目的:分析结直肠癌患者循环微小RNA(miR-375)和组织Yes相关蛋白1(YAP1)表达的相关性，探讨两者与临床病理特征的关系。方法:以嘉兴学院附属第二医院2016年6月至2017年12月收治的87例结直肠癌患者[男45例，女42例，年龄(64.5±11.4)岁]为研究对象，以80例健康志愿者为对照，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)实验测定外周血miR-375表达水平，采用免疫组织化学实验测定结直肠癌病理组织和癌旁健康组织YAP1表达水平，分析两项指标与临床病理特征及预后的关系，进一步根据miR-375和YAP1的表达情况将研究组分为低miR-375且高YAP1组(A组， n＝21)，中间组(B组， n＝32，包含低miR-375且低YAP1，高YAP1且高miR-375两种情况)，高miR-375且低YAP1组(C组， n＝34)，分析两项指标与患者预后的关系。应用SPSS 22.0统计软件分析。 结果:结直肠癌患者循环miR-375表达水平为0.132±0.085，低于对照组(0.521±0.186)，癌组织YAP1表达水平为2.201±0.856，明显高于癌旁健康组织(0.814±0.262)，差异有统计学意义( t＝51.826、51.175， P<0.05)。miR-375表达和YAP1表达之间呈负相关( r＝－0.691， P<0.05)，双荧光素酶实验报告证实两者具有相互作用，差异有统计学意义( t＝9.564， P<0.05)。miR-375和YAP1表达与Dukes分期明显相关，C期患者miR-375表达低于A和B期，YAP1表达高于A和B期，差异有统计学意义( F＝4.347、3.724， P<0.05)。miR-375联合YAP1检查有助于预测结直肠癌复发/转移和死亡(AUC＝0.739、0.699， P<0.05)，差异有统计学意义，其中低miR-375且高YAP1者中位生存期最短，高miR-375且低YAP1者中位生存期最长，组间差异有统计学意义( χ2＝4.685， P<0.05)。 结论:miR-375和YAP1存在交互作用，两者共同参与结直肠癌的发生与发展。

目的:探讨不同剂量的木犀草素对D-半乳糖致衰老大鼠记忆功能及凋亡蛋白的影响。方法:SPF级雄性6～8周龄Wistar大鼠48只，按照随机数字表法分为对照组、模型组、木犀草素低剂量组(25 mg/kg)、中剂量组(50 mg/kg)、高剂量组(100 mg/kg)及维生素C组(100 mg/kg)，每组8只。采用D-半乳糖(1 000 mg/kg)皮下注射法制备大鼠衰老模型，同时使用木犀草素进行预防性灌胃治疗。Morris水迷宫实验评估小鼠学习记忆能力；透射电镜检测大鼠海马神经元形态；分光光度法检测检测大鼠大脑皮质中白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、总抗氧化能力(total antioxidant capacity，T-AOC)水平；RT-PCR检测miR-34a mRNA表达；Western blot技术检测沉默调节蛋白1(sirtuin 1，SIRT1)、B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)、裂解caspase-3、p53、p21的表达水平。采用SPSS 22. 0进行统计分析，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD- t检验。 结果:(1)6组大鼠首次找到原平台时间差异有统计学意义( F＝120.93， P<0.001)，模型组大鼠首次找到原平台时间[(54.61±3.60)s]高于对照组[(10.54±4.27)s]( P<0.05)，木犀草素低、中、高剂量组大鼠首次找到原平台时间[(45.50±3.81)s，(37.46±2.94)s，(32.32±3.14)s]均低于模型组[(54.61±3.60)s](均 P<0.05)。(2)6组大鼠大脑皮质中SOD、MDA、T-AOC、TNF-α、IL-1β和IL-6水平均差异具有统计学意义( F＝281.636，75.119，208.228，38.999，28.428，52.767，均 P<0.001)。模型组较对照组相比炎症因子和抗氧化指标异常，木犀草素中、高剂量组大鼠大脑皮质中SOD、T-AOC含量高于模型组(均 P<0.05)；MDA、TNF-α、IL-1β和IL-6水平低于模型组(均 P<0.05)。(3)6组大鼠的miR-34a mRNA相对表达水平差异有统计学意义( F＝81.439， P<0.001)。木犀草素不同剂量组大鼠海马组织中miR-34a mRNA表达水平均低于模型组(均 P<0.05)。(4)6组大鼠海马组织中SIRT1、p53、p21蛋白表达差异具有统计学意义( F＝159.946，38.342，123.608均 P<0.001)，木犀草素中、高剂量组p53、p21表达均低于模型组(均 P<0.05)，SIRT1蛋白表达均高于模型组( P<0.05)。(5)6组大鼠海马组织中Bcl-2、裂解caspase-3蛋白表达差异具有统计学意义( F＝112.659，43.296，均 P<0.05)，木犀草素低、中、高剂量组Bcl-2表达[(0.24±0.04)，(0.40±0.03)，(0.48±0.05)]高于模型组[(0.09±0.06)]( P<0.05)，木犀草素低、中、高剂量组裂解caspase-3表达[(0.62±0.04)，(0.61±0.09)，(0.51±0.10)]低于模型组[(0.75±0.05)]( P<0.05)。 结论:木犀草素可以缓解衰老模型大鼠脑组织氧化损伤，这可能与下调miR-34a/SIRT1/p53信号通路，减少细胞凋亡有关。

目的:探究过量氟暴露对小鼠睾丸微小RNA（microRNA，miRNA）表达谱的影响，并探讨氟的生殖毒性机制。方法:24只8周龄C57BL/6J雄性小鼠，体重为（23 ± 1）g，按体重采用随机数字表法分为对照组[0 mg/L氟化钠（NaF）]和氟暴露组（50 mg/L NaF），每组12只，处理90 d后麻醉处死小鼠，采集精子检测其数量、活率、畸形率，并对睾丸组织进行HE染色；提取小鼠睾丸组织RNA，利用高通量测序技术检测氟对小鼠睾丸miRNA表达谱的影响，并进行差异表达miRNA筛选及其靶基因预测，同时进行功能注释和通路富集分析；利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）验证差异表达miRNA的表达量。结果:与对照组[精子数量：（11.30 ± 2.52）× 10 6/ml、活率：（90.07 ± 4.34）%、畸形率：（15.49 ± 3.25）%]相比，氟暴露组小鼠精子数量[（9.01 ± 2.25）× 10 6/ml]和活率[（84.34 ± 4.21）%]均下降（ P = 0.041、0.003），而畸形率[（22.36 ± 6.51）%]上升（ P = 0.003）；且HE染色显示，氟暴露组小鼠睾丸间质间距增大，生精小管管腔内精子数量减少，细胞排列紊乱。通过测序，发现氟暴露组小鼠睾丸中存在34个差异表达miRNA；经qRT-PCR验证，与对照组相比，氟暴露组小鼠睾丸mmu-miR-29b-1-5p（ P < 0.001）、mmu-miR-196a-5p（ P = 0.002）和mmu-miR-196b-5p（ P = 0.031）的表达量均显著上升；而mmu-let-7a-2-3p（ P < 0.001）和mmu-miR-466n-3p（ P = 0.018）的表达量均明显下降，与测序结果一致。通过对差异表达miRNA靶基因的KEGG富集，发现氟暴露可改变小鼠睾丸中轴突导向（axon guidance）信号通路、嗅觉传导（olfactory transduction）通路、神经活动配体-受体相互作用（neuroactive ligand-receptor interaction）通路和溶酶体（lysosome）信号通路等。 结论:氟暴露可能通过改变睾丸中miRNA的表达谱，以及通过介导转录后调节的信号通路进而诱导睾丸损伤。睾丸miRNA可能是氟生殖毒性的潜在生物标志物，可为氟中毒机制的探究提供新思路和观点。

目的:探讨微RNA（miR）-34b/c rs4938723基因多态性与肾母细胞瘤易感性的相关性。方法:选取从2014年3月至2018年3月在本院确诊的133例肾母细胞瘤患者，作为病例组，在本院征召的志愿者中随机选取529与对照组性别、年龄等无统计学差异的健康人群作为对照组，提取他们血液DNA，采用Taq-man荧光定量PCR技术，对miR-34b/c的rs4938723进行检测。统计不同基因型在观察组和对照组中的频率，并分析不同的基因型与肾母细胞瘤易感性的相关性。结果:病例组和对照组均得到了较好的基因分型结果。病例组中，rs4938723位点的三种基因型TT、TC和CC分布频率与对照组差异无统计学意义（ P>0.05）。2组的显性模型（TC+CC/TT），隐性模型（TT+TC/CC）和加性模型（TT/TC/CC）的差异均无统计学意义（ P>0.05）。不同性别中miR-34b/c rs4938723的基因型频率分布与肾母细胞瘤发生差异无统计学意义（ P>0.05）。在总人群和男女性人群中miR-34b/c rs4938723等位基因频率分布差异无统计学意义（ P>0.05），miR-34b/c rs4938723等位基因频率分布与肾母细胞瘤无关（ P>0.05）。病例组中rs4938723三种基因分型的病理分级，Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级的差异均无统计学意义（ P>0.05）。 结论:miR-34b/c rs4938723多态性位点与肾母细胞瘤的遗传易感性无关。

目的:探讨糖尿病创面不愈合是否与微小RNA(miR)-200b-GATA2-血管内皮生长因子受体(VEGFR)2通路表达异常引起的血管再生障碍有关。方法:将12只C57/BL6小鼠作为对照组，24只db/db糖尿病小鼠采用随机数字表法分为模型组和miR-200b敲低组，每组12只，在每只小鼠背面制作直径10 mm圆形创面；分别于造模后第1、7和14天记录各组小鼠创面愈合率；造模后第14天取材，采用苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠创面组织形态，免疫组织化学检测CD34阳性表达，实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-200b表达，蛋白质印迹法(Western blot)检测GATA2、VEGFR2蛋白相对表达量。结果:造模后第7天和第14天，模型组的创面愈合率低于对照组[(22.46±2.33)%比(34.63±1.42)%，(49.53±2.81)%比(72.48±2.54)%， F＝9.37、8.42， P均<0.01]；造模后第7天miR-200b敲低组的创面愈合率增加高于模型组[(27.52±1.64)%比(22.46±2.33)%， F＝9.37、8.42， P<0.05]，造模后第14天miR-200b敲低组的创面愈合率明显高于模型组[(61.93±2.55)%比(49.53±2.81)%， F＝9.37、8.42， P<0.01]。对照组创面皮肤细胞排列整齐，无炎性细胞浸润；模型组创面表皮坏死，原纤维结构消失；miR-200b敲低组创面有肉芽组织形成，修复明显。模型组的CD34阳性表达量低于对照组(0.21±0.08比0.63±0.06， F＝12.32， P<0.05)；而miR-200b敲低组CD34阳性表达量高于模型组(0.48±0.05比0.21±0.08， F＝12.32， P<0.01)。模型组miR-200b相对表达量高于对照组(1.43±0.18比0.73±0.12， F＝6.44， P<0.01)；miR-200b敲低组miR-200b相对表达量低于模型组(0.92±0.15比1.43±0.18， F＝6.44， P<0.01)。模型组GATA2蛋白和VEGFR2蛋白相对表达量低于对照组(0.36±0.07比0.78±0.09，0.43±1.41比0.86±1.32， F＝4.85、3.79， P均<0.01)；miR-200b敲低组GATA2和VEGFR2蛋白相对表达量高于模型组(0.64±0.07比0.36±0.07，0.68±1.57比0.43±1.41， F＝4.85、3.79， P均<0.01)，差异均有统计学意义。 结论:miR-200b-GATA2-VEGFR2信号轴对糖尿病创面愈合有重要的调控作用，调控该信号轴可以改善糖尿病足创面愈合过程，缩短创面愈合时间。

目的 观察针刺百会透曲鬓对脑内出血(intracerebral hemorrhage,ICH)大鼠CD32、CD206 蛋白表达水平的影响,探讨其作用机制.方法 将 60只雄性SD大鼠随机分为A组(假手术组)、B组(模型组)、C组(治疗1 组)、D组(治疗2 组)和E组(治疗3 组),每组 12 只.每组再随机分造模后 1 d和 7 d两个亚组,每组6 只.采用自体血注入尾壳核法制取 ICH 模型.造模 12 h 后,C 组采用针刺百会透曲鬓治疗;D 组在造模前 3 d 注射miR-34a-5p agomir-NC,造模 12 h后采用针刺百会透曲鬓治疗;E组在造模前3 d注射miR-34a-5p agomir,造模12 h后采用针刺百会透曲鬓治疗.1 d亚组疗程为1 d,7 d亚组疗程为7 d.于相应时间点进行神经功能评分,处死大鼠后收集血肿周围脑组织,使用蛋白质印迹分析和免疫荧光双染检测血肿周围脑组织中CD32、CD206 蛋白表达水平、CD32+/Iba-1+和CD206+/Iba-1+双阳性细胞计数变化.结果 造模后 7 d时,与B组比较,C组ICH大鼠Longa评分降低(P＜0.01);与C组比较,E组ICH大鼠Longa评分升高(P＜0.05).造模后1 d、7 d两个时间点,与A组比较,B组ICH大鼠CD32、CD206蛋白表达水平及CD32+/Iba-1+、CD206+/Iba-1+双阳性细胞数量均升高(P＜0.01);与B组比较,C组ICH大鼠CD32蛋白表达水平及CD32+/Iba-1+双阳性细胞数量均降低,CD206蛋白表达水平升高,差异均具有统计学意义(P＜0.01);与 C 组和 D 组比较,E 组 ICH 大鼠 CD32 蛋白表达水平及CD32+/Iba-1+双阳性细胞数量均升高,CD206蛋白表达水平均降低,差异均具有统计学意义(P＜0.01).造模后7 d时,与B组比较,C组ICH大鼠CD206+/Iba-1+双阳性细胞数量升高(P＜0.01);与C组和D组比较,E组ICH大鼠CD206+/Iba-1+双阳性细胞数量均降低,差异均具有统计学意义(P＜0.01).结论 针刺百会透曲鬓能抑制ICH大鼠脑组织CD32 的蛋白表达,并促进CD206 的蛋白表达,可减轻炎性反应,提高机体抗炎能力,缓解神经损伤.

目的 探究微小RNA34a5p(miR-34a-5p)靶向调控基质金属蛋白酶(MMP)-9对类风湿关节炎(RA)大鼠氧化应激及滑膜细胞分化的作用机制.方法 选取60只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(A)组,模型(B)组,miR-NC(C)组,miR-34a-5p mimic(D)组,MMP-9 抑制剂(E)组,miR-34a-5p mimic+MMP-9 抑制剂(F)组,每组 10 只,对 B、C、D、E、F 组采用弗氏完全佐剂法进行RA建模,A组不建立该模型,建模成功后,对C组给予尾静脉注射0.5 ml 1×105/ml的miR-NC,对D组给予尾静脉注射0.5 ml 1x105/ml的miR-34a-5p mimic,对E组给予尾静脉注射30 mg/kg的盐酸多西环素,对F组给予miR-34a-5p mimic联合盐酸多西环素,A、B组同期给予尾静脉注射同体积生理盐水,苏木素-伊红(HE)染色检测大鼠滑膜组织病理形态,实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测大鼠滑膜组织中miR-34a-5p、MMP-9 mRNA相对表达,黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法检测血清中氧化应激相关指标,免疫荧光法检测大鼠滑膜组织中滑膜细胞分化相关指标.结果 A组滑膜组织细胞结构正常且排列整齐,未见关节腔渗出、水肿、充血及炎性细胞浸润现象,B、C组出现弥漫性滑膜细胞和纤维组织增生,并可见大量血管翳形成及大量炎性细胞浸润现象,D、E、F组可见滑膜细胞轻度增生及少量炎性细胞浸润和新生毛细血管形成,水肿、充血情况明显改善;与A组比较,B、C组滑膜组织中miR-34a-5p mRNA表达、血清中超氧化物歧化酶(SOD)含量显著降低,MMP-9 mRNA表达、血清中丙二醛(MDA)含量、降钙素受体(CTR)蛋白表达明显升高(P＜0.05),B组与C组相比无明显差异(P＞0.05),与C组相比,D、E、F组miR-34a-5 mRNA表达、SOD含量显著升高,MMP-9 mRNA表达、MDA含量、CTR蛋白表达显著降低(P＜0.05),且D组与E组相比无明显差异(P＞0.05),而F组较E组变化显著(P＜0.05);miR-34a-5p与MMP-9呈负相关(r=-0.952,P＜0.001).结论 促进miR-34a-5p可对RA起到治疗作用,其可有效抑制氧化应激,并抑制滑膜细胞向破骨细胞分化,其机制可能与靶向调控MMP-9有关.

目的 探讨调脾安肠方对裸鼠结肠癌肝转移(colorectal cancer liver metastasis,CLM)灶组织中 MicroRNA-34a-5p(miR-34a-5p)及其靶基因 Notch1/核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)通路表达的影响.方法 选取30只雄性Balb/c裸鼠随机分为空白组、模型组、中药组,每组10只.脾脏原位注射HCT-116人结肠癌细胞(细胞数约为1×107个/mL)法构建CLM模型.中药组在CLM造模完成2周后开始调脾安肠方(2 g/mL,每日0.2 mL)灌胃2周,空白组和模型组同期予等体积0.9％生理盐水灌胃.苏木素—伊红染色观察肝转移灶病理组织形态;蛋白免疫印迹法测定肝转移灶Notch1、NF-κB p65蛋白水平;实时荧光定量PCR测定肝转移灶miR-34a-5p及Notch1、NF-κB p65 mRNA水平.结果 与模型组比较,中药组裸鼠镜下病理转移灶面积明显减小,核分裂像减少,提示调脾安肠方抑制了结直肠癌细胞在肝脏的定植和迁移.与空白组比较,模型组肝转移灶中 miR-34a-5p 含量显著降低(P＜0.01),Notch1、NF-κB p65 蛋白表达升高(均 P＜0.05),Notch1、NF-κB p65的mRNA表达显著升高(均P＜0.01).与模型组比较,中药组Notch1蛋白及mRNA表达降低(P＜0.05),NF-κB p65 的 mRNA 表达显著降低(P＜0.01).miR-34a-5p 与 Notch1 mRNA 在结肠癌肝转移灶组织中表达水平呈负相关(r2=0.8845,P＜0.05),Notch1与NF-κB p65在结肠癌肝转移灶组织中mRNA表达水平呈显著正相关(r2=0.9291,P＜0.01).结论 中药复方调脾安肠方能抑制裸鼠结肠癌肝转移灶形成,其机制可能与通过抑癌基因miR-34a-5p靶向负性调节Notch1/NF-KB通路表达有关.

目的:分析表皮生长因子受体(EGFR)/间变性淋巴瘤激酶(ALK)野生型晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清微小RNA(miR)-499、miR-144-3p 变化,并评估其对预后的预测价值.方法:收集2018 年 1 月至 2020 年我院收治的 107 例 EGFR/ALK 野生型晚期 NSCLC 患者临床资料(NSCLC组),另取同期健康体检者107 例作为对照组,采用实时荧光RCR技术检测血清miR-499、miR-144-3p表达,比较其在两组中的差异,并评估不同临床病理特征晚期 NSCLC 患者血清 miR-499、miR-144-3p表达的变化;以出院时为随访起点,2023 年 1 月为截止时间,死亡为终点事件,以大于等于平均值作为高表达的标准,分别比较miR-499、miR-144-3p 高表达与低表达的晚期 NSCLC 患者预后生存率.结果:NSCLC组血清miR-499[(0.74±0.18)vs(1.05±0.20)]、miR-144-3p 相对表达量[(0.82±0.19)vs(1.22±0.21)]均低于对照组(P＜0.05).晚期NSCLC患者中,Ⅳ期患者血清miR-499[(0.64±0.17)vs(0.86±0.21)]、miR-144-3p 相对表达量[(0.71±0.16)vs(0.95±0.22)]低于ⅢB 及ⅢC 期者(P＜0.05),低分化者则低于中高分化者[(0.63±0.16)vs(0.85±0.21),(0.70±0.15)vs(0.94±0.22),P＜0.05].晚期NSCLC患者随访时间为4～56 个月,中位随访时间 34 个月,血清 miR-499 高表达者生存率明显高于低表达者(P＜0.05),血清miR-144-3p高表达者生存率明显高于低表达者(P＜0.05).结论:miR-499、miR-144-3p在EGFR/ALK野生型晚期 NSCLC 患者血清中呈低表达,Ⅳ期及低分化者表达更低,且表达水平对预后生存率有一定预测价值.

目的 探讨微小RNA-34家族(miR-34s)对结直肠癌细胞同源重组修复的作用及调控机制.方法 分别在2种结直肠癌细胞系(HCT116和HT29细胞)和2种非结直肠癌细胞系(HeLa和U2OS细胞)中过表达miR-34c-5p,应用蛋白质印迹法检测polo样激酶1(PLK1)蛋白表达水平.过表达miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p以及回转PLK1,应用蛋白质印迹法检测PLK1和第139位丝氨酸磷酸化的组蛋白H2AX(γH2AX)蛋白表达水平,分析miR-34s与PLK1以及DNA损伤的关系.使用DR-GFP/Ⅰ-SceI报告质粒检测miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p对同源重组修复效率的影响.qRT-PCR法检测miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p对PLK1 mRNA表达水平的影响.生物信息学预测和双荧光素酶报告基因实验验证miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p与PLK1 mRNA的结合位点.分别在p53wt和p53-/-HCT116细胞中过表达miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p,分析p53在PLK1调控过程中的作用.结果 miR-34c-5p在HCT116、HT29、HeLa、U2OS细胞中均可抑制PLK1蛋白表达,t值分别为13.317、8.129、6.802和15.934,均P<0.001.过表达miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p可抑制PLK1蛋白(F=44.191,P<0.001)和mRNA(F=26.076,P<0.001)表达水平以及上调γH2AX蛋白表达水平(F=5.368,P=0.026),回转PLK1可部分逆转DNA损伤.过表达miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p可降低结直肠癌细胞同源重组修复效率,F=200.739,P<0.001.双荧光素酶报告基因分析显示,miR-34a-5p可靶向结合PLK1 mRNA 3′-UTR.过表达miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p均能明显上调p53蛋白(F=6.100,P=0.018)以及mRNA(F=17.401,P=0.001)表达水平.在HCT116 p53-/-细胞中,miR-34a-5p对PLK1 mRNA及蛋白的抑制作用明显减弱,t值分别为-6.471和-4.056,均P<0.05;而miR-34b-5p和miR-34c-5p对PLK1 mRNA及蛋白的抑制作用消失,均P>0.05.结论 miR-34s可通过下调PLK 1表达水平抑制结直肠癌细胞同源重组修复以及诱导DNA损伤的积累.