目的:阐明牙龈卟啉单胞菌(Pg)诱导食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞发生上皮间质转化(EMT)的分子机制.方法:KEGG分析Pg诱导的ESCC差异表达基因富集的生物学通路,WB和/或免疫荧光法检测Pg诱导的ESCC细胞中糖蛋白A重复优势蛋白(GARP)、TGF-β、pSMAD/SMAD、Snail、Oct4和EMT相关分子表达的变化,ELISA检测TGF-β1水平的变化,免疫组织化学法检测ESCC组织中GARP和TGF-β1的表达规律,Transwell实验和动物实验验证Pg对ESCC的促进作用.结果:ESCC细胞感染Pg后,TGF-β、Hippo、PI3K/Akt等信号通路被激活;Pg感染刺激ESCC细胞分泌总TGF-β1和活性TFG-β1的水平升高(均P<0.01),使SMAD2/3磷酸化并发生核转位,诱导N-cadherin、Snail、Oct4等蛋白表达升高、E-cadherin蛋白表达降低,由此促进ESCC细胞的迁移、侵袭和裸鼠皮下移植瘤的生长(均P<0.01).在ESCC细胞中沉默GARP表达后,逆转了Pg所诱导的上述ESCC细胞表型变化.Pg丰度高的ESCC组织中TGF-β1 和GARP蛋白表达高于低丰度的ESCC组织,且Pg丰度与TGF-β1、GARP表达存在正向关联(P=0.001 5).结论:Pg通过GARP激活TGF-β/SMAD轴促进ESCC细胞发生EMT,进而促进ESCC细胞的迁移、侵袭和生长,清除Pg或阻断TGF-β信号转导则可阻断上述Pg对ESCC的促进作用.

目的:探讨腓骨蛋白-1(Fibulin-1)在高磷诱导的大鼠平滑肌细胞衰老相关钙化过程中的作用及其机制。方法:2020年9月至2021年9月自10只6~8周的雄性SD大鼠胸主动脉和腹主动脉提取大鼠原代血管平滑肌细胞。采用磷酸盐(2.5 mmol/L Pi)刺激大鼠平滑肌细胞钙化作为应激性衰老相关钙化模型。通过β-半乳糖苷酶染色评估细胞衰老。通过茜素红染色和细胞钙含量测定判断细胞钙化程度。蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测平滑肌细胞在衰老相关钙化过程中发生表型转化的指标和Fibulin-1表达水平。使用siRNA敲低原代大鼠平滑肌细胞中Fibulin-1表达，免疫荧光检测Psmad3的表达，Western Blot检测Fibulin-1对平滑肌细胞表型转化指标的影响。用重组Fibulin-1培养，并同时加入转化生长因子(TGF)-β抑制剂A83-01和Psmad3抑制剂SIS3，通过Western Blot检测平滑肌细胞衰老和钙化指标。结果:在磷酸盐刺激大鼠平滑肌细胞钙化的应激性衰老模型中，Fibulin-1的表达上调( t＝11.20， P<0.01)，平滑肌细胞收缩表型标志物MHC、SM22α表达下调( t值分别为7.97、10.27，均 P<0.01)，成骨表型标志物OPN、Bmp2和衰老标志物P53的表达上调( t值分别为4.80、9.56、14.07，均 P<0.01)。Fibulin-1敲低后改善了细胞衰老程度和钙沉积( t＝12.90， P<0.05)、降低了平滑肌细胞表型转化蛋白OPN、Bmp2和衰老蛋白P53的表达( t值分别为5.92、10.15、8.28， P<0.05或 P<0.01)，同时TGF-β/信号转导蛋白(Smad3)及Psmad3表达被抑制( t值分别为12.90、7.46，均 P<0.01)。加入TGF-β/Smad3通路抑制剂后，重组Fibulin-1对平滑肌细胞表型转化蛋白OPN、SM22α和衰老标志蛋白表达P53的促进作用减弱( t值分别为4.52、9.82、3.85， P<0.01或 P<0.05)。 结论:Fibulin-1可通过TGF-β/smad3信号通路促进血管平滑肌细胞发生衰老相关钙化。

目的:探究牙龈卟啉单胞菌( Porphyromonas gingivalis, P． gingivalis)菌体表面菌毛素(fimbrillin, FimA)在 P. gingivalis促进食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)进展过程中的作用。 方法:野生型 P. gingivalis与 fimA基因缺失型 P. gingivalis( fimA-/-P. gingivalis)经形态学和PCR鉴定后感染ESCC细胞，免疫荧光、CCK-8、Transwell小室检测 fimA-/-对 P. gingivalis侵入细胞、增殖、迁移和侵袭能力影响，Western blot检测pSmad2/3变化，裸鼠皮下成瘤检测荷瘤生长。 结果:fimA-/-P． gingivalis与野生型 P. gingivalis比较，FimA缺失可能降低菌体间黏附， fimA-/-P. gingivalis侵入NE6-T细胞内细菌数目减少，刺激NE6-T和KYSE30细胞增殖、迁移和侵袭能力降低，pSmad2/3激活降低， fimA-/-P. gingivalis感染的KYSE30在裸鼠皮下生长较野生型 P. gingivalis明显降低。 结论:FimA介导了 P. gingivalis促进ESCC演进的作用，是阻断 P. gingivalis促肿瘤作用的潜在靶点分子。

目的:通过构建比格犬膝关节前交叉韧带横断(ACLT)骨关节炎模型探究关节软骨下骨重塑的病理特点及发病机制。方法:本研究选取8周岁，雄性，体重10~15 kg的比格犬，将18只犬按随机数字表分为两组，即对照组和骨关节炎(OA)模型组。通过离断犬膝关节前交叉韧带构建关节不稳的OA模型，术后16周后处以安乐死，取材。通过番红固绿染色和国际骨关节炎研究学会-改良Manking(OARSI-Modified Manking)评分评估关节软骨退变程度。采用微计算机断层扫描(Micro-CT)分析软骨下骨的骨体积分数(BV/TV)、骨小梁分离度(SP.Tb)、骨小梁模式因子(Tb.Pf)，通过经免疫染色测定软骨下骨中pSmad2/3，Osterix和CD31的表达水平。采用独立样本 t检验进行数据的统计学分析。 结果:OA模型组肉眼可见多处不同程度的关节软骨退变，番红固绿染色显示关节软骨龟裂，但尚未侵犯深层结构，OARSI-Modified Manking评分显著升高(4.7±2.3)，差异有统计学意义( t＝-3.213， P<0.01)。Micro-CT结果显示，与对照组比较，OA模型组的软骨下骨BV/TV显著高于对照组(0.4±0.3)，而SP.Tb和Tb.Pf均显著低于对照组(0.3±0.1、-2.0±3.5)，且组间差异均有统计学意义( t＝-6.124、2.519、3.393， P<0.05)。酶联免疫吸附试验(ELISA)结果表明，与对照组比较，OA模型组的外周血中含有高浓度的转化生长因子(TGF)-β1(81.7±5.1)，且组间差异有统计学意义( t＝-16.580， P<0.01)。免疫组织化学染色结果显示，与对照组比较，OA模型组的关节软骨下骨髓腔中聚集了大量的pSmad2/3+MSC、Osterix+成骨前体细胞和CD31 +血管内皮细胞(109.9±3.9、70.5±1.8、26.8±1.8)，且组间差异有统计学意义( t＝-29.814、-42.475、-8.937， P<0.05)。 结论:比格犬膝关节OA的软骨下骨中出现异常骨重塑，其中活跃的骨吸收和TGF-β1/Smad2/3通路是疾病发生与发展中的关键靶点。

目的:观察纤维蛋白-1c(Fibulin-1c)对老年膝骨关节炎(OA)软骨细胞增殖代谢的影响。方法:2018年8月至2019年8月，收集山西白求恩医院因外伤截肢年轻人和人工膝关节置换术时老年膝OA患者10例的血清、膝关节软骨标本，检测标本中Fibulin-1c的含量变化。实验分4组，实验组1为培养液含rFibulin-1c(10 μg/L)；实验组2为培养液含rFibulin-1c(100 μg/L)；实验组3为培养液含rFibulin-1c(200 μg/L)；对照组为单纯培养液。常规培养人软骨细胞，实验组培养液中加入不同浓度(10、100、200 μg/L)重组人Fibulin-1c蛋白，培养48 h后，5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)检测软骨细胞增殖，蛋白质印迹法(Western blot)和实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测软骨细胞Col2、基质金属蛋白酶(MMP)-13、Smad3和pSmad3的表达。组间比较采用 t检验和单因素方差分析。 结果:年轻人血清Fibulin-1c蛋白相对表达量为(1.009±0.109)，老年人为(0.695±0.071)，两者比较差异有统计学意义( t＝2.406， P<0.05)；年轻人软骨中蛋白相对表达量(1.021±0.097)高于老年人(0.733±0.079， t＝2.297， P<0.05)，差异有统计学意义。实验组EdU阳性细胞百分比[(25.330±1.453)%、(34.170±2.822)%]高于对照组[(13.170±1.447)%， F＝24.300， P<0.01]，差异有统计学意义；与对照组(0.786±0.042)比较，实验组软骨细胞Col2含量增高(1.470±0.105、1.880±0.120， F＝30.110， P<0.01)，差异有统计学意义；Col2的基因表达水平与蛋白表达水平一致。 结论:Fibulin-1c可以促进老年膝关节软骨细胞增殖代谢能力。

目的:评价七氟烷对肺动脉高压大鼠右心室心肌纤维化的影响。方法:SPF级健康成年雄性Wistar大鼠18只，体重260~300 g，采用随机数字表法分为3组( n＝6)：对照组(C组)、肺动脉高压组(PAH组)和肺动脉高压+七氟烷组(PS组)。PAH组及PS组腹腔注射野百合碱60 mg/kg制备肺动脉高压模型，C组腹腔注射等容量生理盐水。PS组注射完毕后吸入1.5 MAC七氟烷1 h，2次/周，共6周。于第6周末行心脏超声检查，测量右心室舒张末期前后径(RVEDD)、右心室前壁舒张末期厚度(RVWTd)、室间隔舒张末期厚度(IVSTd)、肺动脉内径(PAID)及肺动脉瓣口最大峰值流速(PV)。于第6周末取大鼠心脏，称量右心室、室间隔和左心室重量，计算Fulton′s指数；取右肺下叶组织，HE染色后测量血管壁外径和血管壁内径，计算血管壁厚度指数(WT)，测量总血管面积和管腔面积，计算管壁面积指数(WA)。取右心室心肌组织，行Masson染色，光镜下观察右心室心肌纤维化程度；行免疫荧光染色，观察右心室心肌组织TGF-β1的表达情况；采用Western blot检测右心室心肌组织转化生长因子β1(TGF-β1)、磷酸化Smad3(p-Smad3)和Smad7的表达水平。 结果:与C组相比，PAH组Fulton′s指数、RVEDD、RVWTd、IVSTd、PAID、WT和WA升高，PV降低，右心室心肌组织TGF-β1和p-Smad3表达上调，Smad7表达下调( P<0.01)，发生心肌纤维化。与PAH组相比，PS组Fulton′s指数、RVEDD、RVWTd、IVSTd、PAID、WT和WA降低，PV升高，右心室心肌组织TGF-β1和p-Smad3表达下调，Smad7表达上调( P<0.05或0.01)，心肌纤维化明显改善。 结论:七氟烷可改善大鼠肺动脉高压致右心室心肌纤维化，其机制可能与抑制TGF-β1/Smad3信号通路激活有关。

目的 研究miR-10b对特发性矮小症(ISS)的影响及作用机制.方法 收集ISS患儿(ISS组)和体检健康儿童(健康对照组)各54例,qPCR检验血清miR-10b表达量,分析ISS组患儿血清miR-10b表达与患儿临床资料的关系.采用miR-10b inhibitor、si-TGFBR1及各自阴性对照转染C28/I2细胞,利用CCK-8实验检测C28/I2细胞增殖能力,Western blot检测侏儒相关转录因子2(RUNX2)、X型胶原α1链(COL10A1)、转化生长因子β受体1(TGFBR1)、SMAD3、pSMAD3蛋白表达量.在StarBase数据库筛选miR-10b靶点,利用双萤光素酶报告基因实验验证miR-10b与TGFBR1的靶向关系.结果 ISS组血清miR-10b表达量高于健康对照组,且miR-10b表达越高,患儿的身高、IGF-1、骨特异性碱性磷酸酶的下降越明显(P＜0.05).与NC组相比,miR-10b inhibitor组细胞增殖能力升高,RUNX2、COL10A1、TGFBR1、pSMAD3蛋白表达上调(P＜0.05);StarBase数据库提示miR-10b存在TGFBR1的结合位点,双萤光素酶报告基因实验证实两者结合.与si-NC相比,si-TGFBR1组TGFBR1表达量下调,细胞增殖能力下降(P＜0.05).结论 miR-10b通过靶向TGFBR1/SMAD3通路在特发性矮小症中抑制软骨细胞的增殖、肥大.

目的 探讨LIM和SH3 结构域蛋白 1(LASP1)在重度子痫前期(sPE)患者胎盘组织中的表达及其对经转化生长因子-β1(TGF-β1)处理的滋养细胞生物学功能的影响.方法 收集2022 年4 月至 10 月于新疆医科大学第六附属医院住院行剖宫产分娩的 46 例孕妇的胎盘组织作为研究对象,将其中23 例sPE患者的胎盘组织作为sPE组,23 例健康孕妇的胎盘组织作为对照组.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blotting和免疫组织化学染色法检测两组胎盘组织中LASP1 mRNA与蛋白的表达.将人滋养层细胞系HTR-8 分别转染过表达LASP1 的pcDNA3.1 质粒(pcDNA-LASP1)或阴性对照质粒(pcDNA-NC),采用TGF-β1 处理上述细胞,并将其分为Ctrl组、TGF-β1 组、TGF-β1+pcDNA-NC组和TGF-β1+pcDNA-LASP1 组.分别采用Transwell实验和Western blotting法检测各组HTR-8 细胞迁移、侵袭能力和细胞中上皮-间质转化(EMT)相关蛋白上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达.采用Western blotting法检测各组HTR8 细胞中TGF-β1/Smad通路pSmad2/3 和Smad7 蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,LASP1 mRNA与蛋白在sPE组胎盘组织中的表达水平均显著降低(P＜0.05).与Ctrl组相比,TGF-β1 组、TGF-β1+pcDNA-NC组和TGF-β1+pcDNA-LASP1 组HTR-8 细胞侵袭、迁移能力和E-cadherin蛋白表达均显著降低,而N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平显著升高(P＜0.05);与TGF-β1+pcDNA-NC组相比,TGF-β1+pcDNA-LASP1 组HTR-8 细胞侵袭和迁移能力和E-cadherin蛋白表达水平均显著升高,N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平显著升高(P＜0.05).与Ctrl组相比,TGF-β1 组、TGF-β1+pcDNA-NC 组和TGF-β1+pcDNA-LASP1组HTR-8 细胞pSmad2/3 表达水平显著升高,而 Smad7 表达水平显著降低(P＜0.05).与 TGF-β1+pcDNA-NC组相比,TGF-β1+pcDNA-LASP1 组 pSmad2/3 表达水平降低,Smad7 表达水平升高(P＜0.05).结论 过表达LASP1 可通过抑制 TGF-β1/Smad 通路来改善 sPE 患者滋养细胞迁移、侵袭和EMT功能损伤.

目的 探讨房颤合并肺部感染转化生长因子β(TGF-β)转导途径的变化及其诊断价值.方法 选择2020年1月-2022年7月衡水市人民医院收治的194例房颤患者为研究对象,根据是否合并肺部感染,分成感染组92例和未感染组102例,同时纳入同期在医院体检的100名健康志愿者为对照组.采集三组受试者外周血,检测外周血单个核细胞TGF-β/Smad信号通路蛋白水平.比较三组受试者炎性因子指标、左心房结构指标和T细胞细胞水平,受试者工作特征(ROC)曲线评估TGF-β/Smad信号通路蛋白表达对肺部感染的诊断效能.结果 感染组外周血单个核细胞TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7、pSmad2和pSmad3蛋白、血清白细胞介素-6(IL-6)、高敏C-反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、左心房直径(LAD)、背向散射积分值(IBS)、CD8+高于未感染组和对照组,且未感染组高于对照组(P＜0.05).感染组CD4+、CD4+/CD8+、背向散射积分周期变化幅度(CVIB)高于未感染组和对照组,且未感染组高于对照组(P＜0.05).此外,TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7、pSmad2和pSmad3蛋白在房颤并发肺部感染预测中的价值较高(P＜0.05).结论 房颤合并肺部感染后TGF-β/Smad信号通路异常表达,并参与机体炎症反应、左心房重构及免疫功能应激反应,且TGF-β/Smad蛋白表达可应用于房颤合并肺部感染的诊断.

目的:了解腓骨蛋白-2(Fibulin-2,FBLN2)在急性Stanford A型主动脉夹层患者主动脉壁的表达情况并研究FBLN2调控的TGF-β/Smad信号通路在血管平滑肌细胞凋亡中的作用.方法:通过免疫组化染色和WesternBlot检测急性Stanford A型主动脉夹层手术切除的主动脉标本FBLN2表达,并以重组FBLN2作用于体外培养的小鼠主动脉血管平滑肌细胞,通过Western Blot检测TGF-β1、Smad2/3和磷酸化Smad2/3的表达改变,同时使用A83-01阻断TGF-β1信号,观察平滑肌细胞凋亡情况.结果:FBLN2在急性Stanford A型主动脉夹层患者主动脉壁中表达显著升高(P＜0.01),主要分布在主动脉中层.重组FBLN2可上调小鼠主动脉平滑肌细胞TGF-β1、pS-mad2/3的表达(P＜0.01),并抑制小鼠主动脉平滑肌细胞的凋亡(P＜0.01).当TGF-β1的作用被A83-01阻断时,重组FBLN2对主动脉平滑肌细胞凋亡的抑制作用显著减弱(P＜0.05).结论:FBLN2在急性Stanford A型主动脉夹层患者主动脉壁中层表达上调,并通过调控TGF-β/Smad信号通路抑制血管平滑肌细胞凋亡.FBLN2有可能参与急性Stanford A型主动脉夹层的发生.