目的:探讨在乳腺癌细胞中高表达的N-乙酰转移酶10(NAT10)引起对铂类抗肿瘤药的耐药效应，并揭示其潜在机制。方法:实验分为野生型组(MCF-7野生型细胞未经任何处理)、NAT10过表达组(h-NAT10质粒转染至MCF-7细胞)和NAT10敲低组(sh-NAT10质粒转染至MCF-7细胞)。采用Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力，采用免疫共沉淀实验检测NAT10与多聚ADP核糖转移酶1(PARP1)的相互作用，并检测过表达或敲低NAT10的表达对PARP1乙酰化水平和半衰期的影响，通过免疫组化染色和免疫沉淀实验检测乙酰化的PARP1招募相关DNA损伤修复相关蛋白的情况，采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:Transwell实验显示，NAT10过表达组细胞侵袭数为(483.00±46.90)个，NAT10敲低组细胞侵袭数为(469.00±40.50)个，与MCF-7野生型细胞[(445.00±35.50)个]比较，差异均无统计学意义(均 P>0.05)。在10 μmol/L奥沙利铂作用下，NAT10过表达组细胞侵袭数为(502.00±45.60)个，NAT10敲低组细胞侵袭数为(105.00±20.50)个，与野生型细胞[(219.00±31.50)个]比较，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。在10 μmol/L奥沙利铂作用下，与野生型细胞比较，NAT10过表达可以增强PARP1与NAT10的结合，而使用NAT10抑制剂Remodelin则抑制了二者的相互结合。高表达NAT10诱导PARP1乙酰化后，PARP1与X射线修复交叉互补蛋白1(XRCC1)的结合增加，敲低NAT10的表达后，降低了PARP1和XRCC1的结合。高表达NAT10增强了PARP1与DNA连接酶3(LIG3)的结合，而敲低NAT10的表达则会降低PARP1与LIG3的结合。在10 μmol/L奥沙利铂处理后的细胞中，NAT10过表达细胞中γH2AX表达水平为0.38±0.02, NAT10敲低细胞中γH2AX表达水平为1.36±0.15，与野生型细胞(1.00±0.00)比较，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。在10 μmol/L奥沙利铂处理后的细胞中，NAT10过表达组细胞凋亡率为(6.54±0.68)%，NAT10敲低组细胞凋亡率为(12.98±2.54)%，与野生型细胞[(9.67±0.37)%]比较，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:NAT10高表达增强了NAT10与PARP1的结合，并促进PARP1的乙酰化，进而延长了PARP1的半衰期，从而增强PARP1招募DNA损伤修复相关蛋白到损伤位点，促进DNA损伤修复，最终使乳腺癌细胞存活。

目的:观察甲基化转移酶Wilms肿瘤蛋白1相关蛋白（WTAP）在缺氧/复氧（H/R）诱导的心肌细胞损伤中的调节作用及其分子机制。方法:①实验一：将H9C2心肌细胞分为空白对照组和H/R模型组。采用H/R诱导H9C2细胞建立心肌缺血/再灌注（I/R）损伤模型；空白对照组不进行处理。采用N6-甲基腺苷（m6A）RNA甲基化测定试剂盒检测m6A水平；分别采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测甲基化转移酶〔WTAP、甲基转移酶样蛋白（METTL3、METTL14）〕的基因和蛋白表达水平。②实验二：将H9C2心肌细胞分为空白对照组、H/R+sh-NC组、H/R+sh-WTAP组。H/R+sh-WTAP组转染sh-WTAP以敲降WTAP表达，其余各组制模方法同实验一。转染48 h后，采用流式细胞术检测细胞凋亡率；采用Western blotting检测WTAP、活化天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）、活化多聚二磷酸腺苷酸核糖聚合酶（PARP）、转录激活因子4（ATF4）、蛋白激酶RNA样内质网激酶（PERK）、磷酸化PERK（p-PERK）和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的蛋白表达水平；采用免疫荧光染色观察ATF4阳性表达情况。③实验三：将H9C2心肌细胞分为空白对照组、H/R+sh-NC组、H/R+sh-WTAP和H/R+sh-WTAP+ATF4组。H/R+sh-WTAP+ATF4组用过表达质粒ATF4转染H9C2心肌细胞，其余各组制模方法同实验二。采用流式细胞术检测细胞凋亡率；采用Western blotting检测ATF4、CHOP、活化caspase-3和活化PARP的蛋白表达水平。结果:①实验一：H/R模型组m6A甲基化水平较空白对照组显著上调。RT-qPCR检测结果显示，H/R模型组METTL3、METTL14和WTAP基因表达水平均较空白对照组显著上调，以WTAP上调最显著；Western blotting检测结果呈相同趋势。提示甲基化转移酶WTAP的表达水平在H/R诱导的心肌细胞中显著上调。②实验二：H/R+sh-WTAP组细胞凋亡水平较H/R+sh-NC组明显减少〔（14.16±1.58）%比（24.51±2.38）%， P<0.05〕。Western blotting检测结果显示，H/R+sh-WTAP组WTAP、活化caspase-3、活化PARP、p-PERK、ATF4和CHOP的蛋白表达水平均较H/R+sh-NC组显著下调。荧光显微镜下显示，H/R+sh-WTAP组ATF4阳性信号较H/R+sh-NC组显著减弱〔（19.36±1.81）%比（32.83±2.69）%， P<0.01〕。提示敲降WTAP可抑制H/R诱导的心肌细胞凋亡和内质网应激。③实验三：H/R+sh-WTAP+ATF4组细胞凋亡水平较H/R+sh-WTAP组显著增加〔（26.61±2.76）%比（17.14±0.87）%， P<0.05〕。Western blotting检测结果显示，H/R+sh-WTAP+ATF4组ATF4、CHOP、活化caspase-3和活化PARP的蛋白表达水平较H/R+sh-WTAP组显著上调。提示过表达ATF4可逆转sh-WTAP对H/R诱导的心肌细胞中内质网应激和细胞凋亡的抑制作用。 结论:甲基化转移酶WTAP可调节ATF4表达，介导细胞凋亡和内质网应激，促进H/R诱导的心肌细胞损伤。

目的:探讨PARP-1[poly （ADP-ribose） polymerase-1，聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1]在重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis, SAP）大鼠肠黏膜屏障损伤中的作用机制。方法:20只Wistar大鼠按随机数字表法分为CON组（对照组）、SAP组、3-AB组（即PARP-1抑制剂组）、3-AB-CON组，每组各5只。腹腔注射雨蛙素及脂多糖制作SAP大鼠模型，CON组仅注射等体积生理盐水，3-AB组于建模前0.5 h注射3-AB溶液30 mg/kg，3-AB-CON组腹腔注射3-AB溶液30 mg/kg 0.5 h后处理同CON组。各组大鼠建模后12 h处死，观察各组腹腔内大体改变，取心脏血、胰腺和肠组织，光镜下观察胰腺组织及肠组织病理形态学改变，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清白细胞介素-6（IL-6）含量，使用全自动生化仪检测血清淀粉酶含量，采用蛋白免疫印迹试验（Western Blot）测定肠组织PARP-1、胞核核转录因子-κB（NF-κB）的蛋白表达，采用免疫组化试验测定肠黏膜Occludin蛋白表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，方差不齐时则用秩转换的非参数检验，以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:与CON组比较，SAP组大鼠腹腔明显腹水，胰腺病理明显出血坏死，肠组织绒毛结构紊乱，淀粉酶、IL-6水平升高，肠组织PARP-1、NF-κB蛋白表达明显增多，肠黏膜Occludin蛋白表达减少，说明PARP-1可诱导NF-κB活化和炎症损伤，导致胰腺及肠损伤。3-AB-CON组与CON组各指标比较差异无统计学意义。与SAP组比较，3-AB组胰腺及肠组织损伤明显减轻，淀粉酶、IL-6水平明显降低[淀粉酶（U/L）（1 879.25±736.66） vs （5 569.33±1 993.48），IL-6（pg/mL）（77.98±20.65） vs （209.14±79.08），均 P<0.05],肠组织PARP-1、胞核NF-κB蛋白表达减少[PARP-1（灰度值）（1.44±0.09） vs （1.49±0.13），NF-κB（灰度值）（0.63±0.09） vs （0.96±0.08）,均 P<0.05]，肠黏膜Occludin蛋白表达增多[评分（6.7±1.5） vs （3.2±1.1）， P<0.05]。 结论:抑制PARP-1表达对SAP肠黏膜屏障损伤有保护作用，其作用机制可能是通过抑制NF-κB信号通路、增加肠黏膜Occludin蛋白表达有关。

[目的]初步探讨益气健脾方对香烟烟雾(cigarette smoke,CS)暴露小鼠肺损伤的作用及潜在机制.[方法]60只C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、预防组、治疗组和防治组.除正常组外,所有小鼠均接受为期4周的CS暴露,其中预防组、防治组分别在暴露初期接受4周及8周的益气健脾方干预,治疗组则于暴露结束后接受4周干预.记录各组小鼠一般情况,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察肺组织病理学改变;吉姆萨染色观察肺泡灌洗液细胞分类并计数;原位末端转移酶标记(terminal-deoxynucleoitidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)检测肺组织凋亡细胞 DNA 片段,免疫印迹检测 B 淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2 相关 X 蛋白(Bcl-2 associated X,Bax)、胱天蛋白酶-3(cysteine aspartate proteinase-3,caspase-3)、激活型 caspase-3(cleaved-caspase-3)、多聚 ADP核糖聚合酶 1[poly(ADP-ribose)polymerase 1,PARP1]、激活型 PARP1(cleaved-PARP1)蛋白表达.[结果]至第4周,模型组小鼠生存率仅为72.72％;至第8周,模型组小鼠体质量最低(P＜0.05),肺组织内可见明显炎性细胞浸润及结构破坏.与模型组比较,益气健脾方干预的三组小鼠体质量增加,死亡率降低(P＜0.05),肺部炎症浸润及组织损伤均有所减轻(P＜0.05),其中以防治组改善最为显著(P＜0.01).与正常组比较,模型组小鼠细胞凋亡指数明显增加(P＜0.01),中药干预后则显著减少(P＜0.01).与正常组比较,模型组小鼠肺组织Bcl-2表达减少,Bax表达增多,Bcl-2/Bax比值下调,并且caspase-3、PARP1蛋白及其活化水平均上调(P＜0.01,P＜0.05).与模型组比较,经中药干预8周后,小鼠肺组织中Bcl-2表达增加,Bax表达减少,Bcl-2/Bax 比值上调,而 Bax、caspase-3、cleaved-caspase-3、cleaved-PARP1 表达均降低(P＜0.05,P＜0.01).[结论]益气健脾方可有效减轻CS暴露造成的小鼠肺组织损伤及炎症反应,其机制可能与抑制Bcl-2-Bax/caspase-3/PARP1细胞凋亡通路相关.

目的 探讨多聚ADP核糖转移酶(PARP-1)基因多态性与妊娠期高血压(HDP)的相关性,以及HDP的潜在发病机制.方法 纳入2021年8月至2022年6月在该院就诊的80例HDP孕妇作为HDP组,以及同期80例健康孕妇作为对照组.对比两组临床资料,采用荧光定量PCR法检测外周血单个核细胞PARP-1、TRL7、MyD88和核因子-κB(NF-κB)mRNA水平及PARP-1基因不同位点的单核苷酸多态性,采用 West-ern blotting法检测外周血单个核细胞PARP-1、TRL7、MyD88和NF-κB蛋白相对表达量;Logistic回归模型分析PARP-1单核苷酸多态性与HDP的相关性;采用Pearson相关性分析PARP-1 mRNA和蛋白表达与NF-κB通路蛋白表达的相关性.结果 HDP组血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)、sFlt-1/胎盘生长因子(sFlt-1/PLGF)水平,PARP-1、TRL7、MyD88 和 NF-κB mRNA 水平,以及 PARP-1、TRL7、MyD88 和 NF-κB 蛋白相对表达量高于对照组,PARP-1基因rs1805414位点CC基因型高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);Logis-tic 回归模型分析显示,sFlt-1/PLGF(OR=1.236)、PARP-1 mRNA(OR=107.998)及 PARP-1 基因 rs1805414位点CC基因型(OR=3.788)是HDP患者发生子痫前期(PE)的独立危险因素(P＜0.05);Pearson相关性分析显示,PARP-1 mRNA 水平与 TRL7、MyD88 和 NF-κB mRNA 水平呈正相关(r=0.782、0.688、0.903,均P＜0.05);PARP-1蛋白相对表达量与TRL7、MyD88和NF-κB蛋白相对表达量呈正相关(r=0.833、0.845、0.907,均P＜0.05).结论 PARP-1表达水平及多态性与HDP发病密切相关,特别是rs1805414位点CC突变可作为HDP遗传易感性的敏感指标;NF-κB信号通路在PARP-1参与HDP发病中发挥了重要的作用.

目的:探讨糖酵解抑制剂3-溴丙酮酸(3-BP)对耐顺铂鼻咽癌细胞HNE1/DDP增殖和凋亡的影响.方法:MTT比色法和集落克隆形成实验检测3-BP对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用,PI染色法检测3-BP对HNE1/DDP细胞凋亡的影响,Western blotting检测凋亡相关蛋白多聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)、髓样细胞白血病-1(Mcl-1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达.结果:3-BP可显著抑制HNE1/DDP细胞的增殖,其48 h的IC50值为260.2μmol/L.低浓度(10、20、40μmol/L)的3-BP能明显抑制HNE1/DDP细胞集落克隆的形成.3-BP可诱导HNE1/DDP细胞发生明显的细胞凋亡(P<0.01),80、160、320μmol/L 3-BP作用48 h的细胞凋亡率分别为(13.7±2.1)％、(25.5±2.4)％、(45.5±3.5)％,对照组的细胞凋亡率为(1.6±0.6)％.Western blotting结果显示,3-BP处理HNE1/DDP细胞后可促进PARP的剪切,能下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达.结论:3-BP对HNE1/DDP细胞具有增殖抑制及凋亡诱导作用,其机制可能与下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达相关.

目的 探讨大鼠颅脑损伤后线粒体Omi/HtrA2信号通路在大鼠神经细胞凋亡中的作用.方法 90只大鼠按随机数字表法分成假手术组、颅脑损伤组和UCF-101干预组,每组30只,然后每组按照12、24、48 h三个时间点分成三个亚组,每个亚组10只.使用大鼠自由落体颅脑损伤动物模型,UCF-101干预组大鼠在模型形成前0.5 h按1.5μmol/kg的剂量腹腔注射UCF-101,其余两组大鼠腹腔注射1 mL的等渗NaCl溶液.按照12、24、48 h三个时间点每组分批断头处死10只大鼠,分离海马组织.采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)测定法检测各组大鼠海马组织神经细胞凋亡情况,Western-blotting检测Omi/HtrA2、X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、pro-caspase-3、pro-caspase-9和剪切聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶(PARP)蛋白表达,四肽荧光底物法检测caspase-3和caspase-9蛋白活性.结果 三组大鼠海马神经细胞凋亡比例,Omi/HtrA2、pro-caspase-3、pro-caspase-9、剪切PARP和XIAP蛋白表达以及caspase-3和caspase-9蛋白活性比较,差异均有统计学意义(F=217.742、107.139、145.748、133.970、103.029、65.112、142.772、96.187,P均<0.05).12、24、48 h时颅脑损伤组大鼠凋亡的海马神经细胞比例,Omi/HtrA2、pro-caspase-3、pro-caspase-9和剪切PARP蛋白表达以及caspase-3和caspase-9蛋白活性均较假手术组显著升高(P均<0.05);而UCF-101干预组大鼠凋亡的海马神经细胞比例,Omi/HtrA2、pro-caspase-3、pro-caspase-9和剪切PARP蛋白表达以及caspase-3和caspase-9蛋白活性均较颅脑损伤组显著下降(P均<0.05).各时间点颅脑损伤组大鼠海马组织XIAP蛋白表达均较假手术组显著下降(P均<0.05),而UCF-101干预组大鼠海马组织XIAP蛋白表达均较颅脑损伤组显著升高(P均<0.05).结论 Omi/HtrA2介导的线粒体途径可能参与大鼠颅脑损伤后神经细胞凋亡的发生过程,而UCF-101可有效抑制神经细胞凋亡.

目的 三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)是最具侵袭性的乳腺癌亚型,在乳腺癌中占15％～20％.目前尚无批准的靶向治疗可用于TNBC.与其他乳腺癌亚型相比,TNBC表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)通常过表达,这对该疾病来说是一个潜在治疗靶点.本研究总结TNBC治疗现状、研究方向及进展,靶向治疗在TNBC中应用的可能性,探讨其产生及获得耐药性的潜在因素.方法 应用PubMed数据库检索系统,以“TNBC、靶向治疗、EGFR抑制剂和耐药性”等为关键词,检索2005-01-2017-03的相关文献.纳入标准:(1) TNBC治疗现状;(2)TNBC的靶向治疗;(3)靶向治疗耐药的机制.排除标准:(1)非TNBC的治疗现状;(2)非TNBC的治疗策略;(3)非TNBC治疗的耐药机制.根据纳入和排除标准,选择符合分析的文献34篇.结果 目前TNBC靶向治疗缺乏响应,有必要对TNBC病患进行分层,开发有效的联合疗法来提高靶向治疗效用.蛋白质精氨酸甲基转移酶1(recombinant human protein arginine methyltransferase 1,PRMT1)抑制剂与EGFR单抗(monoclonal antibody,mAb),及小分子酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)与抗多聚(ADP-核糖)聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)抑制剂的联合用药或许会成为TNBC的有效治疗策略.EGFR单抗和免疫检查点抑制剂的联合用药或许会成为一种有前景的治疗方法.结论 TNBC的抗EGFR靶向治疗或许是一种可行的治疗方式,尽管目前没有专门批准用于TNBC治疗的药物,但相关临床试验正在进行中,将为以后的治疗带来启示.

目的:研究真菌次级代谢产物rasfonin对骨肉瘤143B细胞增殖与迁移能力的影响.方法:以骨肉瘤细胞系143B为模型,利用3-(4,5-二甲基)-5-(3-羧甲基苯环)-2-(4-硫基苯)-2H-四唑盐复合物检测法[3-(4,5-dime-thylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,inner salt,MTS]观察rasfonin对细胞活性的影响,以二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组为对照,采用rasfonin(3μmol/L和6μmoL/L)处理12或24 h,观察143B细胞活性的变化;采用克隆形成实验检测rasfonin对细胞集落形成能力的影响,以DMSO组为对照,采用rasfonin(3μmol/L)处理1周,对比两组克隆形成数目.划痕实验及侵袭实验检测rasfonin对细胞侵袭迁移能力的影响,以DMSO组为对照,采用rasfonin(3μmol/L)处理24 h,对比两组的伤痕愈合率及侵袭细胞数.以DMSO组为对照,透射电子显微镜观察rasfonin(3μmol/L)处理4h后细胞内自噬体含量的变化.蛋白免疫印迹的方法检测rasfonin对p62蛋白(sequestosome 1)、微管相关蛋白1轻链3融合蛋白(microtubule associated protein 1 light chain 3 fusion protein,LC3)及聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶[poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]表达的影响.结果:在12和24 h,随着rasfonin浓度的升高,骨肉瘤143B细胞的细胞活性均逐渐降低,3组间差异有统计学意义(12 h:F=31.36,P＜0.01;24 h:F=67.07,P＜0.01),任意两组间比较差异也均有统计学意义(P＜0.01).3μmol/L的rasfonin可以显著抑制143B细胞的集落形成能力(D＜0.01).Rasfonin处理后,143B细胞在24 h内的伤痕愈合比率明显低于DMSO对照组(33.91％ ±0.83％ vs.65.11％ ±0.94％,P＜0.01);同样24 h内穿过覆盖有Matrigel的基底膜的细胞数明显低于DMSO对照组[(21.33±1.45)个 vs.(49.33 ±2.40)个,P＜0.01].Rasfonin处理4h后骨肉瘤143B细胞中自噬体增多,p62水平降低,LC3-Ⅱ累积,自噬抑制剂氯喹存在条件下LC3-Ⅱ累积更为明显,并且随着rasfonin浓度的提高PARP-1的切割增多.结论:Rasfonin既可以抑制骨肉瘤143B细胞的增殖迁移,还可以引起细胞的自噬与凋亡,这些结果为rasfonin作为骨肉瘤新的治疗药物提供了初步的实验基础.

沉默信息调节因子 2 相关酶(silent mating type information regulator 2-related enzymes,Sirtuin)是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)依赖性的去乙酰化酶.Sirt7是定位于核仁的Sirtuin蛋白家族成员,除了具有去乙酰化酶活性外,还具有腺苷二磷酸(adenosine diphosphate,ADP)-核糖基转移酶、去琥珀酰化酶和去戊二酰化酶活性.Sirt7的作用底物包括组蛋白、DNA损伤修复相关因子、核仁小核糖核蛋白成分(核仁纤维蛋白、U3)、转录因子(GA结合蛋白β1(GA binding protein β1,GABPβ1)、叉头框蛋白O4、GATA4)、细胞周期蛋白依赖激酶9、组蛋白乙酰转移酶1、聚合酶相关因子53(polymerase associated factor 53,PAF53)、Ras相关核蛋白(Ras-related nuclear protein,Ran)、活化T细胞的核因子c1和p53等.另外,Sirt7还可以与损伤特异性 DNA 结合蛋白 1(damage-specific DNA binding protein 1,DDB1)/cullin 4/DDB1-cullin 4相关因子1、Suv39h1/Sirt1、Myc、核呼吸因子1和Elk4等作用,进而调节其功能,但作用机制尚不清楚.Sirt7的多种活性使其在维持基因组稳定、调节RNA转录、抵御应激反应、调控代谢及炎症等病理生理活动中发挥重要作用.本文将介绍Sirt7在调节以上病理/生理活动中的作用机制,以及腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine 5'-monophosphate activated protein kinase,AMPK)、蛋白质精氨酸甲基转移酶6、泛素特异性肽酶7等对Sirt7蛋白合成及活性的调节作用,并对目前Sirt7研究中存在的问题进行讨论.