目的:探讨组蛋白去乙酰化酶3（histone deacetylase 3, HDAC3）调节miR-625/组蛋白伴侣抗沉默功能蛋白1B（anti-silencing function 1B, ASF1B）轴对乳腺癌（breast cancer，BC）细胞焦亡的影响及其作用机制。方法:采用qRT-PCR法检测HDAC3、miR-625和ASF1B在乳腺癌（breast cancer，BC）组织和癌旁正常组织、BC细胞系（T47D、MCF7和MDA-MB-231）和人正常乳腺上皮细胞MCF-10A中的表达水平。采用Western blot实验检测细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1和GSDMD的表达水平。ELISA法检测焦亡相关炎性因子IL-18和IL-1β的表达水平。ChIP实验用于测定HDAC3与miR-625的互作用关系。双荧光素酶报告实验验证miR-625和ASF1B的靶向关系。结果:与癌旁正常组织和MCF-10A细胞比较，BC组织和细胞中的HDAC3和ASF1B表达升高，miR-625表达降低（均 P<0.05）。与si-NC组比较，si-HDAC3组细胞NLRP3、Caspase-1和GSDMD的蛋白表达水平升高，细胞培养上清液中IL-18和IL-1β的浓度升高（均 P<0.05）。HDAC3通过结合miR-625的启动子区域抑制其表达（ P<0.05）。与si-HDAC3+miR-NC组比较，si-HDAC3+miR-625 inhibitor组细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-18和IL-1β的表达减少（均 P<0.05）。ASF1B被证实为miR-625的靶基因，si-HDAC3+pcDNA3.1-ASF1B组细胞中的焦亡相关因子水平显著低于si-HDAC3+pcDNA3.1-NC组。 结论:HDAC3通过抑制miR-625上调ASF1B的表达，进而抑制BC细胞焦亡。

目的:探讨肿瘤相关钙信号传感器2在结直肠癌组织的表达变化及其上游微小RNA(miRNA，miR)对其表达水平的调控。方法:选取2020年1月至2023年1月新乡医学院第一附属医院收治的58例结直肠癌临床标本和癌旁组织作为研究对象，采用双向电泳技术分析结直肠癌和癌旁组织差异表达的蛋白，选取肿瘤相关钙信号传感器2作为研究对象，采用蛋白质印迹法(Western blot)分析癌旁组织和结直肠癌组织肿瘤相关钙信号传感器2表达水平。免疫组织化学分析两组组织细胞增殖抗原(PCNA)的阳性率；相关性分析肿瘤相关钙信号传感器2与细胞增殖的关系。转录组学分析癌旁组织和结肠癌组织miRNA，筛选差异靶向肿瘤相关钙信号传感器2的miRNA，并采用双荧光素酶报告基因验证分析miRNA的靶向性。组间计量数据比较采用 t检验。 结果:双向电泳筛选10个差异的蛋白质，本研究选择差异显著的蛋白肿瘤相关钙信号传感器2作为研究对象。癌旁组织中肿瘤相关钙信号传感器2蛋白表达水平(0.92±0.14)明显低于结直肠癌组织(1.62±0.20)，差异有统计学意义( t＝14.320， P<0.05)。PCNA表达阴性患者肿瘤相关钙信号传感器2蛋白表达水平(1.33±0.13)明显低于结直肠癌组织(1.69±0.16)，差异有统计学意义( t＝6.092， P<0.05)。癌旁组织和结直肠癌组织总计差异miRNA共1 218个，其中上调表达732个，下调486个。发现5个与肿瘤相关钙信号传感器2存在互补的miRNA，分别为miR-488-3p、miR-625-5p、miR-3650、miR-518a-5p和miR-204-3p。癌旁组织中miR-488-3p、miR-625-5p、miR-3650、miR-518a-5p和miR-204-3p表达水平(1.07±0.08、1.07±0.09、1.11±0.15、1.01±0.10、1.15±0.15)明显高于结直肠癌组织(0.28±0.05、0.30±0.07、0.45±0.08、0.54±0.09、0.69±0.12)，差异有统计学意义( t＝21.050、26.350、14.850、12.600、9.165， P<0.05)。miRNA对照和荧光素酶报告基因共转染细胞荧光素酶活性(0.96±0.07、0.94±0.03、0.92±0.06、0.91±0.08、0.95±0.05)明显高于miR-488-3p、miR-625-5p、miR-3650、miR-518a-5p和miR-204-3p模拟物和荧光素酶报告基因共转染细胞荧光素酶活性(0.22±0.06、0.24±0.07、0.34±0.09、0.45±0.08、0.60±0.12)，差异有统计学意义( t＝23.541、23.102、18.208、14.231、12.514， P<0.05)。 结论:肿瘤相关钙信号传感器2在结直肠组织中表达显著上调，受miR-488-3p、miR-625-5p、miR-3650、miR-518a-5p和miR-204-3p等miRNA调控。

目的 分析长链非编码RNA(lncRNA)人浆细胞瘤转化迁移基因1(PVT1)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染人胚肺成纤维(HELF)细胞损伤的影响.方法 本研究纳入于2020年1月-2023年5月在常州市第一人民医院确诊并住院治疗的RSV感染的哮喘患者38例和健康志愿者38名.实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测lncRNA PVT1和miR-625-5p表达情况.将HELF细胞分为NC组(未感染)、RSV组(RSV感染)、si-NC+RSV组(转染 si-NC+RSV 感染)、si-lncRNA PVT1+RSV 组(转染 si-lncRNA PVT1+RSV 感染)、miR-NC+RSV 组(转染 miR-NC+RSV 感染)、miR-625-5p+RSV 组(转染 miR-625-5p 模拟物+RSV 感染)、anti-miR-NC+si-ln-cRNA PVT1+RSV 组(共转染 anti-miR-NC 与 si-lncRNA PVT1+RSV 感染)、anti-miR-625-5p+si-lncRNA PVT1+RSV组(共转染anti-miR-625-5p与si-lncRNA PVT1+RSV感染).采用流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫印迹法检测蛋白表达,酶联免疫吸附测定法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6含量.双荧光素酶报告实验分析lncRNA PVT1与miR-625-5p的靶向关系.结果 RSV感染的患者血清和HELF细胞中ln-cRNA PVT1表达量比健康人血清或对照NC增加(均P＜0.05).RSV感染HELF增加Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达量、TNF-α、IL-6含量、凋亡率(均P＜0.05);而这些影响在lncRNA PVT1沉默或miR-625-5p过表达后得到缓解(均 P＜0.05).lncRNA PVT1 靶向调控 miR-625-5p 的表达.anti-miR-625-5p+si-lncRNA PVT1+RSV组HELF细胞的Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达量、TNF-α、IL-6含量和细胞凋亡率均高于anti-miR-NC+si-lncRNA PVT1+RSV 组(均 P＜0.05).结论 lncRNA PVT1 低表达通过靶向 miR-625-5p,抑制 RSV 感染的HELF细胞凋亡和炎症反应.

目的 探讨癌相关成纤维细胞(CAFs)分泌的外泌体(exos)miR-625-3p对卵巢癌细胞SKOV3 迁移和侵袭能力的影响及其机制.方法 选取 2021 年 5 月至 12 月于衡水市人民医院接受手术的卵巢癌患者的癌组织和邻近的非癌组织(5 对).从卵巢癌组织和相邻的正常组织中分离出CAFs和正常成纤维细胞(NFs).采用Western blot评估NFs和CAFs中α-SMA和vimentin的蛋白表达,利用外泌体提取试剂盒从NFs和CAFs培养基中获得NFs-/CAFs-exos.通过透射电子显微镜(TEM)、纳米颗粒跟踪分析(NTA)和Western blot评估NFs-/CAFs-exos的形状、粒径以及表面marker表达.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测CFAs、CAFs-exos和 SKOV3 中miR-625-3p和癌细胞侵袭抑制因子(SCAI)的表达.Tran-swell试验检测细胞迁移和侵袭能力.双荧光素酶报告基因实验确定miR-625-3p和SCAI的相互作用.最后,通过功能挽救实验确定SCAI对SKOV3 细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 Western blot结果显示,α-SMA和vimentin在NFs和CFAs中阳性表达.TEM观察下,NFs-/CAFs-exos均呈杯状形态,粒径大约 100 nm,且CD63、HSP70、CD81 在NFs-/CAFs-exos中阳性表达.与NFs相比,CAFs中α-SMA高表达(P<0.05).与NFs-exo相比,CAFs-exo能够上调SKOV3 细胞中miR-625-3p表达并且在功能上促进细胞迁移和侵袭(P<0.05).然而,抑制CAFs-exos miR-625-3p表达能够显著降低SKOV3 细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05).报告基因显示,miR-625-3p能够直接靶向SCAI mRNA的 3′-UTR区.挽救实验显示,过表达SCAI可有效逆转CAFs-exo miR-625-3p对卵巢癌细胞迁移能力的影响.结论 CAF-exos miR-625-3p能够通过抑制SCAI表达促进卵巢癌细胞的迁移和侵袭.

目的 探讨PRD-BF1 和RIZ同源结构域蛋白(PRDM)家族在甲状腺癌中的表达及与甲状腺癌患者预后的关系,对部分家族成员在甲状腺癌中的作用机制进行初步分析.方法 运用UALCAN数据库分析PRDM家族在甲状腺癌中的表达;UALCAN数据库分析PRDM家族与甲状腺癌预后的关系;StarBase和HMDD数据库分析与PRDM家族成员相互作用的上游miRNA;StarBase数据库分析与PRDM家族成员相互作用的下游靶基因;DAVID数据库对PRDM家族成员相互作用的下游靶基因进行生物学功能注释.结果 PRDM1、PRDM3 在甲状腺癌组织中表达水平明显高于正常组织(P<0.05).PRDM2、PRDM4、PRDM5、PRDM6、PRDM8、PRDM10、PRDM11、PRDM15、PRDM16 在甲状腺癌组织中表达水平明显低于正常组织(P<0.05).PRDM6、PRDM11、PRDM12、PRDM16 与甲状腺癌的患者预后高度相关(P<0.05).在甲状腺癌中与PRDM6 相关并具有统计学意义的miRNA为hsa-miR-20a-5p、hsa-miR-625-5p(P<0.05).对与PRDM6 相关的下游靶基因预测并进行生物学功能注释,PRDM6 可通过与靶基因的作用参与DNA损伤修复等生物学过程.结论 PRDM家族的表达与甲状腺癌相关,部分家族成员的表达与甲状腺癌预后及临床病理特征密切相关.PRDM家族成员PRDM6 可通过与上游miRNA及下游靶基因的相互作用,参与甲状腺癌的发生发展.PRDM家族,特别是PRDM6,可能成为甲状腺癌诊治的新靶点.

目的 探讨血清 miR-140-3p 在孤独症谱系障碍( ASD ) 儿童中表达及其与白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-8(IL-8)及白细胞介素-17A( IL-17A)的相关性,为该病的诊治提供依据.方法 选取2015年1月至2018年6月海南省安宁医院收治的ASD儿童172例作为病例组,另选择80例体检健康者作为对照组.采用ASD行为评定量表和儿童孤独症评定量表将172例ASD儿童分为轻-中度组(n=116)和重度组(n=56).采用实时荧光定量聚合酶链反应( RT-PCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组血清miR-140-3p、IL-4、IL-8及IL-17A水平变化.应用ROC曲线分析miR-140-3p、IL-4、 IL-8 及 IL-17A 对 ASD 的诊断价值,采用 Pearson 相关分析 ASD 儿童血清miR-140-3p与IL-4、IL-21及IL-17A的相关性.结果 病例组血清 miR-140-3p( 0. 86 ± 0. 17,0. 15 ± 0. 03)、IL-4[(48. 65±13. 82) pg/ml,( 31. 42± 7. 50) pg/ml]、IL-8[(7. 14± 2. 05) pg/ml,( 2. 30± 0. 74) pg/ml]及IL-17A[(112. 35±51. 64) pg/ml,(58. 20±26. 40) pg/ml]水平均明显高于对照组(P<0. 05).重度组血清miR-140-3p[(1. 08±0. 24),(0. 71±0. 12)]、IL-4[(53. 28±16. 30) pg/ml,(43. 70±13. 52) pg/ml]、IL-8[(9. 42±2. 85) pg/ml,( 5. 63± 1. 48) pg/ml]及IL-17A[( 138. 40± 65. 72) pg/ml,( 96. 74± 40. 83)pg/ml]水平均明显高于轻-中度组(P<0. 05).血清miR-140-3p诊断ASD的AUC( 95%CI)为0. 827(0. 773~0. 886)明显高于 IL-4[ 0. 719( 0. 651~0. 764) pg/ml]、IL-21[ 0. 683( 0. 625~0. 743) pg/ml]及IL-17A[0. 745(0. 683~0. 817)pg/ml],其最佳截值取0. 75时,敏感度和特异度为84. 8%和78. 2%.相关分析显示,ASD儿童血清miR-140-3p与IL-4、IL-8及IL-17A均呈正相关( r=0. 681、r=0. 624、r=0. 775,均P<0. 01).结论 血清miR-140-3p水平在ASD儿童中明显升高,且与IL-4、IL-8及IL-17A水平相关,是诊断ASD的潜在生物标志物.

目的 分析血清miR-27与老年2 型糖尿病下肢血管病变及25(OH) D3 水平的关系.方法 选取2017年10月—2019年5月河北省沧州市人民医院内分泌科确诊老年2型糖尿病患者86例为T2DM组,并以有无下肢血管病变分为下肢血管病变 (LLPAD)亚组44例和非下肢血管病变( Non-LLPAD) 亚组42例;选择同期医院门诊健康体检者76例为对照组,测定比较各组血清miR-27 mRNA表达及TC、TG、HDL-C、LDL-C、HbA1c、FPG、25(OH)D3 、hs-CRP、Fib水平.结果 T2DM组miR-27 mRNA、TC、TG、LDL-C、Fib、HbA1c、hs-CRP、FPG水平高于对照组,25( OH) D3 、HDL-C水平低于对照组( t =13. 371、13. 036、25. 364、19. 698、29. 326、38. 489、95. 524、66. 547,66. 241、8. 698, P均=0. 000);LLPAD 亚组 miR-27 mRNA、TC、TG、LDL-C、Fib、 HbA1c、 hs-CRP、 FPG 水平高于 Non-LLPAD 亚组,25 (OH)D3 、HDL-C水平低于Non-LLPAD亚组(t=5. 275、13. 541、26. 541、8. 965、20. 146、14. 548、14. 369、23. 654、7. 711、9. 491,P均=0. 000);miR-27 mRNA与25(OH)D3 、HDL-C呈负相关(r= -0. 486、-0. 483,P=0. 039、0. 039),与TC、TG、LDL-C、Fib、HbA1c、hs-CRP、FPG呈正相关(r=0. 651、0. 572、0. 494、0. 747、0. 438、0. 523、0. 591,P均＜0. 05);高水平的miR-27 mRNA、TC及低水平的25(OH)D3 均为老年2型糖尿病合并下肢血管病变发生的危险因素(OR=2. 437、4. 268、13. 625,P＜0. 05);miR-27 mRNA、25(OH)D3 两者的AUC相近,均小于TC;miR-27 mRNA、25( OH) D3 诊断老年2型糖尿病下肢血管病变的敏感度、特异度相近(P＞0. 05),均小于TC(P＜0. 05).结论 老年2型糖尿病下肢血管病变患者血清miR-27 mRNA水平升高,与25(OH)D3 呈负相关;miR-27、25(OH)D3 诊断2型糖尿病下肢血管病变具有较高的敏感度、特异度,可作为判定2型糖尿病下肢血管病变的生物学标志物.

目的 观察miR-625-3p在卵巢浆液性癌中的表达,分析其与炎性细胞因子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、间质巨噬细胞的数量及增殖指数的关系.方法 选取67例卵巢浆液性癌患者作为观察组,60例卵巢浆液性囊腺瘤患者作为对照组.应用实时荧光定量PCR法检测miR-625-3p的表达,应用免疫组化方法检测石蜡包埋组织中MCP-1和巨噬细胞标记物CD163的表达,应用Western blotting法检测新鲜标本中MCP-1和CD163的表达.结果 2组比较,miR-625-3p表达、MCP-1阳性率、巨噬细胞数量、MCP-1和CD163半定量表达的差异均有统计学意义(P<0.05).观察组中,miR-625-3p的表达量、MCP-1和CD163的半定量表达在不同肿瘤最大径、病变级别、脉管癌栓、淋巴结转移、TNM分期中的差异有统计学意义(P<0.05).观察组中miR-625-3p的表达与增殖指数、MCP-1、CD163的表达呈正相关.生存分析显示,miR-625-3p的表达与预后有关.结论 卵巢浆液性癌中miR-625-3p高表达,对促进病变的形成有一定作用,miR-625-3p可能对调控细胞增殖、巨噬细胞形成及炎性细胞因子生成有一定影响.术后检测miR-625-3p的表达,可能对判断预后有一定价值.

目的:探究miR-625和Resistin对NSCLC细胞增殖、侵袭、迁移及裸鼠移植瘤生长的影响及其可能的机制.方法:qPCR实验检测80例NSCLC及癌旁组织(标本收集自2018年3月至2019年10月于新疆维吾尔自治区人民医院手术治疗的NSCLC患者)和4种细胞系中miR-625与Resistin的表达,生物信息学预测两者的靶向关系并用双荧光素酶基因报告实验进行验证;通过脂质体转染技术在NSCLC细胞中过表达或抑制miR-625及Resistin表达,实验分为miR-625 mimic组、miR-625 inhibitor组、si-Resisitin组、miR-625 inhibitor+si-Resisitin组和NC组,利用CCK-8、Transwell及划痕实验检测miR-625与Resistin对NSCLC细胞增殖、侵袭及迁移的影响,Western blotting实验检测两者对NSCLC细胞中EMT相关的PI3K/AKT/Snail通路蛋白表达的影响,裸鼠成瘤实验观察两者对A549细胞移植瘤生长的影响.结果:miR-625在NSCLC组织和4种细胞系中呈低表达、Resistin呈高表达(均P＜0.01),两者表达水平呈负相关(r=-0.7183,P＜0.01),且Resistin的表达与NSCLC分化程度、临床分期及淋巴结转移相关.Resistin是miR-625的靶基因.在NSCLC细胞系A549和H226的增殖、侵袭、迁移能力及裸鼠移植瘤的生长方面,与Blank组和NC组相比,miR-625 mimic组与si-Resistin组能力均显著降低(均P＜0.05),miR-625 inhibitor组显著提高(均P＜0.05);miR-625 inhibitor+si-Resistin组显著低于miR-625 inhibitor组(均P＜0.05);NC组与miR-625 inhibitor+si-Resistin组之间无显著差异(均P＞0.05);p-AKT、p-PI3K、Snail、Twist1、Vimentin等蛋白表达变化也有相同的趋势(均P＜0.05),E-cadherin蛋白表达则发生相反的改变(P＜0.05).结论:miR-625在NSCLC组织和细胞中均呈低表达,其能负向调控Resistin表达从而抑制NSCLC细胞的增殖、侵袭和迁移及裸鼠移植瘤生长,其机制可能与PI3K/AKT/Snail信号通路有关.

目的 本研究通过高通量测序技术,分析阳虚体质人与平和体质人外泌体miRNA表达谱的相同点与不同点.从而得到阳虚体质人与平和体质人的异同.方法 根据《中医体质分类与判定》标准进行体质判定,确定阳虚体质与平和体质之后,采集受试者外周血.利用高通量测序平台对外泌体miRNA进行测序,分析阳虚体质与平和体质差异的外泌体miRNA.利用差异miRNA预测差异靶基因,通过GO和KEGG分析对差异基因进行富集分析.结果 阳虚体质人与平和体质人相比,共有28种miRNA发生改变,其中上调19种,下调9种.阳虚体质上调的miRNA包括hsa-miR-101-3p、hsa-miR-144-3p、hsa-miR-19b-3p等.阳虚体质下调的miRNA包括hsa-miR-409-3p、hsa-miR-625-3p等.功能富集分析发现,相关的生物学过程包括转录及转录调节、信号转导、RNA聚合酶II调节、蛋白磷酸化等.细胞成分包括细胞核、细胞质、胞浆等.分子功能包括蛋白结合、金属离子结合、ATP结合、DNA结合等.相关疾病中,包括肿瘤、感染性疾病、内分泌代谢性疾病等.结论 本研究通过研究阳虚体质与平和体质的外泌体miRNA,得到阳虚体质与平和体质差异的生物学基础.