因mRNA的表达水平为3.8±0.6,高于GG型患者的2.8±0.7,差异有统计学意义( t=6.140, P<0.001)。 结论:XRCC1基因rs1799782位点可能通过介导XRCC1基因mRNA的表达,从而影响接受奥沙利铂为基础辅助化疗的结直肠癌患者的预后。
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编辑人员丨6天前
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Anti-inflammatory and DNA Repair Effects of Astragaloside Ⅳ on PC 12 Cells Damaged by Lipopolysaccharide
编辑人员丨1周前
Objective:This study aimed to establish a neural cell injury model in vitro by stimulating PC12 cells with lipopolysaccharide(LPS)and to examine the effects of astragaloside Ⅳ on key targets using high-throughput sequence technology and bioinformatics analyses.Methods:PC12 cells in the logarithmic growth phase were treated with LPS at final concentrations of 0.25,0.5,0.75,1,and 1.25 mg/mL for 24 h.Cell morphology was evaluated,and cell survival rates were calculated.A neurocyte inflammatory model was established with LPS treatment,which reached a 50%cell survival rate.PC12 cells were treated with 0.01,0.1,1,10,or 100 μmol/L astragaloside Ⅳ for 24 h.The concentration of astragaloside Ⅳ that did not affect the cell survival rate was selected as the treatment group for subsequent experiments.NOS activity was detected by colorimetry;the expression levels of ERCC2,XRCC4,XRCC2,TNF-α,IL-1β,TLR4,NOS and COX-2 mRNA and protein were detected by RT-qPCR and Western blotting.The differentially expressed genes(DEGs)between the groups were screened using a second-generation sequence(fold change>2,P<0.05)with the following KEGG enrichment analysis,RT-qPCR and Western blotting were used to detect the mRNA and protein expression of DEGs related to the IL-17 pathway in different groups of PC12 cells.Results:The viability of PC12 cells was not altered by treatment with 0.01,0.1,or 1 μmol/L astragaloside Ⅳ for 24 h(P>0.05).However,after treatment with 0.5,0.75,1,or 1.25 mg/mL LPS for 24 h,the viability steadily decreased(P<0.01).The mRNA and protein expression levels of ERCC2,XRCC4,XRCC2,TNF-α,IL-1β,TLR4,NOS,and COX-2 were significantly increased after PC12 cells were treated with 1 mg/mL LPS for 24 h(P<0.01);however,these changes were reversed when PC12 cells were pretreated with 0.01,0.1,or 1 μmol/L astragaloside Ⅳ in PC12 cells and then treated with 1 mg/mL LPS for 24 h(P<0.05).Second-generation sequencing revealed that 1026 genes were upregulated,while 1287 genes were downregulated.The DEGs were associated with autophagy,TNF-α,interleukin-17,MAPK,P53,Toll-like receptor,and NOD-like receptor signaling pathways.Furthermore,PC12 cells treated with a 1 mg/mL LPS for 24 h exhibited increased mRNA and protein expression of CCL2,CCL11,CCL7,MMP3,and MMP10,which arc associated with the IL-17 pathway.RT-qPCR and Western blotting analyses confirmed that the DEGs listed above corresponded to the sequence assay results.Conclusion:LPS can damage PC12 cells and cause inflammatory reactions in nerve cells and DNA damage.astragaloside Ⅳ plays an anti-inflammatory and DNA damage protective role and inhibits the IL-17 signaling pathway to exert a neuroprotective effect in vitro.
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编辑人员丨1周前
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甲状腺癌EB病毒感染与XRCC1、STING1、IL-10基因多态性及病理类型的关联
编辑人员丨1个月前
目的 研究甲状腺癌EB病毒感染与X射线交错互补修复基因1(XRCC1)、干扰素基因刺激蛋白1(STING1)、白细胞介素-10(IL-10)基因多态性及病理类型的关联.方法 选取2021年3月-2023年3月青岛大学附属青岛市海慈医院(青岛市中医医院)收治的甲状腺癌患者130例为恶性组,同期收治的138例甲状腺腺瘤患者为良性组,比较两组及不同病理类型甲状腺癌患者EB病毒感染率、XRCC1、STING1、IL-10基因多态性,比较不同EB病毒感染状态甲状腺癌患者XRCC1、STING1、IL-10基因多态性.结果 恶性组EB病毒感染率、XRCC1基因型AA、GA及XRCC1、IL-10等位基因A占比高于良性组,XRCC1基因型GG占比低于良性组(P<0.05);乳头状癌组、滤泡状癌组EB病毒感染率高于髓样癌组、未分化癌组(P<0.05);乳头状癌组、未分化癌组XRCC1等位基因G高于滤泡状癌组、髓样癌组(P<0.05).感染组STING1等位基因C高于非感染组(P<0.05);感染组IL-10基因型CC占比高于非感染组,基因型CA占比低于非感染组(P<0.05).结论 甲状腺癌和甲状腺腺瘤患者EB病毒感染率、XRCC1基因多态性分布具有明显差异,且EB病毒感染可能与甲状腺癌患者病理类型有关,同时IL-10基因多态性可能与甲状腺癌患者EB病毒易感性有关.
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编辑人员丨1个月前
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APEX1和OGG1基因多态性与人结直肠癌的DNA损伤反应的相关性
编辑人员丨1个月前
目的 探究APEX1和OGG1基因多态性与人结直肠癌的DNA损伤反应的相关性.方法 招募2020年3月至2022年12月在保定市第一中心医院胃肠外科和肿瘤科住院治疗的240例结直肠癌患者为研究对象.所有结直肠癌症患者都进行了病理确认.招募同时期在本院体检的300例健康志愿者为对照人员.每位受试者均获得知情同意.从病理档案室和问卷调查中获得病例、志愿者的临床信息.通过Hardy-Weinberg平衡定律预测对照组人群的基因型和等位基因频率.分析所有结直肠癌病例和对照组参与者的基因型分布和优势比.通过在逻辑回归模型中分析多态性与吸烟混杂因素的相互作用.通过计算特定组合的调整后的OR值,对具有一个以上变异等位基因的个体进行结直肠癌风险分析.结果 病例与对照组之间在年龄、性别分布、吸烟状况和癌症家族史等一般资料方面差异无统计学意义(P>0.05).对照组人群中的所有基因型频率与Hardy-Weinberg下预测的一致(P>0.05).XRCC1 399Gln/Gln个体和Arg/Gln基因型患结直肠癌发病风险显著高于Arg/Arg基因型野生型患者.OGG1326Cys和APE1 148Glu的变异等位基因显示出有害作用,OR分别为1.23和1.66.对于APE1-141G/G变异等位基因纯合的个体,获得了略微降低的OR(OR=0.58,95%CI 1.73~2.14,P=0.08),表明该等位基因可能会降低结直肠癌的风险,差异无统计学意义(P>0.05).此外,在病例组和对照组之间OGG1 Ser326Cys和APE1 Asp148Glu的基因型或等位基因分布差异无统计学意义(P>0.05).对于APE1-141T/G多态性,使用纯合子TT基因型作为参考组,观察到对GG基因型的当前吸烟者有明显的保护作用(OR=0.39,95%CI 0.16~0.88;P=0.04),但在非吸烟者中没有发现这种保护作用.XRCC1 399Arg/Gln表现出有害效应,OR=1.66,差异无统计学意义(P>0.05).结论 本研究探讨了 DNA碱基切除修复基因(XRCC1,OGG1和APE1)多态性与结直肠癌风险之间关系,多个基因变异显著增加结直肠癌癌的风险,但APE1-141G/G可能降低当前吸烟者结直肠癌的风险.
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编辑人员丨1个月前
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X-射线修复交叉互补蛋白5在脑胶质瘤中的表达及临床意义
编辑人员丨2024/7/6
目的 分析X-射线修复交叉互补蛋白5(XRCC5)在脑胶质瘤(brain glioma,BG)中的表达水平及其与临床病理特征和预后的关系.方法 利用癌症基因图谱(TCGA)数据库的RNA测序数据分析XRCC5在636例BG[468例低分级脑胶质瘤(LGG),168例多形性胶质母细胞瘤(GBM)]与正常脑组织的表达差异,比较XR-CC5表达水平与年龄、性别、病理分级、生存期以及肿瘤增殖相关抗原67(MKI67)表达水平的相关性.对BG组织芯片(47例LGG、75例GBM及3例正常脑组织)进行XRCC5免疫组化染色,进一步验证XRCC5表达水平与BG病理分级的关系.结果 TCGA分析结果显示,XRCC5在BG组织中的表达水平高于正常脑组织(P<0.001),在GBM组的表达水平高于LGG组(P<0.001);XRCC5表达水平与BG病理分级呈正相关(P<0.001),与MKI67表达水平呈正相关(P<0.001);XRCC5高表达组生存期长于低表达组(P<0.001);不同性别、不同年龄段XRCC5表达水平差异均无统计学意义(P均>0.05);XRCC5的免疫组化染色结果显示,肿瘤组织中XR-CC5表达水平高于正常人脑组织(P<0.05).结论 XRCC5在BG组织中升高,且与恶性肿瘤的生物标记物MKI67呈正相关.XRCC5表达越高,患者的预后越好,生存期越长.
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编辑人员丨2024/7/6
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槲皮素改善苯并(a)芘致雄性大鼠生殖功能损伤的机制研究
编辑人员丨2024/3/16
目的:观察槲皮素对苯并(a)芘致大鼠生殖损伤的修复作用并探讨其保护机制.方法:将 30 只雄性大鼠按随机数字表法分为溶剂对照组、模型组、槲皮素组,每组10 只.除溶剂对照组外,其余组大鼠连续 30d灌胃给予 80 mg·kg-1 的苯并(a)芘溶液进行染毒诱导生殖功能损伤.从第11 天开始,槲皮素组大鼠灌胃给予100 mg·kg-1的槲皮素溶液,其余组大鼠灌胃给予等体积玉米油,持续20 d.给药完成后,取大鼠睾丸、附睾、精囊腺,并称其质量,计算脏器指数;取右侧附睾制备精子混悬液检测精子密度及总活力;精子染色质结构分析法(sperm chromatin structure assay,SCSA)检测精子DNA碎片率(DNA fragmenta-tion index,DFI);ELISA检测大鼠血清促卵泡素(follicle stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、睾酮(testostrone,T)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、一氧化氮(nitrogen monoxide,NO)、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)的水平;HE染色观察睾丸组织病理学变化;采用 Western Blot检测X射线修复交叉互补蛋白1(X-ray repair cross complementing 1,XRCC1)、8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(8-Oxoguanine DNA glycosylase,OGG1)、caspase-3、caspase-9 蛋白表达水平.结果:与溶剂对照组比较,模型组大鼠体质量、睾丸质量、附睾质量、精囊腺质量、睾丸指数、附睾指数、精囊腺指数、精子密度及总活力显著下降,DFI显著升高,FSH、LH、T、SOD、ATP水平明显降低,MDA、NO水平明显升高,XRCC、OGG1 蛋白表达水平显著降低,caspase-3、caspase-9 蛋白表达水平显著升高;与模型组比较,槲皮素组大鼠体质量、睾丸质量、附睾质量、精囊腺质量、睾丸指数、附睾指数、精囊腺指数、精子密度及总活力显著升高,DFI显著下降,FSH、LH、T、SOD、ATP水平明显升高,MDA、NO水平明显降低,XRCC1、OGG1 蛋白表达水平显著升高,caspase-3、caspase-9蛋白表达水平显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05).HE染色显示,槲皮素可明显减轻生殖功能损伤大鼠睾丸损伤程度,生精小管边界变清晰,生精上皮厚度明显恢复,生精细胞数量增多,部分管腔内能够见到成熟精子,变性的间质细胞减少.结论:槲皮素能够修复由苯并(a)芘引起的大鼠生殖损伤,其机制可能与激活睾丸组织中碱基切除修复(base excision repair,BER)信号通路及抗氧化应激有关.
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编辑人员丨2024/3/16
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肝细胞癌与抑郁症的miRNA-mRNA网络共病机制研究
编辑人员丨2024/1/20
目的 基于miRNA-mRNA网络探讨肝细胞癌和抑郁症的共病机制.方法 (1)在GEO数据库中获取与肝细胞癌和抑郁症相关的miRNA微阵列数据;利用在线工具GEO2R分别分析两个数据集的差异表达miRNA(DE-miRNA),然后取交集.在 TargetScan、miRDB、miRPathDB 和 miRWalk 数据库中预测各个DE-miRNA的靶基因,然后取交集.(2)利用DAVID数据库对DE-miRNA靶基因进行功能富集分析及通路富集分析,并筛选出风险通路.(3)利用STRING 数据库和Cytoscape 3.9.1 软件构建DE-miRNA 靶基因的蛋白-蛋白相互作用网络,然后筛选中枢基因及关键基因.(4)利用Microsoft Excel软件及Cytoscape 3.9.1 软件构建DE-miRNA-mRNA-风险通路可视化网络.(5)利用GEPIA2 数据库进行中枢基因在肝细胞癌中的表达分析及生存分析.结果 (1)肝细胞癌和抑郁症共同表达的上调 DE-miRNA 为 miR-1290、miR-3156-5p,下调DE-miRNA为miR-575、miR-6737-3p,四者对789 个靶基因进行调控.(2)DE-miRNA靶基因参与的生物功能与免疫、炎症、血管生成、神经元信号传导等相关.共筛选出15 条风险通路,包括丝裂原活化蛋白激酶信号通路、磷脂酰基醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路、轴突引导、催产素信号通路、神经营养素信号通路等.(3)共获得10个中枢基因,分别为BRCA1、NOTCH1、PTEN、EGFR、ATRX、ERCC4、RAD51B、EME1、RMI1、XRCC2.将富集在风险通路上的3 个中枢基因作为关键基因.(4)构建的DE-miRNA-mRNA-风险通路网络包含了10 对DE-miRNA-中枢基因组合,以及 13 个DE-miRNA-关键基因-风险通路组合.(5)与正常组相比,BRCA1、PTEN、ATRX、ERCC4、RAD51B、EME1、RMI1、XRCC2 在肝细胞癌组中呈高表达,NOTCH1、EGFR在肝细胞癌组中呈低表达(P<0.01).BRCA1、EME1、RMI1、XRCC2 与肝细胞癌患者的生存率有关(P<0.05).结论 miR-1290、miR-3156-5p、miR-575、miR-6737-3p可能是肝细胞癌和抑郁症共同的调控因子,其通过作用于多个靶基因从而调控炎症反应、肿瘤免疫反应、神经传导等途径,进一步参与肝细胞癌和抑郁症的发生、发展.此外,BACR1、EME1、RMI1、XRCC2 这4个靶基因与肝细胞癌患者的预后密切相关.
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编辑人员丨2024/1/20
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RAD51B-RAD51C-RAD51D-XRCC2肿瘤抑制因子的结构和功能
编辑人员丨2023/8/19
同源重组是生命的一个基本过程,它是保护和重启断裂的复制叉、修复染色体断裂和在减数分裂过程中交换遗传物质所必需的.携带有关键重组基因突变的个体,如携带BRCA2(也称为FANCD1),或RAD51同种异型基因RAD51B、RAD51C(也称为FANCO)、RAD51D、XRCC2(也称为FANCU)和XRCC3,易患乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌以及易患癌症综合征Fanconi贫血.
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编辑人员丨2023/8/19
