目的:探讨miR-181a通过磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)促进软骨肉瘤细胞生长的作用及其可能的调控机制。方法:收集2022年1月至12月湖南省人民医院骨科患者手术切除的新鲜软骨肉瘤及软骨瘤组织各10例，采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法分别检测miR-181a在软骨肉瘤及软骨瘤组织中的表达；体外培养软骨肉瘤细胞SW1353，分别转染miR-181a抑制剂(miR-181a抑制组)及其对照(对照miR-NC)到细胞中，通过CCK-8细胞计数实验及克隆形成实验分别检测miR-181a对SW1353细胞生长及增殖能力的影响；通过Target Scan数据库预测miR-181a与PTEN之间的结合位点，并采用双荧光素酶报告基因实验进行验证；分别转染miR-181a模拟物(miR-181a组)及其对照(miR-NC组)到软骨肉瘤细胞SW1353中，检测细胞中ATP含量、葡萄糖消耗量和乳酸生成量，分析miR-181a对SW1353细胞糖酵解的影响。结果:软骨肉瘤组织中miR-181a的表达明显高于软骨瘤组织( P<0.05)；miR-181a抑制组的细胞生长及克隆形成能力均明显低于对照组(均 P<0.05)；经Target Scan在线网站预测，miR-181a与PTEN之间可能存在结合位点，且双荧光素酶报告基因实验证实共转染野生型PTEN和miR-181a可显著降低荧光素酶活性( P<0.05)；miR-181a组的ATP含量、葡萄糖消耗量和乳酸生成量均明显高于miR-NC组(均 P<0.05)。 结论:miR-181a通过PTEN介导糖酵解促进软骨肉瘤细胞的生长。

目的:构建携带过表达miR181a的慢病毒载体，转染骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells，BMSC)，使基因修饰后的BMSC持续高水平表达miR181a。方法:将miR181a质粒与三种助转质粒PRSV，PRRE，VSVG共同转染进293T细胞中，构建含有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein，eGFP)的过表达miR181a的慢病毒表达载体。72 h后收获过表达miR181a的病毒液，转染BMSC。用嘌呤霉素筛选，得到能够长期稳定过表达miR181a的BMSC，即miR181a-BMSC。结果:成功构建出携带miR181a的慢病毒载体，转染率超过95%。嘌呤霉素筛选BMSC，得到能够长期稳定过表达miR181a的BMSC，与BMSC组相比，miR181a-BMSC组中，miR181a的表达量明显增多，差异具有统计学意义(3.80比25.92， t＝19.401， P<0.05)。提取BMSC和miR181a-BMSC的外泌体，纯化后miR181a-BMSC的外泌体内miR181a表达量明显增高，差异具有统计学意义(1.41比0.87， t＝6.003， P<0.05)。 结论:成功构建出慢病毒介导的过表达miR181a基因修饰的骨髓间充质干细胞。

目的:探讨MAPT-IT1在乳腺癌中表达的临床意义及其体外生物学效应。方法:TCGA数据库分析MAPT-IT1在乳腺癌中的表达，收集64例乳腺癌及正常癌旁组织，培养人乳腺癌MDA-MB-231及MCF-7细胞，通过细胞转染技术过表达MAPT-IT1，回复表达miR-181a-5p，将MDA-MB-231细胞分为：空白A组、过表达A组及恢复A组；将MCF-7细胞分为：空白B组、过表达B组及回复B组。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）实验检测组织或各组细胞MAPT-IT1及其预测靶基因miR-181a-5p及MAPT mRNA表达水平，Western blot检测MAPT蛋白表达水平，CCK-8实验检测细胞增殖能力的变化，Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果:MAPT-IT1在正常癌旁组织及乳腺癌组织中表达分别为0.011±0.002及0.028±0.003；MAPT-IT1在乳腺癌组织中表达显著高于正常癌旁组织（ t=4.08， P<0.001），其高表达与患者更早的临床分期、ER阳性及预后时间延长相关（ P均<0.05）。空白A组、过表达A组及回复A组MAPT-IT1表达分别为（1.000±0.078）、（8.597±0.320）、（8.540±0.177），miR-181a-5p表达分别为（1.000±0.027）、（0.263±0.024）、（4.433±0.239），MAPT表达分别为（1.000±0.071）、（3.297±0.243）、（0.497±0.029）。空白B组、过表达B组及回复B组MAPT-IT1表达分别为（1.000±0.081）、（5.716±0.309）、（5.288±0.176），miR-181a-5p表达分别为（1.000±0.024）、（0.291±0.022）、（3.648±0.073），MAPT表达分别为（1.000±0.054）、（3.309±0.177）、（0.883±0.075）。过表达MAPT-IT1后，MDA-MB-231及MCF-7细胞miR-181a-5p表达下调（ P<0.05），而MAPT的表达水平显著增高（ P<0.001），同时细胞增殖及侵袭能力显著降低（ P<0.05）。恢复表达miR-181a-5p则可下调MAPT，促进细胞增殖及侵袭能力（ P<0.05）。 结论:MAPT-IT1的过表达可显著下调乳腺癌细胞miR-181a-5p，介导MAPT表达上调及细胞体外恶性表型的抑制。

目的:探讨微小RNA（miRNA）-181b-5p是否通过靶向普列克底物蛋白（PLEK）抑制皮肤黑素瘤（CM）细胞的增殖及侵袭能力。方法:生物信息学分析CM核心基因；双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-181b-5p和PLEK的靶向结合。采用RNA oligo和siRNA分别调控A375细胞miRNA-181b-5p和PLEK的表达，具体分组为：模拟物阴性对照组、miRNA-181b-5p模拟物组、抑制剂阴性对照组、miRNA-181b-5p抑制剂组、PLEK siRNA组、siRNA阴性对照组、miRNA-181b-5p抑制剂和对照siRNA共转染组以及miRNA-181b-5p抑制剂和PLEK siRNA3共转染组。上述各组用相应试剂处理细胞48 h后，采用qPCR检测A375细胞中miRNA-181b-5p和PLEK mRNA的表达，Western印迹检测PLEK蛋白的表达，Transwell小室侵袭实验检测A375细胞的侵袭能力；继续培养24 ~ 96 h后，CCK8实验检测A375细胞增殖能力。结果:PLEK为CM的核心基因，CM原位癌组织较癌旁组织高表达PLEK（ P = 0.031），转移组织较原位癌组织高表达PLEK（ P = 0.001）。与人表皮黑素细胞HEMa-LP相比，A375细胞高表达PLEK mRNA（3.884 ± 0.156比0.997 ± 0.010， t = 18.48， P < 0.001）及PLEK蛋白（2.840 ± 0.301比1.029 ± 0.094， t = 5.47， P = 0.005），低表达miRNA-181b-5p（0.333 ± 0.042比0.967 ± 0.069， t = 7.83， P = 0.001）。双荧光素酶报告基因实验显示，miRNA-181b-5p和PLEK靶向结合。与模拟物阴性对照相比，miRNA-181b-5p模拟物转染后A375细胞的存活率显著降低（48 h， t = 7.96， P = 0.015；72 h， t = 7.50， P = 0.002；96 h， t = 7.96， P = 0.001），侵袭能力也显著降低（ t = 5.07， P = 0.007）；相反miRNA-181b-5p抑制剂组A375细胞存活率高于抑制剂阴性对照组（24 h， t =5.38， P = 0.013；48 h， t = 5.36， P = 0.013；72 h， t =7.63， P = 0.005；96 h， t =5.99， P = 0.004），侵袭能力也高于抑制剂阴性对照组（ t = 7.24， P = 0.002）；与对照siRNA组相比，PLEK siRNA转染后A375细胞的增殖能力降低（48、72、96 h时， P值分别为0.015、0.011、0.001），侵袭能力也降低（ t = 4.93， P = 0.008）；与miRNA-181b-5p抑制剂和对照siRNA共转染组相比，miRNA-181b-5p抑制剂和PLEK siRNA共转染组A375细胞的增殖率明显降低（24、48、72、96 h时， P值分别为0.042、0.042、0.037、0.017），侵袭能力也明显降低（ t = 8.52， P = 0.001）。 结论:miRNA-181b-5p抑制A375细胞增殖和侵袭能力，其机制涉及靶向下调PLEK的表达。

目的:探讨长链基因间非编码RNA-重编程调节因子（Linc-ROR）及微小RNA 181a-5p（miR-181a-5p）在卵巢高级别浆液性癌（HGSOC）组织中的表达，并探讨两者对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞恶性生物学行为的影响及作用机制。方法:（1）收集2019年6月—2021年6月在青岛大学附属医院行手术治疗的36例HGSOC患者，以同期因子宫肌瘤行子宫全切除+双侧附件切除术（输卵管和卵巢正常）的26例患者作为对照。实时荧光定量PCR技术检测HGSOC组织、正常输卵管伞端及正常卵巢组织中Linc-ROR和miR-181a-5p的表达，分析两者的相关性及与HGSOC患者手术病理分期和淋巴结转移的关系。（2）应用生物信息学软件预测Linc-ROR与miR-181a-5p的靶向关系，并采用双荧光素酶实验验证。采用小分子干扰RNA（siRNA）技术分别沉默和过度表达卵巢癌细胞系SKOV3细胞中Linc-ROR的表达，实验分为4组，Linc-ROR-NC组（即阴性对照）、Linc-ROR-p组（即过度表达Linc-ROR）、Linc-ROR-si组（即沉默Linc-ROR表达）、Linc-RORsi+miR-181a-5p-si组（即同时沉默Linc-ROR和miR-181a-5p表达）。实时荧光定量PCR技术检测转染后4组SKOV3细胞中Linc-ROR和miR-181a-5p的表达，细胞克隆形成实验、划痕实验及穿膜（transwell）小室实验分别检测转染后4组SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭能力。蛋白印迹（western blot）法检测转染后4组SKOV3细胞中Wnt通路相关蛋白β-连环蛋白（β-catenin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（vimentin）的表达。结果:（1）HGSOC组织中Linc-ROR的表达水平为3.77±0.13，显著高于正常卵巢组织和正常输卵管伞端组织（分别为1.00±0.21、1.08±0.26； P均<0.01）；HGSOC组织中miR-181a-5p的表达水平为0.38±0.12，显著低于正常卵巢组织和正常输卵管伞端组织（分别为1.03±0.21、1.01±0.20； P均<0.01）。HGSOC组织中Linc-ROR与miR-181a-5p表达呈显著负相关（ r=-0.979， P<0.01）；Linc-ROR、miR-181a-5p的表达水平与HGSOC患者的手术病理分期、淋巴结转移均明显有关（ P均<0.05）。（2）生物信息学软件预测并经双荧光素酶实验证实，Linc-ROR与miR-181a-5p存在靶向结合位点。与Linc-ROR-NC组比较，Linc-ROR-p组SKOV3细胞中miR-181a-5p及E-cadherin蛋白的表达水平下降，Linc-ROR及β-catenin和vimentin蛋白的表达水平升高，细胞克隆数增加，肿瘤细胞侵袭和迁移能力增强，分别比较，差异均有统计学意义（ P均<0.01）；Linc-ROR-si组SKOV3细胞中miR-181a-5p及E-cadherin蛋白的表达水平升高，Linc-ROR及β-catenin和vimentin蛋白的表达水平下降，细胞克隆数减少，细胞迁移和侵袭能力下降，分别比较，差异均有统计学意义（ P均<0.01）；而Linc-ROR-si+miR-181a-5p-si组SKOV3细胞中miR-181a-5p及E-cadherin、β-catenin、vimentin蛋白的表达水平均无明显变化，肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移能力也均无明显变化，分别比较，差异均无统计学意义（ P均>0.05）。 结论:HGSOC组织中Linc-ROR高表达、miR-181a-5p低表达。Linc-ROR通过抑制miR-181a-5p表达激活Wnt信号通路，从而调控卵巢癌细胞的恶性生物学行为，促进肿瘤的侵袭和转移。

目的:探讨沉默长链非编码RNA SNHG7(LncRNA SNHG7)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation，H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及其对miR-181b-5p的靶向调控作用。方法:体外培养大鼠H9c2心肌细胞，将其随机分为对照组、H/R组、H/R+si-NC组、H/R+si-SNHG7组、H/R+si-SNHG7+anti-miR-NC组和H/R+si-SNHG7+anti-miR-181b-5p组。检测乳酸脱氢酶、丙二醛的含量与超氧化物歧化酶的活性；用流式细胞术检测细胞凋亡率；用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SNHG7、miR-181b-5p的表达量；用双荧光素酶报告实验验证SNHG7、miR-181b-5p的靶向关系；蛋白免疫印迹法检测Bax和Bcl-2蛋白的表达量。结果:与对照组相比，H/R组心肌细胞中SNHG7的表达显著升高( P<0.05)，miR-181b-5p的表达水平显著降低( P<0.05)，乳酸脱氢酶、丙二醛的含量显著升高( P<0.05)，超氧化物歧化酶的活性显著降低( P<0.05)，细胞凋亡率显著升高( P<0.05)，Bax蛋白水平显著升高( P<0.05)，Bcl-2蛋白水平显著降低( P<0.05)；与H/R组、H/R+si-NC组相比，H/R+si-SNHG7组乳酸脱氢酶、丙二醛的含量显著降低( P<0.05)，超氧化物歧化酶的活性显著升高( P<0.05)，细胞凋亡率显著降低( P<0.05)，Bax蛋白水平显著降低( P<0.05)，Bcl-2蛋白水平显著升高( P<0.05)；双荧光素酶报告实验证实SNHG7可靶向结合miR-181b-5p；干扰miR-181b-5p的表达可减弱沉默SNHG7对H/R诱导的心肌细胞氧化应激及细胞凋亡的作用。 结论:沉默SNHG7可能通过上调miR-181b-5p的表达抑制H/R诱导的心肌细胞氧化应激及细胞凋亡，从而对心肌细胞发挥保护作用。

目的:探究不同刺激条件下，小鼠白色脂肪组织棕色化过程中差异表达的微小RNA(miRNAs)，并分析其在棕色化过程中潜在的分子调控机制。方法:构建小鼠腹股沟皮下白色脂肪组织棕色化模型，一组为低温刺激，另一组为腹腔注射CL316-243，通过HE染色和产热相关基因表达分析等，确定皮下白色脂肪组织棕色化模型的建立。通过RNA测序得到不同条件下皮下白色脂肪组织的miRNAs表达谱并筛选出两组内差异表达趋势相同的miRNAs，并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证；通过生物信息学预测miRNAs靶基因，并通过qRT-PCR进一步验证其表达水平。结果:冷刺激和CL316-243均能诱导皮下白色脂肪组织棕色化，同时皮下白色脂肪组织的miRNAs表达谱在诱导前后存在明显差异。经差异表达miRNA筛选后，检测不同白色脂肪组织棕色化诱导条件下，miR-30e-3p表达均升高，miR-181a-5p表达均下降。经靶基因预测及验证，Cdk6和Sirt1分别是miR-30e-3p和miR-181a-5p参与调控皮下白色脂肪组织棕色化的潜在靶点。结论:冷刺激及CL316-243处理小鼠皮下白色脂肪组织棕色化后miRNA表达差异明显，其中miR-30e-3p和miR-181a-5p分别可能通过靶基因Cdk6和Sirt1参与调控皮下白色脂肪组织棕色化过程。

目的:验证过表达小RNA(micro RNA, miR)-23b的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)回输对治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)小鼠具有更好的协同治疗效果。方法:体外实验将EAE小鼠新鲜外周T淋巴细胞与miR23b-BMSCs (miR23b-BMSC-LN组)，未处理BMSCs(BMSC-LN组)，或未加入BMSCs的空白对照(Control-LN组)共培养48 h，应用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测其中白细胞介素(interleukin, IL)-17、转化生长因子-β(transforming growth factor, TGF-β)的表达水平。用CD4 Percp、CD25 PE、IL-17 APC、Foxp3 APC抗体对细胞进行染色，流式细胞仪分析MOG35-55刺激后的CD4 ＋ IL-17 ＋ Th17细胞和CD4 ＋ CD25 ＋ Foxp3 ＋ Treg细胞的百分比；体内实验应用HE染色分析回输miR23b-BMSCs组(miR23b-BMSC-EAE组)，回输未处理BMSCs组(BMSCs-EAE组)，假手术组(ctrl-EAE组)的脊髓白质的炎性浸润情况。 结果:过表达miR-23b可增强BMSCs可抑制Th17细胞的分化能力[(4.34±0.32)%比(8.21±0.16)%， χ2＝10.03, P<0.05]，并促进调节性T(T regular, Treg)细胞亚群的分化[(1.05±0.27)%比(0.24±0.06)%， χ2＝12.67， P<0.05)]。在病理表现上，miR23b-BMSCs移植能够通过降低Th17/Treg细胞比率以及抑制炎症细胞浸润血脑屏障，从而减轻脊髓脱髓鞘，延缓EAE病程的进展。 结论:过表达miR23b-BMSCs回输治疗具有更高效更持久的治疗效果，为BMSCs治疗自身免疫疾病的应用奠定了基础。

目的:探讨miR-181a-5p靶向羧基末端区域小磷酸化酶样蛋白（carboxy-terminal domainsmall phosphatase-like, CTDSPL）基因介导TGF-β信号通路对胃肠道间质瘤发生发展的影响。方法:选择2016年1月至2019年12月于商丘市第一人民医院行手术治疗的胃肠道间质瘤（gastrointestinal stromal tumor，GIST）患者作为研究对象，术中取患者的肿瘤组织和癌旁正常组织。分析患者的临床病理资料；采用定量实时聚合酶联反应（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测CTDSPL基因mRNA和miR-181a-5p的表达量；采用western blot法检测CTDSPL基因及TGF-β信号通路相关因子的蛋白表达水平。将人胃肠道间质瘤细胞系（GIST-T1）分别转染miR-181a-5p mimic、miR-181a-5p inhibitor和CTDSPL过表达载体。MTT检测各组细胞增殖活力，Transwell检测各组细胞侵袭，流式细胞术检测各组细胞凋亡。结果:相对于癌旁组织，GIST患者的肿瘤组织中miR-181a-5p及TGF-β信号通路相关因子表达增强，CTDSPL表达被抑制。肿瘤大小、浸润深度和改良NIH分级与GIST肿瘤组织CTDSPL基因mRNA表达量有关（ P均<0.05）。相对于Blank组，敲除miR-181a-5p或过表达CTDSPL能抑制癌细胞增殖活力和侵袭，诱导细胞凋亡，而miR-181a-5p mimic对GIST-T1细胞的作用能被CTDSPL过表达挽救。 结论:miR-181a-5p可通过下调CTDSPL基因表达水平，激活TGF-β信号通路促进GIST的发生、发展。

目的:探索长链非编码RNA（lncRNA）结直肠肿瘤差异表达基因（CRNDE）、微RNA-181a-5p（miR-181a-5p）、自噬相关蛋白5（ATG5）在原发性痛风性关节炎（GA）患者外周血中的表达及临床意义。方法:收集80例GA患者[急性期痛风（AG）、间歇期痛风（IG）各40例]和50名健康体检者（HC）临床资料、实验室检查指标及外周血标本。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测lncRNA CRNDE、miR-181a-5p、ATG5 mRNA表达水平；蛋白质印迹法检测ATG5蛋白表达水平。比较3组间lncRNA CRNDE、miR-181a-5p、ATG5 mRNA表达量并与临床指标做相关性分析，构建受试者工作特征曲线（ROC）评估lncRNA CRNDE、miR-181a-5p、ATG5 mRNA在痛风诊断中的价值。符合正态分布的计量资料使用 t检验或方差分析，非正态分布用Mann-Whitney U检验或Kruskal-Wallis H检验，变量间的相关分析采用Spearman分析，各指标的诊断价值采用ROC曲线。 结果:①LncRNA CRNDE、miR-181a-5p、ATG5 mRNA在3组间表达差异均有统计学意义（ H=32.12、57.73、68.32， P均<0.001）。其中，lncRNA CRNDE表达水平在AG组明显高于IG组和健康对照组[61.95（11.39，108.30）×10 -3，25.71（15.40，38.40）×10 -3，13.80（3.97，23.99）×10 -3； Z=-3.24， P=0.001； Z=-5.03， P<0.001]，且在IG组的表达水平高于健康对照组（ Z=-3.56， P<0.001）；miR-181a-5p、ATG5 mRNA表达水平在AG组明显低于IG组及健康对照组[miR-181a-5p：39.81（31.22，69.38）×10 -3，60.74（44.19，90.35）×10 -3，121.30（101.50，316.90）×10 -3； Z=-3.01， P=0.030； Z=-6.93， P<0.001。ATG5 mRNA：4.52（2.31，26.63）×10 -3，43.63（13.72，102.70）×10 -3，153.90（66.62，365.80）×10 -3； Z=-5.47、-7.36， P均<0.001）]，在IG组的表达水平低于健康对照组（ Z=-5.25、-4.47， P均<0.001）。ATG5蛋白表达水平在3组间表达的差异有统计学意义（ F=6.24， P=0.030），AG组高于健康对照组，差异有统计学意义[（0.96±0.13）与（0.61±0.04）， t=4.25， P=0.013]，但IG组（0.78±0.15）与AG组（ t=1.51， P=0.206）、HC组（ t=1.85， P=0.138）差异无统计学意义。②Spearman相关性分析显示，在GA组中lncRNA CRNDE与miR-181a-5p、ATG5 mRNA的表达水平呈负相关（ r=-0.49， P<0.001； r=-0.35， P=0.002）；miR-181a-5p与ATG5 mRNA表达水平在呈正相关（ r=0.64， P<0.001）；lncRNA CRNDE表达水平与ESR、WBC呈正相关（ r=0.49， P<0.001； r=0.43， P=0.001）；miR-181a-5p表达水平与ESR、WBC呈负相关（ r=-0.29， P=0.009； r=-0.35， P=0.002）；ATG5 mRNA表达水平与ESR、WBC、中性粒细胞绝对值（GR）呈负相关（ r=-0.26， P=0.021； r=-0.26， P=0.024； r=-0.27， P=0.021）。在AG组中lncRNA CRNDE与ESR、WBC呈正相关（ r=0.36， P=0.022； r=0.36， P=0.026），miR-181a-5p与WBC呈负相关（ r=-0.34， P=0.038）。③ROC曲线显示：lncRNA CRNDE、miR-181a-5p、ATG5 mRNA表达水平预测痛风的ROC曲线下面积分别为0.764、0.875、0.864；三者联合预测痛风的ROC曲线下面积为0.928。 结论:LncRNA CRNDE、miR-181a-5p、ATG5可能参与了GA的发病机制，并且有望成为监测痛风发病的生物学指标。