目的:探讨急性低压缺氧对大鼠视网膜DNA的损伤作用及黄芪复方对其保护作用。方法:取雄性清洁级成年SD大鼠72只，按照计算机数字随机分配法随机分为常氧对照组、低氧模型组和黄芪复方灌胃组，每组24只。常氧对照组大鼠在常氧环境下喂养，低氧模型组及黄芪复方灌胃组大鼠置于模拟海拔高度5 km的低压氧舱内喂养，同时黄芪复方灌胃组大鼠每日黄芪复方制剂(0.1 g/kg)灌胃给药1次，低氧模型组大鼠每日灌胃给予等容量生理盐水1次。连续给药7 d后，过量麻醉法处死大鼠，剥离各组大鼠视网膜，采用组织病理学染色法观察各组大鼠视网膜组织形态；采用免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜DNA损伤标志物p53和DNA损伤修复磷酸化蛋白组蛋白家族2月变异体(γH2AX)的表达；采用实时荧光定量PCR法检测8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶(MTH1)和8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)mRNA表达水平。结果:低氧模型组大鼠视网膜较常氧对照组和黄芪复方灌胃组增厚，其中以神经纤维层及视网膜神经节细胞层增厚明显。低氧模型组大鼠视网膜p53与γH2AX阳性染色程度较常氧对照组和黄芪复方灌胃组增强。低氧模型组视网膜MTH1 mRNA和OGG1 mRNA相对表达量分别为0.573±0.081和0.772±0.136，明显低于常氧对照组的0.846±0.160和1.013±0.168，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。黄芪复方灌胃组视网膜MTH1 mRNA相对表达量为0.748±0.114，明显高于低氧模型组，差异有统计学意义( P<0.05)，而2个组OGG1 mRNA相对表达量比较差异无统计学意义( P＝0.743)。 结论:急性低压缺氧诱导大鼠视网膜DNA损伤，黄芪复方制剂灌胃给药对其有保护作用，其机制可能与调节p53、γH2AX、MTH1以及OGG1的表达有关。

目的 探究APEX1和OGG1基因多态性与人结直肠癌的DNA损伤反应的相关性.方法 招募2020年3月至2022年12月在保定市第一中心医院胃肠外科和肿瘤科住院治疗的240例结直肠癌患者为研究对象.所有结直肠癌症患者都进行了病理确认.招募同时期在本院体检的300例健康志愿者为对照人员.每位受试者均获得知情同意.从病理档案室和问卷调查中获得病例、志愿者的临床信息.通过Hardy-Weinberg平衡定律预测对照组人群的基因型和等位基因频率.分析所有结直肠癌病例和对照组参与者的基因型分布和优势比.通过在逻辑回归模型中分析多态性与吸烟混杂因素的相互作用.通过计算特定组合的调整后的OR值,对具有一个以上变异等位基因的个体进行结直肠癌风险分析.结果 病例与对照组之间在年龄、性别分布、吸烟状况和癌症家族史等一般资料方面差异无统计学意义(P＞0.05).对照组人群中的所有基因型频率与Hardy-Weinberg下预测的一致(P＞0.05).XRCC1 399Gln/Gln个体和Arg/Gln基因型患结直肠癌发病风险显著高于Arg/Arg基因型野生型患者.OGG1326Cys和APE1 148Glu的变异等位基因显示出有害作用,OR分别为1.23和1.66.对于APE1-141G/G变异等位基因纯合的个体,获得了略微降低的OR(OR=0.58,95％CI 1.73～2.14,P=0.08),表明该等位基因可能会降低结直肠癌的风险,差异无统计学意义(P＞0.05).此外,在病例组和对照组之间OGG1 Ser326Cys和APE1 Asp148Glu的基因型或等位基因分布差异无统计学意义(P＞0.05).对于APE1-141T/G多态性,使用纯合子TT基因型作为参考组,观察到对GG基因型的当前吸烟者有明显的保护作用(OR=0.39,95％CI 0.16～0.88;P=0.04),但在非吸烟者中没有发现这种保护作用.XRCC1 399Arg/Gln表现出有害效应,OR=1.66,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 本研究探讨了 DNA碱基切除修复基因(XRCC1,OGG1和APE1)多态性与结直肠癌风险之间关系,多个基因变异显著增加结直肠癌癌的风险,但APE1-141G/G可能降低当前吸烟者结直肠癌的风险.

目的:探讨依帕司他(Epa)对放射性肺炎(RP)小鼠线粒体氧化应激损伤的影响及其机制.方法:C57BL/6小鼠随机对照(CON)组、放射(IR)组、IR联合10 mg/kg Epa处理组及IR联合20 mg/kg Epa处理组,每组各16只.采用6MVX线直线加速器全胸单次照射15 Gy建立放射性肺炎模型.照射后连续灌胃给药6～8周.HE染色观察肺组织病理变化.透射电镜观察肺组织线粒体结构.ELISA检测血浆白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及转化生长因子-β1(TGF-β1)的水平.免疫组化检测肺组织醛糖还原酶(AR)的表达.比色法检测肺组织丙二醛(MDA)及4-羟基壬烯醛(4-HNE)含量.制备肺组织单细胞悬液,使用DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(ROS)水平.实时定量 PCR 检测 AR、IL-6、TNF-α 和TGF-β1 mRNA 的表达.Western blot 法检测 AR、IL-6、TNF-α、TGF-β1、BAX、Bcl2、Cleaved Caspase-3、8-氧鸟嘌呤 DNA糖基化酶1(OGG1)及沉默信号调节因子3(SIRT3)的蛋白水平.结果:与CON组相比,IR组肺泡水肿,肺泡间隔增厚并伴大量炎症细胞浸润;炎症因子IL-6、TNF-α和TGF-β1的水平明显升高(P＜0.01);Bcl2的表达明显下调而BAX、Cleaved Caspase-3的表达明显上调(P＜0.05,P＜0.01).与IR组相比,Epa连续给药6～8周后,小鼠肺组织炎症损伤明显减轻,炎症因子IL-6、TNF-α和TGF-β1的水平明显降低(P＜0.05,P＜0.01),细胞凋亡程度明显减轻(Bcl2的表达上调而BAX、Cleaved Caspase-3的表达下调).与CON组相比,IR组AR的表达明显升高,ROS、MDA及4-HNE的水平明显增加(P＜0.01),OGG1和SIRT3的表达明显降低(P＜0.01),线粒体损伤明显加剧.而与IR组相比,Epa连续给药6～8周后,IR组AR的表达明显下调(P＜0.05,P＜0.01),ROS、MDA及4-HNE的水平明显降低,OGG1和SIRT3的表达明显增加,线粒体损伤明显减轻(P＜0.05,P＜0.01).结论:Epa对放射性肺炎具有保护作用,其作用可能与其抑制AR的表达,减轻线粒体氧化应激损伤,抑制炎症反应和细胞凋亡有关.

目的 探讨萝卜硫素对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞脂质积聚的影响和作用机制.方法 将细胞分为对照组、ox-LDL组(100μg·mL-1 ox-LDL)、萝卜硫素低剂量组(100 μg·mL-1 ox-LDL+5 μmol·L-1 萝卜硫素)、萝卜硫素高剂量组(100μg·mL-1 ox-LDL±10 μmol·L-1萝卜硫素)、si-OGG1 组(100 μg·mL-1 ox-LDL+10 μmol·L-1 萝卜硫素+转染si-OGG1).以蛋白质印迹法检测各组细胞蛋白表达水平,以酶联免疫吸附测定法检测各组细胞炎性因子及8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)表达水平,以氧化酶法检测细胞内胆固醇水平,以探针法检测活性氧(ROS)水平,以流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 对照组、ox-LDL组、萝卜硫素低剂量组、萝卜硫素高剂量组、si-OGG1组的8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶1(OGG1)蛋白相对表达水平分别为 0.80±0.03、0.26±0.02、0.43±0.03、0.68±0.05 和 0.29±0.04,8-OHdG水平分别为(3.02±0.16)、(23.02±1.07)、(18.28±1.40)、(13.05±1.42)和(17.39±1.53)ng·mL-1,总胆固醇含量分别为(0.08±0.01)、(0.39±0.01)、(0.28±0.01)、(0.17±0.02)和(0.30±0.02)mmol·g-1,ROS 水平分别为 1.66±0.10、8.23±0.78、5.41±0.15、3.27±0.24和 7.01±0.41,细胞凋亡率分别为(3.64±0.31)％、(21.72±2.70)％、(16.60±1.18)％、(10.04±0.52)％和(16.07±1.46)％.对照组的上述指标与ox-LDL组比较,萝卜硫素低、高剂量组的上述指标与ox-LDL组比较,si-OGG1组的上述指标与萝卜硫素高剂量组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 萝卜硫素可能通过上调OGG1表达抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞脂质积聚.

目的 了解白细胞端粒长度(LTL)、8-氧鸟嘌呤(8-oxoG)及8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶(OGG1)mRNA表达水平与急性心肌梗死(AMI)之间的关联,筛选AMI的有效预测指标,为AMI的防治提供参考依据.方法 将2021年6月至2022年2月在天津医科大学总医院心内科冠心病监护病房住院并诊断为AMI的84例患者作为AMI组,以同期冠脉造影检查显示血管直径狭窄小于25％的患者98例作为对照组.收集两组患者的临床资料,采集空腹静脉血测定LTL、8-oxoG水平、OGG1 mRNA表达.采用SPSS 25.0软件进行t检验、非参数检验、x2检验、Spearman相关分析和多因素logistic回归模型分析,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价LTL、OGG1 mRNA、8-oxoG对AMI诊断的预测价值.结果 AMI组患者外周血LTL、OGG1 mRNA表达水平均显著低于对照组,8-oxoG水平显著高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).在AMI组中,OGG1 mRNA表达水平和GRACE评分呈负相关(r=-0.288,P＜0.05).多因素logistic回归分析结果显示,长LTL(OR=0.001)和OGG1 mRNA高表达(OR=0.002)与AMI患病低风险相关(P＜0.05).ROC曲线分析结果表明,LTL、OGG1mRNA单独检测及二者联合预测AMI的曲线下面积(AUC)分别为0.691、0.603和0.722.结论 长LTL和OGG1 mRNA高表达与AMI患病低风险相关,LTL和OGG1 mRNA可能成为AMI新的预测诊断标志物,为AMI的防治提供参考依据.

目的:探究白杨素对溃疡性结肠炎的作用及其机制.方法:60 只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、美沙拉嗪(200 mg/kg)组模型组及白杨素低(25 mg/kg)、中(50 mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量组,每组 10 只.3%葡聚糖硫酸钠喂养 1 w 联合 2%冰醋酸直肠灌注一次制备UC大鼠模型.对各组大鼠进行DAI评分,HE染色观察结肠组织病理学变化,透射电镜观察结肠线粒体超微结构.ELISA法检测血清IL-1β、IL-6、TNF-α及结肠组织 4-HNE水平,比色法检测结肠组织MDA水平,Western Blot检测结肠组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3、SIRT3、OGG1、p-IκBα、p-NF-κB P65 蛋白表达及NF-κB P65 核转移情况.体外培养结肠上皮细胞(NCM460),实验设正常对照组、白杨素(100 μmol/L)对照组、模型组及白杨素 1、10、100 μmol/L组.DCFH-DA荧光探针检测细胞ROS水平,比色法检测细胞 MDA 水平,Western Blot 和(或)免疫荧光法检测细胞 Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3、SIRT3、OGG1、p-IκBα、p-NF-κB P65 的蛋白表达及NF-κB P65 核转移情况.结果:体内实验中,与模型组比较,各给药组大鼠体质量显著升高,DAI评分显著降低(P<0.05 或P<0.01),结肠病理损伤明显缓解;血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平与结肠组织IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达显著降低,结肠组织Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.05 或P<0.01);结肠线粒体损伤明显减轻,SIRT3、OGG1 蛋白表达显著升高,MDA、4-HNE水平显著降低,IκBα、NF-κB P65 磷酸化水平与NF-κB P65 核转移程度显著降低(P<0.05 或P<0.01).体外实验中,与模型组比较,白杨素各组ROS、MDA、4-HNE、IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著降低,SIRT3、OGG1 蛋白表达显著升高,IκBα、NF-κB P65 磷酸化程度及NF-κB P65 核转移水平显著降低(P<0.05 或P<0.01),线粒体损伤减轻.结论:白杨素对UC具有一定的缓解作用,其机制可能与减轻线粒体氧化应激损伤,抑制NF-κB信号通路活化,降低炎症反应和细胞凋亡有关.

目的:观察槲皮素对苯并(a)芘致大鼠生殖损伤的修复作用并探讨其保护机制.方法:将 30 只雄性大鼠按随机数字表法分为溶剂对照组、模型组、槲皮素组,每组10 只.除溶剂对照组外,其余组大鼠连续 30d灌胃给予 80 mg·kg-1 的苯并(a)芘溶液进行染毒诱导生殖功能损伤.从第11 天开始,槲皮素组大鼠灌胃给予100 mg·kg-1的槲皮素溶液,其余组大鼠灌胃给予等体积玉米油,持续20 d.给药完成后,取大鼠睾丸、附睾、精囊腺,并称其质量,计算脏器指数;取右侧附睾制备精子混悬液检测精子密度及总活力;精子染色质结构分析法(sperm chromatin structure assay,SCSA)检测精子DNA碎片率(DNA fragmenta-tion index,DFI);ELISA检测大鼠血清促卵泡素(follicle stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、睾酮(testostrone,T)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、一氧化氮(nitrogen monoxide,NO)、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)的水平;HE染色观察睾丸组织病理学变化;采用 Western Blot检测X射线修复交叉互补蛋白1(X-ray repair cross complementing 1,XRCC1)、8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(8-Oxoguanine DNA glycosylase,OGG1)、caspase-3、caspase-9 蛋白表达水平.结果:与溶剂对照组比较,模型组大鼠体质量、睾丸质量、附睾质量、精囊腺质量、睾丸指数、附睾指数、精囊腺指数、精子密度及总活力显著下降,DFI显著升高,FSH、LH、T、SOD、ATP水平明显降低,MDA、NO水平明显升高,XRCC、OGG1 蛋白表达水平显著降低,caspase-3、caspase-9 蛋白表达水平显著升高;与模型组比较,槲皮素组大鼠体质量、睾丸质量、附睾质量、精囊腺质量、睾丸指数、附睾指数、精囊腺指数、精子密度及总活力显著升高,DFI显著下降,FSH、LH、T、SOD、ATP水平明显升高,MDA、NO水平明显降低,XRCC1、OGG1 蛋白表达水平显著升高,caspase-3、caspase-9蛋白表达水平显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05).HE染色显示,槲皮素可明显减轻生殖功能损伤大鼠睾丸损伤程度,生精小管边界变清晰,生精上皮厚度明显恢复,生精细胞数量增多,部分管腔内能够见到成熟精子,变性的间质细胞减少.结论:槲皮素能够修复由苯并(a)芘引起的大鼠生殖损伤,其机制可能与激活睾丸组织中碱基切除修复(base excision repair,BER)信号通路及抗氧化应激有关.

目的 探究慢性间歇性缺氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)合并高脂饮食(high-fat diet,HFD)对小鼠腓肠肌的作用及其可能机制.方法 通过模拟CIH、HFD建立阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea hypopnea syn-drome,OSAHS)合并肥胖小鼠模型.分为正常对照组(NC组)、CIH组、HFD组、CIH+HFD组.采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察各组小鼠腓肠肌结构变化,采用三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)酶染色分析腓肠肌中肌纤维类型的改变,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测小鼠腓肠肌细胞中MHC同工型基因(MHC1、MHC2)和线粒体功能相关基因(Cs、Ant、NQ01、Hmox1、OGG1)的mRNA表达水平,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测细胞凋亡相关蛋白(cleaved-caspase-3)、线粒体融合蛋白(Mfn1、Mfn2、OPA1)及线粒体分裂蛋白(Drp1 Ser616、Fis1)的表达.结果 与NC组比较,CIH+HFD组小鼠的腓肠肌结构明显损伤,同时腓肠肌中Ⅰ型肌纤维减少,Ⅱ型肌纤维增加,腓肠肌细胞中MHC1mRNA表达水平下降、MHC2mRNA表达水平增加;另外,CIH+HFD组小鼠腓肠肌细胞中cleaved-caspase-3蛋白和线粒体分裂蛋白(Drp1 Ser616、Fis1)的表达明显上调,线粒体融合相关蛋白Mfn1表达下调.结论 CIH合并HFD能导致小鼠腓肠肌结构及功能损伤,该作用可能与线粒体动力学紊乱引起的线粒体功能障碍有关.

目的:探讨在顺铂诱导的急性肾损伤(AKI)中8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶(OGG1)的作用及机制.方法:48只8-10周龄C57BL/6雄性小鼠构建动物模型.24只分为4组,每组6只,分别经腹注射顺铂干预0 h、24 h、48 h和72 h.剩余小鼠也随机分为4组,即生理盐水对照组、顺铂组、OGG1抑制剂组(Th5487组)和顺铂+Th5487组.分别在腹腔注射生理盐水或顺铂和Th5487.留取血液测定肌酐、尿素氮,取肾组织进行病理分析,检测肾组织8-氧代鸟嘌呤含量和超氧化物歧化酶活力,RT-qPCR测定mRNA水平,Western Blot验证OGG1和炎症蛋白表达情况.利用顺铂诱导小鼠肾小管上皮细胞建立体外模型,检测线粒体膜电位改变、活性氧生成情况和蛋白表达变化.结果:在顺铂诱导的AKI模型中,OGG1表达上调,环鸟苷酸-腺苷酸合成酶-干扰素基因刺激因子(cGAS-STING)信号轴及炎症反应激活;Th5487可抑制顺铂诱导的组织损伤、cGAS-STING信号轴的激活及炎性反应;在体外,Th5487可减少顺铂诱导的细胞中ROS含量升高及线粒体膜去极化.结论:在顺铂诱导的AKI过程中,OGG1可通过cGAS-STING信号促进肾脏损伤及炎症反应.

目的:探讨卷曲乳酸杆菌对宫颈癌细胞迁移、侵袭能力的影响及其机制.方法:将卷曲乳酸杆菌与宫颈鳞癌SiHa细胞在合适条件下共培养,Transwell实验观察共培养前、后细胞迁移和侵袭能力的变化.分别采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、western blotting法检测 ABCG2、PCNA、ATM、TDG、LIG1、OGG1、HMGB1基因和蛋白表达.结果:共培养 18 h和24 h后,卷曲乳酸杆菌能有效抑制SiHa细胞的迁移和侵袭(P＜0.001).同时,与宫颈癌相关的致癌基因PCNA、ATM和LIG1表达水平在共培养12 h后开始显著下降(P＜0.05);OGG1和HMGB1表达水平在共培养18 h后开始出现显著下降(P＜0.05);ABCG2和TDG表达水平在共培养前、后未出现明显变化(P＞0.05).另外PCNA、OGG1和HMGB1蛋白表达水平在共培养12 h后开始呈现显著性下降(P＜0.05),ABCG2、LIG1和ATM蛋白表达水平在共培养18 h后开始出现显著下降(P＜0.05),TDG蛋白表达水平在共培养前、后未出现明显变化(P＞0.05).结论:卷曲乳酸杆菌可以有效抑制宫颈癌SiHa细胞的迁移和侵袭,并抑制PCNA、ATM、LIG1、OGG1、HMGB1等致癌基因的表达.