Background::Myocardial infarction occurs due to insufficient (ischemia) blood supply to heart for long time; plasmacytoma variant translocation 1 (PVT1) is a long non-coding RNAs (lncRNAs) involved in the pathogenesis of various diseases, including heart disease; However, few studies have explored its role. The present study evaluated the effects of lncRNA PVT1 on hypoxic rat H9c2 cells.Methods::Hypoxic injury was examined by measuring cell viability and apoptosis by using cell counting kit-8 activity and flow cytometry assays. Gene expressions after hypoxia were estimated by quantitative real time polymerase chain reaction and the signaling pathway were explored by Western blot analysis. RNA immunoprecipitation and luciferase reporter assays were applied to examine the interactions among genes. Data were analyzed using t-test with one-way or two-way analysis of variance. Results::The lncRNA PVT1 is up-regulated in hypoxia-stressed H9c2 cells and knockdown of PVT1 mitigates hypoxia-induced injury in H9c2 cells. PVT1 acts as a sponge for miR-135a-5p and knockdown of PVT1 attenuated the increased hypoxia-induced injury by up-regulating miR-135a-5p. Forkhead box O1 ( FOXO1) was identified as a target of miR-135a-5p, and the expression was negatively regulated by miR-135a-5p. The exploration of the underlying mechanism demonstrated that knockdown of FOXO1 reversed PVT1/miR-135a-5p mediated hypoxia-induced injury in H9c2 cells. Conclusions::PVT1 plays a crucial role in hypoxia-injured H9c2 cells through sponging miR-135a-5p and then positively regulating FOXO1.

目的:对复发性肺结核(RTB)患者血浆外泌体长非编码RNA(lncRNA)进行探讨，了解RTB的分子作用机制。方法:本研究为病例对照研究。随机选取2019年11月至2020年9月在新疆医科大学第八附属医院就诊的肺结核患者56例，其中活动性肺结核(ATB)组30例，RTB组26例。健康对照(HC)组30名。收集所有受试者外周血，离心、储存和备用等。进行外泌体提取，形态鉴定和粒经分析，BCA蛋白测定，SDS-PAGE和蛋白质印迹分析，RNA分离，文库制备和测序，以及数据分析。结果:与HC组相比，RTB组差异表达lncRNA有633个，包括273个表达上调和360个表达下调；ATB组差异表达lncRNA有487个，包括319个表达上调和168个表达下调。差异基因维恩图显示，与HC组比较，ATB组和RTB组共有135个lncRNA，RTB组特有498个lncRNA，ATB组特有352个lncRNA。RTB组患者lncRNA调控靶向mRNA的GO功能生物过程集中在mRNA分解代谢过程等；细胞组成集中在MHC-Ⅱ类蛋白复合体等；分子功能集中在质子跨膜转运蛋白活性、微量胺受体活性等。lncRNA调控靶向mRNA的KEGG富集集中在抗原加工提呈、Th1和Th2细胞分化等。lncRNA通过共表达对靶基因进行预测，主要筛选6个lncRNA基因XLOC_027759、XLOC_025889、XLOC_024306、XLOC_011554、XLOC_005700和XLOC_012294，靶向6个mRNA基因TYK2、JAK3、STAT6、ZAP70、CD4和IL-2RA。结论:RTB通过自身在基因表达调控、免疫应答逃逸等方面的改变以适应宿主内环境，TYK2、STAT6、ZAP70等基因对Th1、Th2和Th17细胞分化具有调控作用。同时，RTB受多个基因及多条通路共同调控。

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)AC092718.4对人类表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌耐药性的影响及其可能机制.方法 (1)获取曲妥珠单抗非耐药及耐药HER2阳性乳腺癌患者的乳腺癌组织(设为非耐药组、耐药组),检测其lncRNA AC092718.4、miR-135a-5p、S100钙结合蛋白P(S100P)mRNA和蛋白的表达水平.(2)以对曲妥珠单抗不敏感的HER2阳性乳腺癌细胞系MDA-MB-361细胞作为原发耐药细胞模型,以乳腺癌细胞株BT-474细胞为亲本,构建对曲妥珠单抗继发耐药的细胞模型(BT-474/TRA细胞).检测3种细胞中lncRNA AC092718.4、miR-135a-5p、S100P mRNA和蛋白的表达水平.经同一浓度曲妥珠单抗干预48 h后,检测3种细胞的活力.(3)取MDA-MB-361细胞分为sh-AC092718.4组、sh-NC组、对照组进行实验,其中sh-AC092718.4组细胞和sh-NC组分别转染sh-AC092718.4和sh-NC,对照组细胞未经任何处理.经同一浓度曲妥珠单抗干预48 h后,检测3组细胞的活力.(4)采用starBase和TargetScan分别预测lncRNA AC092718.4和miR-135a-5p的潜在靶标.通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA AC092718.4与miR-135a-5p之间、miR-135a-5p与S100P之间的靶向结合情况.结果 (1)与非耐药组相比,耐药组lncRNA AC092718.4、S100P mRNA、S100P蛋白表达水平升高,miR-135a-5p表达水平降低(P<0.05).(2)与BT-474细胞相比,BT-474/TRA细胞及MDA-MB-361细胞的lncRNA AC092718.4、S100P mRNA、S100P蛋白表达水平升高,miR-135a-5p表达水平降低,曲妥珠单抗干预48 h后的细胞活力更大(P<0.05).(3)与对照组和sh-NC组比较,sh-AC092718.4组MDA-MB-361细胞活力降低(P<0.05).(4)starBase预测结果显示,lncRNA AC092718.4与miR-135a-5p有靶向结合位点;TargetScan预测结果显示,miR-135a-5p与S100P有靶向结合位点.荧光素酶报告基因实验结果提示,lncRNA AC092718.4可与miR-135a-5p直接结合,S100P是miR-135a-5p的靶基因.结论 LncRNA AC092718.4促进乳腺癌细胞对曲妥珠单抗产生耐药性,下调lncRNA AC092718.4 表达可减轻MDA-MB-361细胞对曲妥珠单抗的耐药性,其机制可能涉及lncRNA AC092718.4作为竞争性内源RNA竞争性结合miR-135a-5p,从而上调S100P的表达.

目的 探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本 5(LncRNA GAS5)在糖尿病肾病(DN)进展中的作用机制.方法 选取 10 只健康 5 周龄大鼠为研究对象.将大鼠分为模型组与对照组,每组各 5 只.构建 DN 细胞模型,并分为LncRNA GAS5 干扰组、LncRNA GAS5 过表达组与阴性对照组.通过实时荧光定量聚合酶链式反应及蛋白质印迹法检测LncRNA GAS5、miR-135a-5p及沉默信息调节因子2 相关酶1(SIRT1)的表达水平.采用双荧光素酶报告实验验证miR-135a-5p与LncRNA GAS5、SIRT1 之间的相互作用.结果 模型组肾组织、血清外泌体、人肾小球系膜细胞(HMC)及上清外泌体中LncRNA GAS5 表达水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).敲减或过表达LncRNA GAS5 后,LncRNA GAS5 过表达组HMC细胞中miR-135a-5p表达水平相应高于或低于阴性对照组,而SIRT1 表达水平相应低于或高于阴性对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).感染miR-135a-5p或转染siSIRT1 后,LncRNA GAS5 过表达组对HMC细胞增殖的抑制作用及对α-平滑肌肌动蛋白、纤连蛋白、α(I)胶原表达的抑制作用均弱于阴性对照组,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 LncRNA GAS5 可通过miR-135a-5p/SIRT1 通路调控DN的进展.

目的:应用生物信息学筛选乳腺癌基因芯片中差异表达的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)并探讨其在乳腺癌中的表达情况.方法:从美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)公共基因芯片数据平台(gene expression omnibus,GEO)下载乳腺癌lncRNA基因芯片数据集GSE33447,包含8对乳腺癌组织及其对应癌旁非肿瘤组织,采用R语言Limma函数包筛选乳腺癌差异表达的lncRNA,并用Benjamini&Hochberg错误发现率(false discovery rate,FDR)对原始P值进行多重矫正,采用NONCODE生物信息学网站对lncRNAs进行重新注释,采用starbase 2.0对差异表达的lncRNAs靶基因进行靶向预测,并进一步用DAVID数据库对靶基因进行基因本体论(Gene Ontology,GO)和KEGG信号通路富集分析,最后分别选取3个高表达和3个低表达的lncRNA,采用qRT-PCR的方法验证其在乳腺癌组织中的表达.结果:与正常组织相比,乳腺癌中227个lncRNA存在明显差异表达(Fold change≥2.0,adj.P＜0.05),其中135个lncRNA表达上调,92个lncRNA表达下调.采用NONCODE对227个差异表达的lncRNA重新注释后发现,47个lncRNA存在明显差异表达,其中17个lncRNA表达上调,30个lncRNA表达下调.通过GO和KEGG信号通路富集分析发现,差异表达的lncRNAs广泛地参与了基因的转录及转录后调控等生物学进程以及PI3K-Akt、Ras、TNF以及p53等信号通路.采用qRT-PCR的方法检测3个高表达(MNX1-AS1、MIAT、HOXA11-AS)和3个低表达(PGM5-AS1、LINC00908、AC226118.1)lncRNA的表达水平,发现乳腺癌组织中MNX1-AS1、MIAT和HOXA11-AS表达水平明显高于其癌旁非肿瘤对照组,而PGM5-AS1、LINC00908和AC226118.1在乳腺癌组织中的表达水平明显低于癌旁非肿瘤对照组(P值均＜0.05),差异有统计学意义,其结果与基因芯片筛查结果一致.结论:使用生物信息学方法筛选乳腺癌相关的lncRNAs可能为乳腺癌新型肿瘤标志物的筛选提供新的策略.

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)横纹肌肉瘤相关转录物-2(RMST)在甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)诱导人支气管上皮细胞(16HBE)恶性转化过程中的表达特征及生物学意义.方法 收集GMA转化组和DMSO对照组的第10、20和30代细胞,高通量芯片分析LncRNA RMST在转化不同时期的表达改变,对其进行生物信息学分析,通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测LncRNA RMST和可能相互作用的miRNA相对表达量.结果 芯片结果显示,与对照组相比,LncRNA RMST在转化的前期(P10)、中期(P20)和后期(P30)分别上调4.75倍、上调1.90倍和下调2.53倍,且相对表达量呈下降趋势.LncRNA RMST表达变化趋势的qPCR验证结果与芯片结果一致,而3个时期miR-135a-2相对表达量的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 LncRNA RMST在GMA诱导16HBE细胞恶性转化的早、中期高表达,在转化完成时低表达,并呈下降的趋势;LncRNA RMST可以作为GMA诱导16HBE细胞恶性转化的相关分子标志物,其功能和作用机制有待进一步研究.

背景:目前已有研究发现lncRNA GAS5激活了退变椎间盘髓核细胞(nucleus pulposus cels,NPC)内的线粒体凋亡通路,进而促进髓核细胞的凋亡.目的:探索有关椎间盘退变的ceRNA网络调控机制,寻找治疗椎间盘退变的潜在靶点.方法:计算机检索GEO数据库,下载lncRNA微阵列芯片GSE56081,重注释比对平台文件中的探针核酸序列,运用Perl软件将芯片系列矩阵文件中的探针ID转化为基因名,并添加基因属性.运用R软件分析系列矩阵文件得到差异的lncRNA与mRNA.在miRcode平台下载高度保守的miRNA家族文件,比对后得出lncRNA-miRNA关联.根据miRDB数据库、miRTarBase数据库和TargetScan数据库预测miRNA调控的mRNA,与芯片数据差异分析得到的差异mRNA取交集,得出miRNA-mRNA关联.构建ceRNA网络,运用String数据库分析蛋白互作关系,筛选关键蛋白互作模块.使用DAVID数据库分析关键蛋白模块的功能与相关通路,挖掘关键ceRNA网络.结果与结论:退变椎间盘的髓核细胞中差异lncRNA与mRNA竞争miRNA,从而调控蛋白合成,最终影响泛素介导的蛋白水解、Wnt信号通路和PI3K-Akt信号通路.并发现7种miRNA(hsa-miR-107、hsa-miR-449c-5p、hsa-miR-301b-3p、hsa-miR-135a-5p、hsa-miR-17-5p、hsa-miR-20b-5p、hsa-miR-876-3p)可能在导致椎间盘退变的蛋白质分解代谢与细胞凋亡的过程中发挥关键作用.

目的:探讨富含血小板血浆 (PRP) 和脐带干细胞 (UBC-MSCs) 联用对糖尿病足 (DF) 模型lncRNA表达谱的影响.方法:采用SPF级SD大鼠 (20只) 建立糖尿病足模型, 随机分为4组, 每组5只大鼠.A组注射PBS于DF动物溃疡处, B组采用人PRP注射于DF动物溃疡处, C组采用人UBC-MSCs注射于DF动物溃疡处, D组采用人UBC-MSCs+PRP注射于DF动物溃疡处.治疗14d后, 记录大鼠的血糖水平与血清CRP、TNF-α、VEGF相对表达, 采用arraystar公司12×135K芯片测定lncRNA的表达谱.结果:治疗14d后, B、C、D组均较A组显著降低, D组显著低于B、C组, 组间差异有统计学意义 (P＜0.05);D组大鼠的血清CRP、TNF-α相对表达较A、B、C组显著降低, 血清VEGF相对表达较A、B、C组显著升高, 差异都有统计学意义 (P＜0.05).B组与A组比较存在1563个显著差异的IncRNA, C组与A组比较存在1982个显著差异的IncRNA, D组与A组比较存在2854个显著差异的IncRNA.将靶基因带入差异m RNA数据, 筛选得到与DF相关的靶基因的lncRNA有6条, 具体为CHI3L1、FA2H、CAMTA1、DOCK、STRADB和TNFRSF1A (P1101039、BF74369、Uc001aoh、N385370、AF116618和HMlincRNA1336).结论:UBC-MSCs和PRP联合可能通过改变lncRNA的表达, 影响炎症因子、血管生成因子等的表达, 进而发挥降血糖和治疗DF的目的.

目的 探讨长链非编码RNA(long no-coding RNA,LncRNA)心肌梗死相关转录本(myocardial infarction association tran-script,MIAT)基因启动子单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)与高血压(hypertension,HT)的相关性.方法 采用PCR和Sanger基因测序法检测MIAT基因启动子SNPs;卡方检验对59例HT患者和135例健康对照人群的SNPs进行分型和关联分析.结果 在MIAT基因启动子中共发现7个SNPs,其中rs150465374能增加HT的易感性(P=0.02).结论 MIAT基因启动子多态位点(rs150465374)与HT的发生密切相关.

目的 探讨急性脑梗死患者外周血lncRNA SNHG14和miR-145-5p表达水平变化及其与疾病发生风险的关系.方法 选取本院治疗的135例急性脑梗死患者作为研究对象,另选择同期健康志愿者108例作为对照组;荧光定量反应(qRT-PCR)检测外周血lncRNA SNHG14和miR-145-5p表达水平;Pearson相关性分析lncRNA SNHG14和miR-145-5p表达水平与病情严重程度的关系;受试者工作特征(ROC)评估ln-cRNA SNHG14和miR-145-5p表达水平对急性脑梗死的诊断价值;Logistic回归分析lncRNA SNHG14和miR-145-5p表达水平与急性脑梗死发生风险的关系.结果 与对照组比较,急性脑梗死患者血清lncRNASNHG14表达水平升高,miR-145-5p表达水平降低;随着病情程度的增加,lncRNA SNHG14表达水平逐渐升高,miR-145-5p表达水平逐渐降低(P＜0.05).SNHG14表达水平与患者NIHSS评分呈显著正相关(r=0.416,P=0.000),miR-145-5p表达水平与患者NIHSS评分、SNHG14表达水平均呈显著负相关(r=-0.318,P=0.029;r=-0.487,P=0.000).lncRNA SNHG14和miR-145-5p表达水平与患者OCSP分型、脑梗死面积、血脂异常有关(P＜0.05),lncRNA SNHG14对急性脑梗死诊断的AUC为0.708,敏感性为80.74％,特异性为57.78％;miR-145-5p对急性脑梗死诊断的AUC为0.632,敏感性为77.78％,特异性为50.37％.Logistic多因素回归分析显示血脂异常,lncRNA SNHG14,miR-145-5p表达水平是影响急性脑梗死发生的独立危险因素.结论 急性脑梗死患者外周血lncRNA SNHG14表达水平升高,miR-145-5p表达水平降低,并与患者病情有关,可能是急性脑梗死患者潜在诊断标志物,且是疾病的独立预测因子.