目的:探讨环状RNA小脑变性相关蛋白1反义转录物(circCDR1as)对人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法:体外培养HPASMC，缺氧诱导后干扰circCDR1as表达、抑制或过表达微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)以及过表达Janus激酶2(JAK2)。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中circCDR1as、miR-135a-5p表达；蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中JAK2、信号转导和转录激活因子3(STAT3)蛋白表达。组间差异比较采用 t检验。 结果:缺氧组circCDR1as表达水平和磷酸化JAK2(p-JAK2)/JAK2、磷酸化STAT3(p-STAT3)/STAT3比值高于常氧组(1.98±0.07比1.01±0.05、0.62±0.06比0.18±0.04、0.56±0.05比0.15±0.03)，miR-135a-5p表达水平低于常氧组(0.52±0.05比1.00±0.04)，差异有统计学意义( t＝27.620、14.946、17.223、18.362， P<0.05)。si-circCDR1as组circCDR1as表达水平、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值和细胞活力、迁移细胞数、侵袭细胞数低于si-NC组(0.41±0.05比1.02±0.06、0.41±0.05比0.61±0.05、0.38±0.03比0.54±0.04、0.42±0.04比0.73±0.06、75.64±17.95比145.38±26.42、68.96±16.82比121.05±24.80)，miR-135a-5p表达水平高于si-NC组(1.73±0.06比1.03±0.05)，差异有统计学意义( t＝19.131、6.928、7.838、10.530、5.348、4.258、21.954， P<0.05)。 结论:circCDR1as通过靶向抑制miR-135a-5p表达激活JAK2/STAT3信号通路，促进缺氧诱导的HPASMC增殖、迁移和侵袭。

目的:探讨消化性溃疡合并幽门螺杆菌（ Hp）感染患者血清微小RNA（miR）-155和miR-135b-5p表达水平及其临床意义。 方法:采用前瞻性研究的方法，连续选取济宁医学院附属医院2021年7月至2023年2月消化性溃疡患者263例。其中，经 14C呼气试验确定为 Hp感染146例（ Hp感染组），未合并 Hp感染117例（非 Hp感染组）；免疫印迹法确定Ⅰ型 Hp感染110例，Ⅱ型 Hp感染36例。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测血清miR-155和miR-135b-5p表达水平，放射免疫法检测血清胃泌素水平，酶联免疫吸附法检测血清胃蛋白酶原（PG）Ⅰ和PG Ⅱ水平；记录患者基本临床资料。采用多因素Logistic回归分析影响消化性溃疡患者发生 Hp感染的独立危险因素；采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清miR-155和miR-135b-5p对消化性溃疡患者发生 Hp感染的诊断价值。 结果:Hp感染组胃泌素、PG Ⅰ、PG Ⅱ、溃疡出血率和复发比例明显高于非 Hp感染组[（108.47 ± 15.35）ng/L比（79.63 ± 10.58）ng/L、（295.41 ± 37.26）pg/L比（236.75 ± 29.17）pg/L、（44.08 ± 8.52）pg/L比（39.29 ± 6.74）pg/L、25.34%（37/146）比15.38%（18/117）和21.92%（32/146）比11.97%（14/117）]，差异有统计学意义（ P<0.01或<0.05）。 Hp感染组血清miR-155和miR-135b-5p明显高于非 Hp感染组（1.94 ± 0.63比0.95 ± 0.29和1.86 ± 0.57比1.03 ± 0.31），差异有统计学意义（ P<0.01）。Ⅰ型 Hp感染患者血清miR-155和miR-135b-5p明显高于Ⅱ型 Hp感染患者（2.05 ± 0.66比1.60 ± 0.54和1.97 ± 0.61比1.52 ± 0.45），差异有统计学意义（ P<0.01）。多因素Logistic回归分析结果显示，血清miR-155、miR-135b-5p、胃泌素、PG Ⅰ是影响消化性溃疡患者发生 Hp感染的独立危险因素（ OR = 1.443、1.436、1.452和1.438，95% CI 1.165～1.787、1.146～1.799、1.187～1.777和1.150～1.798， P<0.01）。ROC曲线分析结果显示，血清miR-155和miR-135b-5p联合诊断消化性溃疡患者发生 Hp感染的曲线下面积明显大于血清miR-155和miR-135b-5p单独诊断（0.907比0.839和0.836， Z = 2.57和2.81， P = 0.010和0.005）。 结论:消化性溃疡合并 Hp感染患者血清miR-155和miR-135b-5p水平较高，两者联合检测对消化性溃疡患者发生 Hp感染具有较高的诊断价值。

Background::Myocardial infarction occurs due to insufficient (ischemia) blood supply to heart for long time; plasmacytoma variant translocation 1 (PVT1) is a long non-coding RNAs (lncRNAs) involved in the pathogenesis of various diseases, including heart disease; However, few studies have explored its role. The present study evaluated the effects of lncRNA PVT1 on hypoxic rat H9c2 cells.Methods::Hypoxic injury was examined by measuring cell viability and apoptosis by using cell counting kit-8 activity and flow cytometry assays. Gene expressions after hypoxia were estimated by quantitative real time polymerase chain reaction and the signaling pathway were explored by Western blot analysis. RNA immunoprecipitation and luciferase reporter assays were applied to examine the interactions among genes. Data were analyzed using t-test with one-way or two-way analysis of variance. Results::The lncRNA PVT1 is up-regulated in hypoxia-stressed H9c2 cells and knockdown of PVT1 mitigates hypoxia-induced injury in H9c2 cells. PVT1 acts as a sponge for miR-135a-5p and knockdown of PVT1 attenuated the increased hypoxia-induced injury by up-regulating miR-135a-5p. Forkhead box O1 ( FOXO1) was identified as a target of miR-135a-5p, and the expression was negatively regulated by miR-135a-5p. The exploration of the underlying mechanism demonstrated that knockdown of FOXO1 reversed PVT1/miR-135a-5p mediated hypoxia-induced injury in H9c2 cells. Conclusions::PVT1 plays a crucial role in hypoxia-injured H9c2 cells through sponging miR-135a-5p and then positively regulating FOXO1.

Systemic sclerosis (SSc) is characterized by immune dysfunction, vasculopathy, chronic fibrosis of skin and internal organs with complex etiology. With the rapid development and the application in biomedicine of epigenetics, accumulating evidence has shown that epigenetics plays an important role in the pathogenesis of SSc. Environmental factors via epigenetics are needed to trigger and maintain for the disease in the subjects with genetic predisposition to SSc. The role of epigenetics in the pathogenesis of SSc includes hypermethylation of the promoter region of nitric oxide synthase and bone morphogenetic protein receptors II, up-regulation of histone deacetylases 4 and 5 expression, and down-regulation of miR-193b and miR-152 in endothelial cells inducing vascular dysfunction; DNA hypermethylation and hypoacetylation of histone H3 and H4 in Friend leukemia virus integration 1 and Kruppel-like factor 5 genes, and the abnormal expression of miR-29, miR-129-5p and miR-135b in fibroblasts causing excessive fibrosis; DNA hypomethylation in the promoter regions of CD11a and CD70 genes in CD4+T cells resulting in immune dysfunction. Studies on the role of epigenetics in SSc are of great significance for better understanding the pathogenic machanism of SSc, which is helpful to find new molecular targets for treating SSc, and consequently, improve the prognosis of SSc.

目的:探讨肝癌组织中微小RNA-1470(miR-1470)、POZ结构域和 AT 结合基序锌指蛋白1(PATZ1)表达水平与患者5 年内预后的关系.方法:选取2015 年9 月至2018 年8 月在邯郸市中心医院接受根治术治疗的肝癌患者 135 例,术中留取肝癌组织及相应癌旁正常组织(距肿瘤边缘 2cm 以上的正常肝脏组织).采用免疫组织化学法检测PATZ1 蛋白表达;采用实时荧光定量 PCR 法检测 miR-1470、PATZ1 mRNA表达;术后进行5 年的随访,统计 5 年总生存率.比较肝癌组织和癌旁正常组织中miR-1470、PATZ1 mRNA和蛋白表达情况;分析肝癌组织中miR-1470、PATZ1 mRNA表达与临床病理参数的关系,二者表达的相关性及与预后的关系,影响预后的危险因素;双荧光素酶报告基因实验验证miR-1470 与PATZ1 的靶向关系.结果:肝癌组织PATZ1 蛋白阳性表达率明显低于癌旁正常组织(P<0.05).与癌旁正常组织比较,肝癌组织中miR-1470 表达水平明显升高,PATZ1 mRNA表达水平明显降低(P<0.05).肝癌组织中 miR-1470、PATZ1 mRNA 低表达、高表达患者在血清甲胎蛋白(AFP)水平、中国肝癌分期方案(CNLC)分期及有无脉管癌栓方面,差异均有统计学意义(P<0.05).肝癌组织中miR-1470 与PATZ1 mRNA表达呈负相关(P<0.05).miR-1470 低表达患者、PATZ1 mRNA 高表达患者5 年总生存率分别明显高于miR-1470 高表达患者、PATZ1 mRNA 低表达患者(P<0.05).CNLC 分期Ⅲ期、脉管癌栓、miR-1470 高表达及PATZ1 mRNA低表达是影响肝癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05).miR-1470 可负向调控PATZ1 表达.结论:肝癌组织中miR-1470 表达上调,PATZ1 表达下调,两者呈负相关,均可作为评估肝癌患者预后的生物标记物,且miR-1470 可负向调控PATZ1 表达.

目的 探讨血清微小RNA-499a-5p(miR-499a-5p)、成纤维细胞生长因子9(FGF9)、炎性因子与脓毒症所致急性肺损伤(ALI)患者病情严重程度和预后的关系.方法 选取接受诊治的151例脓毒症患者为研究对象,根据ALI的发生情况分为脓毒症并发ALI组(68例)和一般脓毒症组(83例).根据氧合指数,将脓毒症并发ALI患者分为轻症组(23例)、中症组(26例)和重症组(19例).以脓毒症并发ALI患者诊治28 d内的生存情况,分为预后良好组(43例)和预后不良组(25例).另外,选取同期体检健康者151例为健康组.分析各组miR-499a-5p、FGF9及炎症因子间的差异和相关性.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-499a-5p、FGF9对脓毒症患者并发ALI的预测效能.结果 轻症组、中症组、重症组患者的miR-499a-5p和FGF9水平表现为依次降低,而炎症因子白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)水平依次升高,差异有统计学意义(P＜0.05).预后不良组的miR-499a-5p、FGF9低于预后良好组,IL-1、IL-6、TNF-α、CRP水平高于预后良好组,差异有统计学意义(P＜0.05).脓毒症并发AI.I患者的miR-499a-5p、FGF9与IL-1、IL-6、TNF-α、CRP呈负相关(P＜0.05);miR-499a-5p可正向调节FGF9表达(P＜0.05).miR-93、miR-135a联合预测脓毒症并发ALI患者预后的诊断效能高于单独预测,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-499a-5p、FGF9、炎性因子水平与脓毒症所致ALI患者的病情程度和预后相关.miR-499a-5p和FGF9可能作为潜在的生物标志物用于脓毒症并发ALI的预后评估.

目的:探讨乳腺癌患者血清微小RNA-135b(miR-135b)、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果的相关性.方法:选取116例乳腺癌患者为病例组,均接受新辅助化疗,以21 d为1个周期,共化疗8个周期,根据化疗反应将患者分为耐药组(32例)和敏感组(84例),另选128例体检健康女性为对照组.比较病例组和对照组,耐药组和敏感组血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平.采用Pearson相关性分析血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p水平间的相关性.乳腺癌患者化疗效果的影响因素采用Logistic回归分析.血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p对乳腺癌患者化疗耐药的预测价值通过受试者工作特征(ROC)曲线分析.结果:与对照组比较,病例组miR-135b、miR-148a-3p水平升高,血清miR-186-5p水平降低(均P＜0.05).耐药组血清miR-135b、miR-148a-3p水平高于敏感组,血清miR-186-5p水平低于敏感组(均P＜0.05).Pearson相关性分析结果显示,血清miR-135b与miR-148a-3p呈正相关,与miR-186-5p呈负相关,血清miR-148a-3p与miR-186-5p呈负相关(均 P＜0.05).多因素 Logistic 回归分析显示,血清 miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p 是乳腺癌患者化疗效果的影响因素(均P＜0.05).ROC曲线分析结果显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p联合预测化疗耐药的曲线下面积(AUC)高于三者单独预测AUC(均P＜0.05).结论:乳腺癌患者血清miR-135b、miR-148a-3p水平呈高表达,血清miR-186-5p水平呈低表达,三者水平变化与新辅助化疗效果有关,且三者联合检测对患者新辅助化疗耐药的预测价值更高.

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)AC092718.4对人类表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌耐药性的影响及其可能机制.方法 (1)获取曲妥珠单抗非耐药及耐药HER2阳性乳腺癌患者的乳腺癌组织(设为非耐药组、耐药组),检测其lncRNA AC092718.4、miR-135a-5p、S100钙结合蛋白P(S100P)mRNA和蛋白的表达水平.(2)以对曲妥珠单抗不敏感的HER2阳性乳腺癌细胞系MDA-MB-361细胞作为原发耐药细胞模型,以乳腺癌细胞株BT-474细胞为亲本,构建对曲妥珠单抗继发耐药的细胞模型(BT-474/TRA细胞).检测3种细胞中lncRNA AC092718.4、miR-135a-5p、S100P mRNA和蛋白的表达水平.经同一浓度曲妥珠单抗干预48 h后,检测3种细胞的活力.(3)取MDA-MB-361细胞分为sh-AC092718.4组、sh-NC组、对照组进行实验,其中sh-AC092718.4组细胞和sh-NC组分别转染sh-AC092718.4和sh-NC,对照组细胞未经任何处理.经同一浓度曲妥珠单抗干预48 h后,检测3组细胞的活力.(4)采用starBase和TargetScan分别预测lncRNA AC092718.4和miR-135a-5p的潜在靶标.通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA AC092718.4与miR-135a-5p之间、miR-135a-5p与S100P之间的靶向结合情况.结果 (1)与非耐药组相比,耐药组lncRNA AC092718.4、S100P mRNA、S100P蛋白表达水平升高,miR-135a-5p表达水平降低(P<0.05).(2)与BT-474细胞相比,BT-474/TRA细胞及MDA-MB-361细胞的lncRNA AC092718.4、S100P mRNA、S100P蛋白表达水平升高,miR-135a-5p表达水平降低,曲妥珠单抗干预48 h后的细胞活力更大(P<0.05).(3)与对照组和sh-NC组比较,sh-AC092718.4组MDA-MB-361细胞活力降低(P<0.05).(4)starBase预测结果显示,lncRNA AC092718.4与miR-135a-5p有靶向结合位点;TargetScan预测结果显示,miR-135a-5p与S100P有靶向结合位点.荧光素酶报告基因实验结果提示,lncRNA AC092718.4可与miR-135a-5p直接结合,S100P是miR-135a-5p的靶基因.结论 LncRNA AC092718.4促进乳腺癌细胞对曲妥珠单抗产生耐药性,下调lncRNA AC092718.4 表达可减轻MDA-MB-361细胞对曲妥珠单抗的耐药性,其机制可能涉及lncRNA AC092718.4作为竞争性内源RNA竞争性结合miR-135a-5p,从而上调S100P的表达.

目的 探讨外泌体microRNA(miR)-335-5p与慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者肝硬化严重程度的关系,以期为早期干预治疗提供更多临床信息.方法 于2019年2-8月期间从秦皇岛医院体检门诊和肝病科招募了 6例健康对照、8例代偿期肝硬化(compensated cirrhosis,CLC)和8例失代偿期肝硬化(decompensated cirrhosis,DLC)作为发现队列,采集血清样本用于外泌体提取和miRNA微阵列分析.选择2019年12月—2022年5月在医院肝病科接受诊治的229例CHB肝硬化患者作为验证队列,包括94例CLC和135例DLC患者.提取并鉴定外泌体,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测血清外泌体miR-335-5p表达水平.采用终末期肝病模型(end-stage liver disease,MELD)评分、血清钠与MELD联合公式(MELD-Na)评分评估肝硬化严重程度.结果 发现队列中,DLC组miR-335-5p较对照组和CLC组均下调(P＜0.05).验证队列中,DLC组患者外泌体miR-335-5p水平低于CLC组(P＜0.001).经Spearman相关性分析,肝硬化患者外泌体miR-335-5p表达MELD、MELD-Na均呈负相关(P＜0.05).在多元线性回归模型中调整其他混杂因素后,外泌体miR-335-5p 表达与 MELD(β=-0.103,95％CI:-3.692～-1.149,P＜0.001)和 MELD-Na(β=-0.109,95％CI:-4.007～-1.270,P＜0.001)仍呈负相关.经受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线分析,血清外泌体miR-335-5p用于鉴别诊断DLC的ROC曲线下面积为0.905(95％CI:0.867～0.944),对应截断值为0.158,特异度为87.2％,灵敏度83.7％.结论 外泌体miR-335-5p低表达与CHB患者肝硬化程度加重有关,可能作为DLC早期诊断的有用生物标志物.

目的 研究有吸烟史的口腔白斑病(oral leukoplakia,OLK)患者病损组织microRNA(miRNA)的异常表达,并对差异miRNAs进行癌变相关生物信息学分析.方法 利用人miRNA OneArray?v5.1微阵列芯片检测吸烟组(n=6)和非吸烟组(n=4)OLK石蜡标本间差异表达的miRNA,并运用生物信息学方法从中筛选出与OLK癌变密切相关的目标miRNA,随后对目标miRNA的靶基因进行基因本体数据库(gene ontology,GO)富集分析和KEGG通路分析以预测其可能的作用机制.结果 吸烟组与非吸烟组OLK组织中共检出174个差异表达的miRNAs(P<0.05),其中,39个miRNAs在吸烟组表达上调(log2(FC)≥0.585),135个miRNAs表达下调(log2(FC)≤-0.585).运用生物信息学方法从中筛选出8个与OLK癌变密切相关的目标miRNAs,包括:hsa-miR-6857-5p、hsa-miR-6745、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-363-5p、hsa-miR-6867-3p、hsa-miR-95-3p、hsa-miR-3607-5p、hsa-miR-9500.对上述目标miRNAs的靶基因行GO富集分析,结果显示大部分基因参与调控细胞增殖、凋亡、刺激反应等生物学活动.KEGG通路分析发现上述基因高度相关的作用通路为癌信号通路、PI3K-Akt及FoxO信号通路.结论 吸烟可通过改变OLK组织miRNA表达水平进而改变特定基因功能促进白斑癌变进程.