目的 优化包载丁香苦苷和羟基酪醇的聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-乙醇酸(mPEG-PLGA)纳米粒处方与制备工艺.方法 沉淀法制备纳米粒后,以水相与有机相比例、药物用量、表面活性剂(Pluronic F-68)浓度为影响因素,总包封率和总载药量为评价指标,星点设计-效应面法优化处方与制备工艺.结果 所得纳米粒溶液呈淡蓝色乳光,最佳条件为水相与有机相比例2.1∶1,药物用量14.1 mg,Pluronic F-68浓度0.1％,平均总包封率(32.38±1.21)％,总载药量(12.01 ±0.32)％,平均粒径(69.03±1.89) nm,Zeta电位(-25.2 ±+0.99)mV.结论 该方法稳定可靠,可用于优化包载丁香苦苷和羟基酪醇的mPEG-PLGA纳米粒处方与制备工艺.

目的 制备羟基喜树碱长循环纳米粒并采用星点设计-效应面法筛选制备工艺.方法 以单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸聚合物(mPEG2000-PLGA)作为包封材料,采用改良的乳化-溶剂挥发法制备长循环纳米粒,以包封率与载药量作为评价指标,采用Design-Expert V8.0.6软件进行星点设计,考察羟基喜树碱的浓度、mPEG2000-PLGA的浓度、 水相与有机相的体积比因素对评价指标的影响,并应用效应面法得到最佳制备工艺.结果羟基喜树碱长循环纳米粒的最佳工艺为:羟基喜树碱浓度为1.41 mg·mL-1,mPEG2000-PLGA浓度为3.86 mg·mL-1,水相与有机相的体积比为9.90:1.制备的长循环纳米粒包封率为35.14％,载药量为2.10％,平均粒径为154.10 nm,电位为-38.61 mV.结论所优化的工艺方法简便、稳定可行,适用于羟基喜树碱长循环纳米粒的制备.

目的 考察HepG2.2.15细胞对同时包载丁香苦苷和羟基酪醇纳米粒(nanoparticles co-loaded with syringopicroside and hydroxytyrosol,SH-NPs)的摄取机制.方法 采用沉淀法制备SH-NPs,以异硫氰酸荧光素为荧光标记物,采用流式细胞仪研究HepG2.2.15细胞对SH-NPs的摄取机制.结果 秋水仙素为抑制剂,孵育时间在0.5~24 h范围内,阳性细胞百分数由1.9%增加到56.4%;药物浓度为125、250、500 μg/mL时,阳性细胞百分数分别为4.9%、3.4%、3.9%.氯喹为抑制剂,孵育时间在0.5~24 h范围内,阳性细胞百分数由7.4%增加到55.4%;药物浓度为125、250、500 μg/mL时,阳性细胞百分数分别为19.5%、22.5%、27.6%.结论 秋水仙素与氯喹对HepG2.2.15细胞摄取有抑制作用,且HepG2.2.15细胞对SH-NPs的摄取与药物浓度、孵育时间呈正相关,推断HepG2.2.15细胞对SH-NPs细胞的摄取机制为非特异性吸附内吞.

目的:探讨 α-细辛脑脂质聚合物杂化纳米粒(ARE-LPHNPs)的工艺优化及表征.方法:采用自组装法制备 α-细辛脑脂质聚合物杂化纳米粒,单因素试验考察卵磷脂与mPEG-PLGA的比例 、mPEG-PLGA质量 、有机相与水相体积比及药载比的影响,星点设计-效应面法优化处方工艺,并对其理化性质进行表征.结果:ARE-LPHNPs最优处方为mPEG-PLGA质量为4.69 mg、有机相与水相体积比1:2.08,药载比为19.74％.最优工艺制备出的ARE-LPHNPs外观呈球形,平均粒径及电位分别为(87.67±1.25)nm,(-18.1±0.99)mV,包封率与载药量分别为(84.17±0.37)％ 、(7.63±0.05)％.DSC结果表明药物在ARE-LPHNPs中未以结晶形式存在.结论:采用自组装法制备ARE-LPHNPs,工艺稳定,所制备纳米粒外观圆整,可以为进一步体内研究提供参考.

目的 制备新型姜黄素油酸复合物肝靶向纳米粒[Cur(OA)2-NPs],并对其小鼠体内组织分布进行研究.方法 基于前期工作按最佳工艺,应用改良的溶剂挥发法制备Cur(OA)2-NPs并进行表征;以25 mg·kg-1小鼠尾静脉注射Cur(OA)2-NPs,分别于给药后0.05,0.25,0.75,2,4,6,8,12h,经眼球取血200 μL,小鼠解剖后取肝脏、心脏、脾脏、肺脏、肾脏和脑,经过液-液萃取法提取药物,HPLC测定姜黄素油酸[Cur(OA)2]和姜黄素(Cur)的含量,分析Cur(OA)2-NPs体内组织分布和药物释放特性;将Cur(OA)2和DiR荧光染料包裹到mPEG5000-PLGA中制得纳米粒,按Cur剂量25 mg·kg-1通过静脉注射给予正常小鼠和H22荷瘤小鼠,于不同时间点麻醉小鼠,将其置于785 nm激发波和820 nm发射波形成的活体红外成像系统中扫描成像,研究正常小鼠和H22荷瘤小鼠体内纳米粒的肿瘤靶向性特征.结果 纳米粒呈圆形,大小均匀,平均粒径为(93.39±1.71)nm,载药量为(19.35±0.12)％,包封率为(92.32±3.13)％.血浆中除脑组织外其余组织均可检测到Cur(OA)2分布,分布迅速,Cur(OA)2浓度4h内从310.33 μg·mL-1减少到28.94 μg·mL-1,近90％从血管中被清除,肝脏中含量最高可达368.93 μg·g-1;肝脏、脾脏和肾脏可检测到Cur,分别为125.72,33.60,16.81 μg·g-1,而血浆、肺脏和脑中则无.纳米粒静脉注射后2h左右出现峰值,其中肝脏Cur(OA)2和Cur的浓度最高;活体成像结果也表明,小鼠体内纳米粒主要分布于肝脏和肿瘤部位,肝脏2h左右达到峰值随后慢慢下降,而肿瘤组织8h左右可见强烈荧光,并于12h左右达到峰值,随后缓慢下降,且其荧光强度显著强于肝脏部位.结论 本研究完善了Cur(OA)2-NPs的评价,为进一步研究其体内抗肿瘤作用奠定了良好的基础,也为难溶的、口服生物利用度低的药物开发提供了解决思路.

目的 制备及表征银杏内酯K (GK)聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒(GK-mPEG-PLGA-NPs),并评价其神经保护活性.方法 采用聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PEG-PLGA-COOH)作为载体,复乳溶剂挥发法制备隐形纳米粒;HPLC法测定GK-mPEG-PLGA-NPs的包封率及载药量;动态光散射粒径仪和透射电镜测定GK-mPEG-PLGA-NPs的粒径分布、Zeta电位及表面形态;以pH 7.4磷酸盐缓冲溶液(PBS)作为释放介质,考察GK-mPEG-PLGA-NPs的体外释放行为;采用体外细胞实验,考察GK-mPEG-PLGA-NPs对H2O2诱导肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤的保护作用.结果 GK-mPEG-PLGA-NPs包封率和载药量分别为(83.40±2.85)％和(3.26±0.24) mg/g;GK-mPEG-PLGA-NPs平均粒径为(93.19±2.77) nm;Zeta电位为(-11.93±1.71)mV;60 h内GK-mPEG-PLGA-NPs累积释药量为(90.5±4.0)％.GK-mPEG-PLGA-NPs对H2O2诱导的PC12细胞存活率降低有明显的改善作用,对乳酸脱氢酶(LDH)释放具有抑制作用,但其保护作用明显弱于GK对PC12细胞作用.结论 GK-mPEG-PLGA-NPs体外释放具有缓释性行为,对H2O2诱导PC12细胞具有神经保护作用,表明GK-mPEG-PLGA-NPs具有应用前景,值得进一步研究.

[目的]以聚乙交酯-丙交酯-聚乙二醇(mPEG-PLGA)嵌段共聚物作为药物载体制备木犀草素载药纳米粒,并考察其抗肿瘤活性.[方法]采用乳化-溶剂蒸发法制备木犀草素-mPEG-PLGA载药纳米粒,以共聚物浓度(X1),药物浓度(X2)和有机溶剂/水(X3)作为自变量,以粒径分布(Y1)和包封率(Y2)作为响应值,利用Box-Behnken实验设计优化其处方;透射电镜观察纳米粒的微观形态,Malvern粒度分析仪测定纳米粒的粒径分布;利用透析法评价纳米粒的体外释药状态;比较了木犀草素-PEG-PLGA载药纳米粒与木犀草素溶液对4T1人乳腺癌细胞体外抑制作用.[结果]实验设计优化得到纳米粒最优处方为:mPEG-PLGA共聚物浓度为12.9 mg/ml,木犀草素浓度为2.0 mg/ml,有机溶剂/水用量比为0.3,制备3批木犀草素-mPEG-PLGA载药纳米粒的包封率为(80.6±2.5)％,外观呈淡黄色透明状溶液,在TEM可以观察到纳米粒呈球状或类球状分布,纳米粒的平均粒径为(119.4±25.7) nm,PdI为(0.175±0.053),Zeta电位为(-10.5±0.7)mV;mPEG-PLGA载药纳米粒可减慢木犀草素体外释放速率;木犀草素-mPEG-PLGA载药纳米粒组对4T1人乳腺癌细胞的抑制作用显著高于木犀草素溶液组(P＜0.05).[结论]本研究将木犀草素制备成mPEG-PLGA载药纳米粒,对4T1人乳腺癌细胞表现出良好的抑制作用,木犀草素-mPEG-PLGA载药纳米粒可能具有潜在的临床应用价值.

目的 采用Box-Behnken响应面法优化海藻酸钠聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸共聚物(mPEG-b-PLGA)纳米粒的处方工艺.方法 合成10％ mPEG5000-b-PLGA为基质材料,通过双乳剂法制备载胰岛素的海藻酸钠mPEG-b-PLGA纳米粒.选取胰岛素投料比、油相与外水相体积比、乳化剂浓度为考察因素,包封率和载药量为评价指标,采用Box-Behnken响应面法筛选最优处方,对优化所得纳米粒的基本性质和体外释药性能考察.结果 最优处方为:胰岛素投料比14.67∶100,油相与外水相体积比1∶3.32,乳化剂浓度为2.01％.实际制备所得载胰岛素纳米粒包封率为83.61％,载药量为10.90％,与模型预测值接近.平均粒径为(271.80±3.50)nm,Zeta电位值为-54.27 mV具有良好的缓释性能.结论 Box-Behnken响应面法有效可行,可以用于优化海藻酸钠mPEG-b-PLGA纳米粒的处方工艺,优化后的纳米粒有望作为理想的胰岛素缓释载体.

目的 制备聚乙二醇聚丙交酯-乙交酯聚赖氨酸(mPEG-PLGA-PLL)包载紫杉醇(PTX)的纳米粒(PTX NPs),探讨其在体内外对耐药卵巢癌细胞的作用.方法 以包封率和粒径为综合评价指标,筛选PTX NPs的最佳制备方法,并采用正交实验优化该制备方法的工艺参数.通过粒度仪和透射电镜对PTX NPs进行表征分析.采用高效液相色谱法分析定量检测PTX的包封率,透析法评估PTX NPs中PTX的释放率.荧光倒置显微镜观察PTX NPs的摄取情况,CCK-8法检测NPs及PTX NPs对耐药卵巢癌细胞生长影响,采用动物成像仪观察PTX NPs在体内的生物学分布.结果 PTX NPs粒径为(103.0±0.9)nm,包封率为(84.1±1.3)％,具有一定缓释作用.细胞摄取实验结果显示PTX NPs相比游离药物更容易被卵巢癌A2780细胞紫杉醇耐药株(A2780TR)细胞摄取.空载mPEG-PLGA-PLL纳米粒无明显细胞毒性,游离PTX在A2780和A2780TR细胞中的IC50分别为(0.010 2±0.000 3)μg·mL-1和(4.55±0.44)μg·mL-1,而PTX NPs的IC50分别为(0.003 1±0.000 6)μg·mL-1和(1.05±0.13) μg·mL-1.体内生物学分布结果显示PTX NPs能够靶向肿瘤部位发挥作用.结论 本研究制备的PTX NPs粒径适宜、包封率高、具有药物缓释作用,易被细胞摄取,相比游离PTX对卵巢癌耐药细胞的作用更强,且具有体内靶向作用,在卵巢癌治疗中具有一定的应用前景.

目的 以血管生成为靶点治疗肿瘤的假说验证后,抗肿瘤血管生成基因治疗因其明显的优势而受到关注,与化疗联合,既抑制肿瘤血管内皮细胞,亦杀灭肿瘤细胞,协同增强抗肿瘤效应.文中探讨了共载血管内皮生长因子(VEGF)的小型干扰RNA(siRNA)与化疗药物(EPI)的双层纳米粒的负载基因能力和体内外抑制乳腺癌初步效应.方法 将合成的mPEG-g-CS与PLGA纳米粒通过超声透析法制备成双层纳米粒(DL NPs),外层为mPEG-g-CS,负载siRNA,内层为PLGA纳米粒,包载化疗药物EPI,研究双层纳米粒的理化性质,基因负载能力.将裸鼠随机数字表法分成4组,每组6只,重复3次:等渗盐水组,游离EPI组、mPEG-g-CS-siRNA NPs组以及DL NPs-siRNA组,EPI给药剂量为25 mg EPI/kg,mPEG-g-CS-siRNA以及DL-siRNA NPs给药剂量为65μg siRNA/kg,开始进行治疗.定期测量肿瘤长宽,22 d时处死裸鼠,取出肿瘤组织、称重.结果 琼脂糖凝胶电泳阻滞实验表明mPEG-g-CS能有效地与pDNA结合形成稳定的复合物,且对细胞活性影响小,证明其可作为基因载体.siRNA浓度为100 nmol/L为最佳负载浓度.当N/P比例为5时,mPEG-g-CS-siRNA的粒径最小[(-12.70±0.42)nm],而对DL NPs-siRNA而言,当N/P比例为20时其粒径最小[(153.82±30.15)nm].当N/P比例为0.1时,可以看到有少量的pDNA迁移,此时mPEG-g-CS不能完全缩合pDNA;当N/P比例为0.4及之上,pDNA完全被mPEG-g-CS阻滞,此时mPEG-g-CS已经完全缩合pDNA.以聚乙烯亚胺(PEI)为阳性对照,MCF-7细胞、HUVEC细胞与纳米粒共孵育24、48、72 h后,mPEG-g-CS-pDNA NPs都显示出较低的毒性.但是随着培养时间的延长,mPEG-g-CS-pDNA NPs的毒性增加.siRNA浓度为100 nmol/L时,MCF-7细胞存活率为78.66％,HUVEC的细胞存活率为85.69％,毒性更大.在孵育24 h时,DL NPs-siRNA浓度为0.5、50和500μg/mL时MCF-7细胞的平均存活率分别是92.4％、78.1％和51.4％,并且,随着孵育时间的延长,各组细胞存活率均降低.治疗22 d后,游离EPI组的肿瘤抑制率约为22.36％,mPEG-g-CS-siRNA组的肿瘤抑制率约为85.01％,相比之下,DL NPs-siRNA组肿瘤抑制率高达99.90％.22 d后,解剖小鼠,取出肿瘤组织,对照组的肿瘤体积和质量最大,DL NPs-siR-NA组最小,肿瘤几乎完全消失.结论 DL NPs可用于负载siRNA及化疗药物,有望成为一种新的抗肿瘤药物输送体系.