目的:探讨消化性溃疡合并幽门螺杆菌（ Hp）感染患者血清微小RNA（miR）-155和miR-135b-5p表达水平及其临床意义。 方法:采用前瞻性研究的方法，连续选取济宁医学院附属医院2021年7月至2023年2月消化性溃疡患者263例。其中，经 14C呼气试验确定为 Hp感染146例（ Hp感染组），未合并 Hp感染117例（非 Hp感染组）；免疫印迹法确定Ⅰ型 Hp感染110例，Ⅱ型 Hp感染36例。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测血清miR-155和miR-135b-5p表达水平，放射免疫法检测血清胃泌素水平，酶联免疫吸附法检测血清胃蛋白酶原（PG）Ⅰ和PG Ⅱ水平；记录患者基本临床资料。采用多因素Logistic回归分析影响消化性溃疡患者发生 Hp感染的独立危险因素；采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清miR-155和miR-135b-5p对消化性溃疡患者发生 Hp感染的诊断价值。 结果:Hp感染组胃泌素、PG Ⅰ、PG Ⅱ、溃疡出血率和复发比例明显高于非 Hp感染组[（108.47 ± 15.35）ng/L比（79.63 ± 10.58）ng/L、（295.41 ± 37.26）pg/L比（236.75 ± 29.17）pg/L、（44.08 ± 8.52）pg/L比（39.29 ± 6.74）pg/L、25.34%（37/146）比15.38%（18/117）和21.92%（32/146）比11.97%（14/117）]，差异有统计学意义（ P<0.01或<0.05）。 Hp感染组血清miR-155和miR-135b-5p明显高于非 Hp感染组（1.94 ± 0.63比0.95 ± 0.29和1.86 ± 0.57比1.03 ± 0.31），差异有统计学意义（ P<0.01）。Ⅰ型 Hp感染患者血清miR-155和miR-135b-5p明显高于Ⅱ型 Hp感染患者（2.05 ± 0.66比1.60 ± 0.54和1.97 ± 0.61比1.52 ± 0.45），差异有统计学意义（ P<0.01）。多因素Logistic回归分析结果显示，血清miR-155、miR-135b-5p、胃泌素、PG Ⅰ是影响消化性溃疡患者发生 Hp感染的独立危险因素（ OR = 1.443、1.436、1.452和1.438，95% CI 1.165～1.787、1.146～1.799、1.187～1.777和1.150～1.798， P<0.01）。ROC曲线分析结果显示，血清miR-155和miR-135b-5p联合诊断消化性溃疡患者发生 Hp感染的曲线下面积明显大于血清miR-155和miR-135b-5p单独诊断（0.907比0.839和0.836， Z = 2.57和2.81， P = 0.010和0.005）。 结论:消化性溃疡合并 Hp感染患者血清miR-155和miR-135b-5p水平较高，两者联合检测对消化性溃疡患者发生 Hp感染具有较高的诊断价值。

目的:高通量测序分析日本血吸虫童虫的微小RNA（microRNA，miRNA），鉴定已知miRNA的表达水平，预测分析miRNA靶基因及其生物学功能。方法:体外制备日本血吸虫童虫，提取童虫的总RNA构建文库进行Illumina高通量测序。采用DEGseq R语言包，结合perl脚本进行miRNA表达量的差异分析；分别利用miRanda、Blast软件和KEGG数据库对差异miRNA进行靶基因及其生物学功能预测。结果:构建文库中，日本血吸虫童虫表达的miRNAs与最新miRBase数据库比对结果显示，共有38 483条匹配序列，鉴定到已知miRNA 60个；其中，sja-miR-125b表达量最高，其次为sja-miR-61、sja-miR-71a、sja-miR-36-3p和sja-miR-10-5p，上述5种miRNA表达量占总miRNA的91%（3 263/3 585）。共预测到靶基因7 176个，基因功能集中在核苷酸转移酶活性、细胞氮复合代谢、分子功能、生物学过程、生物合成、等离子体膜及蛋白质成熟；功能富集分析显示，高表达的miRNA主要参与致病过程、生物进展及多条代谢途径通路。结论:日本血吸虫童虫显著表达的miRNA参与了血吸虫分化、生长发育和致病过程中的代谢途径调节，为研究血吸虫发育调控机制及新药物开发奠定了基础。

[目的]麦长管蚜Sitobion avenae是小麦生产的首要害虫.本研究旨在明确miR-263干扰对麦长管蚜室内种群的影响,为小麦蚜虫的绿色防控提供技术支持.[方法]以纳米材料为载体,利用400 nmol/L miR-263 agomir干扰麦长管蚜1龄若蚜,采用两性生命表评价miR-263干扰对其生长发育、繁殖和种群增长的影响,以清水阴性对照(water negative control,NCW)和纳米材料阴性对照(nanomaterial negative control,NCS)作为对照组.[结果]miR-263干扰后,与NCW和NCS相比,麦长管蚜1和2龄若蚜历期显著延长,3龄若蚜历期没有显著差异,4龄若蚜历期要显著短于NCW组,整个若蚜历期显著延长;全生育期(25.42 d)显著长于NCS的(23.73 d),与NCW(23.84 d)没有显著差异;成蚜寿命和繁殖历期有所延长,单雌产蚜量有所增加,但与NCW和NCS的比没有显著差异.miR-263干扰后麦长管蚜成蚜前存活率为43.33％,显著低于NCW和NCS的(分别为91.34％和91.32％).种群生命表数据显示,miR-263干扰后内禀增长率(r)、周限增长率(λ)、净增殖率(R0)均显著低于NCW和NCS的,平均世代周期(T)比NCW和NCS显著延长;种群预测结果显示,在miR-263干扰60 d时麦长管蚜种群约为8万头,显著低于NCS的454万头和NCW的394万头.[结论]miR-263干扰主要影响低龄若蚜的历期和存活率,并对麦长管蚜的种群增长具有抑制作用,研究结果为麦长管蚜RNAi生物农药的研发提供了候选基因.

美洲大蠊Periplaneta americana是一种世界性的卫生害虫,但其提取物有较高的药用价值.本研究对饲养的雌雄美洲大蠊成虫进行microRNA测序,分别在雄性和雌性中得到12 155 616条和9 847 263条序列.序列长度主要为18 ～ 23 nt,且在22 nt和29 nt处有2个峰值.将所得序列与数据库(NCBI、Rfam)进行比对注释,最终在雄性成虫中鉴定到57种已知的microRNA和152种潜在的新microRNA,在雌性成虫中鉴定到53种已知的microRNA和94种潜在的新microRNA.差异表达分析发现只有一种microRNA:miR-750在雌雄之间差异表达,其在雌虫中表达量显著高于雄虫.本研究首次在基因组水平研究了美洲大蠊microRNA的组成并对其功能进行了预测,为其后续研究奠定了基础.

目的 探讨舌鳞癌细胞线粒体微小RNA(mitochondrial microRNAs,mitomiRs)的表达,筛选出与化疗耐药相关的mitomiRs.方法 提取舌鳞癌细胞系CAL-27及其顺铂耐药细胞株CAL-27-re的线粒体、细胞质、总细胞RNA,采用高通量miRNA芯片筛选出耐药和亲本细胞中差异表达的mitomiRs,应用qRT-PCR验证在CAL-27和CAL-27-re中表达上调的mitomiRs,并在化疗耐药及敏感的舌鳞癌患者样本中验证表达上调的mit-omiRs.结果 芯片结果显示,在CAL-27和CAL-27-re的线粒体、细胞质和总细胞RNA共6个组分中共检测到263个miRNA,其中共有57个mitomiRs和134个细胞质微小RNA(cytoplasmic microRNAs,cytomiRs);与总miR-NA相比,CAL-27-re细胞中有35个mitomiRs表达上调,CAL-27细胞中有31个mitomiRs表达上调(≥1.5倍).进一步比较分析亲本和耐药细胞中差异表达的mitomiRs,在CAL-27-re细胞中有miR-2392、miR-4462、miR-1290、miR-4449、miR-1268a、miR-1246、miR-371a-5p、miR-3934-5p、miR-4271、miR-513p、miR-664b-3p共11个mi-tomiRs表达上调;而5个表达下调的mitomiRs则分别是miR-188-5p、miR-1973、miR-3653、miR-4499、miR-5787;其他41个mitomiRs在两种细胞株中的表达水平几乎相同.qRT-PCR与miRNAs芯片结果相符合,并且在CAL-27和CAL-27-re中得到验证的11个表达上调的mitomiRs中,有miR-1268a、miR-2392、miR-4462、miR-1290、miR-4449共5个mitomiRs在化疗耐药舌鳞癌临床样本中也同样表达上调.结论 顺铂化疗耐药和敏感的舌鳞癌细胞中存在差异表达的mitomiRs,特异高表达的mitomiRs:miR-1268a、miR-2392、miR-4462、miR-1290、miR-4449可能在舌鳞癌化疗耐药中具有重要作用.

目的 探讨微小RNA-138(miR-138)对zeste同源增强子2( EZH2)的靶向调控作用及甲状腺癌细胞8505C侵袭迁移的影响.方法 miR_pathway在线分析miR-138在甲状腺癌组织中的表达及调控的生物学过程;脂质体法向8505C细胞转染miR-138模拟物(过表达组)或阴性对照序列(NC组)并设未转染的细胞为对照组,采用实时定量PCR( QPCR)检测miR-138水平,活细胞计数CCK-8试剂盒检测增殖情况,划痕实验和Transwell小室实验分别检测划痕愈合率和穿膜细胞数, QPCR检测EZH2、基质金属蛋白酶-9( MMP-9)、Janus激酶1(JAK1)和信号转导和转录激活因子3( STAT3)的mRNA水平, Western blotting检测EZH2、MMP-9、JAK1、磷酸化JAK1(p-JAK1)、STAT3、磷酸化STAT3( p-STAT3)和MMP-9的蛋白水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-138对EZH2的靶向调控作用.结果 miR_pathway在线分析发现miR-138在甲状腺癌中调控多个生物学过程,且在甲状腺癌组织中的表达低于正常组织(P＜0. 05).过表达组的miR-138水平为12. 657±2. 263,高于对照组的1. 025±0. 087和NC组的1. 109±0. 097(P＜0. 05);与对照组和NC组相比,过表达组转染24、48 h的细胞增殖活力降低(P＜0. 05).过表达组的划痕愈合率和穿膜细胞数目分别为( 22. 571± 2. 168)%和(152. 3± 16. 5)个,低于对照组的(59. 424± 3. 624)%和(287. 4±17. 5)个及NC组的(61. 280±4. 035)%和(278. 5±16. 3)个( P＜0. 05);miR-138模拟物对EZH2野生型3’端非翻译区的荧光素酶活性有抑制作用( P＜0. 05),但对突变型无影响(P＞0. 05).与其余两组相比,过表达组的 MMP-9、EZH2、p-JAK1和p-STAT3水平降低(P＜0. 05),而JAK1和STAT3水平的差异无统计学意义( P＞0. 05).对照组和NC组上述指标的差异无统计学意义(P＞0. 05).结论 miR-138在甲状腺癌组织中低表达,且该miRNA在甲状腺癌中发挥抑制增殖和侵袭迁移的抑癌作用,可能与靶向调控EZH2和JAK1／STAT3／MMP-9通路有关,有作为甲状腺癌治疗候选靶点的潜能.

目的 探讨不同剂量辛伐他汀对急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清微小RNA-182 (miR-182)和miR-497水平及预后的影响.方法 选取2018年1月至2019年12月上海交通大学医学院附属新华医院神经内科收治的AIS患者88例,依据治疗中加用他汀药物剂量的不同分为低剂量组(L组,46例)和高剂量组(H组,42例).L组在常规治疗基础上口服辛伐他汀片20 mg/d;H组在常规治疗基础上口服辛伐他汀片40 mg/d;疗程总计3个月.比较2组患者入院当天及治疗3个月后血清miR-182和miR-497水平、血脂[高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三酰甘油]水平和神经功能评分[美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分]和生活自理能力评分(Barthel评分).结果 治疗3个月后,H组血清miR-182、HDL-C水平、Barthel评分明显高于L组[(328 ±31) fmol/L比(263±25) fmol/L、(1.38±0.43) mmol/L比(1.27±0.32) mmoL/L、(72±9)分比(62±7)分],miR-497、LDL-C及三酰甘油水平和NIHSS评分明显低于L组[(128±25) fmol/L比(320±34) fmol/L、(2.16±0.49) mmol/L比(2.78±0.59) mmol/L、(1.2±0.4)mmol/L比(1.6±0.5) mmol/L、(11.8±1.1)分比(13.8±1.2)分],差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 辛伐他汀可调节AIS患者血清miR-182和miR-497水平,并且呈现剂量依赖性.辛伐他汀能够改善AIS患者治疗后神经功能,恢复患者生活自理能力.

目的 通过外泌体小RNA测序技术,比较慢性肾脏病3～4期糖尿病肾脏疾病(DKD)湿热证患者与正常人群尿液外泌体微RNA(miRNA)的差异表达.方法 2021年4月—2022年4月于安徽中医药大学第一附属医院招募受试者,DKD湿热证患者40例,健康体检正常者40名.2组分别任选10名/例受试者,对尿液外泌体进行miRNA高通量测序,以log2(Fold Change)绝对值≥1及q值<0.05为条件筛选出所有差异表达miRNA,然后进一步筛选出10个miRNA进行验证,筛选条件为:①2组样本中,至少1组组内平均表达量(TPM)>2;②log2(Fold Change)绝对值≥2;③DKD湿热证组中至少有1个样本TPM>0.最后通过定量RT-PCR在2组受试者中进行验证.结果 将DKD湿热证组及正常对照组的测序数据与数据库miRNA成熟序列进行对比,正常对照组表达的miRNA为302个,DKD湿热证组表达的miRNA为386个,2组共同表达的miRNA为263个.得出97个有差异表达的miRNA,其中上调的84个,下调的13个.DKD湿热证组患者尿液miR-664a-5p、miR-320b及miR-199a-5p表达水平较正常对照组上调(P<0.001).miR-664a-5p、miR-320b及miR-199a-5p在诊断DKD湿热证中的受试者工作特征曲线下面积分别为0.886、0.923及0.761.结论 慢性肾脏病3～4期DKD湿热证患者尿液外泌体miRNA与正常人群比较存在差异表达;尿液外泌体miR-664a-5p、miR-320b和miR-199a-5p有助于DKD湿热证患者的诊断.