目的:食品与环境中49株豚鼠气单胞菌菌种鉴定、毒力与耐药性检测。方法:VITEK、API 20NE生化鉴定， gyrB、 rpoD系统发育分析；PCR检测 act、 alt、 ast、 lip、 ahp、 aerA、 hlyA、 ompA1、 fla基因；AST-GN16药敏试验。 结果:生化鉴定为豚鼠/嗜水气单胞菌株54株，经系统发育分析豚鼠气单胞菌49株，嗜水气单胞菌4株，中国台湾省气单胞菌1株。毒力基因 alt、 lip、 ompA1、 fla、 act、 aerA、 hlyA检出率依次为100.00%、100.00%、79.59%、14.29%、2.04%、2.04%、2.04%，未检出 ast、 ahp；存在4种毒力基因组合，优势组合为 alt/ lip/ ompA1(32/49)。豚鼠气单胞菌氨苄西林、头孢唑林、头孢西丁、阿莫西林/克拉维酸、头孢曲松、复方新诺明、安曲南耐药率依次为79.59%、14.29%、10.20%、6.12%、4.08%、4.08%、2.04%，哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南、阿米卡星、庆大霉素、左氧氟沙星、替加环素、呋喃妥英均敏感；2株多重耐药菌株。 结论:gyrB、 rpoD可有效鉴定豚鼠/嗜水气单胞菌， rpoD可区分近亲缘关系豚鼠与中国台湾省气单胞菌；所有豚鼠气单胞菌均携带2种以上毒力基因，1株环境源菌携带7种毒力基因；青霉素类普遍耐药，产生β-内酰胺酶是最主要耐药机制；未发现碳青霉烯类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类、四环素类、呋喃类耐药菌株；食品和生活饮用水存在多重耐药菌。

目的:探究本院临床分离的气单胞菌中 mcr基因的携带情况和基因特征，为临床检测粘菌素耐药基因的携带和表达情况提供依据。 方法:应用PCR对183株气单胞菌进行 mcr基因检测；微量肉汤稀释法检测粘菌素以及多粘菌素对 mcr基因阳性气单胞菌的最低抑菌浓度(MIC)；肉汤接合法和滤纸接合法进行接合转移试验；全基因组测序技术分析气单胞菌中 mcr-3基因的存在环境。构建 mcr-3携带基因的 E. coli DH5α-pGEM-T：：p mcr-3菌株以验证其粘菌素耐药表达情况。 结果:183株气单胞菌 mcr-3基因的携带率为2.19%(4/183)，未检测到 mcr-1和 mcr-2基因；药敏试验结果显示4株携带 mcr-3基因的嗜水气单胞菌对粘菌素和多粘菌素均敏感(MIC<2 μg/ml)；接合转移试验结果显示 mcr-3基因无法进行水平转移；全基因组测序分析显示本院临床分离嗜水气单胞菌携带的 mcr-3基因属于 mcr-3.2以及 mcr-3-like变异体，且上下游并未检测到相邻的转移元件。构建的重组菌株 E. coli DH5α-pGEM-T：：p mcr-3表现为粘菌素敏感表型(MIC＝2 μg/ml)。 结论:我院临床分离气单胞菌中存在 mcr-3基因，但其在嗜水气单胞菌不表达粘菌素耐药性，且暂时未发现支持其可以转移的证据。

目的:分析骨科医院感染患者的临床特征及其感染部位和病原体分布的变化趋势。方法:回顾性分析2015年1月至2019年12月厦门大学附属福州第二医院骨科住院患者的医院感染监测资料，包括住院例数、感染例数、感染例次数、感染部位、病原微生物、多重耐药菌检出情况等。采用 χ2检验和线性相关卡方检验进行统计学分析。 结果:5年内骨科共收治患者104 769例，总医院感染例次为2 662例次，总例次感染率为2.54%。2015年至2019年的例次感染率分别为3.87%(728/18 790)、3.49%(682/19 562)、2.15%(451/21 006)、2.06%(446/21 627)、1.49%(355/23 784)，呈逐年下降趋势( χ2＝319.0， P<0.01)。感染部位中，手术部位感染930例次(34.94%)，皮肤和软组织感染784例次(29.45%)，呼吸系统感染615例次(23.10%)。手术部位、呼吸系统、泌尿系统的占比有逐年下降趋势( χ2＝7.155、8.379、4.921， P＝ 0.007、0.004和0.027)。其中，表浅切口、下呼吸道感染的占比有下降趋势( χ2＝4.024、15.550，均 P<0.05)，而深部切口、抗菌药物相关性腹泻的占比有上升趋势( χ2＝27.903、3.919，均 P<0.05)。共分离出病原微生物1 871株，其中革兰阳性菌865株(46.23%)，革兰阴性菌934株(49.92%)，真菌72株(3.85%)。革兰阳性菌中金黄色葡萄球菌最常见，为485株(25.92%)；革兰阴性菌中铜绿假单胞菌最常见，为166株(8.87%)；真菌中最常见的是白念珠菌，为38株(2.03%)。革兰阳性菌和革兰阴性菌在总检出的病原微生物中的占比均无明显线性趋势(均 P>0.05)，而真菌的占比有逐年下降趋势( χ2＝4.454， P＝0.035)。粪肠球菌、鲍曼不动杆菌、嗜水气单胞菌的占比有逐年上升趋势，而凝固酶阴性葡萄球菌、白念珠菌的占比有逐年下降趋势( χ2＝5.639、1.594、18.500、4.458、6.562，均 P<0.05)。耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌、耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的逐年检出率均无明显线性趋势( χ2＝0.004、2.568、0.200、0.165，均 P>0.05)。5年间未检出耐万古霉素肠球菌。 结论:骨科的医院感染发生率变化大。深部切口、抗菌药物相关性腹泻的感染率逐年增高，粪肠球菌、鲍曼不动杆菌、嗜水气单胞菌感染有逐年上升趋势，今后在防控上需要引起关注和重视。

文章旨在建立一种针对嗜水气单胞菌的敏感性高、特异性强的快速临床诊断方法.研究根据嗜水气单胞菌促旋酶B亚单位(gyrase subunit B,gyrB)基因的保守序列,设计特异性重组酶聚合酶扩增技术(RPA)扩增引物,通过结合琼脂糖凝胶电泳(AGE)和侧流层析试纸条(LFD)的方法进行反应条件的优化、特异性及灵敏度检测.实验结果表明,所建立的嗜水气单胞菌RPA-LFD快速检测方法可在38℃最适温度下30min内无干扰地检测到嗜水气单胞菌,对嗜水气单胞菌纯培养物和基因组DNA的最小检出限为103 cfu/mL和100 pg/nL.利用建立的RPA-LFD与普通PCR同时检测杂交鲟鱼处理临床样品的结果表明,两种方法的结果一致.综上所述,通过对RPA反应条件的探索和优化,成功建立了嗜水气单胞菌快速检测方法.该方法操作简便,反应迅速,与普通PCR相比,不需要昂贵的仪器,为未来嗜水气单胞菌细菌性疾病的早期诊断提供了更有效的技术支持.

为研究亲环蛋白A(Cyclophilin A,CypA)在三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)免疫系统中的作用,研究利用PCR与RACE技术克隆获得三角帆蚌CypA基因全长cDNA序列(基因序列登录号:MN121742).三角帆蚌CypA基因cDNA序列全长1237bp,其5'非编码区(UTR)长度为57 bp,3'非编码区长度为688bp,三角帆蚌CypA基因的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)长度为492 bp,编码164个氨基酸,CypA蛋白质理论等电点为8.9,相对分子量为17.29 kD.在GenBank中进行同源序列检索,三角帆蚌CypA氨基酸序列与其他贝类CypA的相似性依次为池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)(99.39％)、青蛤(Cyclina sinensis)(77.44％)、菲律宾蛤仔(Rudita-pes philippinarum)(78.05％)、近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)(78.66％)和大竹蛏(Solen grandis)(75.05％).通过SWISS-MODEL预测三角帆蚌CypA含有8个p折叠和2个a螺旋,可能形成CypA的活性中心区域.利用MEGA 5.1软件将三角帆蚌CypA与其他物种CypA基因进行序列比对并构建系统进化树,分析发现三角帆蚌CypA与池蝶蚌的CypA聚为一支,其与池蝶蚌CypA具有最近的亲源关系.通过qRT-PCR检测CypA基因在三角帆蚌不同组织中表达,发现三角帆蚌性腺中CypA基因的表达量最高,肝脏、肾和鳃中的表达量次之.对三角帆蚌浸泡感染嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),CypA基因在肝脏、性腺、肠和鳃中的表达水平在感染72h先升高后降低,其表达量在性腺和鳃中6h最高,肝脏中12h达到峰值,肠中24h达到最高值,表明三角帆蚌感染嗜水气单胞菌后,可显著诱导CypA基因的表达.CypA基因在性腺中的表达量到达峰值的时间要早于肠与肝脏,且到达峰值时的相对表达量(14.91)也显著高于肝脏(9.89)、肠(9.78)和鳃(7.53),推测CypA在三角帆蚌性腺中具有防御细菌感染的重要作用,三角帆蚌性腺可能不仅具有生殖的功能,同时在免疫防御系统中也发挥着重要的作用.

铁蛋白广泛存在于生物体内,能够使细胞内的铁元素含量保持相对稳定且能参与机体免疫反应.近年来因细菌侵染,黑龙江林蛙(Rana amurensis)种群数量出现下降趋势,本研究探究铁蛋白基因在细菌感染的林蛙中的表达模式,期望可以为黑龙江林蛙抗细菌感染的机制研究提供参考.本研究首先采用PCR技术扩增黑龙江林蛙铁蛋白H亚基基因的编码区序列并对其进行生物信息学分析;再应用实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)检测黑龙江林蛙被嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)侵染后,铁蛋白H亚基基因在其肝、脾、肾、皮肤以及肌肉组织中的转录水平变化情况;最后采用免疫荧光检测技术,分析嗜水气单胞菌侵染后,黑龙江林蛙铁蛋白H亚基蛋白表达情况.结果表明,该基因编码区长度534 bp,编码177个氨基酸;对该基因氨基酸序列进行分析,其与欧洲林蛙(R.temporaria)相应基因同源性最高,达到98.37％;RT-qPCR结果显示,铁蛋白H亚基基因在黑龙江林蛙组织中广泛存在,在嗜水气单胞菌侵染后,铁蛋白H亚基mRNA在黑龙江林蛙肝、脾、肾、皮肤以及肌肉组织中的表达均显著上调(P＜0.01).免疫荧光检测结果发现,在感染嗜水气单胞菌后,铁蛋白H亚基蛋白在黑龙江林蛙肝和肌肉组织的胞质中均有不同程度表达.综上结果表明,黑龙江林蛙铁蛋白H亚基基因会通过上调表达来响应细菌性感染,由此推测该基因参与了黑龙江林蛙的细菌性免疫应答.

为探究热激蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)对池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)在应对不利环境胁迫时的作用,研究结合转录组测序和RACE-PCR获得池蝶蚌HSP70家族一个成员(暂命名:HSP70 B2-like)cDNA全长序列(2 209 bp),同源分析显示,该基因编码的蛋白含有HSP70家族的签名序列,C末端存在细胞质特异性调控信号EE-MD.与其他物种的HSP70具有很高的相似性.进化树分析表明,获得序列与褶纹冠蚌HSP70亲缘关系最近,并和其他软体动物HSP70 B2亚家族聚为同一进化支.实时荧光定量PCR结果表明,池蝶蚌HSP70 B2-like在检测的多个组织中均有表达,且闭壳肌中表达量最高.经热刺激(37℃)后,池蝶蚌闭壳肌、肝胰腺、外套膜和肾中的HSP70 B2-like mRNA表达快速上调,6 h达到峰值(P＜0.01),随后逐渐下降.池蝶蚌鳃和血细胞中的HSP70 B2-like mRNA表达量则是先降后升再回落.但血细胞、外套膜和肾中的HSP70 B2-like在48 h再次出现表达上调.注射嗜水气单胞菌后,HSP70 B2-like在肝胰腺、血细胞和闭壳肌的表达量均显著上升,6 h开始上调(P＜0.05),持续到24 h,到48 h回落.而鳃中的HSP70 B2-like基因的表达则是先降后升再回落.研究结果表明,池蝶蚌HSP70 B2-like是一个应激蛋白基因,可能在机体耐受高温胁迫和抗病原菌浸染时发挥重要作用.

目的 通过分析手外伤缝合术后感染的病原菌分布,总结大芬戈尔德菌、嗜水气单胞菌、大肠埃希菌感染的临床特点及治疗转归.方法 回顾性分析1例因手部创伤行骨折固定和伤口缝合术后,大芬戈尔德菌及嗜水气单胞菌、大肠埃希菌感染的临床资料,并查阅相关文献进行分析.结果 患者在手部创伤后出现了感染症状,伤口分泌物细菌培养结果为大芬戈尔德菌、嗜水气单胞菌和大肠埃希菌.患者接受了联合使用敏感抗菌药物治疗,并进行了手术和皮瓣移植等治疗措施.治疗半月余后,患者的伤口干燥无渗出,治疗效果良好并成功出院.结论 临床应充分认识到厌氧菌合并需氧菌混合感染的临床意义.医院启动多学科密切配合,才能共同促进临床个案的成功经验被推广和探索.

文章研究了饲料中添加不同水平的白术提取物(Extraction of Atractylodes macrocephala Koidz,EAMK)对日本沼虾(Macrobrachium nipponense)生产性能、器官指数、血液生化指标、抗氧化能力、消化系统健康和抗病力的影响.实验以初始体重为(0.21±0.05)g的日本沼虾为研究对象,设置6个饲料处理,白术提取物添加量为0、100、200、400、600和1200 mg/kg(Control、A100、A200、A400、A600和A1200).每个饲料处理设6个重复,每个养殖缸放入60尾虾,实验周期为75d,每天记录采食量.养殖实验期间监测水体温度为(20±3)℃,pH为7.8-8.2,亚硝酸盐为0.16-0.2 mg/L,氨氮为0.02-0.1 mg/L,溶氧＞6.0 mg/L.在实验结束后,分析日本沼虾生长性能、血清生化指标、肠道消化酶和免疫指标及肝胰腺抗氧化能力,观察日本沼虾的组织结构,用嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)进行攻毒并记录存活率.结果表明:饲料中添加200 mg/kg的白术提取物可以显著提高日本沼虾的增重率(WGR)和特定生长率(SGR),并显著降低饲料系数(FC;P＜0.05).各处理组间的肝体比、出肉率和体成分均无显著性差异(P＞0.05);A100组的血清葡萄糖(Glu)含量显著高于对照组(P＜0.05),并能显著降低谷丙转氨酶(ALT)活性(P＜0.05);各白术提取物处理组的血清甘油三酯(TG)和总胆固醇含量(TC)均显著低于对照组(P＜0.05);A400组的肝胰腺GSH-Px活性显著高于A100组和对照组(P＜0.05),A600组的肝胰腺CAT活性显著高于其他各组(P＜0.05),A200和400组的肠道iNOS的活性显著高于对照组(P＜0.05);A400组的日本沼虾肠绒毛显著高于对照组(P＜0.05),并且减轻了肝细胞的空泡化,促进了鳃的完整性;A100处理组的嗜水气单胞菌攻毒后存活率显著高于对照组(P＜0.05).综上所述,白术提取物可以提高日本沼虾的生长性能和抗氧化能力,提高抗病力,在日本沼虾饲料中适宜添加量为100-400 mg/kg.

研究旨在探究饲料中添加酵母培养物"水产益康"对大口黑鲈(Micropterus salmoides)生长性能、肠道健康、免疫力和病菌攻击后存活率等方面的影响,在基础对照饲料中添加质量分数0.1％和0.3％的酵母培养物"水产益康"(分别为0.1％添加组和0.3％添加组),配置3种等氮等脂的实验饲料.将360尾初始质量为(32.37±0.15)g的大口黑鲈分为3个处理,每个处理设3个重复,每个网箱放养40尾鱼,生长实验周期为11周.结果表明:两个添加组的生长性能与对照组相比没有显著差异(P＞0.05);在肠道结构方面,0.3％添加组的绒毛长度较对照组显著增加,隐窝深度较对照组显著下降(P＜0.05);在肠道微生物方面,两个实验组均较对照组降低了肠道内蓝藻门(Cyanobacteria)及葡萄球菌(Staphylococcus)含量,提高了肠道内梭菌目(Clostridiales)含量;在头肾生化指标方面,0.3％添加组较对照组显著提高了头肾超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和碱性磷酸酶(AKP)活性及溶菌酶(LZM)含量,0.1％添加组也较对照组显著提高了头肾SOD和AKP活性(P＜0.05);在血浆生化指标方面,0.3％添加组较对照组显著降低了血浆丙二醛(MDA)含量(P＜0.05),SOD活性也有所提高,但没有显著性差异(P＞0.05);嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)攻毒结果显示,攻毒后两实验组的累计存活率较对照组升高,在252h以后有显著区别(P＜0.05).以上结果表明,饲料中添加0.1％-0.3％培养物对大口黑鲈肠道健康、抗氧化能力、免疫和抗病力有积极作用.