The highly conserved target of rapamycin(TOR)pathway plays an important role in aging across species.Previous studies have established that inhibition of the TOR complex 1(TORC1)significantly extends lifespan in Caenorhabditis elegans.However,it has not been clear whether TORC1 perturbation affects aging in a spatiotemporal manner.Here,we apply the auxin-inducible degradation tool to knock down endogenous DAF-15,the C.elegans ortholog of regulatory associated protein of TOR(Raptor),to char-acterize its roles in aging.Global or tissue-specific inhibition of DAF-15 during development results in various growth defects,whereas neuron-specific knockdown of DAF-15 during adulthood significantly extends lifespan and healthspan.The neuronal DAF-15 deficiency-induced longevity requires the intestinal activities of DAF-16/FOXO and PHA-4/FOXA transcription factors,as well as the AAK-2/AMP-activated protein kinase a catalytic subunit.Transcriptome profiling reveals that the neuronal DAF-15 knockdown promotes the expression of genes involved in protection.These findings define the tissue-specific roles of TORC1 in healthy aging and highlight the importance of neuronal modulation of aging.

研究灯盏细辛总咖啡酰奎宁酸(caffeoylquinic acid from Erigeron breviscapus,EBCQA)的抗衰老作用,并探讨其潜在作用机制.以线虫为模型,观察EBCQA对其寿命、氧化抗性、热抗性、运动能力、DAF-16入核、以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量的影响.腹腔注射D-半乳糖构建衰老大鼠模型,检测EBCQA对大鼠学习记忆能力、胸腺和脾脏系数、肝脏中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(Akt/protein kinase B,Akt)、磷酸化 Akt(phosphp-Akt,p-Akt)、叉头框蛋白 O3a(forkhead box class O3a,FOXO3a)、磷酸化 FOXO3a(phosphp-FOXO3a,p-FOXO3a)表达,以及肝脏和血清中SOD、GSH-Px、CAT活性和MDA含量的影响.结果显示,EB-CQA能够延长野生型线虫寿命,并提升其氧化抗性、热抗性和运动能力,但对线虫PI3K、Akt、FoxO3a同源体突变株寿命没有显著影响;EBCQA能促进DAF-16入核,通过DAF-16提升线虫的SOD、GSH-Px、CAT活性,降低MDA水平.在D-半乳糖诱导衰老大鼠中,EBCQA给药显著改善大鼠的学习记忆功能,提升胸腺和脾脏系数,降低PI3K、Akt、p-Akt、p-FoxO3a表达和MDA含量,增强SOD、GSH-Px、CAT活性.以上结果表明,EBCQA具有延缓衰老的作用,其机制可能与抑制PI3K和Akt激活、降低FOXO3a磷酸化、促进FOXO3a入核和转录活性、提升抗氧化酶活性和抑制氧化应激相关.

目的 研究棉子糖抗衰老活性并探讨其作用机制.方法 棉子糖(150、200、250 μmol·L-1)加到大肠杆菌中孵育秀丽隐杆线虫后,显微镜下观察线虫身体弯曲频率、头尾摆动频率、体长,观察热应激刺激下线虫的存活时间;通过脂褐素荧光强度检测评价棉子糖对线虫抗衰老能力的影响;采用DAF-16核定位测定和超氧化物歧化酶-3(SOD-3)表达测定研究其抗衰老的相关机制.结果 与对照组比较,棉子糖3个浓度均使线虫的身体弯曲频率加快(P＜0.001);200 μmol·L-1棉子糖使线虫头尾摆动频率加快(P＜0.01);体长测试结果显示棉子糖3个浓度均对线虫生长发育无毒害作用.热应激测试中,与对照组比较,棉子糖3个浓度均显著延长线虫在热应激条件下的存活时间(P＜0.05).脂褐素测试中,与对照组比较,棉子糖3个浓度均使线虫体内脂褐素含量显著降低(P＜0.01).DAF-16核定位测定中,棉子糖3个浓度均促进DAF-16蛋白入核表达.SOD-3表达测定中,与对照组比较,棉子糖250 μmol·L-1浓度组的SOD-3蛋白表达水平显著上升(P＜0.05),与DAF-16核定位测定一并说明棉子糖抗衰老活性依赖IIS分子信号通路.结论 棉子糖能够促进线虫的活动能力,对其生长发育无毒害性,并能延缓线虫的衰老速度,促进DAF-16蛋白入核表达,提高SOD-3蛋白表达水平,其抗衰老机制依赖IIS分子信号通路.

目的 探究天麻石油醚提取部位(Petroleum ether extract from Gastrodia elata,GEPEE)对秀丽隐杆线虫体内β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积的作用及可能机制.方法 以秀丽线虫为模式生物,实验分为空白组(Control组)、GEPEE 0.5 mg·mL-1组、GEPEE 1 mg·mL-1组,研究GEPEE对线虫瘫痪、寿命、运动能力、氧化应激和热应激、活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平、Aβ聚集实验的影响,用实时荧光定量PCR检测线虫体内与胰岛素/胰岛素样生长因子信号通路(Insulin/IGF-1 signaling pathway,IIS)相关基因表达的变化,并结合高效液相色谱技术分析其主要成分.结果 与Control组比较,GEPEE干预后,能明显改善线虫瘫痪表型(P<0.01),延长线虫寿命(P<0.01),增强线虫运动能力(P<0.01),并提高抵抗外界氧化胁迫(P<0.01)、高温的应激能力(P<0.01),改善Aβ在体内的沉积量(P<0.01),降低线虫体内ROS含量(P<0.01),降低Aβ、daf-2的表达水平(P<0.01),提高daf-16及其靶基因sod-3、gsh-px,hsf-1及其靶基因hsp-16.2,skn-1及其靶基因gst-4的表达水平(P<0.01),经高效液相色谱分析,其主要成分包括对羟基苯甲醇和对乙氧基苯甲醇.本实验表明GEPEE通过降低CL4176线虫体内的ROS水平,提机体抗氧化水平和调控IIS通路,从而降低CL4176线虫中Aβ诱导的毒性.结论 GEPEE能抑制Aβ蛋白毒性,其机制与调控IIS信号通路有关.

目的 以秀丽隐杆线虫为模式生物,探讨黄精枸杞胶囊的抗衰老活性.方法 将野生型N2 秀丽隐杆线虫同步化处理后分为对照组和药物干预组,观察黄精枸杞胶囊对秀丽隐杆线虫寿命、应激抵御能力、生殖能力、咽部泵送能力和运动能力的影响,同时对抗氧化相关指标超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)进行检测,考察对突变体线虫TJ356 DAF-16 基因核转位和对线虫AM141 多聚谷氨酰胺(polyQ)聚集的影响.结果 黄精枸杞胶囊能显著延长野生型秀丽隐杆线虫的寿命,增强其抗氧化应激和热应激、咽部泵送和运动能力,提高秀丽隐杆线虫体内SOD活性并降低其体内MDA水平,但对其生殖能力无明显影响;可促进 TJ356 线虫体内 DAF-16 的核转位,抑制 polyQ 在AM141 线虫体壁细胞中聚集.结论 黄精枸杞胶囊能延长线虫的健康寿命,其作用机制可能与通过调控 DAF-16/FOXO通路,增强应激抵御能力有关.

目的:利用秀丽隐杆线虫(以下简称线虫)模型,研究水苏糖在体内抗衰老活性及作用机制.方法:通过测定野生型N2 线虫的体长、头部摆动频率、脂褐素、氧化应激和热应激探讨水苏糖的抗氧化效果.通过测定转基因TJ356 线虫的衰变加速因子-16(DAF-16)蛋白核转位和CF1553 线虫体内超氧化物歧化酶-3(SOD-3)表达探讨水苏糖抗衰老的分子机制.结果:水苏糖显著改善了N2 线虫的头部摆动频率(P<0.001),降低了脂褐素的沉积(P<0.01),显著延长了线虫的耐热性(P<0.001).水苏糖能够促进 TJ356 线虫 DAF-16 核转位,显著提升CF1553 线虫体内SOD-3 蛋白的表达水平.结论:水苏糖的抗氧化效果显著,可能与胰岛素/胰岛素样生长因子 1 信号通路(IIS)的信号传导有关,通过促进DAF-16 的转录、激发SOD-3 的表达实现对细胞的保护作用.

目的:探究探讨异槲皮苷对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导毒性的转基因CL4176 秀丽隐杆线虫(以下简称线虫)的神经保护作用及其作用机制.方法:以转基因线虫CL4176 为模型,在显微镜下考察异槲皮苷对线虫瘫痪情况、寿命、运动能力、吞咽频率、活性氧(ROS)水平、抗氧化酶活力等指标的影响.采用实时荧光定量技术测定异槲皮苷作用后线虫Aβ沉积及胰岛素信号途径相关基因表达情况.结果:异槲皮苷能够显著降低痴呆模型线虫瘫痪率(P<0.05),可延长模型线虫寿命,提高其运动能力,能够显著提高模型线虫体内超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活力(P<0.05),显著降低其体内ROS和丙二醛水平(P<0.05),同时显著下调Aβ mRNA表达量,上调DAF-16、SKN-1、SOD-3、GST-4、CTL-3、HSF-1 mRNA表达量.结论:异槲皮苷能够显著延缓线虫衰老、降低瘫痪率和抑制Aβ沉积,可能与调控胰岛素/胰岛素样生长因子 1 信号通路上的基因表达有关.

目的 探讨黄连素对高盐高糖诱发的秀丽隐杆线虫形态和寿命改变的干预作用.方法 取秀丽线虫进行培养,随机分为正常对照组、高盐组、高糖组、高盐高糖组.正常对照组加入线虫NGM培养基;高盐组、高糖组、高盐高糖组下设模型对照组、10 mg/L黄连素干预组、20 mg/L黄连素干预组,先分别加入高盐培养基(含0.7%氯化钠的线虫NGM培养基)、高糖培养基(含1%葡萄糖的线虫NGM培养基)、高盐高糖培养基(含0.7%氯化钠和1%葡萄糖的线虫NGM培养基),然后向黄连素干预组中加入相应浓度的黄连素溶液,培养6 d.于第1、3、6天测定各组线虫体长、体宽及寿命,培养第6天采用RT-qPCR法检测线虫类似人胰岛素代谢相关基因daf-2、daf-16 mRNA.结果 与正常对照组相比,高盐、高糖以及高盐高糖组线虫体宽增加、寿命缩短(P均<0.05),体长无明显变化(P均>0.05),daf-2 mRNA表达升高、daf-16 mRNA表达降低(P均<0.05);与高盐、高糖以及高盐高糖组相比,添加黄连素组线虫的体宽降低、寿命延长(P均<0.05),体长无明显变化(P均>0.05),daf-2 mRNA表达降低、daf-16 mRNA表达升高(P均<0.05).结论 黄连素可抑制高盐高糖诱发的秀丽线虫形态改变以及寿命缩短,其机制可能是通过下调daf-2 mRNA表达、上调daf-16 mRNA表达来发挥作用.

目的 探讨梓醇延长秀丽隐杆线虫寿命的作用及其机制.方法 以野生型秀丽隐杆线虫(N2)、突变体线虫Daf-2(CF1041)、Daf-16(CF1038)为衰老模型,设置空白组、梓醇低、中、高剂量组(0.025、0.050、0.100 mg/ml梓醇),观察梓醇对线虫寿命的调控作用.通过检测梓醇对N2 线虫生殖能力、运动能力、抗急性应激及荧光定量RT-聚合酶链反应(PCR)检测Daf-2、Daf-16、Sod-3 及Ctl-1 基因表达量,探究梓醇抗衰老作用及机制.结果 与空白组比较,梓醇高、中剂量组N2 线虫寿命显著延长(P<0.01,P<0.05),突变体Daf-2、Daf-16 寿命差异无统计学意义(P>0.05),N2 线虫紫外辐射应激、高温热应激、胡桃醌氧化应激及过氧化氢应激条件下生存时长显著延长(P<0.05,P<0.01).与空白组比较,梓醇高剂量组N2 线虫Daf-2 mRNA表达显著下调,Daf-16、Sod-3 及Ctl-1 mRNA表达显著上调(P<0.01,P<0.05).结论 梓醇延长了N2 线虫正常状态和氧化应激状态下的寿命,没有延长突变体Daf-2 和Daf-16 线虫寿命,其作用机制可能是通过胰岛素/胰岛素样生长因子(IGF)-1 信号通路,促进Daf-16 下游相关抗氧化基因表达,提高线虫抗氧化应激能力,从而延长线虫寿命.

目的 观察研究芒柄花素(formononetin,FMN)对秀丽隐杆线虫的抗衰老作用及机制研究.方法 观察在给予FMN后线虫的寿命、运动能力和生殖能力的变化;线虫在热应激或氧化应激条件下的生存情况;线虫体内脂褐素的荧光强度;检测线虫体内 daf-16,skn-1,sod-3和sir2.1的mRNA表达水平;观察FMN对CF1038 株线虫(daf-16 缺失)和EU1 株线虫(skn-1缺失)寿命的影响.结果 给予FMN后的线虫寿命明显延长,运动能力明显增强,生殖能力没有影响;其热应激或者氧化应激条件下的生存状况有所改善;降低了体内脂褐素的累积;daf-16,skn-1,sod-3和sir2.1的转录水平明显上升;对线虫CF1038和EU1的寿命没有影响.结论 芒柄花素具有延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用,其机制可能与调控daf-16基因有关.