目的:研究miR-539-5p对雄激素非依赖性前列腺癌细胞C4-2B阿帕鲁胺（ARN-509）敏感性及恶性表型的影响及相关机制。方法:获取去势抵抗性前列腺癌、去势敏感性前列腺癌及良性前列腺组织，并选取处于对数生长期C4-2B前列腺癌细胞，传代扩增后，采用miR-539-5p质粒对C4-2B细胞系进行转染，共分为空白组，转染组（miR-539-5p质粒）及对照组（对照质粒）。qPCR检测组织及3组细胞中miR-539-5p、AR及热休克因子结合蛋白1（heat shock factor binding protein 1，HSBP1）基因的表达含量；Western blot检测3组细胞雄激素受体AR及HSBP1的蛋白表达含量；Transwell实验检测3组细胞的侵袭迁移能力；CCK-8法检测3组细胞的增殖能力及雄激素受体拮抗剂ARN-509的半抑制浓度（IC 50）；平板克隆实验检测3组细胞的克隆形成能力。 结果:组织qPCR提示：良性前列腺组织、前列腺癌去势敏感患者肿瘤组织及前列腺癌去势抵抗患者肿瘤组织miR-539-5p的表达分别为0.29±0.04、0.17±0.02、0.07±0.01，AR的表达分别为0.13±0.02、0.28±0.04、0.79±0.11，HSBP1的表达分别为0.20±0.03、0.38±0.04、0.72±0.11。相比良性前列腺组织和前列腺癌组织，前列腺癌去势抵抗患者的组织中AR及HSBP1基因的表达含量较高，miR-539-5p表达较低（ P<0.001）。细胞qPCR提示：空白组、对照组及转染组miR-539-5p表达分别为1.00±0.09、1.07±0.11、7.19±0.51，AR的表达分别为1.00±0.10、1.03±0.14、0.51±0.08，HSBP1的表达分别为1.00±0.10、0.96±0.12、0.97±0.11。转染组细胞的miR-539-5p表达显著高于对照组及空白组，AR基因表达含量明显低于对照组及空白组，HSBP1基因表达水平无显著差异。Western blot显示：空白组、对照组及转染组AR的蛋白表达分别为1.00±0.10、1.12±0.22、0.72±0.16，HSBP1的蛋白表达分别为1.00±0.10、0.94±0.18、0.48±0.11，转染组细胞的AR及HSBP1的蛋白表达明显少于对照组及空白组。Transwell实验显示：转染组侵袭及迁移细胞明显少于对照组及空白组。CCK-8法及平板克隆实验结果显示：转染组细胞的增殖能力及克隆形成数明显少于对照组及空白组。与空白组及对照组细胞相比，转染组细胞ARN-509的IC 50值显著降低。 结论:miR-539-5p可能通过干扰HSBP1的翻译水平，抑制细胞的恶性表型及去势抵抗。

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) MYOSLID靶向微小RNA(miR)-339-5p调控肺癌细胞生物学行为的分子机制。方法:收集2016年5月至2018年4月于本院接受手术治疗的肺癌组织及癌旁组织标本20例，采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测肺癌组织及癌旁组织中MYOSLID与miR-339-5p的表达。体外培养肺癌细胞株A549并分组转染，用噻唑蓝(MTT)、双荧光素酶报告实验验证MYOSLID对miR-339-5p的靶向调控作用；通过细胞转染及分组，流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell实验检测细胞迁移及侵袭，双荧光素酶报告基因检测，蛋白质印迹法(Western blot)检测，细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)，负向调控因子P21(p21)，B淋巴细胞瘤2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、金属蛋白酶2(MMP)-2、MMP-9蛋白表达用Image J软件分析各条带灰度值。结果:抑制lncRNA MYOSLID表达对肺癌A549细胞活力及Cyclin D1蛋白相对表达量，si-MYOSLID组低于si-NC组[1.00±0.09比0.42±0.04， t＝17.667， P<0.05；0.74±0.06比0.31±0.03， t＝19.230， P<0.05]；p21蛋白si-MYOSLID组高于si-NC组[0.28±0.03比0.69±0.06， t＝18.335， P<0.05，]，差异有统计学意义。抑制lncRNA MY OSLID表达对肺癌A549细胞凋亡率(%)及bax的表达水平，si-MYOSLID组明显高于si-NC组[6.32±0.64比19.48±1.83， t＝20.317， P<0.05；0.32±0.03比0.71±0.07， t＝15.362， P<0.05]；bcl-2蛋白的表达水平，si-MYOSLID组明显高于si-NC组[0.62±0.06比0.23±0.03， t＝17.441， P<0.05]，差异有统计学意义。抑制lncRNA MYOSLID表达对肺癌A549细胞迁移与侵袭细胞数及MMP-2、MMP-9的表达水平，si-MYOSLID组低于si-NC组[0.22±0.06比0.43±0.01， t＝14.441， P<0.05；0.15±0.02比0.37±0.02， t＝10.410， P<0.05；0.36±0.02比0.48±0.02， t＝16.041， P<0.05]，差异有统计学意义。miR-NC组肺癌A549细胞增殖、凋亡率低于miR-339-5p组[(1.00±0.09)%比(2.58±0.25)%， t＝17.839， P<0.05；(7.32±0.74)%比(17.45±1.63)%， t＝16.041， P<0.05]；迁移细胞数及侵袭细胞数，miR-NC组高于miR-339-5p组(98.36±9.54比52.64±5.28， t＝12.579， P<0.05；84.33±8.41比44.69±5.17， t＝12.046， P<0.05)，差异有统计学意义。miR-339-5p过表达对肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭相关蛋白表达的影响-Cyclin D1蛋白表达，miR-NC组高于miR-339-5p组(0.76±0.07比0.38±0.03， t＝14.968， P<0.05)；p21蛋白表达miR-NC组低于miR-339-5p组(0.27±0.03比0.64±0.06， t＝16.546， P<0.05)；bcl-2蛋白表达，MMP-9蛋白表达，MMP-2蛋白表达，miR-NC组低于miR-339-5p组(0.61±0.06比0.28±0.03， t＝14.758， P<0.05；0.71±0.07比0.33±0.03， t＝14.968， P<0.05；0.88±0.08比0.43±0.04， t＝15.093， P<0.05)bax蛋白表达，miR-NC组低于miR-339-5p组(0.31±0.03比0.68±0.06， t＝16.546， P<0.05)，差异有统计学意义。干扰miR-339-5p表达逆转了抑制lncRNA MYOSLID表达对肺癌A549细胞凋亡、迁移、侵袭的作用，与si-NC组比较，si-MYOSLID组逆转miR-339-5p表达，凋亡率(%)及迁移细胞数最明显，si-MYOSLID和si-MYOSLID+anti-miR-339-5p差异有统计学意义[(2.41±0.24)比(1.53±0.14)， F＝119.730， P<0.05；(19.63±1.95)比(12.48±1.23)， F＝130.702， P<0.05；(43.16±4.38)比(82.64±8.26)， F＝141.749， P<0.05]；与si-MYOSLID+anti-miR-NC组比较，si-MYOSLID+anti-miR-339-5p凋亡率[(12.48±1.23)%， F＝130.027， P<0.05]干扰miR-339-5p表达逆转了抑制lncRNA MYOSLID表达对肺癌A549细胞凋亡、迁移、侵袭相关蛋白表达的作用，蛋白表达si-MYOSLID组和si-MYOSLID+anti-miR-339-5p组差异有统计学意义。结果显示抑制MYOSLID的表达可通过靶向miR-339-5p而抑制肺癌细胞增殖、迁移及侵袭，并可诱导细胞凋亡，MYOSLID可能为肺癌治疗的潜在新靶点。 结论:lncRNA MYOSLID通过调控miR-339-5p促进肺癌细胞的增殖、迁移及侵袭，抑制细胞凋亡。

目的 探讨微小RNA(miR)-539-5p、Caspase活性和凋亡抑制因子1(CAAP1)在胃癌组织中表达及其临床意义.方法 2018年1月～2019年12月我院接受手术治疗胃癌组织标本及对应的癌旁组织102例,检测癌组织miR-539-5p、CAAPl表达水平,探讨miR-539-5p、CAAPl表达与临床病理参数及预后的关系.Pearson法分析miR-539-5p与CAAP1表达相关性.Kaplan-Meier法分析胃癌病人生存期.采用Cox回归模型分析胃癌病人预后的影响因素.结果 胃癌组织中miR-539-5p表达水平低于癌旁组织,CAAP1表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.05).胃癌组织miR-539-5p与CAAP1表达水平存在负相关性(P=0.000).胃癌组织miR-539-5p、CAAP1表达均与TNM分期、浸润深度、淋巴结转移、肿瘤直径显著相关(P＜0.05).miR-539-5p高表达组3年生存率高于低表达组(P=0.045),CAAP1高表达组3年生存率低于低表达组,差异有统计学意义(P=0.015).Cox回归显示,TNM分期、浸润深度、淋巴结转移以及miR-539-5p、CAAP1表达是胃癌病人预后影响因素(P＜0.05).结论 miR-539-5p在胃癌组织中表达水平降低、CAAP1表达水平升高,与TNM分期、浸润深度、淋巴结转移、肿瘤直径有关,且二者与病人预后密切相关.

目的:分析非小细胞肺癌患者预后相关的外泌体miRNA的临床意义,并通过实验验证其功能,作为肺癌诊断和治疗的生物标志物.方法:从公共数据库下载非小细胞肺癌患者血清外泌体和肺癌组织的miRNA表达谱及临床数据;分别利用R语言"limma""survival"和"survminer"包进行miRNA的差异表达分析和生存分析;通过靶基因富集分析预测miRNA生物学功能并分析其与免疫细胞浸润的相关性;在两种肺癌细胞中敲低miRNA,通过CCK-8、EdU和Transwell实验分析其对细胞增殖和迁移的影响;收集过表达miRNA肺癌细胞的外泌体,处理人正常支气管上皮细胞BEAS-2B并分析生物学功能变化.结果:基于差异分析和单因素COX分析,选定has-miR-539-5p(miR-539)进一步探究其与多个肿瘤相关信号通路和免疫系统相关;相关性分析表明miR-539 表达与多种免疫细胞浸润显著相关;敲低miR-539 能够显著降低肺癌细胞增殖和迁移能力,而过表达miR-539 肺癌细胞外泌体处理正常肺细胞能够使其获得恶性细胞特征,包括增殖和迁移能力的增强.结论:miR-539 能够调控肺癌细胞增殖和迁移能力,并且在非小细胞肺癌患者肿瘤组织和血清外泌体中上调,对患者诊断和预后具有重要的指导意义.

目的 探讨肝癌组织中microRNA-539(miR-539)表达水平及其抑制肝癌细胞增殖的作用机制.方法 收集90例肝癌患者术后肝癌组织及癌旁组织标本,用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测组织中miR-539表达量.在PCL/PRF5、Huh7和QGY-7701肝癌细胞中转染miR-539模拟物(mimics),用Real-time PCR检测miR-539表达量.用MTT法检测miR-539对肝癌细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测miR-539对肝癌细胞凋亡的影响;用免疫印迹法检测miR-539对肝癌细胞中E2F转录因子3(E2F3)蛋白表达的影响.结果 肝癌组织中miR-539表达量显著低于癌旁组织(P＜0.05);miR-539表达量与肝癌患者性别、年龄及肝癌组织分化程度无关(P＞0.05);与肿瘤直径和淋巴结转移相关(P＜0.05).转染miR-539 mimics组肝癌细胞中miR-539表达量显著高于空白组和miR-539 NC组(P＜0.05).在QGY-7701细胞中,过表达miR-539能显著抑制细胞增殖(P＜0.05),降低E2F3蛋白的表达(P＜0.05),对细胞凋亡无明显作用(P＞0.05).结论 miR-539是肝癌发生中的抑癌因子,可能是通过靶向下调E2F3蛋白水平达到抑制癌细胞的增殖.

目的 明确衰老相关microRNA与恒河猴增龄的相关性.方法 将猴群参照人类增龄划分为幼年、成年、老年和长寿,提取外周血白细胞的总RNA;用real-time PCR检测外周血白细胞中的microRNA及VEGFA、GHR、TBP、INSR、CLOCK、IKBKB、PIK3R1、LRP2、SSTR3、IGF1R、BCL2、PPM1D、IRS1、MAPK8、ADCY5、APP、NFE2L1、BDNF和PEX5的表达;利用microRNA靶基因预测网站miRwalk、TargetSan、miRecords、miRDB预测miR-16-5p的靶基因,并与人类衰老基因库(http://genomics.senescence.info/)对接.结果 在增龄过程中,恒河猴外周血白细胞中miR-16-5p的表达量随年龄增长而增加(P<0.001);多个网站对miR-16-5p靶基因预测得到539个潜在的靶基因,与人类衰老基因组库对接后有19个基因重合;有10个基因的mRNA在恒河猴增龄过程中存在差异表达,其中,IKBKB、PIK3R1、IRS1的表达随着年龄的增加逐渐下降.结论 在自然衰老恒河猴的外周血白细胞中,miR-16-5p及其靶基因IKBKB、PIK3R1、IRS1能作为外周血衰老候选标志物.

目的 探讨微小RNA-145-5p(miR-145-5p)对结肠癌细胞增殖、凋亡和Fascin-1( FSCN1)表达的影响.方法 采用实时定量PCR(QPCR)检测人正常结肠上皮NCM460细胞和结肠癌HCT116细胞的miR-145-5p水平;体外常规培养HCT116细胞并分为对照组、过表达组和抑制组,过表达组转染miR-145-5p模拟物mimics,抑制组则转染miR-145-5p抑制物inhibitor,而对照组不作特殊处理.采用QPCR、活细胞计数CCK-8、Annexin Ⅴ-FITC／PI双染流式细胞术和Western blotting检测miR-145-5p水平、增殖活力、凋亡率和FSCN1水平;构建FSCN1基因3’端非翻译区( 3’UTR)野生型和突变型重组 psi-CHECK2荧光素酶报告载体并通过双荧光素酶报告基因系统验证miR-145-5p与FSCN1的靶向关系.结果 HCT116细胞的miR-145-5p水平为0. 281±0. 072,低于NCM460细胞的1. 062±0. 226( P＜0. 05).与对照组的1. 103±0. 214相比,过表达组的miR-145-5p水平升高至4. 159±1. 080,而抑制组则降低至0. 348±0. 052;与对照组相比,过表达组转染48、72 h后的增殖活力降低,而抑制组则升高;与对照组的(7. 539±1. 413)%相比,过表达组的凋亡率升高至(17. 126±4. 274)%,而抑制组则降低至(2. 658±0. 725)%;与对照组的0. 521±0. 078相比,过表达组的FSCN1水平降低至0. 243±0. 034,而抑制组则升高至0. 769± 0. 092;以上组间差异均有统计学意义(P＜0. 05).与转染突变型FSCN1 3’UTR的荧光素酶报告载体相比,miR-145-5p mimics能降低FSCN1 3’UTR野生型的荧光素酶活性(P＜0. 05),但对突变型无影响( P＞0. 05).结论 miR-145-5p在结肠癌细胞中低表达并发挥抑癌作用,该miRNA可能通过靶向FSCN1来调控癌细胞的增殖并促进其凋亡,有望成为结肠癌的新型生物诊治靶点.

Objective: MicroRNA (miRNA), a short noncoding RNA, is claimed to be a potential blood-based biomarker. We aimed to identify and evaluate miRNAs as diagnostic biomarkers for non-small cell lung cancer (NSCLC). Methods: Profiles of 745 miRNAs were screened in the serum of 8 patients with NSCLC and 8 age- and sex-matched controls using TaqMan low-density arrays (TLDAs) and validated in 25 patients with NSCLC and 30 with other lung diseases (OLs) as well as in 19 healthy persons (HPs). The diagnostic performance of the candidate miRNAs was assessed in 117 cases of NSCLC and 113 OLs using quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). Differences in miRNA expression between patients with NSCLC and controls were assessed using the Mann–Whitney U test. The area under receiver operating characteristic (ROC) curve (AUC) was obtained based on the logistic regression model. Results: Ten miRNAs were found to be differentialy expressed between patients with NSCLC and controls, including miR-769, miR-339-3p, miR-339-5p, miR-519a, miR-1238, miR-99a#, miR-134, miR-604, miR-539, and miR-342. The expression of miR-339-3p was significantly higher in patients with NSCLC than in those with OLs (P < 0.001) and HPs (P = 0.020). ROC analysis revealed an miR-339-3p expression AUC of 0.616 [95％ confidence interval (CI): 0.561–0.702]. The diagnostic prediction was increased (AUC = 0.706, 95％ CI: 0.649–0.779) in the model combining miR-339-3p expression and other known risk factors (i.e., age, smoking status, and drinking status). Conclusions: MiR-339-3p was significantly upregulated in patients with NSCLC compared with participants without cancer, suggesting a diagnostic prediction value for high-risk individuals. Therefore, miR-339-3p expression could be a potential blood-based biomarker for NSCLC.

环状RNA (circular RNA,circRNA)是一类呈闭环状结构的竞争性内源RNA (competing endogenous RNA,ceRNA),其通过竞争性地吸附微RNA (microRNA,miRNA)来调节基因表达.circRNA失调与癌细胞的增殖、分化和侵袭等密切相关.本研究基于生物信息学分析和多数据库的联合应用,以ceRNA为切入点探析胃癌中circRNA潜在的致病机制,以期为胃癌提供潜在的临床诊疗靶点,并为胃癌的科学研究提供新思路.首先,通过挖掘胃癌差异表达的circRNA、miRNA和mRNA构建circRNA-miRNA-mRNA ceRNA网络;随后,利用网络拓扑属性分析确定核心的节点,并根据这些核心的节点从原始的ceRNA网络中提取子网;最后,对子网进行功能学分析和生存分析,分析网络行使的生物学功能并挖掘预后相关的基因.结果 显示:共挖掘了6个核心节点(hsa_circ_0008468、hsa_ circ_0005822、hsa_ circ_0025842、hsa-miR-940、hsa-miR-944及hsa-miR-515-5p);从原始的ceRNA网络中提取了包含8对circRNA-miRNA和539个miRNA-mRNA关系对的子网络.功能富集结果表明子网涉及癌症相关的多个生物学过程,包括代谢途径、cAMP信号通路、pathways in cancer信号通路等,生存分析发现子网中ACO2、E2F8、GHR、ITIH5等14基因与预后显著相关,这表明3个核心circRNA介导的ceRNA网络与胃癌的发生发展及预后密切相关.

目的:探讨三叶苷对缺氧缺糖心肌细胞损伤的保护作用及机制.方法:采用不同浓度的三叶苷作用于缺氧缺糖诱导的心肌细胞H9C2,试剂盒检测丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,流式细胞术、蛋白质印记(Western blot)检测细胞凋亡以及B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl相关X蛋白(Bax)蛋白表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-539-5p表达.转染miR-539-5p模拟物至H9C2细胞,检测过表达miR-539-5p对缺氧缺糖诱导的H9C2细胞损伤的影响.结果:三叶苷作用于缺氧缺糖诱导的H9C2细胞后,细胞中MDA含量、LDH释放量、细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平显著降低,SOD活性、Bcl-2蛋白和miR-539-5p表达水平显著升高(P＜0.05).过表达miR-539-5p后,缺氧缺糖诱导的H9C2细胞中MDA含量、LDH释放量、细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平显著降低,SOD活性、Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P＜0.05).抑制miR-539-5p表达可减弱三叶苷对缺氧缺糖诱导的H9C2细胞MDA含量、LDH释放量、SOD活性、凋亡,以及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.结论:三叶苷可有效降低缺氧缺糖诱导的心肌细胞损伤,其机制与上调miR-539-5p表达有关.