Background:The sensitivity of breast cancer cells to radiation is a key cause of locoregional recurrence after postoperative radiother-apy.Several studies have reported that microRNAs (miRNAs) are involved in the radiosensitivity of human breast cancer cells.One miRNA microarray study showed that miR-450b-5p was overexpressed 13.3-fold in patients with estrogen receptor-positive (ER+) and human epidermal growth factor receptor 2-negative (HER2-) breast cancer and no local relapse compared with local relapse patients.However,its underlying mechanism of action remains unknown.Methods:The predicted target mRNAs of miR-450b-5p were screened using the TargetScan,miRDB,and miRWalk databases.West-ern blotting,quantitative polymerase chain reaction,and dual-luciferase reporter assays explored the association between cyclin-dependent kinase 6 (CDK6) and miR-450b-5p.The cell counting kit-8 assay and flow cytometry detected the proliferation of transfected MCF7 cells.Colony formation and xenograft tumors detected the radiosensitivity of the transfected MCF7 cells.Results:Bioinformatics analysis,Western blotting,quantitative polymerase chain reaction,and dual-luciferase reporter assays demon-strated that CDK6 was the target gene of miR-450b-5p.Furthermore,in vitro and in vivo experiments showed that miR-450b-5p inhibited MCF7 cell proliferation and cell cycle progression,increased the sensitizer enhancement ratio,and decreased the volume of xenograft tu-mors after irradiation by regulating CDK6.Conclusions:This study demonstrates that miR-450b-5p enhances the radiosensitivity of hormone receptor-positive (HR+) and HER2-breast cancer cells and elucidates its mechanism.miR-450b-5p may be considered a therapeutic target in HR+and HER2-breast cancer treated with radiotherapy.

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-214-5p对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)(购自上海信裕生物技术有限公司)增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:检测62例正常皮肤组织和62例皮肤瘢痕疙瘩患者miR-214-5p表达。将miR-NC(miR-NC组)、miR-214-5p(miR-214-5p组)、si-NC(si-NC组)、si-鼠双微体2基因(MDM2)(si-MDM2组)、anti-miR-NC(anti-miR-NC组)、anti-miR-214-5p(anti-miR-214-5p组)、miR-214-5p＋pcDNA3.1(miR-214-5p＋pcDNA3.1组)和miR-214-5p＋pcDNA3.1-MDM2(miR-214-5p＋pcDNA3.1-MDM2组)转染至KF细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-214-5p表达；蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白表达；细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖；流式细胞仪检测细胞凋亡；双荧光素酶报告基因检测细胞荧光活性。采用 t检验或单因素方差分析比较两组或多组间均数差异。 结果:与miR-NC组比较，miR-214-5p组KF细胞细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、吸光度( A450)值和B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)显著降低(分别为0.23±0.02比0.80±0.08、0.52±0.05比0.97±0.09、0.16±0.02比0.68±0.06， t＝20.737、13.695、24.661， P<0.05)，miR-214-5p、p21、bcl-2相关X蛋白(bax)和凋亡率显著升高[分别为0.51±0.05比0.14±0.01、0.95±0.09比0.27±0.02、0.79±0.08比0.14±0.04、(23.57±2.23)%比(8.16±0.85)%， t＝21.769、22.127、21.802、19.371， P<0.05]。与si-NC组比较，si-MDM2组KF细胞MDM2、Cyclin D1、 A450和bcl-2显著降低(分别为0.33±0.03比0.84±0.07、0.37±0.03比0.82±0.07、0.64±0.06比0.97±0.08、0.26±0.03比0.66±0.05， t＝14.621、12.328、7.926、6.112， P<0.05)，p21、bax和凋亡率显著升高[分别为0.73±0.07比0.26±0.03、0.61±0.06比0.13±0.05、(18.27±1.53)%比(8.23±0.95)%， t＝15.477、10.386、11.149， P<0.05]。与miR-214-5p＋pcDNA3.1组比较，miR-214-5p＋pcDNA3.1-MDM2组KF细胞MDM2、Cyclin D1、 A450值和bcl-2显著升高(分别为0.57±0.06比0.23±0.02、0.50±0.05比0.22±0.03、0.73±0.07比0.51±0.05、0.48±0.05比0.17±0.02， t＝18.324、15.122、10.784、16.131， P<0.05)，p21、bax和凋亡率显著降低[分别为0.62±0.06比0.97±0.09、0.43±0.04比0.76±0.08、(12.37±1.24)%比(23.42±2.20)%， t＝9.123、13.244、18.024， P<0.05]。 结论:miR-214-5p可抑制KF细胞增殖并促进凋亡，其机制可能与靶向调控MDM2有关。

目的:探讨Gm31083/miR-450b-5p/EphB1通路介导肺癌骨转移癌痛小鼠的机制。方法:2020年1月至2021年12月，选取健康SPF级SD雄性小鼠20只，采用随机数字表法分为假手术组、模型组各10只。肺癌骨转移癌痛模型通过股骨内注射人肺腺癌A549细胞建立。于小鼠左侧足底中部采用2 g Von Frey细纤维刺激，5~6 s观察小鼠缩足反应；于热板仪上测定小鼠的痛阈值；采用实时荧光定量聚合酶链式反应法测定miR-450b-5p表达；采用Western Blot测定Gm31083和EphB1蛋白表达。结果:模型组小鼠缩足反应率［（31.98±6.36）%］高于假手术组［（22.78±4.54）%］（ t=-3.72， P < 0.05）。模型组小鼠热刺激痛阈值［（8.18±2.53）s］低于假手术组［（15.42±3.97）s］（ t=4.86， P < 0.001）。模型组小鼠miR-450b-5p相对表达量（1.62±0.29）高于假手术组（1.00±0.04）（ t=-6.70， P < 0.001）。模型组小鼠Gm31083、EphB1蛋白表达灰度值分别为（1.23±0.21）、（2.73±0.28），均高于假手术组［（0.67±0.18）、（1.25±0.24）］（ t=-6.40、-12.69，均 P < 0.001）。 结论:Gm31083/miR-450b-5p/EphB1通路在肺癌骨转移癌痛小鼠中高表达，有可能成为评估肺癌骨转移癌痛新的标志物。

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)人类微小RNA17簇宿主基因(MIR17HG)调节微小RNA(miR)-214-3p/环指蛋白38(RNF38)信号轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响.方法 收集2022年5月至2023年10月于本院行手术切除的46例肝癌患者的癌组织及癌旁组织,检测lncRNA MIR17HG、miR-214-3p和RNF38的表达.体外培养HepG2、Bel-7402、SMMC-7721、HL-7702细胞,并比较lncRNA MIR17HG、miR-214-3p和RNF38的表达,选择Bel-7402细胞继续研究,随机分为sh-NC组、sh-MIR17HG组、anti-NC组、anti-miR-214-3p组和Bel-7402组.探究各组Bel-7402细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移情况,蛋白质印迹法分析RNF38、半胱天冬酶-3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶-2(MMP2)、基质金属蛋白酶-9(MMP9)蛋白表达,双荧光素酶验证lncRNA MIR17HG与miR-214-3p以及miR-214-3p与RNF38的关系.结果 肝癌组织中lncRNA MIR17HG、RNF38的mRNA表达较高,miR-214-3p的mRNA表达较低,RNF38的蛋白阳性表达率较高(P＜0.05).细胞SMMC-7721、HepG2、Bel-7402 中 lncRNA MIR17HG mRNA、RNF38 mRNA 和 RNF38 蛋白表达高于 HL-7702 细胞,miR-214-3p mRNA 表达低于HL-7702细胞(P＜0.05).与Bel-7402组、sh-NC组比较,sh-MIR17HG组OD450nm值、克隆细胞数、侵袭细胞数、迁移细胞数和 RNF38、MMP2、Bcl-2、MMP9 表达减少,凋亡率和 caspase-3 表达增加(P＜0.05);与 sh-MIR17HG 组、anti-NC 组比较,anti-miR-214-3p组OD450nm值、克隆细胞数、侵袭细胞数、迁移细胞数和RNF38、MMP2、Bcl-2、MMP9表达增加,凋亡率和caspase-3表达减少(P＜0.05).lncRNA MIR17HG 与 miR-214-3p 以及 miR-214-3p 与 RNF38 分别存在靶向关系.miR-214-3p+WT-MIR17HG 组荧光素酶活性低于 miR-NC+WT-MIR17HG 组(P＜0.05),miR-214-3p+WT-RNF38 组荧光素酶活性低于 miR-NC+WT-RNF38组(P＜0.05).结论 lncRNA MIR17HG可能通过调控miR-214-3p/RNF38轴促进肝癌细胞的恶性生物学行为.

目的 探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)与大鼠小胶质(RM)细胞活化的关系.方法 体外培养RM细胞,并随机分为正常组和氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)组,RT-qPCR检测各组细胞内circHIPK3表达水平.构建具有嘌呤霉素抗性的circHIPK3慢病毒载体,设置过表达(OE)组和阴性对照(NC)组,根据荧光表达强度选择RM细胞最佳感染复数(MOI),采用嘌呤霉素筛选稳定表达circHIPK3的RM细胞.将OE组和NC组细胞置于OGD/R条件下培养,Western blot检测各组细胞中小胶质细胞活化标志蛋白钙结合衔接分子1(Iba-1)、肿瘤坏死因子受体超家族成员5(CD40)表达水平.通过circRNAdb数据库分析circHIPK3翻译蛋白潜能,利用circBank和Starbase数据库预测circHIPK3潜在结合的微小RNA(miRNA).结果 与正常组相比,OGD/R组RM细胞中circHIPK3的表达水平显著下调(P<0.0001).测序比对结果正确,成功构建cir-cHIPK3过表达慢病毒载体.感染RM细胞最佳MOI=80,以2μg/ml嘌呤霉素筛选得到稳定过表达circHIPK3的RM细胞.RT-qPCR结果显示,OE组细胞中circHIPK3表达水平较NC组显著增高(P<0.01).Western blot结果显示,在OGD/R培养条件下,OE组细胞中Iba-1和CD40蛋白表达水平较NC组显著降低(P<0.05).蛋白翻译分析显示,cir-cHIPK3具有2个内部核糖体进入位点(IRES)和1个开放阅读框(ORF),可编码由404个氨基酸组成的多肽.miRNA结合分析显示,circHIPK3可能与8个靶向miRNAs结合:hsa-miR-3529-5p、hsa-miR-379-5p、hsa-miR-506-3p、hsa-miR-33、hsa-miR-450b-5p、hsa-miR-551b-3p、hsa-miR-193、hsa-miR-508-3p.结论 过表达circHIPK3显著抑制OGD/R诱导的RM细胞活化、circHIPK3有编码多肽潜能,可能通过海绵miRNA发挥功能.

目的:探讨艾司氯胺酮对肝癌细胞恶性生物学行为的影响及可能的作用机制.方法:收集26例肝癌患者的癌组织和癌旁组织.实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肝癌组织和细胞微小RNA(miR)-449b-5p和转化生长因子-β诱导因子同源盒2(TGIF2)mRNA表达.选取上述基因变化最显著的细胞进行后续实验.将肝癌SK-Hep-1细胞分为对照组(正常培养)、艾司氯胺酮-L组(1 mmol/L艾司氯胺酮处理)、艾司氯胺酮-H组(2 mmol/L艾司氯胺酮处理)、艾司氯胺酮-H+inhibitor NC组(转染inhibitor NC+2 mmol/L艾司氯胺酮处理)、艾司氯胺酮-H+miR-449b-5p inhibitor组(转染miR-449b-5p inhibitor+2 mmol/L艾司氯胺酮处理).细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖.划痕实验检测细胞迁移能力.Transwell实验检测细胞侵袭能力.流式细胞术检测细胞凋亡情况.Western blot检测细胞中肿瘤增殖细胞核抗原(Ki-67)、半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子A(VEGF-A)、TGIF2蛋白表达量.双荧光素酶报告基因实验验证miR-449b-5p和TGIF2的靶向关系.结果:肝癌组织和细胞TGIF2 mRNA表达水平升高,miR-449b-5p表达水平降低(均P＜0.05).与对照组比较,艾司氯胺酮-L组、艾司氯胺酮-H组以及艾司氯胺酮-H+inhibitor NC组SK-Hep-1细胞中miR-449b-5p表达水平、细胞凋亡率及Cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,TGIF2 mRNA表达水平、OD450值(24、48 h)、细胞划痕愈合率、细胞侵袭数及Ki-67、MMP-9、VEGF-A、TGIF2蛋白表达水平降低(均P＜0.05).与艾司氯胺酮-H+inhibitor NC 组比较,艾司氯胺酮-H+miR-449b-5p inhibitor 组 SK-Hep-1 细胞miR-449b-5p表达水平、细胞凋亡率及Cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,TGIF2 mRNA表达水平、OD450值(24、48 h)、细胞划痕愈合率、细胞侵袭数及Ki-67、MMP-9、VEGF-A、TGIF2蛋白表达水平升高(均P＜0.05).miR-449b-5p mimic+TGIF2-WT组荧光素酶活性低于miR-NC+TGIF2-WT组(P＜0.05).结论:艾司氯胺酮通过上调miR-449b-5p/TGIF2轴抑制肝癌细胞的恶性生物学行为.

目的:筛选果蝇Zeste基因增强子同源物2(EZH2)基因上游miRNA及lncRNA,分析其在胃癌细胞中的表达并验证其间的靶向关系,探讨它们对胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响.方法:通过ENCORI、miRDB和Target Scan数据库查询并分析、筛选EZH2 上游miRNA(has-miR-450b-5p),ENCORI数据库和DAINA数据库筛选has-miR-450b-5p上游lncRNA(lncRNA NEAT1),预测hsa-miR-450b-5p、lncRNA NEAT1与EZH2之间的结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证hsa-miR-450b-5p与lncRNA NEAT1的结合关系.采用qPCR和WB法检测lncRNA NEAT1和EZH2在正常胃黏膜细胞(GES-1)与胃癌细胞(MGC-803、SGC-7901和MKN-28)中的表达量.按转染物的不同将MGC-803和SGC-7901细胞分为hsa-miR-450b-5p-mimic组、mimic-NC组、si-NEAT1组和si-NC组,转染36～48 h后qPCR法验证过表达及敲减效果;通过qPCR、WB法检测观察过表达hsa-miR-450b-5p对细胞中lncRNA NEAT1和EZH2 mRNA、蛋白表达的影响,以及敲减lncRNA NEAT1对hsa-miR-450b-5p和EZH2 mRNA表达的影响;CCK-8法、划痕愈合实验和流式细胞术分别检测敲减EZH2或敲减lncRNA NEAT1对细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响.结果:生物信息学分析筛选获得EZH2上游miRNA和lncRNA为has-miR-450b-5p和lncRNA NEAT1,双荧光素酶报告基因实验验证了两者间存在靶向关系.lncRNA NEAT1和EZH2 mRNA、蛋白在胃癌细胞中均呈高表达(均P<0.05).与mimic-NC组相比,hsa-miR-450b-5p-mimic组MGC-803、SGC-7901细胞中miR-450b-5p水平均显著升高,而EZH2 mRNA、蛋白和lncRNA NEAT1的表达量均显著降低(P<0.05或P<0.01);与si-NC组相比,si-NEAT1组MGC-803、SGC-7901细胞中lncRNA NEAT1和EZH2 mRNA的表达量均显著降低(均P<0.01),SGC-7901细胞中hsa-miR-450b-5p表达量显著升高(P<0.05).敲减EZH2或敲减lncRNA NEAT1后,MGC-803、SGC-7901细胞的增殖、迁移能力均显著降低(均P<0.01).结论:lncRNA NEAT1 和EZH2在胃癌细胞中均呈高表达,lncRNA NEAT1可通过hsa-miR-450b-5p促进EZH2的表达并提高胃癌MGC-803和SGC-7901细胞的增殖和迁移能力.

目的 筛选并鉴定靶向调控蚊虫细胞色素P450s酶系(CYP450s)基因的miRNA,分析差异表达miRNA及其靶基因的功能.方法 采集氯氰菊酯敏感(CS)和抗性(CR)品系的淡色库蚊Ⅲ、Ⅳ龄幼蚊各10只、羽化后3d未吸血雌成蚊5只,分别提取总RNA并测序,采用DEGseq软件计算CS和CR品系miRNA的表达差异.使用RNAhybrid软件和miRanda软件筛选差异表达miRNA的靶基因,并进行基因本体论(GO)显著性富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.选取5个可能调控CYP450s基因表达的差异表达miRNA(miR-11-5p、miR-317_3、miR-278-3p_1、miR-8-5p、miR-305-3p_5)进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证测序数据的准确性.qRT-PCR检测 5个差异表达miRNA靶基因(CYP6a8、CYP6BB1v2、CYP6N22、CYP6N26P、CYP9b2)的相对表达水平.结果 测序结果显示,CS、CR品系淡色库蚊间差异表达的miRNA共有196个,只在Ⅲ龄幼蚊中差异表达的占16.3％(32/196),只在Ⅳ龄幼蚊中差异表达的占20.4％(40/196),只在雌成蚊中差异表达的占26.0％(51/196),在3个阶段都差异表达的miRNA占12.2％(24/196).Ⅲ龄幼蚊阶段差异表达的91个miRNA中,有45个上调、46个下调;Ⅳ龄幼蚊阶段差异表达的104个miRNA中,有59个上调、45个下调;雌成蚊阶段差异表达的98个miRNA中,有44个上调、54个下调.GO显著性富集分析和KEGG通路富集分析结果显示,差异表达miRNA的靶基因主要与细胞途径、代谢途径、单细胞生物途径等相关,分子功能主要为结合、催化活性、转运体活性等,主要富集在信号传输、传染性疾病、癌症、寄生虫病等相关通路.qRT-PCR结果显示,5个差异表达miRNA的上调、下调趋势与测序结果基本一致,表达情况与其对应的靶基因(CYP6a8、CYP6BB1v2、CYP6N22、CYP6N26P和CYP9b2)的表达情况相反.结论 本研究所筛选的5个差异表达miRNA(miR-11-5p、miR-317_3、miR-278-3p_1、miR-8-5p、miR-305-3p_5)能够通过调节CYP450s基因表达来调控淡色库蚊的抗药性.

目的:探讨大黄素通过miR-96-5p靶向叉头蛋白K2(FOXK2)减轻狼疮性肾炎肾小球系膜细胞(MCs)损伤.方法:检测MRL/faslpr小鼠(狼疮性肾炎肾组)和MRL/MPJ小鼠(对照组)24 h尿蛋白以及血清尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)含量.MCs分离纯化后分为:MCs组(未做任何处理的MCs);L-EMO组(10 μmol/L 大黄素处理 MCs)、M-EMO组(25 μmol/L大黄素处理 MCs)、H-EMO组(50 μmol/L 大黄素处理 MCs)、H-EMO+miR-96-5p-NC 组(50μmol/L 大黄素处理 MCs后转染 miR-96-5p-NC)、H-EMO+miR-96-5p-minic 组(50 μmol/L 大黄素处理MCs后转染miR-96-5p-minic).双荧光素酶报告基因实验验证miR-96-5p和FOXK2的靶向关系;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-96-5p表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测FOXK2以及凋亡相关蛋白表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测MCs炎性因子水平;细胞计数试剂盒 8(CCK-8)测定 MCs 活力;Annexin-V FITC/PI 双染法检测MCs凋亡情况.结果:与对照组相比,狼疮性肾炎组24 h尿蛋白含量、血清BUN和Scr水平显著升高(P＜0.05);与MCs组相比,L-EMO组、M-EMO组、H-EMO组miR-96-5p的表达量、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、A450值、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白水平依次显著下降(P＜0.05),FOXK2水平、细胞凋亡率、Bcl-2相关的X基因(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)蛋白水平依次显著升高(P＜0.05),大黄素作用效果呈现剂量依赖性;与H-EMO 组、H-EMO+miR-96-5p-NC组相比,H-EMO+miR-96-5p-minic组显著升高miR-96-5p的表达量、炎性因子水平、A450值以及Bcl-2蛋白水平(P＜0.05),显著降低FOXK2水平以及细胞凋亡率(P＜0.05).结论:大黄素通过下调miR-96-5p进而上调FOXK2,从而减轻狼疮性肾炎MCs损伤.

目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-30b-5p在前列腺癌中的表达及其对前列腺癌细胞增殖的影响.方法 通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测41例前列腺癌组织及癌旁组织中miRNA-30b-5p的表达差异;分析上述组织中miR-30b-5p的表达与患者临床病理特征的关系.将人前列腺癌PC-3细胞分为空白对照组,阴性对照组及过表达组,分别进行转染,RT-qPCR法检测各组细胞中miR-30b-5p的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)实验和细胞平板集落实验检测细胞增殖能力,Western blot检测细胞中细胞核增殖抗原(Ki-67)、β-连环蛋白([β-catenin)及细胞周期蛋白D1(Cyclin Dl)的蛋白表达.结果 前列腺癌组织中miR-30b-5p的表达(0.469±0.032)显著低于癌旁组织(0.997 ±0.016,t=14.499,P=0.000).miR-30b-5p低表达的患者在临床分期Ⅲ～Ⅳ期、病理分级G3 ～ G4级及Gleason评分≥8分者中所占比例明显高于临床分期Ⅰ～Ⅱ期[65.2％ (15/23)与33.3％ (6/18),x2=4.108,P=0.043]、病理分级G1～G2级[72.7％ (16/22)与26.3％ (5/19),x2=6.145,P=0.013]、及Gleason评分≤7分[72.0％ (18/25)与18.8％ (3/16),x2=11.072,P=0.001]所占比例均明显增加,而不同年龄患者的miR-30b-5p低表达比例比较差异无统计学意义[54.5％ (12/22)与47.4％ (9/19),x2=0.210,P=0.647].转染后,过表达组miR-30b-5p的表达(4.088±0.229)显著高于阴性对照组(1.028±0.054,F=168.200,P=0.000).48 h及72 h时,过表达组A450值(0.308±0.040,0.512 ±0.033)显著低于阴性对照组A450值(0.494±0.035,0.840±0.037,F=6.514,P=0.001).过表达组细胞菌落数(14.400±2.227)显著低于阴性对照组(87.600±4.760,F=111.000,P=0.000).过表达组Ki-67、1β-catenin及Cyclin D1的蛋白表达(0.622±0.095、0.437±0.091、0.237±0.049)显著低于阴性对照组(1.681±0.062、1.067±0.188、0.665±0.083)(F=38.490、6.570、13.510,P=0.000、0.031、0.006).结论 miR-30b-5p在前列腺癌中低表达,过表达前列腺癌细胞中miR-30b-5p可减少癌细胞增殖,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关.