目的:探讨N6-甲基腺苷(m6A)修饰与非小细胞肺癌(NSCLC)淋巴结转移的相关性。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载NSCLC患者的转录组测序数据，共包含1 037例原发肺癌组织样本和108例癌旁组织样本。分析参与m6A修饰过程的调控蛋白在肿瘤组织和癌旁正常组织样本中表达水平的差异，利用加权基因共表达分析(WGCNA)算法识别与m6A调控因子存在共表达关系的信使RNA(mRNA)和非编码RNA(ncRNA)并根据RNA的表达模式对NSCLC患者进行共识聚类。采用 t检验比较聚类亚组间m6A甲基化丰度的差异，采用 χ2检验比较组间淋巴结转移发生率的差异。 结果:共纳入20个m6A调控因子，肿瘤组织中15个调控因子的表达水平显著上调[甲基转移酶样蛋白3(METTL3)、YTH结构域蛋白1(YTHDC1)、YTH结构域结合蛋白1-3(YTHDF1-3)、异质核核糖蛋白A2B1(HNRNPA2B1)和HNRNPC、ALK B同源物5(ALKBH5)等]，3个调控因子显著下调[M0ETTL14、含锌指CCCH结构域蛋白13(Zc3h13)、脂肪和肥胖相关蛋白(FTO)]，差异有统计学意义( P<0.05)，YTHDC2和METTL16差异无统计学意义。通过WGCNA算法识别出454个与调控因子存在共表达关系的mRNAs和400个ncRNAs[325个长链非编码RNAs(lncRNAs)、23个微小RNAs(miRNAs)、28个核仁小RNAs(snoRNAs)、24个核内小RNAs(snRNAs)]。根据854个RNAs的表达模式进行共识聚类，将NSCLC患者分为2个聚类亚组(聚类1和聚类2)。WT1相关蛋白WTAP( t＝14.322， P<0.01)和HNRNPC( t＝15.424， P<0.01)等11个调控因子的表达水平在聚类1中均显著上调，其他9个调节因子在聚类亚组间差异无统计学意义，聚类1患者具有较高的m6A甲基化丰度。聚类1患者淋巴结转移发生率38.16%(292/765)明显高于聚类2组的22.27%(55/247)，差异有统计学意义( χ2＝19.487， P<0.01)。 结论:通过m6A甲基化与非小细胞肺癌淋巴结转移的相关分析，有助于探讨肺癌淋巴结转移相关机制。

目的:探讨甲基转移酶样蛋白14（methyltransferase like 14，METTL14）通过m6A修饰的方式调控细胞周期蛋白L2（cyclin L2，CCNL2）对乳腺癌（breast cancer，BC）细胞增殖与侵袭的影响。方法:收集2018年8月至2020年2月烟台山医院乳腺癌患者的癌组织和癌旁组织，高效液相色谱/质谱（HPLC/MS）定量与qRT-PCR检测组织中m6A、METTL14、CCNL2的表达水平。双荧光素酶报告实验、qRT-PCR、Western blot验证METTL14与CCNL2的调控关系。RIP实验验证YTH家族蛋白2(YTH domain-containing family protein, YTHDF2)与CCNL2的调控关系。MTT法检测细胞活性，Transwell检测细胞侵袭能力。结果:与正常细胞（0.24±0.02）及组织（0.18±0.02）相比，乳腺癌细胞MCF-7（0.47±0.03， t=11.05， P<0.001）和HS-578T细胞（0.41±0.03， t=8.17， P=0.001）及乳腺癌组织（0.39±0.02， t=12.86， P<0.001）中m6A水平升高。与正常组织（1.00±0.26）、（0.84±0.07）相比，乳腺癌组织中METTL14mRNA（1.57±0.28， t=13.50， P<0.001）与蛋白水平（1.66±0.11， t=10.89， P<0.001）显著升高。与对照组（100.00±10.11）、（1.00±0.12）相比，sh-METTL14组中乳腺癌细胞侵袭能力（54.15±6.21， t=6.69， P=0.003）与活性（0.64±0.06， t=4.65， P=0.010）均减弱。与对照组（100.00±11.05）、（1.00±0.13）相比，过表达METTL14组中乳腺癌细胞侵袭能力（175.31±13.45， t=7.49， P=0.002）与活性（2.16±0.16， t=9.75， P=0.001）均增强；m6A抑制剂处理后，METTL14对细胞侵袭（137.41±12.64， t=3.56， P=0.024）和活性（1.64±0.15， t=5.59， P=0.005）的作用均被部分反转。与正常组织相比，CCNL2在乳腺癌组织中表达下调，CCNL2与METTL14的相互作用关系被证实，与对照组（1.00±0.10）（0.64±0.05）相比，敲减METTL14可使CCNL2 mRNA（1.67±0.13， t=7.08， P=0.002）与蛋白（1.09±0.09， t=7.57， P=0.002）表达上调。METTL14敲除通过YTHDF2依赖的途径增强CCNL2 mRNA的稳定性，较sh-METTL14组（50.47±5.16）、（0.52±0.05）相比，sh-METTL14+sh-CCNL2组乳腺癌细胞侵袭能力（71.69±6.41， t=4.47， P=0.011）与活性（0.64±0.05， t=2.94， P=0.042）均有所提高。 结论:METTL14通过m6A修饰的方式抑制CCNL2的表达进而提高乳腺癌细胞侵袭与活性。

目的:探讨行肺癌根治术患者Yes相关蛋白1（YAP1）、YTH结构域连接蛋白2（YTHDF2）、miRNA-888-3p（miR-888-3p）的表达情况，及其对患者近期预后的预测价值。方法:选择2015年5月至2022年5月山西省肿瘤医院420例行肺癌根治术的肺癌患者，通过计算机产生随机数法以2∶1将其分为建模集（280例）、验证集（140例）；选择手术切除的癌旁正常肺组织（距离癌组织边缘>5 cm）作为对照。采用蛋白质印迹法检测建模集癌组织、癌旁组织YAP1、YTHDF2蛋白相对表达量，实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-888-3p相对表达量。统计患者随访1年预后情况，建模集患者出现复发、转移或癌因性死亡为预后不良组，其余患者为预后良好组。比较两组患者YAP1蛋白、YTHDF2蛋白、miR-888-3p相对表达量及一般资料；采用Cox比例风险模型分析建模集肺癌根治术近期预后的影响因素；构建肺癌根治术近期预后的Nomogram预测模型并验证其效能。结果:建模集癌组织、癌旁组织miR-888-3p相对表达量分别为0.49±0.08和0.16±0.05，差异有统计学意义（ t＝58.53， P<0.001）；YAP1蛋白的相对表达量分别为0.48±0.06、0.12±0.03，差异有统计学意义（ t＝89.80， P<0.001）；YTHDF2蛋白的相对表达量分别为0.23±0.04、0.59±0.07，差异有统计学意义（ t＝74.72， P<0.001）。建模集随访1年，32例失访，其余248例中81例（32.66%）预后不良（预后不良组），167例（67.34%）为预后良好组。与预后良好组比较，预后不良组癌组织YAP1蛋白、miR-888-3p相对表达量均升高（均 P<0.05），YTHDF2蛋白相对表达量降低（ P<0.05）；预后不良组吸烟、冠心病、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤长径≥5 cm、组织分化程度未/低分化的患者比例均高，体力状况（PS）评分升高，术后规律放化疗患者比例降低（均 P<0.05）。多因素Cox回归分析结果显示，吸烟（ HR＝2.098，95% CI 1.143~3.852， P＝0.009）、TNM分期（ HR＝2.421，95% CI 1.350~4.341， P＝0.002）、肿瘤长径（ HR＝1.883，95% CI 1.036~3.424， P＝0.011）、组织分化程度（ HR＝3.133，95% CI 1.590~6.173， P<0.001）、术后规律放化疗（ HR＝0.417，95% CI 0.219~0.797， P＝0.003）、YAP1（ HR＝7.043，95% CI 2.842~17.452， P<0.001）、YTHDF2（ HR＝0.560，95% CI 0.418~0.752， P<0.001）、miR-888-3p（ HR＝4.100，95% CI 1.789~9.394， P<0.001）是肺癌根治术近期预后的独立影响因素。建立Nomogram预测模型，内部验证显示模型的一致性指数为0.822（95% CI 0.774~0.870）；受试者工作特征曲线结果显示，Nomogram预测模型预测建模集肺癌根治术近期预后的灵敏度为97.5%（95% CI 86.8%~99.9%），特异度为82.4%（95% CI 73.0%~89.6%），曲线下面积（AUC）为0.943（95% CI 0.889~0.976）；预测验证集肺癌根治术近期预后的灵敏度为91.5%（95% CI 81.3%~97.2%），特异度为81.5%（95% CI 71.3%~89.2%），AUC为0.922（95% CI 0.865~0.961）。 结论:YAP1、YTHDF2、miR-888-3p均是肺癌根治术近期预后的影响因素，据此构建的Nomogram预测模型对肺癌根治术近期预后具有良好的预测效能。

目的:分析非小细胞肺癌(NSCLC)脑转移患者血清YTH结构域家族结合蛋白3(YTHDF3)的表达水平及其诊断价值。方法:本研究为横断面研究。采用非随机抽样的方法，选取2022年6月至2023年6月就诊于空军军医大学唐都医院的NSCLC脑转移患者50例作为NSCLC脑转移组，NSCLC Ⅳ期非脑转移患者70例作为NSCLC Ⅳ期非脑转移组，NSCLC淋巴结转移患者60例作为NSCLC淋巴结转移组，体检健康者54名作为健康组，比较4组血清YTHDF3表达水平。收集并比较NSCLC脑转移组与NSCLC Ⅳ期非脑转移组血清传统肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、铁蛋白(FR)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、糖类抗原50(CA50)、鳞状细胞相关抗原(SCCA)、细胞角蛋白19片段(CK19)]水平。采用受试者操作特征(ROC)曲线评估血清YTHDF3与传统肿瘤标志物的NSCLC脑转移的诊断效能。结果:NSCLC脑转移组男24例，女26例；年龄(59.8±10.1)岁，年龄范围为36～83岁；腺癌29例(58.0%)，鳞癌21例(42.0%)。NSCLC Ⅳ期非脑转移组男41例，女29例；年龄(58.5±10.1)岁，年龄范围为29～78岁；腺癌37例(52.9%)，鳞癌33例(47.1%)。NSCLC淋巴结转移组男34例，女26例；(59.4±8.5)岁，年龄范围为27～80岁。健康组男25例，女29例，年龄(58.2±16.6)岁，年龄范围为24～89岁。各组性别和年龄比较，差异均无统计学意义( P>0.05)。NSCLC脑转移组与NSCLC Ⅳ期非脑转移组病理类型比较差异无统计学意义( χ2＝0.31， P>0.05)。4组血清YTHDF3表达水平比较差异有统计学意义( H＝48.71， P<0.001)；NSCLC脑转移组血清YTHDF3水平高于NSCLC Ⅳ期非脑转移组、NSCLC淋巴结转移组和健康组，差异均有统计学意义[1 073.18(743.47，1 168.14) μg/L比754.98(602.30，861.49) μg/L、734.95(653.25，842.68) μg/L、665.94(564.00，728.10) μg/L，均 P<0.05]。NSCLC脑转移组与NSCLC Ⅳ期非脑转移组血清NSE表达水平比较差异有统计学意义[(16.72±6.66) μg/L比(15.50±4.47) μg/L， t＝5.49， P<0.05]，其他血清传统肿瘤标志物(CEA、FR、CA50、SCCA、CK19)水平比较差异均无统计学意义(均 P>0.05)。ROC曲线显示，单独检测血清YTHDF3的曲线下面积为0.754，最佳截断值为894.32 μg/L，敏感度为82.60%，特异度为56.50%；CEA、FR、NSE、CA50、SCCA、CK19的曲线下面积和特异度均较低。血清YTHDF3与NSE、CK19、CA50、SCCA联合检测的曲线下面积、敏感度、特异度分别为0.769、70.20%、69.60%。 结论:NSCLC脑转移患者血清YTHDF3表达水平升高。检测血清YTHDF3对NSCLC脑转移具有较好的诊断价值。

目的:探讨N6-甲基腺嘌呤（m 6A）在结直肠癌组织中表达及临床意义。 方法:2021年9月至2021年12月，利用癌症基因组图谱（TCGA）和基因表达综合数据库（GEO）对结直肠癌中m 6A相关调控因子的表达进行汇总分析，对不同临床病理特征及分子分型下m 6A调控因子的基因表达进行对比统计，对不同表达m 6A的结直肠癌病例做生存分析。 结果:在TCGA数据库中，胰岛素样生长因子2 mRNA绑定蛋白1（IGF2BP1），胰岛素样生长因子2 mRNA绑定蛋白3（IGF2BP3）和YTH结构域m6A RNA结合蛋白1（YTHDF1）在结直肠癌组织中较正常组织高表达（TCGA-COAD比IGF2BP3：12.80比204.46，logFC=4.00， P=0.003；YTHDF1：2 347.56比3 712.77，logFC=0.66， P < 0.001；TCGA-READ比IGF2BP1：6.20比359.32，logFC=5.82， P=0.007；YTHDF1：2 470.10比4 369.09，logFC=0.82， P=0.020）；将TCGA和GEO数据库做交集后，发现甲基转移酶样14（METTL14）、YTH结构域m6A RNA结合蛋白3（YTHDF3）和α-酮戊二酸依赖的加双氧酶AlkB同源蛋白5（ALKBH5）均在结直肠癌组织中下调（TCGA-COAD比METTL14：1 051.56比711.40，logFC=-0.56， P < 0.001；YTHDF3：4 613.85比3 155.05，logFC=-0.55， P < 0.001；ALKBH5：4 250.10比2 555.55，logFC=-0.73， P < 0.001；TCGA-READ比METTL14：1 113.3比674.36，logFC=-0.72， P < 0.001；YTHDF3：5 034.30比3 331.95，logFC=-0.60， P=0.004；ALKBH5：4 902.20比2 529.71，logFC=-0.95， P < 0.001；GEO-CRC比METTL14：6.58比6.33，logFC=-0.06， P < 0.001；YTHDF3：6.28比6.20，logFC=-0.02， P=0.002；ALKBH5：5.07比4.98，logFC=-0.02， P < 0.001）。在不同分子分型结直肠癌中IGF2BP2、HNRNPC、TP53和YTHDF2在KRAS突变中低表达（IGF2BP2：48.53比44.04， t=2.64， P=0.008；HNRNPC：121.30比112.60， t=2.32， P=0.020；TP53：65.30比60.26， t=2.11， P=0.034；YTHDF2：54.07比51.19； t=1.97， P=0.048）。不同临床病理特征分析显示，IGF2BP1在淋巴结阳性（8.97比6.11，W=20 008， P=0.002）、存在远处转移（8.94比6.41，W=19 104， P=0.009）及Ⅲ~Ⅳ期（7.46比7.13，W=8 779， P=0.025）的结直肠癌中较对照组升高。ALKBH5高表达、高龄、存在脉管侵犯和病理分期晚与较短生存期显著相关（ALKBH5高表达比ALKBH5低表达：5.85年比NA， HR：1.63，95% CI：1.071~2.491， P=0.021。> 68岁比 < 68岁：6.78年比NA，HR：1.59，95% CI：1.049~2.422， P=0.047。Ⅲ~Ⅳ期比Ⅰ~Ⅱ期：4.55年比8.33年， HR：2.89，95% CI：1.895~4.425， P < 0.001。有静脉侵犯比无静脉侵犯：5.48年比NA， HR：2.82，95% CI：1.672~4.783， P < 0.001）与生存时间短具有明显相关性。 结论:m 6A中的部分调控因子与结直肠癌的生物学特征及预后相关。

目的:探讨甲基转移酶3（Mettl3）在血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）诱导周细胞向肌成纤维细胞转分化及肾脏纤维化过程中的作用及相关机制。方法:使用C57BL/6J小鼠，（1）细胞实验中，采用磁珠分选法培养纯化小鼠肾脏周细胞，并予以1×10 6 mmol/L的Ang Ⅱ诱导周细胞-肌成纤维细胞转分化，为Ang Ⅱ组；正常培养的周细胞为对照组。采用免疫荧光染色、蛋白质印迹（Western blot）及实时反转录PCR（RT-qPCR）检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）以验证转分化成功。采用斑点印迹、RT-qPCR、Western blot检测N6-甲基腺苷（m6A）修饰水平及相关酶［Mettl3、Mettl14、Wilms肿瘤蛋白1相关蛋白（WTAP）、肥胖相关蛋白（FTO）、ALKB同源蛋白5（ALKBH5）、YTH结构域家族蛋白（YTHDF）1、YTHDF2、YTHDC1、YTHDC2、YTHDC3］的表达水平。采用慢病毒转染Mettl3 shRNA的方法抑制细胞中的Mettl3表达，为sh-Mettl3组、Ang Ⅱ+sh-Mettl3组；以转染慢病毒空载体作为阴性对照，为Ang Ⅱ+sh-NC组，观察Ang Ⅱ对周细胞转分化的影响，并检测下游磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信号通路蛋白的表达，包括PI3K、AKT（丝氨酸磷酸化位点473）［p-AKT（S473）］、AKT（苏氨酸磷酸化位点308）［p-AKT（T308）］等。加入放线菌素D与各组周细胞共培养以抑制PI3K基因的转录，通过检测不同共培养时间残余PI3K mRNA表达量以计算PI3K mRNA半衰期。在Ang Ⅱ+sh-Mettl3组周细胞中加入AKT激动剂SC79，观察是否可逆转Mettl3抑制对Ang Ⅱ诱导周细胞-肌成纤维细胞转分化的作用。（2）动物实验中，分为假手术组（仅给予0.9%无菌生理盐水）、Ang Ⅱ组（泵入Ang Ⅱ溶液）、sh-Mettl3组（注射Mettl3 shRNA慢病毒溶液）、Ang Ⅱ+sh-Mettl3组（泵入Ang Ⅱ溶液+注射Mettl3 shRNA慢病毒溶液）、Ang Ⅱ+sh-Mettl3+SC79组（Ang Ⅱ+sh-Mettl3组处理基础上注射SC79），每组6只。手术前后采用尾夹法测定血压，术后4周测定血清肌酐、尿素含量及尿液白蛋白含量。28 d后取肾脏组织，采用苏木精-伊红（HE）及Masson三色法对组织切片进行染色，检测肾脏纤维化程度。 结果:（1）磁珠分选法可获得原代肾脏周细胞，以1×10 6 mmol/L的Ang Ⅱ处理周细胞48 h可成功诱导其向肌成纤维细胞转分化。斑点印迹结果显示，Ang Ⅱ组总RNA的m6A修饰水平高于对照组（ P<0.05），RT-qPCR及Western blot结果显示，与对照组相比，Ang Ⅱ组中Mettl3 mRNA及蛋白表达水平上调（ P均<0.05）。Ang Ⅱ+sh-Mettl3组细胞中的Mettl3蛋白表达水平低于Ang Ⅱ组，α-SMA、波形蛋白、肌间线蛋白、成纤维细胞激活蛋白a（FAPa）以及Ⅰ型胶原蛋白的表达水平亦低于Ang Ⅱ组（ P均<0.05）。与对照组相比，Ang Ⅱ组的PI3K mRNA表达水平上调，且p-AKT（S473）和p-AKT（T308）蛋白高表达；Ang Ⅱ+sh-Mettl3组的PI3K mRNA表达水平低于Ang Ⅱ组，p-AKT（S473）和p-AKT（T308）蛋白表达下调（ P均<0.05）。Ang Ⅱ+sh-Mettl3组的半衰期短于Ang Ⅱ+sh-NC组（2.34 h比3.42 h）。而Mettl3抑制对Ang Ⅱ诱导周细胞-肌成纤维细胞转分化的改善作用可被SC79逆转。（2）动物实验结果显示，与假手术组比较，Ang Ⅱ组小鼠的血压更高，血清肌酐、尿素及24 h尿蛋白测量值更高，纤维化面积更大（ P均<0.05）；而Ang Ⅱ+sh-Mettle3组的纤维化面积小于Ang Ⅱ组（ P<0.05），但在加入SC79后肾脏纤维化又加重。 结论:Mettl3介导的RNA m6A表观遗传调控参与Ang Ⅱ诱导的肾脏周细胞-肌成纤维细胞转分化及肾脏纤维化，Mettl3可能通过影响PI3K的稳定性，进而影响PI3K/AKT信号通路发挥调控作用。

目的 探讨牙龈卟啉单胞菌(Pg)感染食管癌细胞后对YTHDF2及凋亡相关因子(Fas)的影响,阐明其促进免疫逃逸可能的调控机制.方法 运用免疫组织化学法及Western blot法检测Pg感染食管癌与YTHDF2及Fas表达变化;运用免疫共沉淀验证YTHDF2和Fas蛋白间的相互作用;将体外培养的Pg感染后的KYSE150细胞通过慢病毒转染分为对照组(转染si-NC)和实验组(转染si-YTHDF2),Western blotting检测两组细胞中YTHDF2、组织蛋白酶B(CTSB)及Fas、FasL蛋白的表达水平;对Pg感染的KYSE150细胞用组织蛋白酶抑制剂(E64)进行处理,Western blotting分别检测抑制剂处理前后YTHDF2、CTSB、Fas及FasL蛋白的表达变化情况;Pg感染前后及E64处理的KYSE150细胞与人外周血单个核细胞(PBMC)共培养,运用流式细胞术检测T细胞相关效应分子的表达情况.结果 免疫组化法及Western blotting结果显示,Pg感染后的组织或细胞中YTHDF2的表达增强,而Fas表达减弱(P<0.001);免疫共沉淀结果显示,YTHDF2和Fas之间可直接相互作用;Western blotting结果显示,si-YTHDF2组细胞中CTSB表达量减低,而Fas及FasL的表达量高于si-NC组(P<0.001);用E64处理细胞后,CTSB表达减弱,YTHDF2表达无影响,而Fas及FasL的表达增强;流式细胞术结果显示,与PBMC共培养的细胞中,GranzymeB及Ki67表达由强到弱分别为Pg阴性、Pg阳性+E64、Pg阳性,而PD-1表达情况相反(P<0.001).结论 Pg感染依赖YTHDF2调节Fas的表达,协助食管癌免疫逃逸,从而促进食管癌发生发展,表明YTHDF2可能是一个新的调控食管癌免疫逃逸的关键分子.

目的 分析YTH结构域N6-甲基腺嘌呤RNA结合蛋白F1(YTHDF1)和真核翻译起始因子3C(EIF3C)在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达及临床意义.方法 回顾性分析2016年1月至2020年1月徐州医科大学附属医院初诊收治的130例EOC患者的临床资料,另选取同期因卵巢良性囊肿行手术治疗的70例患者的正常卵巢组织作为对照.采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测组织中YTHDF1 mRNA和EIF3C mRNA表达水平.采用免疫组化染色检测组织中YTHDF1蛋白和EIF3C蛋白表达情况.采用Pearson相关分析探讨YTHDF1 mRNA与EIF3C mRNA表达水平的相关性.分析YTHDF1蛋白、EIF3C蛋白表达情况与EOC患者临床病理特征的关联性.采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线.采用Cox回归分析EOC患者预后的影响因素.结果 EOC组织中YTHDF1 mRNA、EIF3C mRNA表达水平高于正常卵巢组织,差异有统计学意义(P＜0.05).EOC组织中YTHDF1蛋白、EIF3C蛋白阳性表达率高于正常卵巢组织,差异有统计学意义(P＜0.05).Pearson相关分析结果显示,EOC组织中YTHDF1 mRNA与EIF3C mRNA表达呈正相关(r=0.802,P＜0.001).EOC组织中YTHDF1蛋白、EIF3C蛋白表达情况与肿瘤FIGO分期、病理分级、淋巴结转移情况具有显著关联性(P＜0.05).YTHDF1阴性患者的生存预后优于阳性患者(log-rank检验:x2=6.120,P=0.013).EIF3C阴性患者的生存预后优于阳性患者(log-rank检验:x2=10.610,P=0.001).Cox回归分析结果显示,FIGO分期Ⅲ期、病理分级Ⅲ级、淋巴结转移、较高的CA125水平以及YTHDF1蛋白、EIF3C蛋白阳性表达是EOC患者不良预后的独立危险因素.结论 EOC组织中YTHDF1、EIF3C表达升高,与不良临床病理特征有关.YTHDF1和EIF3C是潜在的评估EOC预后的生物标志物.

目的 检测m6A识别蛋白 YTHDF1和YTHDF2在ALS转基因小鼠脊髓中的表达变化,阐明其异常表达与ALS疾病进展的动态关系.方法 选取hSOD1G93A突变型ALS转基因小鼠与同窝野生型(WT)小鼠,分别在发病前期(出生后70 d)、发病早期(出生后95 d)、发病中期(出生后108 d)和发病晚期(出生后122 d)分离脊髓,Western blot和免疫荧光染色双标技术检测YTHDF1和YTHDF2在小鼠脊髓中的蛋白表达与定位,qRT-PCR检测小鼠脊髓中YTHDF1和YTHDF2 mRNA表达.结果 与WT小鼠相比,在70 d、95d、108 d和122 d ALS转基因小鼠脊髓中YTHDF1的mRNA水平和蛋白水平表达均降低,YTHDF2的mRNA水平和蛋白水平表达均升高.免疫荧光双标染色结果显示,在ALS转基因小鼠和WT小鼠脊髓前角均可检测到YTHDF1/神经元核抗原(NeuN)和YTHDF2/NeuN双阳性细胞,在疾病后期可检测到YTHDF1 和YTHDF2与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)双阳性细胞,提示YTHDF1和YTHDF2主要在脊髓神经元中表达.结论 YTHDF1和YTHDF2 在ALS转基因小鼠脊髓中表达异常与ALS脊髓运动神经元退变密切相关.

目的:探讨N6-甲基腺苷(m6A)甲基化酶甲基转移酶样蛋白3(METTL3)在体外调控人骨髓间充质干细胞(MSCs)向脂肪细胞分化的作用机制.方法:构建METTL3、AKT丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和YTH m6A RNA结合蛋白F2(YTHDF2)慢病毒载体,包装慢病毒并感染MSCs;采用成脂分化试剂盒诱导各组MSCs分化为脂肪细胞,利用油红O染色检测各组的脂肪细胞形成情况;采用分子克隆技术构建METTL3突变重组载体以证实METTL3的m6A关键位点对靶基因的调控作用;利用放线菌素D作用于YTHDF2过表达的MSCs以探究阅读蛋白YTHDF2对AKT1 mRNA和蛋白表达的影响;采用RNA pull-down结合银染和Western blot实验检测可能发生甲基化修饰的片段与识别蛋白的结合情况.结果:m6A甲基化酶METTL3以PPARγ/AKT1依赖的方式抑制骨髓MSCs的脂肪形成,并且以m6A修饰阅读蛋白YTHDF2依赖的方式抑制AKT1的蛋白表达.YTHDF2可识别并结合发生m6A修饰的AKT1编码序列(CDS),降低其表达水平,抑制MSCs脂肪形成过程.结论:m6A甲基化酶METTL3通过YTHDF2/AKT1/PPARγ通路调控人骨髓MSCs成脂分化过程.本研究为从肿瘤微环境角度寻找急性髓系白血病治疗新靶点提供了理论依据.