目的:探讨miRNA-192靶向调控Wilms肿瘤蛋白1(WT1)在高糖诱导足细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用。方法:以人肾小球足细胞为研究对象，将细胞分为4组：空白对照组、高糖组、阴性对照组、miRNA-192抑制组。采用Western印迹检测各组足细胞表面标志蛋白肾病蛋白(nephrin)、WT1、转化生长因子(TGF)-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平；qRT-PCR检测各组细胞miRNA-192、WT1、TGF-β1、α-SMA mRNA表达水平；采用双荧光素酶靶标实验验证miRNA-192与WT1基因的靶向关系。结果:与空白对照组相比，高糖组和阴性对照组nephrin的蛋白表达水平显著降低，差异有统计学意义( F＝444.404， P<0.05)；miRNA-192相对表达量升高而WT1蛋白及mRNA表达水平均降低( F＝184.216、243.543、107.898， P均<0.05)；双荧光素酶报告基因实验分析结果显示，WT1是miRNA-192的靶基因；与空白对照组相比，高糖组和阴性对照组TGF-β1、α-SMA蛋白及mRNA表达水平均升高( FTGF-β1蛋白＝69.014， P<0.05； Fα-SMA蛋白＝87.644， P<0.05； FTGF-β1 mRNA＝147.714， Fα-SMA mRNA＝247.584， P<0.05)。与阴性对照组相比，miRNA-192抑制组nephrin的蛋白表达水平升高( t＝16.519， P<0.05)，miRNA-192相对表达量降低、WT1蛋白及mRNA表达水平升高( tmiRNA-192＝10.533， tWT1＝17.088、8.186， P均<0.05)；TGF-β1、α-SMA蛋白及mRNA蛋白表达水平均降低( tTGF-β1蛋白＝6.114， P<0.05； tα-SMA蛋白＝7.941， P<0.05； tTGF-β1 mRNA＝8.239， tα-SMA mRNA＝8.481， P均<0.05)。 结论:miRNA-192靶向调控WT1促进糖尿病肾病的发展，其作用机制可能与足细胞EMT有关；抑制miRNA-192的表达可减轻高糖诱导的足细胞EMT。

目的:建立一种催化发夹自组装（CHA）联合成簇间隔的短回文重复序列及其关联蛋白12a（CRISPR-Cas12a）的传感技术，用于外泌体源性微小RNA-21（miR-21）的检测并分析其性能。方法:选取2023年9—10月在陆军军医大学第一附属医院确诊为乳腺癌的患者8例为乳腺癌组；选取同期健康体检者8名为健康对照组。采用试剂盒提取血浆外泌体及其miR-21。针对miR-21序列设计DNA发夹和CRISPR RNA序列。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和荧光分光光度计验证检测技术可行性。进一步优化发夹浓度、CHA反应时间、Cas12a蛋白浓度和Cas12a蛋白反应时间。在此基础上，检测不同浓度（0、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 nmol/L）的miR-21，收集荧光强度采用一元线性回归方法做线性分析以评价方法学的灵敏度，同时检测不同类型miRNA（miR-31、miR-26a、miR-192、miR-25-3p）及空白对照以评价方法学特异性。采用病例对照研究，用该检测技术和逆转录PCR方法检测乳腺癌组和健康对照组血浆外泌体源性miR-21的相对表达水平以评价其临床样本检测能力。结果:应用CHA联合CRISPR-Cas12a技术建立了外泌体源性miR-21的检测方法。该方法检测miR-21的浓度与荧光强度呈良好的线性关系（相关系数为0.966 7），线性检测范围为0.1~10.0 nmol/L，检测限为87.81 pmol/L。miR-21的检测荧光强度为450.27±23.96，高于miR-31、miR-26a、miR-192、miR-25-3p和空白对照组（分别为98.89±7.35、98.12±2.07、98.93±2.45、96.66±2.45、82.93±3.54），差异均有统计学意义（ P均<0.001）。逆转录PCR结果显示，乳腺癌组血浆外泌体源性miR-21相对表达水平高于健康对照组（1.83±0.27比0.93±0.12， P<0.001）；CHA联合 CRISPR-Cas12a检测技术结果显示，乳腺癌组血浆外泌体源性miR-21相对表达水平高于健康对照组（1.94±0.21比0.98±0.08， P<0.001）；CHA联合 CRISPR-Cas12a检测技术与逆转录PCR检测的乳腺癌组和健康对照组的血浆外泌体源性miR-21相对表达水平比较，差异无统计学意义（ P均>0.05）。 结论:建立了CHA联合CRISPR-Cas12a检测外泌体源性miR-21的高灵敏度与高特异性的传感技术，其检测血浆外泌体源性miR-21的结果与逆转录PCR结果一致，可用于乳腺癌患者筛查。

微RNA (miRNA，miR)-192家族，包括miR-192、miR-194和miR-215，是一组在进化上高度保守的小RNA分子，它们在染色体上的位置紧密相关，其中miR-192和miR-215具有非常相似的种子序列。越来越多的研究表明，miR-192家族可能在乳腺癌的发展过程中起着关键作用。这些miRNA分子通过多种机制参与调控乳腺癌细胞的增殖、凋亡、代谢、侵袭和转移，对乳腺癌的发展和预后具有重要影响。因此，笔者对miR-192家族在乳腺癌中的作用进行全面总结，不仅能加深对乳腺癌发病机制的理解，还可能为开发新的诊断工具和治疗策略提供有价值的线索。通过总结这些miRNA家族成员的共性和特性，可以为乳腺癌的临床治疗和基础医学研究提供参考。

目的 评估某品牌7种微小RNA(miRNA)检测试剂盒的检测性能.方法 采用多中心横向联合评价方法,在全国范围内选择10家检测中心在同一时间使用同一批样本,对同一批号试剂进行性能评估.检测项目为miR-21、miR-26a、miR-27a、miR-122、miR-192、miR-223和miR-801,以miR-1228为内参.评估参数包括精密度、符合率、检出限和抗干扰能力.结果 10家检测中心检测8种miRNA的循环阀值(Ct)的批内变异系数(CV)均<5.00%,批间CV均<6.50%.10家检测中心检测20例临床血浆样本的总符合率均为100.00%(20/20),对50拷贝/μL标准参考品的检出率均为100.00%(20/20).血红蛋白200 g/L、胆红素1 000 μmol/L和三酰甘油100 mmol/L对检测结果无明显干扰.结论 该试剂盒检测7种miRNA的精密度、符合率、检出限和抗干扰能力表现良好,可满足不同地区、不同实验室和不同检测系统的使用需求和预期用途,具有一定的临床应用价值.

目的 探讨老年痴呆患者外周血单个核细胞微小RNA(miRNA)-16 和miRNA-192 表达及与认知功能的关系.方法 选择老年痴呆患者 64 例,根据认知功能障碍情况分为轻度组(n=29)与中度组(n=35).另选择老年健康体检者60 例为对照组.采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定 miRNA-16 和 miRNA-192 表达;采用简易精神状态检查(MMSE)量表评估认知功能.比较两组miRNA-16 和miRNA-192 表达,MMSE评分变化;比较不同认知功能障碍组miRNA-16和miRNA-192 表达;采用Pearson分析miRNA-16 和miRNA-192 表达与MMSE评分相关性.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miRNA-16 和miRNA-192 对认知功能的预测价值.结果 痴呆组miRNA-16 和miRNA-192 相对表达量显著高于对照组,MMSE评分显著低于对照组(P<0.05).中度组miRNA-16 和miRNA-192 相对表达量显著高于轻度组(P<0.05).经Pearson分析显示,miRNA-16 和miRNA-192 表达与MMSE评分呈线性负相关(P<0.05).经ROC曲线分析显示,miRNA-16 对认知功能预测灵敏度为85.90%,特异度为96.70%;miRNA-192 对认知功能预测灵敏度为85.90%,特异度为98.30%.结论 老年痴呆患者外周血单个核细胞miRNA-16 和miRNA-192 高表达,且与认知功能密切相关.

目的 建立软骨细胞(HC-α)SHOX基因过/低表达模型,筛选与未处理组差异表达miRNA,并予以验证.方法 通过慢病毒过/低表达SHOX基因,用miRNA芯片筛选差异表达的miRNA.结果 SHOX过表达组与对照组有425条差异表达的miRNA;SHOX低表达组与对照组有379条差异表达的miRNA;按照表达水平差异相反的标准筛选差异miRNA,其中6条miRNA在处理组中表达水平差异相反.实时荧光定量PCR对6条miRNA(miR-126、miR-192、miR-370、miR-432、miR-3162、miR-4745)进行验证,miR-126在过表达组明显上调(P＜0.05),在低表达组明显下调(P＜0.05).结论 miR-126参与SHOX介导的软骨细胞凋亡过程.

目的 筛选不同转移潜能肝癌细胞株的 microRNA (miRNA)差异表达谱,并预测分析差异表达miRNAs调控的靶基因与功能.方法 提取总RNA进行miRNA芯片分析,通过分析MHCC-97H(高转移)、Hep3B(不转移)两种不同转移潜能肝癌细胞株与正常肝细胞L02比较,以及两种肝癌细胞株相互比较的miRNA差异表达谱,筛选出差异表达明显的miRNAs进行qRT-PCR验证,利用4个靶基因预测软件(TargetScan、miRanda、miRWalk、miRDB)进行靶基因预测,并通过生物信息学分析来探讨候选靶基因的生物学功能.结果 与正常肝细胞 L02相比,肝癌细胞株 MHCC-97H、Hep3B中的 miR-192-5p、miR-215-5p 表达均明显上调,而miR-130a-3p、miR-196a-5p 则明显降低;与不转移肝癌细胞株Hep3B相比,miR-224-5p在肝癌细胞株 MHCC-97H中明显上调,而miR-146a-5p、miR-483-3p、miR-200b-3p则明显降低.qRT-PCR验证结果与芯片结果相一致.结论 MHCC-97H及Hep3B两种转移能力不同的肝癌细胞株的 miRNAs存在差异表达,这些差异表达的miRNAs与肝细胞癌的发生发展、转移侵袭密切相关.

目的 通过综合分析高通量miRNA/mRNA的表达数据及DNA甲基化数据,研究直肠腺癌(READ)潜在的发病机制.方法 从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中下载miRNA/mRNA表达数据及DNA甲基化数据.利用DESeq2软件包筛选差异表达的miRNA(DEmiRNAs)、mRNA(DEmRNAs),利用COHCAP软件包筛选差异甲基化位点(DMSs).采用生物信息学方法分别构建DEmiRNAs与DEmRNAs的调控网络和DNA甲基化与DEmRNAs调控网络,获得DEmiRNAs与DEmRNAs负调控关系对(DEmiRNA-DEmRNA),以及DNA甲基化与DEmRNAs的负调控关系对(DNAmethylation-DEmRNA).利用KEGG分析得到异常甲基化的DEmRNAs富集的通路.最后通过实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)验证其中差异显著的DEmRNAs的表达水平.结果 在数据中筛选到了1192个DEmRNAs, 27个DEmiRNAs,通过靶基因筛选,获得1987个miRNA-mRNA调控关系对.得到446个甲基化异常的基因,6403个异常甲基化的CpG位点.通过对446个异常甲基化基因和668个DEmRNAs的关联性分析,发现50个DEmRNAs (39个下调和11个上调)伴有高甲基化,同时受到DEmiRNAs的负调控.这50个DEmRNAs显著富集于cAMP、昼夜节律和谷氨酸等信号通路.qRT-PCR结果显示DEmRNAs表达结果与预测结果一致.结论 受到DEmiRNAs负调控的7个高甲基化基因(SORCS1、PDZRN4、LONRF2、CNGA3、HAND2、RSPO2和GNAO1)可能促进了READ的发生.

目的：研究 miRNA 在卵清蛋白（OVA）诱导的支气管哮喘（简称哮喘）小鼠模型中及炎性因子刺激肥大细胞 P815后的表达差异，以进一步了解哮喘的发病机制，为哮喘的防治提供新的靶点。方法采用OVA 诱导的哮喘小鼠模型，通过检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中的细胞数及组织病理验证模型的成功建立，应用实时荧光定量-PCR 法检测哮喘小鼠模型肺组织中 miRNA 与正常对照组的表达差异。采用炎性因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素12（IL-12）刺激肥大细胞，检测 miRNA 与正常对照组的表达差异。结果OVA 诱导的哮喘小鼠模型组 BALF 中细胞总数[（12.8±2.2）x 107/ L]较正常对照组[（5.6±2.5）x 107/ L]显著升高（t ＝4.760，P ﹤0.05）；嗜酸性粒细胞数[（6.6±1.9）x 107/ L]较正常对照组[（0.8±0.8）x 107/ L]显著升高（t ＝8.068，P ﹤0.05）。组织病理显示哮喘模型组小鼠呼吸道炎性细胞浸润程度明显高于正常对照组，模型建立成功。在哮喘模型组小鼠的肺组织中，miRNA-155的表达约为正常对照组的5倍（ P ﹤0.05）， miRNA-192的表达相对于正常对照组差异无统计学意义。TNF-α刺激肥大细胞 P815后，miRNA-192的表达约为正常对照组的1.9倍（P ﹤0.05）。IL-12刺激肥大细胞 P815后，miRNA-192的表达约为正常对照组的1.7倍（P ﹤0.05）。结论 miRNA 在 OVA 诱导的哮喘小鼠模型及炎性因子刺激肥大细胞后存在差异表达，而这些差异表达的 miRNA 可能通过调节肥大细胞的功能参与哮喘的发病。

[背景]镉是一种重要的环境污染物,低剂量环境镉暴露能够对机体产生健康损伤.肾脏是镉毒性作用重要的靶器官之一,但目前关于镉暴露致肾损伤的机制尚不清楚.[目的]探讨低剂量环境镉暴露与外周血转化生长因子(TGF)-β1/Smad3、相关微小RNA (miRNA)和肾损伤的关系.[方法]选择有污染灌溉史的某社区居民223人为暴露组,选择与该社区相距约32 km无污染灌溉史的某社区居民237人为对照组.采用面对面问卷调查的形式收集镉暴露区和非镉暴露区居民的一般情况;采集空腹静脉血检测血浆TGF-β1及Smad3,采集尿液检测尿N-乙酰-β-葡萄糖苷酶(UNAG)、尿白蛋白(UALB)、尿肾损伤因子1(UKim-1)以及尿镉水平.分析尿镉与血浆TGF-β1/Smad3及肾功能指标的关系.通过1:1匹配的病例对照研究设计在镉接触肾损伤组和对照组中比较血浆TGF-β1/Smad3相关miRNA的表达水平.[结果]暴露组人群尿镉的总体水平为1.06μg/g(以肌酐校正,余同),高于对照组(0.74μg/g)(P＜ 0.001).此外,镉暴露组血浆TGF-β1、血浆Smad3、UNAG和UALB水平均高于对照组(均P＜0.05).暴露组UNAG和UALB的水平以及对照组UNAG和UKim-1水平均随年龄增加而增加(均P趋势＜0.01).Pearson相关分析结果显示,血浆TGF-β1水平与UNAG、血浆Smad3水平呈正相关关系(r=-0.133,P＜0.001;r=0.091,P＜0.05).回归分析结果显示,UNAG(b=0.285,95％CI:0.076～0.494)、UALB (b=0.738,95％CI:0.385～1.092)和UKim-1 (b=0.038,95％CI:0.014～0.062)的变化与尿镉关系密切.镉暴露且肾损伤组miRNA-21、miRNA-192和miRNA-126的表达水平均高于对照组(均P＜0.001).[结论]环境镉暴露人群血浆TGF-β1、Smad3水平增加,miRNA-21、miRNA-192和miRNA-126表达水平的增加与镉暴露相关肾损伤可能有关.