目的:探讨miR-1182在卵巢癌组织中的表达及对肿瘤细胞增殖与转移的影响。方法:使用反转录聚合酶链式扩增（RT-PCR）技术检测正常卵巢组织和卵巢癌及相应癌旁组织中的miR-1182表达水平。用miR-1182 mimics病毒转染人卵巢癌细胞株SKOV-3，并用RT-PCR和Western Blot检测细胞的miR-1182和hTERT蛋白的表达水平。用噻唑兰法检测转染后的SKOV-3细胞的增殖与侵袭情况。结果:卵巢癌组织中miR-1182的表达水平明显低于正常卵巢组织与癌旁组织（均 P<0.05）。对于miR-1182表达水平，不同肿瘤分期、组织分化程度的患者间的差异有统计学意义（均 P<0.05），但患者年龄与肿瘤类型间的差异无统计学意义（均 P>0.05）。与空白病毒组和对照组相比，转染miR-1182后，转染组SKOV-3细胞的miR-1182表达水平明显升高（均 P<0.05），而hTERT蛋白表达明显降低（均 P<0.05）。转染组SKOV-3细胞在转然后24、48、72 h细胞增殖和迁移能力受到明显抑制（均 P<0.05）。 结论:miR-1182在卵巢癌组织中低表达，过表达miR-1182可抑制卵巢癌的增殖与侵袭能力，其可能通过靶向调节hTERT的表达实现调控作用。

目的:探讨长链非编码RNA (lncRNA) FBXL19-AS1对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，明确lncRNA FBXL19-AS1与微小RNA-339-3p(miR-339-3p)的靶向关系。方法:收集2017年1月至2019至8月间烟台市烟台山医院73例行手术切除且经病理确诊的胰腺癌患者的癌组织及匹配的癌旁正常胰腺组织，体外培养正常胰腺上皮细胞(hTERT-HPNE)和3株胰腺癌细胞(Capan-1、SW1990、PaTu8988)，采用实时荧光定量PCR法检测胰腺癌组织和各株细胞lncRNA FBXL19-AS1和miR-339-3p表达。将胰腺癌Capan-1细胞分为NC组(正常对照组)、si-NC组(转染无意义阴性序列)、si-FBXL19-AS1组(转染FBXL19-AS1小干扰RNA)，miR-NC组(转染空质粒对照)、miR-339-3p组(转染miR-339-3p过表达慢病毒载体)，si-FBXL19-AS1+anti-miR-339-3p NC组(共转染FBXL19-AS1siRNA和miR-339-3p抑制剂阴性对照序列)、si-FBXL19-AS1+anti-miR-339-3p组(共转染FBXL19-AS1siRNA和miR-339-3p抑制剂)。采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性，采用Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力，采用蛋白质免疫印迹法检测细胞cyclinD1、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9蛋白表达。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA FBXL19-AS1和miR-339-3p的靶向关系。结果:胰腺癌组织lncRNA FBXL19-AS1表达量显著高于癌旁正常胰腺组织(2.96±0.21比1.00±0.13， P<0.05)，miR-339-3p表达量显著低于癌旁正常胰腺组织(0.37±0.05比1.00±0.11， P<0.05)。Capan-1、SW1990及PaTu8988细胞lncRNA FBXL19-AS1表达量分别为2.43±0.18、1.97±0.13和1.73±0.14，均显著高于hTERT-HPNE细胞的1.00±0.07，miR-339-3p表达量分别为0.42±0.03、0.54±0.03和0.57±0.04，均显著低于hTERT-HPNE细胞的1.00±0.05。其中以Capan-1细胞的lncRNA FBXL 19-AS1表达量最高，miR-339-3p表达量最低。与si-NC组比较，si-FBXL19-AS1组Capan-1细胞450nm处吸光度值( A450值)、迁移细胞数、穿膜细胞数显著下降[0.47±0.03比0.94±0.06、(81.00±7.41)个比(187.00±16.13)个、(67.00±5.41)个比(141.00±9.24)个]，cyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达量显著降低(0.44±0.03比0.83±0.05、0.48±0.03比0.92±0.07、0.38±0.02比0.73±0.05)。与miR-NC组比较，miR-339-3p组Capan-1细胞 A450值、迁移细胞数、穿膜细胞数显著下降[0.54±0.04比0.94±0.05、(98.00±6.53)个比(193.00±10.02)个、(83.00±6.58)个比(146.00±7.11)个]，cyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达量显著降低(0.47±0.03比0.81±0.07、0.43±0.03比0.94±0.06、0.32±0.02比0.71±0.06)。与si-FBXL19-AS1+anti-miR-NC组比较，si-FBXL19-AS1+anti-miR-339-3p组细胞 A450值、迁移细胞数、穿膜细胞数显著上升[0.96±0.07比0.48±0.03、(204.00±11.25)个比(83.00±5.11)个、(157.00±8.76)个比(64.00±4.12)个]，cyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达量显著升高(0.84±0.06比0.42±0.03、0.96±0.08比0.47±0.08、0.74±0.06比0.37±0.02)。上述差异均有统计学意义( P值均<0.05)。共转染野生型lncRNA FBXL19-AS1和miR-339-3p mimics组Capan-1细胞的荧光素酶活性显著低于共转染野生型lncRNA FBXL19-AS1和miR-NC组(0.47±0.04比1.00±0.10)，差异有统计学意义( P<0.05)，而共转染突变型lncRNA FBXL19-AS1和miR-339-3p mimics组与共转染突变型lncRNA FBXL19-AS1和miR-NC组Capan-1细胞的荧光素酶活性差异无统计学意义。 结论:LncRNA FBXL19-AS1在胰腺癌组织及胰腺癌Capan-1细胞株中呈高表达，敲减lncRNA FBXL19-AS1可靶向结合miR-339-3p调节胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力，促进胰腺癌的发生和发展。

胃癌是威胁人类健康的重大疾病之一，发病率较高，早期诊断率低。治疗过程中遇到许多瓶颈。提高早期诊断率并寻找新的治疗靶点是当前亟待解决的难题。端粒酶在正常组织中检测不到，但在大多数癌症中表现出较高的特异性和敏感性，且与预后有明确相关性，有可能作为血清肿瘤标志物和预后指标。人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因多态性可以调节人群对胃癌的易感性，并通过其靶基因影响胃癌发生发展及增殖和凋亡过程。抵抗素、visfatin、G-四链体、胡椒胺等物质则可以通过调节端粒酶表达来影响胃癌的发生发展。目前关于hTERT参与调节肿瘤侵袭和转移的机制尚不清楚，阐明其作用机制具有重要意义。本文将对这一机制近年来的研究进展进行综述。

目的:探究 125I-RSOAds-hTERT/PSA溶瘤腺病毒对前列腺癌靶向治疗作用以及对肿瘤微环境的影响。 方法:采用PCR扩增技术及双酶切连接技术构建 125I-RSOAds-hTERT/PSA溶瘤腺病毒( 125I-病毒复合物)。通过缺口末端标记法(TUNEL)染色，流式细胞实验以及Caspase-3的免疫印迹实验分别从体内和体外检测 125I-病毒复合物对前列腺癌细胞的杀伤作用。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测人前列腺癌细胞株PC3和小鼠前列腺癌细胞株RM-1培养上清液及血清中的白介素2(IL-2)、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)等的分泌水平，探究 125I-病毒复合物对瘤组织细胞因子分泌水平的影响。通过免疫组织化学法以及免疫荧光实验探究 125I-病毒复合物对前列腺癌组织及癌细胞中CD24、CD44以及前列腺干细胞抗原(PSCA)表达的调节，同时检测瘤组织中CD32和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平，以及CD4＋、CD8＋和巨噬细胞浸润情况。 结果:125I-病毒复合物体内、体外均可显著诱导癌细胞凋亡，同时显著高于 125I组和病毒复合物组。同时IL-2( t＝-183.30、-38.20， P<0.05)、IL-10( t＝113.80、92.71， P<0.05)、TNF-α( t＝-73.20、-73.91， P<0.05)、IFN-γ( t＝-65.37、-139.70， P<0.05)在体内体外含量均升高。 125I-病毒复合物可降低癌细胞及癌组织中CD24、CD44以及PSCA表达，减小癌组织重量( t＝8.55， P<0.05)，抑制癌组织血管生成，同时调节肿瘤组织中免疫反应。 结论:125I-病毒复合物溶瘤腺病毒对前列腺癌靶向可显著杀伤癌细胞，减少癌组织重量和血管生成，同时改善肿瘤微环境。

目的:探讨皮肤黑素瘤（CMM）临床病理特点及与易感基因突变的关系。方法:回顾分析新疆维吾尔自治区人民医院2009年1月至2019年12月确诊的94例CMM临床及组织病理学特征。48例留存黑素瘤石蜡组织标本，采用Sanger测序法检测黑素瘤组织中BRAF、NRAS、c-KIT基因及人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因启动子区突变情况；分析基因突变与临床病理特征的关系。计量资料的比较采用 t检验，计数资料采用卡方检验或Fisher精确检验法。 结果:94例CMM中，男46例（48.9%），女48例（51.1%），年龄（58.5 ± 16.0）岁。汉族41例（43.6%），少数民族53例（56.4%）。发病部位为肢端50例（53.2%），其中27例（65.8%）为汉族；非肢端患者44例（46.8%），14例（31.8%）为汉族，两组民族分布差异有统计学意义（ χ2 = 5.25， P = 0.022）。组织病理特征：41例（43.6%）Clark分级处于Ⅳ、Ⅴ级，52例（55.3%）可见溃疡，32例（34.04%）初诊即有淋巴结转移。48例中，11例（22.9%）出现BRAF基因突变，包括c.1799 T>A（p.V600E）、c.1790 T>A（p.L597Q）、c.1394 C>T（p.S465F）；5例（10.4%）出现NRAS基因c.182 A>G（p.Q61R）突变；6例（12.5%）出现c-KIT基因突变，包括c.1727 T>C（p.L576P）、c.1669 T>C（p.W557R）；7例（14.6%）出现hTERT基因启动子区突变，4例为距起始密码子ATG上游124 bp（C228T），3例为146 bp（C250T）。26例< 60岁患者中，发生BRAF突变9例，显著高于60岁以上患者（22例中2例发生突变， P < 0.05），肢端型患者发生率（3/27例）低于非肢端型（8/21例， P < 0.05）；有淋巴结转移的患者中NRAS、c-KIT、hTERT突变发生率（3/10、4/10、4/10例）均高于无淋巴结转移的患者（2/38、2/38、3/38例，均 P < 0.05）。 结论:不同民族CMM的发病部位有差异；BRAF基因突变与CMM患者年龄、发病部位相关；NRAS、c-KIT基因突变、hTERT基因启动子区突变与是否有淋巴结转移相关。

目的:采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)系统的方式，通过检测结直肠癌患者外周血端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达，分析其对结直肠癌微转移的诊断价值。方法:选取2015年10月至2016年10月于重庆市开州区人民医院确定诊断的结直肠癌患者47例为肿瘤组。同期选取23名健康体检者为对照组。采用荧光定量RT-PCR系统技术检测肿瘤组及对照组外周血液标本中的hTERT mRNA表达的具体情况，并分析其表达与肿瘤特征的关系，分析其对结直肠癌微转移的诊断价值。结果:肿瘤组hTERT mRNA阳性表达量为(14.022±7.691)，对照组为(0.467±0.391)，肿瘤组明显高于对照组，差异有统计学意义( P<0.05)。47例结直肠癌患者外周血液中hTERT mRNA阳性表达的情况，与患者性别、年龄、肿瘤大小、分化程度及浸润程度无关，差异均无统计学意义(均 P>0.05)，与是否有淋巴、血行转移及TNM分期有关，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:采用实时荧光定量RT-PCR系统，克服了传统检测技术不能定量只能定性的检测缺点，通过检测外周血hTERT mRNA表达量，可作为有效诊断结直肠癌及是否微转移，有在临床上普及、推广价值。

Background::Extracellular matrix (ECM) remodeling is the most important pathomechanism of pelvic organ prolapse (POP). Fibroblasts are the key to ECM regulation. The passaging capacity of human vaginal wall fibroblasts (hVWFs) is limited in vitro. Here, we aimed to immortalize hVWFs through the introduction of human telomerase reverse transcriptase (hTERT). Methods::Primary cells were derived from the vaginal wall tissue of patients with POP. Cellular senescence was detected via senescence-associated β-galactosidase staining. We employed a lentiviral transfection vector to stably express hTERT in hVWFs at passage 3, generating immortalized hVWFs (i-hVWFs). We then assessed cellular proliferation via the CCK-8 and EdU assays as well as cellular migration via wound healing assays. G-banded chromosome karyotypic analysis was performed to evaluate chromosomal karyotype stability. Finally, cellular tumorigenesis capacity was assessed in nude mice. A two-tailed Student’s t test was used to compare differences between the two groups. Results::Our results showed that senescence of primary hVWFs significantly increased from passage seven. From passage 11, hVWFs showed a significantly higher senescence percentage than i-hVWFs. During the continuous passage, i-hVWFs presented stability in proliferation, migration capacity, expression of ECM regulation-related genes, and chromosome karyotype. In vivo tumorigenesis was absent in i-hVWFs. Conclusions::The senescence of hVWFs significantly increased from the seventh passage, and we successfully used hTERT to immortalize hVWFs derived from patients with POP. Studies on POP that require a long-lived hVWF line will benefit from our technique.

目的:探究敲减解整联蛋白及金属蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinase,ADAM)结构域样癸蛋白1(ADAM domain-like decysin 1,ADAMDEC1)对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法:利用GEPIA和UALCAN在线数据库对ADAMDEC1在胰腺癌组织中的表达情况进行分析.Western blot检测人胰腺癌细胞系(MIA PaCa-2和PANC-1)和胰腺导管细胞系(hTERT-HPNE)中ADAMDEC1的蛋白表达水平.采用CCK-8实验、集落形成实验、细胞划痕实验和Transwell实验检测敲减ADAMDEC1对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测敲减ADAMDEC1对胰腺癌细胞中迁移、侵袭及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平的影响.此外,通过恢复性实验,检测Wnt/β-catenin信号通路激动剂CHIR-99021对敲减ADAMDEC1抑制胰腺癌细胞生长和转移作用的影响.结果:(1)ADAMDEC1在胰腺癌中高表达;(2)敲减ADAMDEC1表达后,胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降;(3)敲减ADAMDEC1后,E-cadherin蛋白表达增加,而基质金属蛋白酶9、N-cadherin和vimen-tin蛋白表达减少,Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达亦减少;(4)CHIR-99021与ADAMDEC1小干扰RNA共处理胰腺癌细胞,可逆转敲减ADAMDEC1对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用.结论:ADAMDEC1在胰腺癌中高表达,可通过Wnt/β-catenin信号通路调控胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭.

目的:观察白藜芦醇(RSV)对人骨髓间充质干细胞(MSC)的自发衰老是否具有抑制作用.方法:将MSC传至p13和p15代,建立MSC的自发衰老模型组;用5 nmol/L RSV分别处理p13和p15代MSC 48 h,建立RSV处理组.通过SA-β-Gal染色法检测细胞衰老,MTT法检测细胞增殖,RT-PCR检测细胞衰老相关端粒酶活性,Western blot检测与衰老相关的磷酸化mTOR的水平.结果:SA-β-Gal染色显示,RSV处理组MSC的衰老细胞数量明显少于模型组(p13代MSC,RSV组ts模型组,P＜0.05;p15代MSC,RSV组vs模型组,P＜0.01).MTT结果显示,RSV处理组MSC的增殖能力高于模型组,其中p13代MSC处理组与模型组在72 h相比有显著差异(P＜0.05).RT-PCR结果显示,RSV处理组中MSC的hTERT mRNA表达量高于模型组,其中p13代MSC的RSV处理组与模型组相比有显著差异(P＜0.05).Western blot结果显示,RSV处理组中MSC的磷酸化(Ser2448)mTOR水平低于模型组,其中p13代MSC的处理组与模型组相比有显著差异(P＜0.05).结论:RSV可通过调节mTOR活性抑制人MSC的自发衰老.