目的:探讨冬凌草甲素(Ori)调节Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路对骨质疏松(OP)大鼠成骨细胞凋亡的影响.方法:随机选取10只大鼠为假手术组仅分离但不切除卵巢,其余大鼠通过切除双侧卵巢建立OP模型,将造模成功的大鼠随机分为OP组、不同剂量Ori(5mg/kg Ori、10mg/kg Ori、20mg/kg Ori)组、20mg/kg Ori+Hippo/YAP 激活剂-Verteporfin(10mg/kg)组.干预后,收集腹主动脉血液,ELISA检测血清中骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(ALP)水平;分离股骨组织,双能X射线骨密度仪检测股骨矿含量、骨密度;HE检测股骨组织形态学变化;TUNEL检测成骨细胞凋亡变化;Western blot检测YAP、转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)蛋白表达.结果:假手术组大鼠股骨结构变化不明显,与假手术组相比,OP组股骨组织形态发生明 显改变,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨 密度、YAP、TAZ蛋白表达显著降低(P＜0.05),成骨细胞凋亡率显著增加(P＜0.05);与OP组相比,5mg/kg Ori组、10mg/kg Ori组、20mg/kg Ori组股骨组织形态得到改善,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨密度、YAP、TAZ蛋白表达显著增加(P＜0.05),成骨细胞凋亡率显著降低(P＜0.05),不同剂量Ori间具有统计差异(P＜0.05);与20mg/kg Ori组相比,20mg/kg Ori+V erteporfin组股骨组织形态变化加重,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨密度、YAP、TAZ蛋白表达显著降低(P＜0.05),成骨细胞凋亡率显著增加(P＜0.05).结论:Ori调节Hippo/YAP信号通路减少OP大鼠成骨细胞凋亡,减轻OP大鼠症状.

目的:探讨G蛋白耦联受体30(GPR30)与Hippo-Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路在甲状腺乳头状癌发生、发展中的影响。方法:收集福建医科大学附属第二医院2019年9月至2020年4月之间40例甲状腺乳头状癌及癌旁组织标本，分析GPR30、YAP、TAZ mRNA及蛋白表达，并分析三者mRNA表达量与甲状腺乳头状癌病理资料之间的关系。采用GPR30特异性激动剂G1及抑制剂G15处理人甲状腺乳头状癌细胞系(TPC-1)，分析GPR30、YAP、TAZ表达变化。采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪等检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡，细胞衰老的检测应用β-半乳糖苷酶染色法，细胞迁移侵袭采用Transwell实验。采用配对 t检验分析各组数据差异。用 t检验评估GPR30、YAP、TAZ表达与具体病理资料之间的关系。用皮尔森(Person)相关分析评估GPR30表达量与YAP、TAZ表达量的关系。 结果:40例甲状腺乳头状癌组织中GPR30、YAP、TAZ的表达在转录及翻译水平均明显高于癌旁组织(癌与癌旁mRNA相对表达量分别为3.438±0.123比2.463±0.747， t＝7.786， P<0.01；3.325±0.111比2.638±0.541， t＝8.285， P<0.01；2.581±0.089比2.041±0.418， t＝8.068， P<0.01；癌及癌旁蛋白相对表达量分别为1.838±0.074比1.172±0.211， t＝13.333， P<0.01、1.735±0.152比1.200±0.321， t＝7.641， P<0.01、2.265±0.024比1.310±0.301， t＝13.915， P<0.01)，差异均有统计学意义。GPR30的mRNA表达与淋巴结转移(3.519±0.094比3.328±0.096， t＝3.786， P<0.01)和肿瘤大小(<2 cm为3.424±0.116，≥2 cm为3.600±0.099， t＝2.553， P<0.05)明显相关，与年龄、性别、腺外侵犯、病灶数量无明显相关。YAP、TAZmRNA表达与淋巴结转移(3.395±0.105比3.283±0.093， t＝3.519， P<0.01；2.627±0.117比2.554±0.053， t＝2.686， P<0.05)明显相关，与年龄、性别、肿瘤大小、腺外侵犯、病灶数量无明显相关。GPR30特异性激动剂G1处理TPC-1细胞后，GPR30 mRNA表达量高于对照组(1.224±0.067比0.976±0.048， t＝5.212， P<0.01)，YAP、TAZ表达量高于对照组(分别为1.359±0.096比0.995±0.004， t＝6.562， P<0.01；1.311±0.024比0.985±0.066， t＝8.040， P<0.01)，促进细胞的增殖(0.381±0.002、0.523±0.003、0.754±0.004比0.359±0.004、0.476±0.003、0.665±0.003， t＝8.521、19.190、30.830， P<0.01)、侵袭(422.33±7.23比210.00±3.61， t＝45.510， P<0.01)、迁移(550.67±10.69比229.67±8.33， t＝41.030， P<0.01)，抑制细胞的衰老(0.052±0.001比0.094±0.001， t＝51.440， P<0.01)、凋亡[(1.8±0.2)%比(5.8±0.3)%， t＝19.220， P<0.01]，差异均有统计学意义。 结论:GPR30、YAP、TAZ的的高表达可能与甲状腺乳头状癌淋巴结转移以及预后相关，GPR30可能通过Hippo-TAZ/YAP通路促进甲状腺乳头状癌的发生、发展。

目的:探讨外源性硫化氢(H 2S)对心肌梗死(心梗)后大鼠心肌纤维化和心肌细胞凋亡的影响及其机制。 方法:43只SD大鼠按随机数字表法分为4组：对照组12只、心梗组13只、硫化氢组6只和心梗+硫化氢组12只。采用异丙肾上腺素腹腔注射法(50 mg/kg，1次/d，共2 d)建立急性心梗大鼠模型，末次给药后48 h记录心电图及肌钙蛋白变化确定造模情况。造模成功后，心梗组和心梗+硫化氢组大鼠每日腹腔注射硫氢化钠(56 μmol/kg，1次/d，持续6周)。6周后比较各组大鼠心脏彩色超声观察心功能变化情况，Masson染色观察各组大鼠心肌胶原容积分数，TUNEL染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡率，酶联免疫吸附(Western blot)法检测Yes相关蛋白1(YAP1)、含有PDZ结合基序的转录共激活因子(TAZ)、哺乳动物STE20样激酶2(MST2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)、基质金属蛋白酶3(MMP3)/基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP2)比值、B细胞淋巴瘤因子(Bcl-2)等蛋白在各组大鼠心肌组织的表达变化情况。结果:与对照组比较，心梗组大鼠心肌胶原容积分数增加( P<0.05)，心肌细胞凋亡率升高( P<0.05)，心肌组织YAP1、TAZ、MST2、Bax、Caspase-3蛋白表达及MMP3/TIMP2比值增加(均 P<0.05)，而Bcl-2蛋白表达降低( P<0.05)；心梗+硫化氢组较心梗组大鼠心肌组织中胶原容积分数减少( P<0.05)，心肌细胞凋亡率降低( P<0.05)，心肌组织YAP1(2.406±0.024比2.830±0.063)、TAZ(0.964±0.090比1.329±0.018)、MST2(0.780±0.082比1.788±0.097)、Bax(1.500±0.008比0.613±0.003)、Caspase-3(0.620±0.024比0.780±0.012)蛋白表达及MMP3/TIMP2比值降低(均 P<0.05)，而Bcl-2蛋白表达升高( P<0.05)。 结论:硫化氢可改善心梗后心肌纤维化，该作用与抑制YAP1/TAZ信号通路表达和减少心肌细胞凋亡有关。

目的 探究扁蒴藤素(PM)调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路对创伤性关节炎(PTOA)大鼠的治疗作用.方法 将SD雄性大鼠随机分为对照组、PTOA组、低剂量PM组(PM-L组,100 mg/kg PM)、高剂量PM组(PM-H组,200 mg/kg PM)和高剂量PM+YAP抑制剂VTPF组(PM-H+VTPF组,200 mg/kg PM+10 mg/kg VTPF),每组12 只.记录大鼠热痛阈值、压痛阈值的变化.HE染色观察大鼠软骨组织病理学变化,并进行Mankin's评分,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠软骨组织中炎症因子一氧化氮(NO)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-3 水平.TUNEL染色观察大鼠软骨组织细胞凋亡的情况.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测大鼠软骨组织TAZ、IL-1β、TNF-α mRNA水平.Western Blot检测大鼠软骨组织YAP/TAZ信号通路相关蛋白的表达情况.结果 与对照组相比,PTOA组大鼠热痛阈值、压痛阈值、软骨组织YAP磷酸化水平、TAZ蛋白水平与mRNA水平显著降低(P<0.05),软骨组织IL-1β、TNF-α及其mRNA水平、NO、MMP-1、MMP3 水平、细胞凋亡率、Mankin's评分显著升高(P<0.05),HE显示软骨层变薄,结构不清晰,软骨细胞大量丢失、排列紊乱.与PTOA组相比,PM-L组、PM-H组大鼠相关指标变化与上述相反(P<0.05),软骨组织病变减轻.YAP抑制剂VTPF减轻了PM对PTOA的治疗作用.结论 PM可能通过激活YAP/TAZ信号通路,对PTOA大鼠具有一定的治疗作用.

目的 探讨橄榄苦苷(OL)通过调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路对膝骨关节炎(KOA)大鼠滑膜炎症的影响.方法 采用改良的Hulth法构建KOA大鼠模型,并随机分为Model组、低剂量OL组(20 mg/kg)、高剂量OL组(40 mg/kg)、高剂量OL+VT103组(40 mg/kg+10 mg/kg YAP/TAZ抑制剂),每组12只,另取12只大鼠作为正常对照组(NC组).观察各组大鼠的情况,Lequesne MG评分对各组大鼠行为学进行评估;ELISA试剂盒检测大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的表达;苏木精-伊红(HE)染色检测大鼠滑膜组织的病理损伤;qRT-PCR法检测滑膜组织中YAP和TAZ mRNA的表达;Western blot检测大鼠滑膜组织中YAP、磷酸化YAP(p-YAP)、磷酸化TAZ(p-TAZ)、TAZ、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达.结果 与NC组比较,Model组大鼠Lequesne MG评分升高、血清中 TNF-α 和 IL-6 的表达增加、YAP 和 TAZ mRNA 表达增加、p-YAP/YAP、p-TAZ/TAZ、Bax 蛋白表达升高(P＜0.05);与 Model组比较,低剂量、高剂量OL组大鼠Lequesne MG评分降低、血清中TNF-α和IL-6的表达减少、YAP和TAZ mRNA表达减少、p-YAP/YAP、p-TAZ/TAZ、Bax蛋白表达降低(P＜0.05);VT103可明显减弱OL对KOA大鼠滑膜组织的保护作用(P＜0.05).结论 OL可能通过激活YAP/TAZ信号通路减轻膝骨关节炎大鼠滑膜炎症.

观察白藜芦醇(resveratrol,Res)通过调控Hippo信号通路对卵巢低反应(poor ovarian response,POR)小鼠卵巢功能的保护作用,探析Res抑制卵巢细胞凋亡的可能机制.将筛选后动情周期规律的雌性小鼠随机分成空白组,模型组以及Res低、高剂量组(20、40 mg·kg-1),每组20只.空白组给予等体积0.9％氯化钠溶液灌胃,模型组以及Res低、高剂量组小鼠给予雷公藤多苷混悬液(50 mg·kg-1)灌胃2周,造模完成后,Res低、高剂量组小鼠连续灌胃治疗2周,空白组和模型组给予等体积0.9％氯化钠溶液灌胃,于治疗结束次日对各组雌鼠进行促排操作.最后每组随机选取12只雌鼠进行取材,将每组剩余的8只雌鼠与雄鼠1∶1合笼.采用阴道脱落细胞涂片观察小鼠的动情周期变化,检测小鼠获卵数、卵巢湿重、卵巢指数和妊娠率,通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中抗缪勒管激素(anti-Mullerian hormone,AMH)、促卵泡生成素(follicle-stimulating hormone,FSH)、雌二醇(estradiol,E2)、促黄体生成激素(luteinizing hormone,LH)的含量;通过苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和脱氧核苷酸转移酶dUTP末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling,TUNEL)染色法观察卵巢组织形态和卵巢细胞凋亡情况;通过免疫组化法检测Yes相关蛋白(Yes-asso-ciated protein,YAP)1 和带有 PDZ 结合基序的转录共激活因子(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,TAZ)的蛋白表达,通过Western blot法检测哺乳动物Ste-20样激酶(mammalian sterile 20-like kinase,MST)1/2、大型肿瘤抑制因子(large tumor suppressor,LATS)1/2、YAP1、TAZ、B 淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2 关联 X的蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)蛋白表达水平的变化.结果发现,与空白组比较,模型组小鼠动情周期紊乱率升高,卵巢组织各级正常发育卵泡数量减少,闭锁卵泡增多,卵巢颗粒细胞凋亡量提高,获卵数下降,卵巢湿重与卵巢指数降低,血清中FSH和LH含量升高,AMH和E2含量下降,卵巢组织YAP1、TAZ蛋白表达水平降低,MST1/2、LATS1/2和Bax蛋白相对表达升高,YAP1、TAZ和Bcl-2蛋白相对表达降低,合笼后每胎胚胎数显著降低;与模型组比较,Res低、高剂量组小鼠动情周期紊乱率降低,卵泡数量和形态得到不同程度改善,卵泡闭锁量降低,卵巢颗粒细胞凋亡程度得到改善,获卵数升高,卵巢湿重与卵巢指数升高,血清中FSH和LH含量降低,AMH和E2含量升高,卵巢组织YAP1、TAZ蛋白表达水平升高,MST1/2、LATS1/2和Bax蛋白相对表达降低,YAP1、TAZ和Bcl-2蛋白相对表达升高,合笼后每胎胚胎数不同程度升高.综上,Res可以有效抑制小鼠卵巢细胞凋亡,改善卵巢反应性,其机制可能与调节Hippo通路中的关键分子有关.

目的 探讨槐耳多糖(PST)通过调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路对骨肉瘤(OS)细胞生物学行为的影响.方法 将OS细胞系G292细胞分为G292组(未做任何处理的G292细胞)、L-PST 组(1 μg/mL PST)、M-PST 组(2.5 μg/mL PST)、H-PST 组(5 μg/mL PST)、GA-017 组(10 μmol/L YAP/TAZ信号通路激活剂 GA-017 处理 G292 细胞)、H-PST+GA-017 组(5 μg/mL PST+10 μmol/L GA-017).CCK-8 法检测细胞活性;流式细胞术检测G292细胞凋亡;划痕实验以及Trans well法检测G292细胞迁移和侵袭;Western blot检测YAP/TAZ通路蛋白、EMT相关蛋白、凋亡蛋白水平.结果 PST抑制OS细胞系MG63、Saos-2、U20S、G292细胞活性,且G292细胞的A450最小,因此,以G292细胞为研究对象.与G292组相比,M-PST组、H-PST组G292细胞A450值、迁移率、侵袭数量以及vimentin、N-cadherin、Bcl-2、p-YAP/YAP、TAZ蛋白水平均显著下降(P＜0.05),细胞凋亡率、E-cadherin、Bax、cleaved-Caspase-3 蛋白水平显著升高(P＜0.05),GA-017 组呈现相反的趋势(P＜0.05),而 L-PST组没有显著差异(P＞0.05);GA-017削弱了 H-PST对G292细胞恶性行为的抑制作用.结论 PST可能通过抑制YAP/TAZ信号通路来抑制OS细胞的增殖、迁移和侵袭.

目的:探讨鸢尾素(Irisin)对绝经后骨质疏松(PMOP)大鼠骨代谢及Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路的影响.方法:采用双侧卵巢切除法构建 PMOP 大鼠模型,将所有实验大鼠分为对照组(Control组)、PMOP 组、鸢尾素低、中、高剂量组(Irisin-L、Irisin-M、Irisin-H 组)、鸢尾素高剂量+YAP抑制剂维替泊芬组(Irisin-H+VTPF 组);骨密度仪测定骨密度(BMD);Micro-CT 分析骨小梁的平均厚度(Tb.Th)、骨小梁面积百分比(Tb.Ar)、骨小梁数量(Tb.N)和骨小梁分离度(Tb.Sp);HE 染色观察股骨组织形态学变化;ELISA法检测大鼠血清中骨代谢标志物特异性碱性磷酸酶(BALP)、I 型前胶原氨基端前肽(PINP)、Ⅰ型胶原氨基端延长肽(PINP)、骨钙素(OC)、核结合因子-α1(CBF-α1)水平;West-ern blot法检测带pdz结合基序的转录共激活因子(TAZ)、YAP、p-YAP 蛋白表达水平.结果:与Control组比较,PMOP 组大鼠股骨组织的骨小梁结构紊乱,骨小梁厚度变薄,空骨陷窝明显,甚至发生轻微骨折,BMD、Tb.Th、Tb.Ar、Tb.N、BALP、P1NP、OC、CBF-α1、TAZ、YAP、p-YAP 表达水平显著降低,Tb.Sp显著升高(P<0.05);与PMOP 组比较,Irisin-L、Irisin-M、Irisin-H组大鼠股骨组织骨小梁结构逐渐排列有序,空骨陷窝减少,股骨组织损伤逐渐减轻,BMD、Tb.Th、Tb.Ar、Tb.N、BALP、P1NP、OC、CBF-α1、TAZ、YAP、p-YAP 表达水平依次显著升高,Tb.Sp依次显著降低(P<0.05);与Irisin-H组比较,Irisin-H +VTPF组大鼠股骨组织的骨小梁结构紊乱,空骨陷窝明显增加,股骨组织损伤加重,BMD、Tb.Th、Tb.Ar、Tb.N、BALP、P1NP、OC、CBF-α1、TAZ、YAP、p-YAP 表达水平显著降低,Tb.Sp显著升高(P<0.05).结论:鸢尾素可以通过激活Hippo-YAP 信号通路,调节绝经后骨质疏松大鼠骨代谢,防治骨质疏松.

目的:探讨他克莫司(FK506)调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响.方法:将对数生长期SKOV3 细胞分为对照组、阴性对照(si-NC)组(转染si-NC质粒)、沉默YAP载体(si-YAP)组(转染si-YAP)、过表达质粒阴性对照(pcDNA-NC)组(转染pcDNA-NC)、过表达YAP质粒(pcDNA-YAP)组(转染 pcDNA-YAP)、FK506 组(500μg/L)、FK506+si-NC 组(500μg/L FK506+转染si-NC质粒)、FK506+si-YAP组(500μg/L FK506+转染si-YAP)、FK506+pcDNA-NC组(500μg/L FK506+转染pcDNA-NC)、FK506+pcDNA-YAP组(500μg/L FK506+转染pcDNA-YAP).CCK-8 法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Tran-swell实验检测细胞侵袭,qRT-PCR 检测YAP、TAZ mRNA 表达,Western blot 检测YAP、TAZ、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、Bcl2-相关X蛋白(Bax)及细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达水平.结果:与IOSE80 相比,SKOV3、OVCAR3、UWB1.289 细胞中YAP、TAZ mRNA和蛋白表达水平显著增加(P＜0.05).与si-NC组相比,si-YAP组YAP、TAZ mRNA和蛋白表达水平、细胞活力、侵袭细胞数显著下降(P＜0.05),细胞凋亡率显著增加(P＜0.05);与pcDNA-NC组相比,pcDNA-YAP组YAP、TAZ mRNA和蛋白表达水平、细胞活力、侵袭细胞数显著增加(P＜0.05),细胞凋亡率显著降低(P＜0.05).与对照组相比,FK506 组细胞活力、侵袭数,YAP、TAZ mRNA表达,以及YAP、AZ、CyclinD1、MMP-2 蛋白表达均显著降低,凋亡率及Bax表达显著增加(P＜0.05);与FK506+si-NC组相比,FK506+si-YAP组细胞活力、侵袭数,YAP、TAZ mRNA表达,以及YAP、TAZ、CyclinD1、MMP-2 表达显著降低,凋亡率及Bax表达显著增加(P＜0.05);与FK506+pcDNA-NC组相比,FK506+pcDNA-YAP组细胞活力、侵袭数,YAP、TAZ mRNA表达,以及YAP、TAZ、CyclinD1、MMP-2 表达显著增加,凋亡率及Bax表达显著降低(P＜0.05).结论:FK506 通过抑制YAP/TAZ信号通路阻止SKOV3 细胞增殖、侵袭,诱导其凋亡.

Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)/作为Hippo信号通路级联的下游效应因子,在器官生长、组织再生、细胞增殖等中具有关键调控作用.在哺乳动物细胞中,Hippo通路的激酶级联反应通过磷酸化YAP/TAZ来抑制YAP/TAZ的活性,从而调控器官的大小和肿瘤的形成.上皮-间充质转化作为肿瘤转移的首发事件,是肿瘤发展的关键因素,而YAP/TAZ在调控肿瘤细胞上皮-间充质转化中具有重要作用.而作为核心的YAP/TAZ必将成为癌症和再生药物中最有吸引力的治疗靶点.