目的 探讨循环微小核糖核酸(miR)-126-3p在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达及诊断价值.方法 收集多中心miR芯片及测序数据探讨NSCLC的循环miR-126-3p的表达差异.为了评估循环miR-126-3p综合表达水平,计算标准化均数差(SMD)和综合受试者工作特征(sROC)曲线,分析sROC曲线的曲线下面积(AUC),探讨灵敏度、特异度、阳性阴性似然比,并结合组织进一步综合分析循环miR-126-3p表达.通过miRDB、starBase v2.0和TargetScan 7.1,结合NSCLC中的上调差异基因,利用互补序列方法筛选了循环miR-126-3p潜在靶基因.结果 基于6项循环miR数据集发现循环miR-126-3p表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),受试者工作曲线显示循环miR-126-3p有较强的诊断效能(AUC＞0.5),而在199例NSCLC组中综合表达低于对照组(SMD=-1.46).sROC曲线显示循环miR-126-3p区分NSCLC组和对照组有高准确性(AUC=0.91),Egger's检验不存在发表偏倚(P＞0.05),灵敏度、特异度均≥0.80,阳性似然比、阴性似然比为5.37和0.18.此外,对26个数据集1 320例NSCLC循环和组织综合分析显示,循环miR-126-3p在NSCLC组中表达低于对照组(SMD=-2.07).sROC曲线显示低表达的循环miR-126-3p在区分NSCLC组和对照组有高准确性(AUC=0.97).此外,筛选得到循环miR-126-3p的潜在靶基因ADAM9和SLC7A5在NSCLC组中表达均高于对照组.结论 低表达的循环miR-126-3p可能是NSCLC高准确性筛查的重要生物标志物.

本研究旨在观察微小RNA(microRNA，miR)-199a-5p调控DDR1对人脑胶质瘤细胞增殖和迁移的影响。

目的:确定肠道病毒A71型(Enterovirus-A71，EV-A71)感染人扁桃体上皮细胞后miRNA表达谱的改变。方法:EV-A71以感染复数为1感染人扁桃体上皮细胞6 h后，采用Trizol提取总RNA，构建小RNA文库，在Illumina NextSeq 500平台进行高通量测序，处理数据后确定差异表达的已知和新型miRNA种类及其靶基因，进行基因本体和信号途径分析；使用psRNATarget预测具有潜在结合EV-A71基因组的差异表达的miRNA种类。实时定量RT-PCR检测差异表达miRNA的变化倍数。结果:通过高通量测序共鉴定61个已知差异表达的miRNA(下调21个、上调40个)和559个新型miRNA，新型miRNA具有典型的前miRNA的二级发卡结构。实时定量RT-PCR确定hsa-miR-517b-3p和hsa-miR-199a-5p的变化倍数与高通量测序结果基本一致。差异表达miRNA靶基因涉及到不同的生物学过程和信号途径。共鉴定出24个差异表达的miRNA(5个已知miRNA，19个新型miRNA)具有与EV-A71结合的潜在"种子序列"。结论:EV-A71感染人扁桃体上皮细胞后引起miRNA表达谱的显著改变，且差异表达的miRNA可能靶向结合EV-A71基因组进而调控EV-A71复制。

目的:探讨hsa-miR-199a-5p对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs)纤维化过程的影响及其与转化生长因子(TGF)-β/Smad信号通路的关系。方法:将携带hsa-miR-199a-5p基因的慢病毒载体(hsa-miR-199a-5p组)及空白慢病毒载体(rLv-NC组)感染KFs，并设空白对照组(KFs正常培养)。采用CCK-8法检测各组KFs的增殖情况。慢病毒感染KFs 48 h后，应用实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组KFs的hsa-miR-199a-5p表达水平，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，Transwell实验检测细胞侵袭能力，并分别采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad3及TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平。结果:病毒感染KFs 48 h后，hsa-miR-199a-5p组的hsa-miR-199a-5p表达量明显高于rLv-NC组和空白对照组，差异有统计学意义( P<0.01)；与rLv-NC组和空白对照组相比，hsa-miR-199a-5p组的细胞增殖率、侵袭性均有所降低，细胞凋亡率有所升高，差异有统计学意义( P<0.01)；hsa-miR-199a-5p组的Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA、Smad3、TGF-β1的mRNA及蛋白表达水平均明显低于rLv-NC组和空白对照组，差异有统计学意义( P<0.01)。 结论:hsa-miR-199a-5p可能通过抑制TGF-β/Smad通路的表达，抑制KFs增殖与侵袭，并促进KFs凋亡，从而抑制瘢痕疙瘩纤维化。

目的:探讨外泌体miR-218-5p在结直肠癌（CRC）患者血清中的表达水平及其与患者临床病理特征的相关性，评价其在CRC中的诊断效能。方法:选择同济大学附属同济医院2016年10月至2018年10月确诊的结直肠癌病例组78例，术前采血并保存血清；选择同期健康体检者40例作为对照组。采用ExoQuick试剂盒提取血清外泌体，应用透射电镜、NTA、蛋白印迹对外泌体进行形态学和分子表型鉴定；利用miRNeasy试剂盒提取血清外泌体中总RNA，实时荧光定量PCR法（RT-qPCR）检测各组血清外泌体miR-218-5p的表达水平。以miR-218-5p相对表达水平的中位数为截断值，将CRC患者分为高表达与低表达组，用χ2检验判断其与临床病理特征的关系；受试者工作特征（ROC）曲线判断其在结直肠癌中的诊断效能。结果:试剂盒法成功提取到血清中的外泌体。结直肠癌组血清外泌体miR-218-5p的表达水平明显低于对照组［0.566（0.364，0.850）比1.054（0.781，1.709）， P<0.001］；其低表达程度与肿瘤大小、TNM分期、肿瘤淋巴结转移和浸润深度显著相关（ P均<0.05）；ROC分析表明血清外泌体miR-218-5p诊断结直肠癌的曲线下面积（AUC）为0.827（95% CI 0.754~0.900），明显优于常规的肿瘤标志物癌胚抗原CEA（AUC=0.718，95% CI 0.626~0.811）和糖类抗原CA199（AUC=0.661，95% CI 0.564~0.758）。 结论:结直肠癌患者血清外泌体中 miR-218-5p的表达下调与多个不良临床病理学因素相关，具有成为结直肠癌诊断生物标志物的潜力。

目的:检测初治多发性大动脉炎（TAK）患者血浆外泌体携带的微小RNA和蛋白，分析其在TAK发病机制中的可能作用。方法:选2020年6月至11月北京协和医院风湿免疫科确诊的初治TAK患者10例，另选与之年龄性别匹配的健康对照者5例，分别通过RNA测序和蛋白质谱技术检测血浆外泌体携带的微小RNA和蛋白，筛选出差异表达的微小RNA和蛋白，并对其进行层次聚类分析、功能、信号通路和结构域富集分析，最终筛选出与血管炎有关的微小RNA和蛋白，探究其在TAK发病机制中的可能作用。统计学采用Fisher精确概率检验或 χ2检验。 结果:TAK患者血浆外泌体携带的差异表达的微小RNA 29个，其中miR-101-3p、miR-122-5p、miR-143-3p、miR-185-3p、miR-192-5p、miR-194-5p、miR-19a-3p、miR-19b-3p、miR-20b-5p、miR-21-5p、miR-22-3p、miR-335-5p、miR-34a-5p、miR-3613-5p、miR-548ad-5p、miR-590-3p、miR-7-5p表达上调，miR-1249-3p、miR-141-3p、miR-199a-5p、miR-199b-5p、miR-200a-3p、miR-200c-3p、miR-204-5p、miR-29c-5p、miR-335-3p、miR-381-3p、miR-4433b-5p、miR-584-5p表达下调。差异表达的蛋白357个，其中236个表达上调，121个表达下调，最终筛选前激肽释放酶、激肽原1、桥粒蛋白。结论:血浆外泌体携带的miR-34a-5p、miR-200c-3p、miR-143-3p、miR-22-3p、miR-21-5p、前激肽释放酶、激肽原1、桥粒蛋白可能通过调节血管生理过程、炎症反应、自身免疫等过程参与TAK的发病机制，具有作为TAK生物标志物和治疗靶点的潜在作用。

目的:分析静止和循环张应力条件下大鼠髁突软骨细胞（mandibular condylar chondrocytes，MCC）外泌体显著差异微RNA（microRNA，miRNA）的表达谱并探究张应力调节髁突软骨内成骨的作用机制。方法:分别选择5只2周龄雄性SD大鼠（共10只）在静止和循环张应力条件下培养大鼠MCC，提取细胞外泌体，两组外泌体分别命名为对照组和实验组。采用透射电子显微镜、纳米流式检测仪、纳米颗粒追踪分析等方法观察并鉴定，通过高通量测序筛选表达显著差异的miRNA，采用TargetScan、miRanda网站进行生物信息学分析及成骨相关靶基因预测。结果:实验组大鼠MCC外泌体均呈“双凹圆盘状”单层膜结构，CD9、CD81表达阳性，粒径分布符合外泌体特征，与对照组大鼠MCC外泌体一致。高通量测序筛选表达显著差异的miRNA共85个（ P<0.05）。差异miRNA主要参与的生物学过程与分子功能分别为生物学过程和蛋白质结合；京都基因与基因组数据库通路富集分析显示在哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路有显著富集（ P<0.05）。其中miR-199a-5p的候选靶基因有骨形态发生蛋白3（bone morphogenetic protein 3，BMP3）、内皮素转换酶-1，miR-186-5p可靶向Smad8、BMP3，以发挥成骨相关功能。 结论:相比于静止状态，CTS刺激能改变大鼠MCC外泌体中miR-199a-5p、miR-186-5p等miRNA的表达量，可考虑作为调节外泌体应用潜能的一种手段。

目的:探讨miR－199b与结直肠癌患者临床病理特征以及预后的关系。方法:收集2011年3—12月于中国医学科学院肿瘤医院接受治疗的202例结直肠癌患者的癌组织及癌旁正常组织，采用实时荧光定量PCR方法检测结直肠癌组织及相应癌旁正常组织中miR－199b的表达水平，生存分析采用Kaplan－Meier法和Log rank检验，受试者工作特征(ROC)曲线评估miR－199b预测结直肠癌患者预后的价值。结果:结直肠癌组织中miR－199b的相对表达水平(－7.88±0.11)低于癌旁正常组织(－6.49±0.12， P<0.001)。伴有淋巴结转移的结直肠癌组织中miR－199b的表达水平(－7.51±0.14)高于无淋巴结转移的结直肠癌组织(－8.23±0.17， P<0.001)。miR－199b在Ⅰ~Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期结直肠癌组织中相对表达水平逐渐升高，分别为－8.26±0.17、－7.70±0.16、－6.57±0.27，差异有统计学意义( P<0.001)。miR－199b高表达组患者的5年生存率(75.6%)低于低表达组患者(84.6%， P＝0.045)。ROC曲线显示，当miR－199b为－7.965时，曲线下面积为0.578(95% CI：0.468~0.688)。 结论:结直肠癌组织中高表达miR－199b与结直肠癌患者TNM分期晚、淋巴结转移以及不良预后有关，miR－199b可能作为结直肠癌患者术后疾病进展及预后的潜在标志物。

目的:探讨miR-199a-5p对宫颈癌CaSki细胞放射敏感性的影响及潜在机制。方法:体外培养宫颈癌CaSki细胞。采用脂质体Lipofectamine 2000将miR-199a-5p模拟物(miR-199a-5p mimics)转染至宫颈癌CaSki细胞，记为miR-199a-5p组，以转染模拟物对照(mimics control)的CaSki细胞为阴性对照(NC组)，以未转染的CaSki细胞为空白对照(Control组)，各组细胞经X射线照射后，采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-199a-5p的表达量，通过克隆形成实验和流式细胞凋亡实验检测miR-199a-5p对CaSki细胞放射敏感性和凋亡的影响，使用生物信息学软件预测miR-199a-5p的靶基因，通过双荧光素酶报告基因实验和蛋白免疫印迹(Western blot)验证miR-199a-5p和甲状腺激素受体相互作用因子4(TRIP4)的靶向关系。结果:转染miR-199a-5p mimics后，miR-199a-5p组中miR-199a-5p的表达量显著高于Control组( P<0.05)，经X射线照射后，miR-199a-5p过表达更明显( P<0.05)；过表达miR-199a-5p降低CaSki细胞克隆形成能力( P<0.05)，促进CaSki细胞的凋亡；且过表达miR-199a-5p能够进一步降低放射后细胞的克隆形成，并促进放射后细胞凋亡( P<0.05)；双荧光素酶报告基因实验和Western blot证实了miR-199a-5p能够靶向负调控TRIP4。 结论:miR-199a-5p可通过靶向负调控TRIP4的表达提高宫颈癌CaSki细胞的放射敏感性。

目的:探讨长链非编码RNA KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)对人晶状体上皮细胞(LECs)凋亡的影响及其机制。方法:收集2018年12月至2019年8月在新乡市第一人民医院行白内障手术的23例年龄相关性白内障患者的晶状体前囊膜组织，同时收集20例正常供体眼晶状体前囊膜组织。采用实时荧光定量PCR法检测并比较不同人群晶状体前囊膜组织中KCNQ1OT1和miR-199a-5p mRNA表达水平。体外培养人LECs(SRA01/04)，将细胞分为空白对照组、模型对照组、小干扰RNA-阴性对照(siR-NC)组、siR-KCNQ1OT1组、miR-NC组、miR-199a-5p组、siR-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组和siR-KCNQ1OT1+anti-miR-199a-5p组，其中空白对照组不做任何处理，模型对照组采用100 μmol/L过氧化氢(H 2O 2)培养细胞24 h制作氧化应激损伤模型，其余各组分别采用相应转染试剂按照脂质体法转染6 h后换用100% μmol/L H 2O 2处理细胞24 h。采用实时荧光定量PCR法检测各组晶状体前囊膜组织和各组LECs细胞中KCNQ1OT1和miR-199a-5p表达水平；采用MTT法检测各组细胞活力值；采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率；采用Western blot法检测各组B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和bcl-2相关X蛋白(bax)表达水平；采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量；采用双荧光素酶报告实验检测KCNQ1OT1和miR-199a-5p的关系。 结果:年龄相关性白内障患者前囊膜内KCNQ1OT1相对表达量为2.41±0.42，明显高于正常人的0.97±0.19，差异有统计学意义( t＝14.112， P<0.001)；miR-199a-5p相对表达量为0.36±0.12，明显低于正常人的1.04±0.15，差异有统计学意义( t＝16.507， P<0.001)。与空白对照组比较，模型对照组中KCNQ1OT1和bax蛋白相对表达量、细胞凋亡率、MDA含量明显增加，miR-199a-5p和bcl-2蛋白相对表达量、细胞活力值、SOD活性值明显降低，差异均有统计学意义(均 P<0.001)；与siR-NC组比较，siR-KCNQ1OT1组细胞中KCNQ1OT1和bax蛋白相对表达量、细胞凋亡率、MDA含量降低，bcl-2蛋白相对表达量、细胞生存率、SOD活性值增加，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。与miR-NC组比较，miR-199a-5p组KCNQ1OT1-WT荧光素酶活性显著降低，差异有统计学意义( t＝21.131， P<0.001)；与miR-NC组相比，miR-199a-5p组miR-199a-5p和bcl-2蛋白相对表达量、细胞生存率、SOD活性值明显升高，bax蛋白相对表达量、细胞凋亡率、MDA含量显著降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。siR-KCNQ1OT1+anti-miR-199a-5p组miR-199a-5p和bcl-2蛋白相对表达量、细胞生存率、SOD活性值明显低于siR-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组，细胞凋亡率、bax蛋白相对表达量和MDA含量显著高于siR-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:抑制KCNQ1OT1能够增强人LECs活力，抑制H 2O 2诱导的细胞凋亡和氧化应激反应，其作用机制可能与上调miR-199a-5p有关。