目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA）C9ORF139靶向微小RNA（miR）-24-3P/TAOK1调控急性髓系白血病（AML）细胞增殖的作用和机制。方法:AML细胞株（人急性早幼粒白血病细胞株HL-60以及人单核白血病细胞株THP-1）购自中国科学院，分为4组：A组为阴性对照（siNC）组，B组为干扰C9ORF139（siC9ORF139）组，C组为siC9ORF139+miR-24-3P抑制剂组，D组为miR-24-3P+TAOK1过表达（oe-TAOK1）组。采用实时荧光定量逆转录（qRT）-PCR检测4组AML细胞株HL-60、THP-1中的表达水平。细胞计数试剂盒-8（CCK8）法检测细胞增殖，流式细胞仪分析细胞的凋亡情况，Transwell实验检测4组细胞的迁移、侵袭能力，Western印迹法检测p-丝氨酸/苏氨酸激酶（p-raf）、p-丝裂原活化蛋白激酶（p-MEK）、p-细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）表达。构建荧光素酶报告基因质粒，验证C9ORF139、miR-24-3P、TAOK1的结合能力。裸鼠皮下肿瘤细胞接种分为HL-60（A组）和HL-60（B组）。结果:敲减细胞中C9ORF139基因并培养120 h后，在HL-60及THP-1细胞中，B组细胞增殖能力（0.62±0.02、0.82±0.02）、迁移能力（0.22±0.03、0.05±0.01）、侵袭能力（0.20±0.02、0.13±0.03）均低于A组（1.30±0.02、1.83±0.07；0.99±0.02、0.99±0.02；1.00±0.01、1.00±0.01）（均 P<0.05）。共转染miR-24-3抑制剂后，细胞增殖能力、迁移能力、侵袭能力均高于B组（均 P<0.05）。共转染miR-24-3P与oe-TAOK1质粒后，细胞增殖能力、迁移能力、侵袭能力均高于B组（均 P<0.05）。当干扰细胞中C9ORF139基因后，与A组凋亡水平（0.31±0.27、2.49±0.33）相比，B组（28.56±8.07、17.74±1.91）均较高（均 P<0.05）；当共转染miR-24-3P抑制剂后，C组细胞凋亡水平（2.34±0.09、3.06±0.06）均低于B组（均 P<0.05）；在共转染miR-24-3P与oe-TAOK1质粒组中，D组细胞凋亡水平（2.16±1.29、4.80±0.37）均低于B组（均 P<0.05）。在HL-60、THP-1细胞中，当C9ORF139未突变时，miR-24-3P组荧光素酶活性均低于miR-NC组（均 P<0.05）。当C9ORF139序列中与miR-24-3P结合位点突变后，miR-24-3P组荧光素酶活性与miR-NC组差异无统计学意义（ P>0.05）。当TAOK1未突变时，miR-24-3P组荧光素酶活性低于miR-NC组（ P<0.05）；当TAOK1序列中与miR-24-3P结合位点突变后，miR-24-3P组荧光素酶活性与miR-NC组差异无统计学意义（ P>0.05）。当干扰HL-60细胞中C9ORF139基因并培养72 h后，B组Raf、MEK及ERK分子磷酸化表达水平均低于A组（均 P<0.05）。第14天，A组肿瘤体积高于B组［（284.49±57.61）比（125.70±18.64）mm 3， P=0.017］。HL-60 A组肿瘤重量高于B组［（847.80±159.36）比（408.40±113.16）mg， P=0.001］。 结论:lncRNA C9ORF139通过调控miR-24-3P上调TAOK1促进AML细胞的增殖、侵袭、迁移，C9ORF139表达具有促进AML裸鼠皮下肿瘤生长的作用。

目的:探讨人环状RNA 0001400（hsa_circ_0001400）及其线性转录物RELL1在卡波西肉瘤（KS）发生发展中的作用机制。方法:采用人KS相关疱疹病毒（KSHV）感染人脐静脉内皮细胞（HUVEC）并鉴定感染是否成功。取对数生长期HUVEC分为3组：HUVEC组（未感染的HUVEC）、KSHV + HUVEC组（0.5感染复数的KSHV感染HUVEC）、MAPK抑制剂组（0.5感染复数的KSHV感染HUVEC6 h后，再用1 μmol/L MAPK抑制剂处理），细胞计数试剂盒（CCK8）和流式细胞仪分别检测各组细胞增殖能力及凋亡情况。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及Western印迹法检测HUVEC组与KSHV + HUVEC组细胞中hsa_circ_0001400及其线性转录物RELL1、鼠肉瘤病毒癌基因同源物（RAS）/丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）信号通路的转录和蛋白表达水平。收集5对KS组织及瘤旁组织，并在KS组织样本中验证上述基因mRNA表达。统计分析采用两因素方差分析、单因素方差分析及 t检验等。 结果:与未感染的HUVEC相比，感染KSHV 48 h后HUVEC变圆，生长更密集。感染KSHV的HUVEC可检出KSHV裂解激活基因ORF50与潜伏态基因LANA的mRNA表达，其表达水平均高于未感染的HUVEC（均 P < 0.001），KSHV成功感染HUVEC。在培养24 ~ 72 h内随培养时间延长，KSHV + HUVEC组细胞增殖率逐渐升高，而MAPK抑制剂组细胞增殖活力明显受到抑制；3组48 h时总凋亡率差异有统计学意义（ F = 673.98， P < 0.001），且MAPK抑制剂组细胞总凋亡率明显高于KSHV + HUVEC组和HUVEC组（均 P < 0.001），而KSHV + HUVEC组与HUVEC组差异无统计学意义（ P > 0.05）。qRT-PCR结果显示，KSHV + HUVEC组hsa_circ_0001400、RELL1、Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物（KRAS）、MAPK11、细胞外信号调节激酶（ERK）-2 mRNA表达量均高于HUVEC组（均 P < 0.05），而两组间ERK1 mRNA表达量差异无统计学意义（ t = 0.92， P = 0.410）。Western印迹法检测显示，KSHV + HUVEC组RELL1、KRAS、MAPK11、ERK1、ERK2蛋白表达量均明显高于HUVEC组（均 P < 0.01）。KS组织中RELL1、ERK1、ERK2 mRNA表达量显著高于瘤旁组织（均 P < 0.05）。 结论:KSHV感染后，可能通过诱导hsa_circ_0001400及其线性转录物RELL1表达上调，激活MAPK信号通路，从而调控KS的发生发展。

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)C3orf77-2对头颈鳞癌细胞增殖和迁移的影响。方法:收集2021年9月至2023年9月郑州大学第一附属医院收治并接受手术治疗的30例下咽鳞癌患者的临床样本作为研究对象。选取下咽鳞癌组织和癌旁组织标本，运用lncRNA芯片技术检测下咽鳞癌组织和配对的癌旁组织标本中lncRNA的表达，分析差异表达的非编码RNA；实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)验证基因芯片差异基因；收集临床数据，分析lncRNA C3orf77-2表达与各种临床病理的相关性；下咽鳞癌FaDu细胞随机分为对照组、siNC组、lncRNA C3orf77-2 si-lnc1组、lncRNA C3orf77-2 silnc2组；沉默lncRNA C3orf77-2后，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验检测细胞增殖能力，细胞划痕实验检测细胞迁移能力；组间比较采用最小显著差异法LSD- t检验进行统计分析。 结果:下咽鳞癌组织中lncRNA C3orf77-2表达量(0.78±0.14)显著高于癌旁组织(0.13±0.10)，差异有统计学意义( t＝14.96， P<0.01)。下咽鳞癌组织中lncRNA C3orf77-2的表达与患者肿瘤分化程度( F＝4.3， P<0.05)、TNM分期( F＝13.4， P<0.05)、淋巴结转移( t＝4.07， P<0.05)明显相关；CCK-8结果显示，各组细胞在24、48、72 h的吸光度值分别为空白对照组(0.360±0.018、0.546±0.047、0.882±0.028)，siNC组(0.401±0.018、0.561±0.037、0.825±0.056)，lncRNA C3orf77-2 si-lnc1(0.230±0.031、0.416±0.009、0.555±0.048)和lncRNA C3orf77-2 si-lnc2(0.244±0.008、0.367±0.041、0.531±0.022)，差异有统计学意义( F24 h＝15.6、 F48 h＝360.7、 F72 h＝105.7， P<0.01)。克隆形成实验结果显示，siNC组(89.00±0.58)，lncRNA C3orf77-2 si-lnc1(31.67±1.76)，lncRNA C3orf77-2 si-lnc2(22.67±1.76)，空白对照组(94.00±2.52)，差异有统计学意义( F＝433.6， P<0.01)。细胞划痕实验显示：si-NC组(36.67±4.33)，lncRNA C3orf77-2 si-lnc1(10.83±1.17)，lncRNA C3orf77-2 si-lnc2(12.00±1.67)，差异有统计学意义( F＝78.8， P<0.01)。 结论:lncRNA C3orf77-2在下咽鳞癌组织中表达显著上调，且与患者的临床病理特征相关。沉默lncRNA C3orf77-2可显著抑制FaDu细胞的增殖、迁移。

目的:分析2017年山东省戊型肝炎病毒（HEV）的基因型分布和分子流行病学特征。方法:选取山东省2017年1—12月通过国家法定传染病报告系统报告的戊型肝炎病例为研究对象，对其进行个案调查，并采集其血清标本，共1 045例。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法复核检测HEV-IgM和HEV-IgG抗体，对HEV-IgM阳性者的血清提取病毒核酸，采用逆转录PCR方法扩增HEV开放式阅读框架2区域内长度为644 bp的核苷酸片段，直接测序后与GenBank下载的参考病毒株序列进行同源性和系统进化分析。结果:HEV-IgM复核检测阳性者638例（61.1%），其中男性病例年龄为（57.9±12.2）岁，阳性率为61.5%（496/807），女性病例年龄为（58.1±15.0）岁，阳性率为59.7%（142/238）；复核检测阳性者中共检出163株HEV毒株，检出率为25.6%（163/638），其中，东、中和西部地区检出率分别为23.0%（71/309）、33.6%（72/214）和17.4% (20/115)。检出的163株HEV病毒株均属于基因Ⅳ型，以4d亚型为主，占85.9%（140株），其次为4b亚型（7.4%，12株），以及少量的4a和4h亚型，分别占3.7%（6株）和3.1%（5株）。4a、4b和4h基因亚型组病例以东部为主，分别占3/5、11/12和4/6；4d基因亚型组以中部为主，占50.0%（70/140）。163株HEV的核苷酸序列同源性为82.7%~100.0%，其中140株HEV 4d亚型毒株与山东省猪源（KF176351）、牛源（KU904278）和羊源（KU904267）HEV毒株亲缘关系较近，核苷酸同源性分别为93.1%～98.3%、92.7%～97.9%和92.7%～97.9%。结论:山东省HEV优势流行株属于基因Ⅳ型4d亚型，跨种间传播可能是山东省人HEV感染的主要来源。

目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA）C9ORF139对急性髓系白血病（AML）细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响及可能机制。方法:回顾性收集2017年11月至2021年8月常州市第二人民医院血液内科30例初发AML患者和30名健康对照者骨髓标本，采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各标本C9ORF139转录水平相对表达量。合成针对C9ORF139基因靶点的小干扰RNA（siRNA）序列，转染至人急性早幼粒细胞白血病HL-60细胞、人单核细胞白血病THP-1细胞，为C9ORF139敲减组，以转染阴性对照序列的siRNA的细胞为对照组；采用qRT-PCR检测各组细胞C9ORF139转录水平相对表达量，计算干扰效率。CCK8法检测各组细胞增殖能力（以吸光度值表示细胞增殖能力，吸光度值越高，细胞增殖能力越强），Transwell实验检测细胞的迁移、侵袭能力，流式细胞术检测细胞凋亡情况。依据miRanda数据库预测miRNA-24-3p（miR-24-3p）与C9ORF139和TAOK1有结合位点，双荧光素酶报告基因实验检测miR-24-3p分别与C9ORF139、TAOK1的靶向关系。结果:qRT-PCR检测示，初发AML患者骨髓标本中C9ORF139的相对表达量高于健康对照组，差异有统计学意义（ P<0.001）。C9ORF139敲减组HL-60、THP-1细胞C9ORF139相对表达量均低于相对应的对照组细胞，差异均有统计学意义（均 P<0.01）。C9ORF139敲减组HL-60细胞和THP-1细胞增殖能力（培养72 h吸光度值：1.04±0.13比1.78±0.23，1.05±0.04比1.79±0.13）、侵袭能力（培养48 h细胞侵袭率：0.06±0.02比1.00±0.02，0.22±0.09比1.01±0.01）、迁移能力（培养48 h细胞迁移率：0.37±0.07比1.01±0.01，0.21±0.03比1.00±0.01）均低于对应的对照组，细胞凋亡率[（6.35±0.26）%比（0.58±0.55）%，（18.75±1.83%）比（2.07±0.19）%]均高于对应的对照组，差异均有统计学意义（均 P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验显示，在THP-1、HL-60细胞中，转染miR-24-3p+C9ORF139-野生型（WT）的细胞相对荧光素酶活性均低于转染miR-24-3p -阴性对照（NC）+C9ORF139-WT的细胞，差异均有统计学意义（均 P<0.001），而转染miR-24-3p+C9ORF139-突变型（MUT）的细胞与转染miR-24-3p-NC+C9ORF139-MUT的细胞相对荧光素酶活性差异均无统计学意义（均 P>0.05）；转染miR-24-3p+TAOK1 3'UTR-WT的细胞荧光素酶活性均低于miR-24-3p -NC+TAOK1 3'UTR-WT细胞，差异均有统计学意义（均 P<0.001），而转染miR-24-3p+TAOK1 3'UTR-MUT的细胞与转染miR-24-3p-NC+TAOK1 3'UTR-MUT的细胞相对荧光素酶活性差异均无统计学意义（均 P>0.05）。 结论:lncRNA C9ORF139可能通过与miR-24-3p相互作用来调控TAOK1基因表达，进而促进AML细胞增殖、侵袭和迁移，抑制AML细胞凋亡，可为AML治疗新靶点提供参考。

目的:探讨泛素特异性蛋白酶7（USP7）在瘢痕溃疡癌变过程中的生物学作用及其临床意义。方法:采用回顾性观察性研究结合生物信息学分析方法。从癌症基因组图谱（TCGA）数据库和基因表达综合数据库中获取USP7在肿瘤和/或其对应癌旁正常组织中的RNA表达谱数据，并将RNA测序数据进行log 2转化。通过多维度癌症基因集cBioPortal数据库分析 USP7基因变异情况，并分析其突变位点。通过TIMER 2.0数据库中“差异表达”模块获得TCGA数据库中肿瘤、癌旁正常组织USP7 mRNA表达情况。使用基因表达谱交互分析2（GEPIA2）数据库分析皮肤黑色素瘤（SKCM）、宫颈鳞状细胞癌（CESC）、肺鳞状细胞癌（LUSC）和头颈鳞状细胞癌（HNSC）中高表达USP7患者与低表达USP7患者的生存率并绘制Kaplan-Meier生存曲线。利用Sangerbox数据库分析USP7在泛癌中的表达与微卫星不稳定性（MSI）或肿瘤突变负担（TMB）的相关性。通过GEPIA2数据库中“相关性分析”模块，评估USP7在泛癌中的表达与5种DNA错配修复基因（ MLH1、 MSH2、 MSH6、 PMS2和 EPCAM）表达水平和3种必需DNA甲基转移酶（DNMT）——DNMT1、DNMT3A、DNMT3B表达水平的相关性。通过TIMER 2.0数据库中“免疫-基因”模块分析USP7在CESC、HNSC、LUSC和SKCM中表达及其与免疫细胞（B细胞、CD4 +T细胞、CD8 +T细胞、中性粒细胞、巨噬细胞和树突状细胞）浸润的相关性。利用GEPIA2数据库的“相似基因检测”模块获得与USP7表达模式相似且排名前100的蛋白集。将前述蛋白集与利用STRING数据库获得的与USP7有直接物理结合作用且排名前50的蛋白集进行交集分析。通过DAVID数据库对上述2个蛋白集进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）和基因本体论（GO）富集分析。收集2018年10月—2022年10月武汉大学附属同仁医院暨武汉市第三医院病理科有相应临床病理特征的正常皮肤、增生性瘢痕、瘢痕溃疡、瘢痕癌的术后标本，采用免疫组织化学法检测组织中USP7表达情况，样本数为6。对数据行Log-rank检验、单因素方差分析及Bonferroni检验。 结果:在泛癌中， USP7的主要基因变异类型为突变和扩增，变异频率（>6%）居前3位的肿瘤依次为膀胱尿路上皮癌、SKCM和子宫内膜癌。 USP7基因在泛癌中的主要突变为错义突变。在突变频率最高的SKCM中，主要突变类型是USP7_ICP0_bdg结构域的错义突变。USP7 mRNA在乳腺浸润癌、胆管癌、结肠癌、食管癌、HNSC、肾嫌色细胞癌、肝细胞肝癌、肺腺癌、LUSC、前列腺癌和胃癌肿瘤组织中的表达均明显高于其对应的癌旁正常组织（ P<0.05），在多形成性胶质细胞瘤、肾透明细胞癌、肾乳头状细胞癌和甲状腺癌中的表达均明显低于其对应的癌旁正常组织（ P<0.05）；此外，USP7 mRNA在SKCM转移组织中的表达远高于其原发肿瘤组织（ P<0.05）。生存曲线显示，在CESC、HNSC、LUSC和SKCM中，高表达USP7患者与低表达USP7患者的存活率比较，差异均无统计学意义（Log-rank P>0.05，风险比分别为1.00、0.99、1.00、1.30）。USP7在结肠癌、结直肠癌、胸腺癌、甲状腺癌中的表达均与TMB呈显著负相关（Pearson相关系数分别为-0.26、-0.19、-0.19和-0.11， P<0.05）；USP7在神经胶质瘤、CESC、肺腺癌、混合肾癌、LUSC中的表达均与MSI呈显著正相关（Pearson相关系数分别为0.22、0.14、0.15、0.08和0.14， P<0.05），在结肠癌、结直肠癌、乳腺浸润癌、前列腺癌、HNSC、甲状腺癌和弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达均与MSI呈显著负相关（Pearson相关系数分别为-0.31、-0.27、-0.13、-0.19、-0.16、-0.18和-0.53， P<0.05）。USP7在CESC中的表达与MSH2和MSH6的表达均呈明显正相关（Spearman相关系数分别为0.51和0.44， P<0.05），在HNSC中的表达与EPCAM、MLH1、MSH2、MSH6、PMS2的表达均呈明显正相关（Spearman相关系数分别为0.39、0.14、0.49、0.54和0.41， P<0.05），在LUSC中的表达与EPCAM、MSH2、MSH6和PMS2的表达均呈明显正相关（Spearman相关系数分别为0.20、0.36、0.40和0.34， P<0.05），在SKCM中的表达与EPCAM、MLH1、MSH2、MSH6和PMS2的表达均呈明显正相关（Spearman相关系数分别为0.11、0.33、0.42、0.55和0.34， P<0.05）；USP7在CESC、HNSC、LUSC和SKCM中的表达与DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的表达均呈显著正相关（Spearman相关系数分别为0.42、0.34和0.22，0.45、0.52和0.22，0.36、0.36和0.22，0.38、0.46和0.21， P<0.05）。USP7在CESC、HNSC、LUSC和SKCM中的表达仅与CD4 +T细胞浸润呈显著正相关（Partial相关系数分别为0.14、0.22、0.13、0.16， P<0.05）。与USP7表达模式相似且排名前100的蛋白集中，排名前5的蛋白依次是C16orf72、BCLAF1、UBN、GSPT1、ERI2（Spearman相关系数分别为0.83、0.74、0.73、0.73和0.72， P值均<0.05）。与USP7有直接物理结合作用且排名前50的蛋白集与前述蛋白集的交集仅有1个蛋白，即为甲状腺激素受体相互作用因子12。KEGG富集分析显示，USP7相关基因涉及细胞周期、剪接体、细胞衰老和p53信号通路等。GO富集分析显示，USP7相关基因涉及转录调控、蛋白质泛素化、DNA修复和细胞质模式识别受体信号通路等。临床样本分析显示，USP7在增生性瘢痕（0.35±0.05）、瘢痕溃疡（0.43±0.04）和瘢痕癌（0.61±0.03）中的表达均明显高于正常皮肤（0.18±0.04）， P<0.05。 结论:USP7可能为临床瘢痕溃疡癌变恶化的生物标志物。

[目的]分析和阐明沟眶象Eucryptorrhynchus scrobiculatus味觉受体基因EscrGR8的分子特性和功能,揭示其调节雌成虫繁殖力的作用.[方法]基于沟眶象触角转录组数据库,采用RACE克隆EscrGR8的cDNA全长序列;利用qRT-PCR检测EscrGR8在沟眶象不同发育阶段(卵、1-6龄幼虫、蛹、雌成虫和雄成虫)和雌雄成虫组织(去除触角和喙的头、触角、口器、中肠、前足、睾丸、卵巢、雄虫交配器和雌虫产卵器)中的表达量.显微注射雌成虫dsRNA后0,6,12,24,36,48和72 h时利用qRT-PCR检测RNAi后EscrGR8的表达量.检测显微注射dsEscrGR8后1-5d和6-11d时沟眶象雌成虫在不同土壤含水量(0～10％,11％～20％,21％～40％,41％～60％,61％～80％和81％～100％)条件下的产卵选择率、总产卵数量和所产卵的孵化率,研究抑制EscrGR8表达对雌成虫产卵选择性和繁殖力的影响.[结果]成功克隆了沟眶象EscrGR8(GenBank登录号:OR836580)的cDNA全长序列,开放阅读框(ORF)长1 251 bp,编码了 416个氨基酸,具有6个跨膜结构域.多序列比对和系统发育进化分析结果表明,EscrGR8与其他昆虫的GR的氨基酸序列同源性普遍较低,其中与棉铃象甲Anthonomus grandis的AgraGR64f氨基酸序列一致性为30.96％.qRT-PCR检测结果表明,EscrGR8在沟眶象不同发育阶段和成虫组织中的表达量具有显著差异,EscrGR8在雌成虫中的表达量最高,在卵中的表达量最低;EscrGR8在雌成虫卵巢中特异性高表达.显微注射dsEscrGR8不仅在一定时间内显著降低EscrGR8的表达量,并且对雌成虫的产卵选择性具有显著影响.显微注射dsEscrGR8后1-5 d时沟眶象雌成虫在含水量21％～40％土壤条件下的产卵选择率和所产卵的孵化率与显微注射dsGFP的对照组相比分别显著降低了 24.66％和15.83％;在含水量81％～100％土壤条件下的产卵选择率与显微注射dsGFP的对照组相比显著增加了 28.39％,雌成虫所产卵几乎不孵化.[结论]本研究证实了味觉受体基因EscrGR8对沟眶象雌成虫产卵选择和繁殖力的影响,有助于理解昆虫味觉受体基因的多样性和功能特异性.

为研究亲环蛋白A(Cyclophilin A,CypA)在三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)免疫系统中的作用,研究利用PCR与RACE技术克隆获得三角帆蚌CypA基因全长cDNA序列(基因序列登录号:MN121742).三角帆蚌CypA基因cDNA序列全长1237bp,其5'非编码区(UTR)长度为57 bp,3'非编码区长度为688bp,三角帆蚌CypA基因的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)长度为492 bp,编码164个氨基酸,CypA蛋白质理论等电点为8.9,相对分子量为17.29 kD.在GenBank中进行同源序列检索,三角帆蚌CypA氨基酸序列与其他贝类CypA的相似性依次为池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)(99.39％)、青蛤(Cyclina sinensis)(77.44％)、菲律宾蛤仔(Rudita-pes philippinarum)(78.05％)、近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)(78.66％)和大竹蛏(Solen grandis)(75.05％).通过SWISS-MODEL预测三角帆蚌CypA含有8个p折叠和2个a螺旋,可能形成CypA的活性中心区域.利用MEGA 5.1软件将三角帆蚌CypA与其他物种CypA基因进行序列比对并构建系统进化树,分析发现三角帆蚌CypA与池蝶蚌的CypA聚为一支,其与池蝶蚌CypA具有最近的亲源关系.通过qRT-PCR检测CypA基因在三角帆蚌不同组织中表达,发现三角帆蚌性腺中CypA基因的表达量最高,肝脏、肾和鳃中的表达量次之.对三角帆蚌浸泡感染嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),CypA基因在肝脏、性腺、肠和鳃中的表达水平在感染72h先升高后降低,其表达量在性腺和鳃中6h最高,肝脏中12h达到峰值,肠中24h达到最高值,表明三角帆蚌感染嗜水气单胞菌后,可显著诱导CypA基因的表达.CypA基因在性腺中的表达量到达峰值的时间要早于肠与肝脏,且到达峰值时的相对表达量(14.91)也显著高于肝脏(9.89)、肠(9.78)和鳃(7.53),推测CypA在三角帆蚌性腺中具有防御细菌感染的重要作用,三角帆蚌性腺可能不仅具有生殖的功能,同时在免疫防御系统中也发挥着重要的作用.

目的 旨在克隆获得远志Polygala tenuifolia细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)基因CYP72A546的基因开放阅读框(open reading frame,ORF),并对其理化特性、系统进化关系、组织表达、激素与非生物胁迫下的表达等展开分析.方法 基于远志全长转录组文库筛选并克隆远志细胞色素P450家族基因PtCYP72A546,通过生物信息学在线软件分析其编码的氨基酸序列,预测蛋白理化性质、结构域等分子特征;利用MEGA11分析进化关系,并采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测不同组织、激素及非生物胁迫的相对表达量.结果 从远志中成功克隆得到远志细胞色素P450家族基因PtCYP72A546,其ORF序列全长共计1 560bp,编码519个氨基酸,相对分子质量为59770,系疏水性稳定蛋白,含有1个保守结构域,不具有跨膜结构,二级结构主要为a-螺旋和无规卷曲,亚细胞定位分析表明PtCYP72A546-GFP融合蛋白定位于内质网.qPCR结果显示,远志根中CYP72A546表达量显著高于茎和叶片;200 μmol/L脱落酸(abscisic acid,ABA)和200 μmol/L壳聚糖(chitosan,CHT)处理下,CYP72A546均于12 h达峰值,分别为空白对照的7.45倍和5.49倍;在非生物(干旱、盐)胁迫处理下,CYP72A546的表达均先受抑制(6 h),再上调后缓慢下降.结论 通过对远志CYP72A546基因的克隆、鉴定与分析,为深入研究其在远志三萜皂苷合成途径的功能奠定基础.

Amyotrophic lateral sclerosis is a neurodegenerative disease,and the molecular mechanism underlying its pathology remains poorly understood.However,inflammation is known to play an important role in the development of this condition.To identify driver genes that affect the inflammatory response in amyotrophic lateral sclerosis,as well as potential treatment targets,it is crucial to analyze brain tissue samples from patients with both sporadic amyotrophic lateral sclerosis and C9orf72-related amyotrophic lateral sclerosis.Therefore,in this study we used a network-driven gene analysis tool,NetBID2.0,which is based on SJARACNe,a scalable algorithm for the reconstruction of accurate cellular networks,to experimentally analyze sequencing data from patients with sporadic amyotrophic lateral sclerosis.The results showed that the OSMR gene is pathogenic in amyotrophic lateral sclerosis and participates in the progression of amyotrophic lateral sclerosis by mediating the neuroinflammatory response.Furthermore,there were differences in OSMR activity and expression between patients with sporadic amyotrophic lateral sclerosis and those with C9orf72-related amyotrophic lateral sclerosis.These findings suggest that OSMR may be a diagnostic and prognostic marker for amyotrophic lateral sclerosis.