妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）是一种妊娠并发症，可导致早产、死胎等严重后果，其发病机制尚不清楚。非编码RNA起重要的生理性调节作用，影响着物种之间及生物与环境之间的相互关系，参与许多疾病的发生和发展。微小RNA（miRNA）是一种由DNA转录，长度为18~24 nt的内源性非编码RNA，miRNA 34a（miR-34a）、miR-221/222、miR-148a、miR-3614-5p、miR-590-3p等miRNA在ICP孕妇的血清或胎盘组织中表达异常。长链非编码RNA（lncRNA）是一类长度大于200 nt的非编码RNA，部分lncRNA在ICP患者的胎盘中表达量异于正常产妇，如linc02527在ICP患者的血清及胎盘中表达均增加、lncRNA H19可能与雌激素相互作用从而促进ICP的发生。这些差异表达的非编码RNA通过调节胆汁酸的合成、代谢、转运及与雌激素的相互作用等，与ICP的发生、发展相关。本文综述近年来非编码RNA中的miRNA和lncRNA在ICP中的研究进展，为ICP的治疗提供新思路。

目的:探讨ⅩⅦ型胶原蛋白α1（COL17α1）在小鼠衰老皮肤中的表达与作用及其对人表皮干细胞（ESC）干性和增殖能力的影响，并且探讨相关微小RNA（miR）干预人ESC中COL17α1表达的机制。方法:采用实验研究方法。取2个月龄（青年）和24个月龄（老年）雄性C57BL/6J小鼠各12只，取其胸背部全层皮肤标本进行后续检测。对青年小鼠和老年小鼠全层皮肤标本，行苏木精-伊红染色后观察表皮层结构并测量表皮厚度，用透射电子显微镜观察表皮基底膜形态和半桥粒并行半桥粒计数，分别采用实时荧光定量反转录PCR（RT-PCR）法与蛋白质印迹法检测COL17α1的mRNA与蛋白表达，采用免疫荧光法观测COL17α1的蛋白表达与分布。取于解放军总医院第四医学中心行包皮切除手术的3名20~30岁健康男性术后弃用的新鲜包皮组织，提取ESC，取生长良好的细胞进行后续实验。按随机数字表法（分组方法下同）将ESC分为进行相应处理的空白对照组、转染试剂对照组、空载体质粒组、敲低COL17α1质粒组，培养48 h后，采用实时荧光定量RT-PCR法检测COL17α1的mRNA表达，采用蛋白质印迹法检测COL17α1和细胞角蛋白14（CK14）的蛋白表达，采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖水平。通过DIANA、miRTarBase、miRNAMap、TargetScan、microRNA数据库筛选可能作用于 COL17α1 mRNA 3'非编码区的miR。将ESC分为转染miR模拟物阴性对照物的阴性对照组和转染前述筛选出的各miR的模拟物的各miR模拟物组，转染后48 h，通过蛋白质印迹法检测COL17α1的蛋白表达。基于基因表达综合数据库（GEO）的miR测序数据集GSE114006，使用GEO2R工具统计分析前述筛选出的可造成COL17α1蛋白表达下降的miR在30名青年（18~25岁）人和30名老年（>70岁）人皮肤中的表达。取青年小鼠和老年小鼠全层皮肤标本，采用实时荧光定量RT-PCR法检测前述老年人皮肤中表达增多的miR的表达。取2批ESC，第1批分为COL17α1野生型+miR-203b-3p阴性对照组与COL17α1野生型+miR-203b-3p模拟物组，第2批分为COL17α1突变型+miR-203b-3p阴性对照组与COL17α1突变型+miR-203b-3p模拟物组，分别转染对应序列，48 h后，采用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测COL17α1的基因表达水平。组织实验中样本数均为6，细胞实验中样本数均为3。对数据行独立样本 t检验、单因素方差分析、LSD检验或Dunnett检验、Mann-Whitney U检验或Kruskal-Wallis H检验。 结果:与青年小鼠比较，老年小鼠皮肤表皮层与真皮层分界模糊且细胞层次较少，表皮层厚度明显变薄（ Z=-2.88， P<0.01），基底膜形态不连续，表皮-真皮连接处半桥粒较少且分布不均，半桥粒数量明显减少（ Z=-2.91， P<0.01），COL17α1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低（ t值分别为10.61、6.85， P<0.01）。与青年小鼠比较，老年小鼠皮肤表皮基底层和毛囊球部的COL17α1蛋白表达均明显减少（ Z=-2.24， P<0.05）。培养48 h后，空白对照组、转染试剂对照组、空载体质粒组、敲低COL17α1质粒组ESC中COL17α1的蛋白表达水平分别为1.00±0.27、1.12±0.21、1.13±0.23、0.42±0.18。相较于空白对照组，转染试剂对照组和空载体质粒组ESC中COL17α1的mRNA和蛋白表达水平、CK14的蛋白表达水平及ESC增殖水平均未发生明显变化（ P>0.05），敲低COL17α1质粒组ESC中这些指标均明显降低（ P<0.05或 P<0.01）。miR-203a-3p、miR-203b-3p、miR-512-5p、miR-124-3p、miR-28-5p、miR-590-3p、miR-329-5p可能结合 COL17α1 mRNA的3'非编码区。转染48 h后，与阴性对照组的1.000±0.224比较，miR-329-5p模拟物组、miR-203b-3p模拟物组和miR-203a-3p模拟物组ESC中COL17α1的蛋白表达水平明显降低（0.516±0.188、0.170±0.025、0.235±0.025， t值分别为3.17、5.43、5.07， P<0.05或 P<0.01）。老年人皮肤中仅miR-203b-3p表达水平明显高于青年人（ t=3.27， P<0.01）。老年小鼠皮肤中miR-203b-3p表达水平明显高于青年小鼠（ Z=-2.88， P<0.01）。转染后48 h，COL17α1野生型+miR-203b-3p模拟物组ESC中COL17α1的基因表达水平明显低于COL17α1野生型+miR-203b-3p阴性对照组（ t=7.66， P<0.01），COL17α1突变型+miR-203b-3p模拟物组ESC中COL17α1的基因表达水平与COL17α1突变型+miR-203b-3p阴性对照组相近（ P>0.05）。 结论:COL17α1的mRNA和蛋白表达水平随小鼠年龄增长而减少，可能导致小鼠ESC脱离表皮基底膜。COL17α1的表达减少可抑制CK14的表达与ESC增殖，这可能是老年人皮肤中表皮层变薄和创面愈合减慢的原因。小鼠衰老皮肤中表达增多的miR-203b-3p可以靶向结合 COL17α1 mRNA的3'非编码区，阻碍转录后翻译过程，造成COL17α1蛋白表达减少。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-590靶向CCNG2对神经胶质瘤细胞增殖、侵袭和干细胞特性的影响。方法:选取2017年3月至2021年3月南阳市中心医院收集的59例神经胶质瘤和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析分析癌旁组织和肺癌组织miR-590表达水平。神经胶质瘤细胞U251分为miRNA对照组、miR-590组和miR-590 KD组，并采用转染试剂转染对照miRNA、miR-590-5p模拟物、miR-590-5p抑制剂，48 h后检测。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验分析两组细胞增殖能力；采用Transwell实验分析两组细胞的侵袭能力。采用成球实验和流式细胞术分析两组细胞的干细胞特性；采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-590靶基因。采用蛋白质印迹法(Western blot)分析细胞和肿瘤组织靶基因的表达水平。组间比较采用 t检验。 结果:癌旁组织中miR-590-5p表达水平(1.03±0.15)明显低于神经胶质瘤组织(2.25±0.27)，差异有统计学意义( t＝30.640， P<0.05)。对照组细胞48 h吸光度值(2.01±0.15)明显高于miR-590-5p KD组(1.37±0.11)，差异有统计学意义( t＝30.640， P<0.05)。克隆形成实验结果显示，对照组细胞克隆形成数量[(81.33±10.78)个]明显高于miR-590-5p KD组[(36.67±6.71)个]，差异有统计学意义( t＝8.614， P<0.05)。对照组细胞侵袭数量[(122.17±15.13)个]明显高于miR-590-5p KD组[(60.17±7.83)个]，差异有统计学意义( t＝8.913， P<0.05)。对照组细胞SP亚群比例[(3.67±1.04)个]明显高于miR-590-5p KD组[(0.71±0.32)个]，差异有统计学意义( t＝6.669， P<0.05)。对照组细胞成球数量[(32.33±8.09)个]明显高于miR-590-5p KD组[(13.33±2.16)个]，差异有统计学意义( t＝5.557， P<0.05)。CCNG2是miR-590-5p的靶基因。对照组细胞CCNG2蛋白表达水平(0.89±0.08)明显低于miR-590-5p KD组(2.32±0.30)，差异有统计学意义( t＝11.130， P<0.05)。 结论:miR-590靶向CCNG2调节神经胶质细胞的增殖、侵袭和干细胞特性等细胞生物学行为。

目的:检测初治多发性大动脉炎（TAK）患者血浆外泌体携带的微小RNA和蛋白，分析其在TAK发病机制中的可能作用。方法:选2020年6月至11月北京协和医院风湿免疫科确诊的初治TAK患者10例，另选与之年龄性别匹配的健康对照者5例，分别通过RNA测序和蛋白质谱技术检测血浆外泌体携带的微小RNA和蛋白，筛选出差异表达的微小RNA和蛋白，并对其进行层次聚类分析、功能、信号通路和结构域富集分析，最终筛选出与血管炎有关的微小RNA和蛋白，探究其在TAK发病机制中的可能作用。统计学采用Fisher精确概率检验或 χ2检验。 结果:TAK患者血浆外泌体携带的差异表达的微小RNA 29个，其中miR-101-3p、miR-122-5p、miR-143-3p、miR-185-3p、miR-192-5p、miR-194-5p、miR-19a-3p、miR-19b-3p、miR-20b-5p、miR-21-5p、miR-22-3p、miR-335-5p、miR-34a-5p、miR-3613-5p、miR-548ad-5p、miR-590-3p、miR-7-5p表达上调，miR-1249-3p、miR-141-3p、miR-199a-5p、miR-199b-5p、miR-200a-3p、miR-200c-3p、miR-204-5p、miR-29c-5p、miR-335-3p、miR-381-3p、miR-4433b-5p、miR-584-5p表达下调。差异表达的蛋白357个，其中236个表达上调，121个表达下调，最终筛选前激肽释放酶、激肽原1、桥粒蛋白。结论:血浆外泌体携带的miR-34a-5p、miR-200c-3p、miR-143-3p、miR-22-3p、miR-21-5p、前激肽释放酶、激肽原1、桥粒蛋白可能通过调节血管生理过程、炎症反应、自身免疫等过程参与TAK的发病机制，具有作为TAK生物标志物和治疗靶点的潜在作用。

目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA）FAM224A调控miRNA-590-3p（miR-590-3p）表达对卵巢癌细胞增殖及迁移的影响。方法:选择人卵巢癌细胞株OC3、SKOV-3、HO-8910、A2780及人正常卵巢上皮细胞株IOSE80，采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测FAM224A在各个细胞株中的相对表达水平，筛选FAM224A相对表达水平最低的细胞株进行后续实验。将细胞分为FAM224A组（转染FAM224A模拟质粒）和对照组（转染对照模拟质粒），分别采用CCK-8法和细胞划痕实验检测两组细胞增殖和迁移能力。采用生物信息学网站LncBase v.2预测FAM224A可能互补结合的靶基因为miR-590-3p。qRT-PCR检测miR-590-3p和叉头框蛋白A2（FOXA2）mRNA的相对表达水平，蛋白质印迹法检测相关蛋白的表达情况。结果:卵巢癌细胞株OC3、SKOV-3、HO-8910、A2780及正常卵巢上皮细胞株IOSE80中FAM224A的相对表达水平分别为0.23±0.04、0.65±0.05、0.45±0.03、0.63±0.08和1.02±0.11，差异有统计学意义（ F=14.78， P<0.01），其中FAM224A相对表达水平最低的细胞株是OC3。CCK-8法检测结果显示，培养第2、3、4、5天，FAM224A组OC3细胞增殖能力均低于对照组（均 P<0.05）。FAM224A组和对照组OC3细胞的划痕愈合率分别为（18.6±2.3）%和（71.7±7.2）%，差异有统计学意义（ t=6.99， P<0.01）。FAM224A组和对照组OC3细胞中FAM224A相对表达水平分别为12.36±1.45和1.14±0.24（ t=13.08， P<0.01）；miR-590-3p相对表达水平分别为0.19±0.06和1.04±0.20（ t=4.01， P<0.01）；FOXA2 mRNA相对表达水平分别为6.37±1.37和1.05±0.08（ t=3.86， P<0.01）。与对照组比较，FAM224A组OC3细胞FOXA2蛋白表达升高，细胞增殖蛋白细胞周期蛋白依赖激酶2（CDK2）、cyclin D3表达均降低，细胞迁移蛋白Snail表达降低。 结论:FAM224A在卵巢癌细胞株中低表达，FAM224A通过抑制miR-590-3p表达降低卵巢癌OC3细胞的增殖和迁移能力。

目的 探讨miR-590-5p、DNA损伤检查点蛋白调节子1(mediator of DNA damage checkpoint 1,MDC1)在高级别胶质瘤(high-grade glioma,HGG)组织中的表达及与胶质瘤病人术后放疗效果的关系,并明确二者对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响.方法 选取2019年1月至2021年2月河北北方学院附属第一医院64例HGG患者,评估放疗效果.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-590-5p水平,免疫组织化学染色检测MDC1表达情况,分析miR-590-5p、MDC1表达与胶质瘤病人术后放疗效果的关系,多因素Logistic回归分析影响HGG患者术后放疗效果的因素;体外培养胶质瘤U87MG细胞,并分别转染miR-590-5p mimic、MDC1-shRNA及其阴性对照,CCK-8 法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡;构建裸鼠移植瘤模型,观察过表达miR-590-5p和敲低MDC1对肿瘤生长的影响.结果 MDC1在HGG组织中的表达较正常脑组织中升高,miR-590-5p表达较正常脑组织降低,二者表达水平呈负相关;MDC1表达升高、miR-590-5p表达降低,其放疗效果越差;Logistic回归分析显示,MDC1高表达、miR-590-5p低表达均是影响HGG患者放疗效果的危险因素.过表达miR-590-5p和敲低MDC1 后,U87MG细胞增殖力降低,凋亡率升高,移植瘤体积和重量下降,Ki-67 阳性细胞比例减少.过表达miR-590-5p后MDC1 蛋白表达明显下降.结论 HGG组织中miR-590-5p呈低表达,MDC1 呈高表达,二者表达与HGG的发生和患者术后放疗效果关系密切;过表达miR-590-5p和敲低MDC1 表达可抑制胶质瘤细胞增殖并促进凋亡.

目的 评估循环microRNA预测严重发热伴血小板减少综合征(SFTS)患者不良预后的潜力.方法 选择2020年1月至2022年1月56例SFTS患者(SFTS组)和同期30例有发热但没有SFTS临床特征的患者(对照组)为研究对象.使用小RNA测序分析对照组(n=13)和SFTS组患者(n=13)血浆血小板中的miRNA表达谱,并通过定量PCR验证失调的miRNA.进行多变量线性回归分析确定与SFTS患者30 d死亡的独立影响因素.结果 56例SFTS患者中,35例为普通SFTS,21例为重症SFTS.与普通SFTS患者相比,重症SFTS患者的年龄、脑病、死亡人数、白细胞计数、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)显著升高(P＜0.05),血小板计数显著降低(P＜0.05).所有SFTS患者的病死率为8.93％(95％CI,4.92％～15.67％),重症SFTS患者的病死率为23.81％(95％ CI,13.48％～38.53％).与普通SFTS患者相比,重症SFTS患者的30 d存活率显著降低(P＜0.05).SFTS患者血小板中发现26个显著失调的miRNA(倍数变化＞8和FDR＜0.000 1％).miR-106b、miR-25、miR-92a、miR-21、miR-590-5p在SFTS患者和对照组患者之间的表达差异有统计学意义(P＜0.05),且重症 SFTS 患者的 miR-106b、miR-25、miR-92a、miR-21、miR-590-5p 表达显著高于普通 SFTS 患者(P＜0.05).miR-106b、miR-25、miR-92a、miR-21、miR-590-5p 是 SFTS 患者 30 d 死亡的独立影响因素(P＜0.05).结论 在 SFTS患者的血小板中发现了一个独特的miRNA表达特征,并能够对SFTS患者与其他发热性疾病患者进行有效区分.此外,这些miRNA还可作为SFTS患者30 d死亡的独立预测因素.

目的 探讨microRNA-590-5p(miR-590-5p)、miR-103、miR-34c-5p、Dicer及BRMS-1在肺癌中表达及相互间关系.方法 选取47例肺癌患者的癌组织及癌旁正常组织,利用Trizol提取总RNA,实时荧光定量聚合酶链反应检测基因的相对表达量.结果 肺癌组织与癌旁正常组织miR-103、miR-34c-5p、Dicer及BRMS-1基因表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),miR-34c-5p与P53呈正相关(P<0.05), miR-103与多药耐药相关蛋白呈正相关(P<0.05),Dicer与miR-34c-5p、miR-103及miR-590-5p呈负相关(P<0.05).结论 在肺癌组织中Dicer基因表达与miR-34c-5p呈负相关,可能通过抑制癌基因的表达,抑制肺癌的发生.

目的 观察宫颈鳞状细胞癌组织中长链非编码RNA(lncRNA)HCG11、微小RNA-590-3p(miR-590-3p)的表达变化,并探讨其临床意义.方法 宫颈鳞状细胞癌患者69例,手术治疗时留取癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法对癌组织及癌旁组织中的lncRNA HCG11、miR-590-3p进行检测.分析癌组织中lncRNA HCG11、miR-590-3p表达量与患者临床病理参数及预后的关系.结果 宫颈鳞状细胞癌组织、癌旁组织中lncRNA HCG11的相对表达量分别为0.41±0.33、1.04±0.12,两者相比,P<0.05;宫颈鳞状细胞癌组织、癌旁组织中miR-590-3p的相对表达量分别为14.6±5.94、1.06±0.23,两者相比,P<0.05.宫颈鳞状细胞癌组织中lncRNA HCG11的表达量与miR-590-3p呈负相关(r=-0.597,P<0.01).宫颈鳞状细胞癌组织中lncRNA HCG11和miR-590-3p的表达量与肿瘤组织大小、有无淋巴结转移以及临床分期有关(P均<0.05).宫颈鳞状细胞癌组织中lncRNA HCG11高表达者5年总生存率为87.5％(28/32)、低表达者为59.46％(22/37),两者相比,P<0.01;宫颈鳞状细胞癌组织中miR-590-3p高表达者5年总生存率为58.33％(21/36)、低表达者为81.82％(27/33),两者相比,P<0.01.结论 宫颈鳞状细胞癌组织中lncRNA HCG11低表达,miR-590-3p高表达;宫颈鳞状细胞癌组织中的lncRNA HCG11低表达和miR-590-3p高表达预示肿瘤组织较大并处于较高临床分期、淋巴结转移可能性较大、患者预后较差.

目的 探讨爱泼斯坦-巴尔病毒 ( Epstein-Barr virus, EBV) 操控鼻咽癌细胞HONE-1的miR-590-5p以实现逃避免疫的机制研究.方法 通过miRDB在线分析miR-590-5p与泛素E3连接酶 ( itchy E3 ubiq-uitin protein ligase, ITCH) 的匹配情况, 然后通过荧光素酶报告系统检测miR-590-5p是否靶向ITCH; 使用miR-590-5p mimics过表达或者miR-590-5p inhibitor敲低miR-590-5p的情况下, 通过免疫印迹检测ITCH与其底物MAVS的表达量, 通过酶联免疫吸附试验检测鼻咽癌细胞HONE-1上清液中干扰素γ ( interferon-γ, IFNγ) 的表达量, 同时检测EBV的复制情况.结果 EBV感染鼻咽癌细胞HONE-1后miR-590-5p的表达量显著下降 (P<0.05), 并且miR-590-5p靶向ITCH的3′UTR.过表达miR-590-5p后, 发现鼻咽癌细胞HONE-1的ITCH表达量降低, 线粒体抗病毒信号蛋白 ( mitochondrial antiviral signaling protein, MAVS) 泛素化水平下降, MAVS的表达量升高, IFNγ表达升高 ( P<0.05), EBV复制水平下降 ( P<0.05).敲低miR-590-5p后, 发现鼻咽癌细胞HONE-1的ITCH表达量上升, MAVS泛素化水平上升, MAVS的表达量下降, IFNγ表达下降 (P<0.05), EBV复制水平上升 (P<0.05).过表达miR-590-5p的同时敲低MAVS或敲低miR-590-5p的同时过表达MAVS后, EBV病毒的复制没有明显差异 (P>0.05).结论 EBV通过抑制miR-590-5p的表达量以提高MAVS的泛素E3连接酶ITCH的表达量, 降低鼻咽癌细胞HONE-1的IFNγ表达量, 最终实现自身复制的增强.