目的:探讨miR-301a-3p对大鼠星形胶质细胞凋亡与增殖的影响。方法:获取并培养大鼠原代星形胶质细胞，将miR-301a-3p agomir以及antagomir分别转染至细胞。分Blank组、miR-NC对照组、miR-301a组、antagomir组，每组设3个复孔，每孔2×10 5个细胞，CCK8实验检测各组细胞的增殖能力变化；用流式细胞术及Caspase-3活性检测分析细胞凋亡的情况。 结果:与Blank组(48 h：0.83±0.09；72 h：1.20±0.21；96 h：1.65±0.17)和miR-NC组(48 h：0.79±0.10；72 h：1.12±0.25；96 h：1.60±0.15)相比，miR-301a组(48 h：1.16±0.07；72 h ：1.56±0.11；96 h：2.13±0.14)细胞的增殖能力显著提高( P<0.05)，miR-301a组细胞的凋亡率显著下降(Blank组：10.44±1.33，miR-NC组：9.84±1.40，miR-301a组：4.32±0.51， P<0.05)；而antagomir组(48 h：0.52±0.12；72 h：0.72±0.09；96 h：1.01±0.15)细胞转染后增殖能力较Blank组和miR-NC组显著降低( P<0.05)，antagomir组细胞的凋亡率显著升高(Blank组：10.44±1.33，miR-NC组：9.84±1.40，antagomir组：21.41±2.57， P<0.05)。 结论:miRNA-301a-3p过表达促进大鼠星形胶质细胞的增殖，抑制细胞的凋亡通路，降低细胞的凋亡，从而调控大鼠星形胶质细胞的生物学功能。

目的:观察miR-301a靶向调控Smad4介导高糖促进前列腺癌细胞增殖的作用及其机制。方法:预测miR-301a的靶基因并转染miR-301a模拟物，分别采用实时定量聚合酶链反应、蛋白质印迹法对miR-301a、Smad4的表达进行检测，并采用流式细胞术对细胞增殖及周期进行分析。结果:通过Pic Tar数据库及TargetScan数据库对miR-301a的靶基因进行寻找，结果显示，Smad4是miR-301a的靶基因。双荧光素酶实验也提示，miR-301a的结合位点是Smad4。miR-301a可与Smad4的野生型3'-UTR结合(但未与Smad4中发生突变的3'-UTR结合)，对荧光素酶活性造成抑制。miR-301a过表达后，可抑制Smad4蛋白，但不影响Smad4的mRNA。加入高糖后会导致Smad4蛋白表达水平明显降低，与miR-301a表达相似，miR-301a抑制物注入到DU145和PC3细胞可改变其抑制作用。转染Smad4 siRNA后DU145和PC3细胞中的Smad4 mRNA均呈低水平表达，致使Cyclin E和Cyclin D1表达呈上升趋势，可增加磷酸化Rb蛋白(ppRb)。上调miR-301a的表达同时转染过表达Smad4的质粒，采用CCK-8实验检测，结果显示，转染96 h后，DU145和PC3细胞的增殖能力明显上升( P<0.05)。在PC3细胞中，转染miR-301a前的细胞周期比例为G0/G1期63.05%，S期27.93%，G2/M期9.37%；转染后的G0/G1期49.96%，S期40.97%，G2/M期9.04%；转染miR-301a前、后的细胞周期中G0和S期的比例比较，差异有统计学意义( P<0.05)；在DU145细胞中，转染miR-301a前的G0/G1期为65.22%，SD期为24.62%，G2/M期为10.35%；转染后为G0/G1期为53.45%，S期为37.65%，G2/M期为10.03%；转染miR-301a前、后的G0和S期比例比较，差异有统计学意义( P<0.05)。沉默DU145、PC3细胞中的Smad4与过表达miR-301a，均可导致细胞周期G1期缩短，S期延长。另外，miR-301a诱导的G1/S期转化可被Smad4过表达阻断。 结论:Smad4是miR-301a的靶基因，miR-301a靶向调控Smad4介导高糖促进前列腺癌细胞增殖的作用机制主要是通过对Smad4和miR-301a通路进行抑制，对高血糖诱导的前列腺癌细胞生长起到阻断作用。

目的:探讨Smad4作为微小RNA(miRNA，miR)-301a调控的靶基因的证据，以及介导高糖促进前列腺癌细胞增殖的作用。方法:采用TargetScan和PicTar数据库寻找miR-301a的分子靶点。采用转染miR-301a模拟物、实时定量聚合酶链反应及蛋白质印迹法(Western blot)法[25 μg，10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)]检测miR-301a和Smad4的表达，双荧光素酶报道基因实验检测miR-301a对Smad4的调控，细胞计数试剂盒(CCK-8)法(10 μl/孔CCK-8溶液，2 h)测定细胞增殖，以流式细胞术进行细胞周期分析。两组数据的均数检验采用 t检验。 结果:生物信息学分析及荧光素酶报道实验均表明Smad4是miR-301a的靶点，上调miR-301a后，Smad4 mRNA及蛋白表达均明显降低。同时上调miR-301a及Smad4表达96 h后，前列腺癌细胞增殖能力升高160%( P<0.05)，差异有统计学意义。miR-301a可抑制Smad4的表达，从而促进细胞从G 1期向S期过渡。在PC-3细胞，转染miR-301a前的细胞周期比例为G 0/G 1 62.60%，S28.00%，G 2/M 9.40%；转染后为G 0/G 1 49.97%，S 41.04%，G 2/M 8.99%(转染前后G 0和S期的比例差异有统计学意义， P<0.05)；在DU-145细胞，转染miR-301a前G 0/G 1 65.16%，S 24.54%，G 2/M 10.30%；转染后G 0/G 1 53.34%，S 36.67%，G 2/M1 0.00%(转染前后G 0和S期比例差异有统计学意义， P<0.05)。沉默Smad4的表达导致，细胞周期的G 1期缩短，S期延长，与过表达miR-301a的结果相似；过表达Smad4可阻断miR-301a诱导的G 1/S期转化。 结论:miR-301通过下调靶蛋白Smad4的表达来调控前列腺癌细胞增殖。Smad4在高糖相关的前列腺癌生长中发挥重要作用。

Objective::Polycystic ovary syndrome (PCOS) is an endocrine disorder with diverse clinical manifestations that often occurs in women of childbearing age. However, its molecular pathogenesis remains unclear, and this study aimed to identify miRNA targets in PCOS through text mining and database analysis.Methods::First, three different sets of text mining genes (TMGs) associated with "polycystic ovary syndrome", "obesity/adiposis", and "anovulation" keywords were retrieved from the GenCLiP3 database, and overlapping genes were selected. Second, Gene ontology annotation and biological pathway enrichment analyses of these overlapping TMGs were performed, followed by protein-protein interaction (PPI) network analysis. Third, genes in the gene module clustered in the PPI were selected to predict potential miRNAs for PCOS via miRNA-mRNA analysis.Results::A total of 4291 TMGs related to three different keywords were obtained through text mining; 72 intersect TMGs were retained among the three gene sets, and 62 TMGs participated in the establishment of the PPI network, of which 18 were aggregated in the gene module. Finally, 11 miRNAs that simultaneously bound to two TMGs ( IGF1, ESR1, MAPK1, NAMPT, PIK3CA, and SERPINE1) could be prioritized as targets to study PCOS. Conclusion(s)::The discovery of 11 miRNAs (miR-301a-3p, miR-301b-3p, miR-3666, miR-454-3p, miR-130a-3p, miR-130b-3p, miR-4295, miR-190a-3p, miR-5011-5p, miR-548c-3p, and miR-4799-5p) and 6 TMGs, which are associated with the HIF-1 signaling pathway ( P = 4.799E-08), could be used as potential targets for PCOS.

目的 探讨抑制miR-301a对胶质瘤U87细胞增殖、凋亡和侵袭的影响.方法 体外培养人脑胶质瘤U87细胞,将细胞分为空白对照组、阴性转染组(阴性序列转染U87细胞)、miR-301a抑制剂转染组(miR-301a抑制剂转染U87细胞).采用MTT法检测各组细胞的增殖;平板细胞克隆形成实验检测菌落形成;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell法检测细胞迁移、侵袭能力;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;RTPCR法检测细胞中miR-301a、PTEN mRNA表达;Western blot检测细胞PTEN、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9蛋白表达.结果 与空白对照组、阴性转染组比较,miR-301a抑制剂转染组转染后不同时间点的细胞抑制率均升高,呈时间依赖性(均P＜0.05).miR-301a抑制剂转染组的菌落数量明显降低,迁移距离短,细胞迁移、侵袭数量明显降低,细胞凋亡率升高(均P ＜0.05);miR-301amRNA表达水平降低,PTEN mRNA表达水平升高;PTEN、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平明显升高,Bcl-2蛋白表达水平降低(均P＜0.05).结论 抑制miR-301a的表达,可抑制胶质瘤U87细胞的增殖、迁移、侵袭能力,促进胶质瘤U87细胞凋亡.

目的:检测白塞氏病(BD)患者和正常人群血浆中微小核糖核酸(microRNA,miRNA)的差异表达谱,探讨miRNA在BD发病中的作用,寻找与BD相关的血浆生物标记物.方法:收集15例活动期BD患者和15例正常人的抗凝静脉血,离心获得血浆,提取总RNA,经miRNA标记、miRNA阵列杂交、miRNA阵列扫描和分析获得BD患者异常表达的miRNA谱.通过miRTarBase(靶基因数据库)检索差异性表达的miRNA已经过验证的靶基因,并选取与免疫学相关的差异性表达的miRNA进行Real time-PCR验证.结果:活动期BD患者血浆中hsa-miR-34c-5p、hsa-miR-144-3p、hsa-miR-483-3p较正常人表达上调,hsa-miR-301a-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-454-3p、hsa-miR-17-5p、hsa-miR-199a-5p较正常人表达下调.结论:miRNA的差异性在BD的发生发展过程发挥重要作用,异常表达的miRNA可能通过Notch1和SMAD4信号通路促进BD发病.

目的 探讨微小核糖核酸301b(miR-301b)对体外三阴性型乳腺癌(TNBC)细胞血管生成拟态的作用,并结合微阵列数据库的生物信息学数据分析miR-301b 对TNBC患者预后的影响.方法 体外培养TNBC细胞株MDA-MB-231细胞,使用脂质体Lipofectamine2000将miR-301b模拟物(miRNA过表达组)、miR-301b抑制剂(miRNA抑制组)、miR-301b阴性对照(阴性对照组)分别转染于MDA-MB-231细胞,通过血管生成拟态实验验证miR-301b在 TNBC细胞中的血管生成作用.同时,通过 Kaplan-Meier Plotter平台(http://kmplot.com/analysis/)的微阵列数据库获取相关数据分析 miR-301b 高/低表达对TNBC患者10年、15年生存的影响.结果 血管生成拟态实验表明,miR-301b 过表达组MDA-MB-231细胞的管形成数量分别是阴性对照组的3.9 倍(P<0.01)、miR-301b 抑制组的9.6倍(P<0.01),而 miR-301b 抑制组 MDA-MB-231细胞的管形成数量比阴性对照组减少了 58%(P<0.01).根据微阵列数据库获取相关的10年、15年的队列随访数据,miR-301b的高表达是TNBC患者不良预后的危险因素(HR=2.09,95%CI:1.21~3.60,P=0.0068);第3四分位数(P75)生存时间:miR-301b 高表达队列TNBC患者是38.27个月,miR-301b 低表达队列TNBC患者是106.59 个月.结论 MDA-MB-231细胞中存在血管拟态现象,miR-301b过表达促进TNBC细胞的血管生成,是TNBC的一个负性预后因子.进一步寻找、研究、验证miR-301在TNBC中的靶基因,有望成为TNBC抗血管生成治疗的一个突破口.

目的 探讨自发性高血压大鼠延髓microRNA(miRNA)差异表达谱及其靶基因生物信息学分析.方法 采用自发性高血压大鼠模型(SHR组),同周龄SD大鼠为对照组(Control组).利用miRNA芯片检测大鼠延髓中miRNAs差异表达谱.结果 与对照组比较,SHR组尾动脉收缩压显著升高(P＜ 0.0001);SHR组延髓组织miRNAs有显著差异表达谱,16个miRNAs表达上调和7个miRNAs表达下调(1.5-fold change cutoff,P＜0.05).qRT-PCR验证结果显示,与对照组比较,SHR组延髓miR-153、miR-193及miR-301a表达显著下降,与芯片结果一致.生物信息学分析显示,差异表达miRNAs可能调控2775个靶基因(target score≥83).这些靶基因主要富集在12个信号通路,包括磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositide 3-kinase,PI3K)通路等.结论 自发性高血压大鼠延髓组织中miR-153、miR-193及miR-301a明显下调,且生物信息学分析提示PI3K通路介导神经炎症可能作为高血压中枢相关差异表达miRNAs调控靶基因介导的主要致病通路.

背景:目前已有研究发现lncRNA GAS5激活了退变椎间盘髓核细胞(nucleus pulposus cels,NPC)内的线粒体凋亡通路,进而促进髓核细胞的凋亡.目的:探索有关椎间盘退变的ceRNA网络调控机制,寻找治疗椎间盘退变的潜在靶点.方法:计算机检索GEO数据库,下载lncRNA微阵列芯片GSE56081,重注释比对平台文件中的探针核酸序列,运用Perl软件将芯片系列矩阵文件中的探针ID转化为基因名,并添加基因属性.运用R软件分析系列矩阵文件得到差异的lncRNA与mRNA.在miRcode平台下载高度保守的miRNA家族文件,比对后得出lncRNA-miRNA关联.根据miRDB数据库、miRTarBase数据库和TargetScan数据库预测miRNA调控的mRNA,与芯片数据差异分析得到的差异mRNA取交集,得出miRNA-mRNA关联.构建ceRNA网络,运用String数据库分析蛋白互作关系,筛选关键蛋白互作模块.使用DAVID数据库分析关键蛋白模块的功能与相关通路,挖掘关键ceRNA网络.结果与结论:退变椎间盘的髓核细胞中差异lncRNA与mRNA竞争miRNA,从而调控蛋白合成,最终影响泛素介导的蛋白水解、Wnt信号通路和PI3K-Akt信号通路.并发现7种miRNA(hsa-miR-107、hsa-miR-449c-5p、hsa-miR-301b-3p、hsa-miR-135a-5p、hsa-miR-17-5p、hsa-miR-20b-5p、hsa-miR-876-3p)可能在导致椎间盘退变的蛋白质分解代谢与细胞凋亡的过程中发挥关键作用.

目的:研究大鼠星形胶质细胞中微小RNA-301a-3p(miR-301a-3p)对缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的靶向调控作用及其作用位点.方法:合成miR-301a-3p agomir和miR-301a-3p antagomir,转染至星形胶质细胞,Western blot检测各组细胞中Cx43蛋白的表达情况;构建重组载体wt-pEZX-MT05-Cx43和mut-pEZX-MT05-Cx43,采用双萤光素酶报告基因实验验证miR-301a-3p的靶基因;构建表达载体pcDNA3.1-Cx43,通过回复实验分析miR-301a-3p对细胞凋亡的影响.结果:将miR-301a-3p agomir转染到星形胶质细胞后,Western blot检测显示,与对照组相比,Cx43蛋白表达显著降低(P<0.05).双萤光素酶报告基因实验结果表明,miR-301a-3p能够与Cx43的3'-UTR结合,对其表达产生负调控;将不含Cx433'-UTR的重组载体pcDNA3.1-Cx43转染星形胶质细胞后,能够回复miR-301a-3p对Cx43蛋白表达的负调控作用,引起细胞凋亡.结论:Cx43是miR-301a-3p的一个靶基因,miR-301a-3p通过作用于Cx43 mRNA的3'-UTR而抑制其在大鼠星形胶质细胞中的表达.