目的:研究 elavl1/HuR对斑马鱼肠神经系统早期发育的影响。 方法:应用免疫组化方法检测elavl1、HuC/HuD在野生型斑马鱼肠道的表达。挑选25个斑马鱼胚胎，应用Western Blot法检测elavl1在受精后24～96 h野生型斑马鱼中的蛋白表达水平。在野生型斑马鱼胚胎处于1细胞期时分别显微注射4 ng、8 ng elavl1a morpholino和8 ng control morpholino，挑选25个受精后24 h的胚胎采用Western Blot法检测elavl1的蛋白表达，免疫组化检测受精后72 h、96 h的胚胎斑马鱼肠道神经元的分布情况。 结果:elavl1在斑马鱼全身都有表达，而HuC/HuD在第四天斑马鱼肠道部位出现表达；在受精后24～96 h时期，elavl1在斑马鱼中的蛋白表达量随斑马鱼生长而增加，且受精后96 h时elavl1蛋白量明显高于受精后24 h、48 h、72 h，差异有统计学意义( P<0.05)；分别注射4 ng、8 ng elavl1a Mo和8 ng Con Mo后，发现注射8 ng Con Mo组elavl1蛋白含量高于其他两组，且差异有统计学意义( P<0.05)；敲降elavl1a后免疫组化显示在受精后72 h时三组都不能在肠道末端明显观察到神经元，受精后96 h时可以观察到 elavl1a Mo 8 ng组和 elavl1a Mo 4 ng组较Con Mo 8 ng组斑马鱼肠神经元数量有所减少，每组随机抽取5条斑马鱼统计肠道末端到前面四个体节长度的肠道神经元数量，发现 elavl1a Mo 8 ng组和 elavl1a Mo 4 ng组较Con Mo 8 ng组斑马鱼肠神经元数量差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:elavl1a是斑马鱼肠神经发育过程中重要基因，敲降elavl1a会减少肠神经元细胞数量。

目的 分析环状RNA同源结构域相互作用蛋白激酶3(circ_HIPK3)靶向miR-381-3p/锌指蛋白217(ZNF217)轴对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的海马神经元功能和形态的影响.方法 制备新生大鼠海马神经元,分为对照组、Aβ组、si NC1组、si HIPK3组、si HIPK3+inhibitor NC组、si HIPK3+miR-381-3p inhibitor组、si HIPK3+miR-381-3p inhibitor+si NC2组、si HIPK3+miR-381-3p inhibitor+si ZNF217组,除对照组外其余组均通过40 μmol/L Aβ1～42诱导.qRT-PCR法测定海马神经元circ_HIPK3、miR-381-3p、ZNF217 mRNA表达,透射电镜观察细胞形态,CCK-8法测定海马神经元存活率,Hochesst 33342法测定海马神经元凋亡,流式细胞仪检测海马神经元内Ca2+荧光强度,Western blot法测定海马神经元磷酸化Tau蛋白(P-Tau)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、ZNF217蛋白表达,双萤光素酶报告基因分析miR-381-3p与circ_HIPK3、ZNF217靶向关系.结果 对照组海马神经元结构正常,胞核形态正常,线粒体、内质网无病理改变;Aβ组海马神经元呈退行性改变,核形态异常,膜内陷,可见大量线粒体肿胀,胞浆内含大量脂滴空泡;与Aβ组相比,si HIPK3组海马神经元结构部分恢复;与si HIPK3组相比,si HIPK3+miR-381-3p inhibitor组海马神经元结构损伤严重;与si HIPK3+miR-381-3p inhibitor组相比,si HIPK3+miR-381-3p inhibitor+si ZNF217组海马神经元结构损伤减轻.与对照组相比,Aβ组海马神经元circ_HIPK3、ZNF217 mRNA和蛋白表达、凋亡率、Ca2+荧光强度、P-Tau、Bax、Caspase-3蛋白表达升高,miR-381-3p表达、存活率、Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.05);与Aβ组相比,si HIPK3组海马神经元circ_HIPK3、ZNF217 mRNA和蛋白表达、凋亡率、Ca2+荧光强度、P-Tau、Bax、Caspase-3蛋白表达降低,miR-381-3p表达、存活率、Bcl-2蛋白表达升高(P＜0.05);与si HIPK3组相比,si HIPK3+miR-381-3p inhibitor组海马神经元circ_HIPK3、ZNF217 mRNA和蛋白表达、凋亡率、Ca2+荧光强度、P-Tau、Bax、Caspase-3蛋白表达升高,miR-381-3p水平、存活率、Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.05);与si HIPK3+miR-381-3p inhibitor组相比,si HIPK3+miR-381-3p inhibitor+si ZNF217组海马神经元ZNF217 mRNA和蛋白表达水平、凋亡率、Ca2+荧光强度、P-Tau、Bax、Caspase-3蛋白表达降低,存活率、Bcl-2蛋白表达升高(P＜0.05);miR-381-3p与circ_HIPK3、ZNF217均靶向结合.结论 circ_HIPK3沉默可能通过调控miR-381-3p/ZNF217轴改善Aβ诱导的海马神经元结构功能损伤.

目的 探讨环状RNA(circRNA)-锌指蛋白532(ZNF532)、circRNA-同源域相互作用蛋白激酶3(HIPK3)与糖尿病视网膜病变(DR)的相关性.方法 纳入109例DR患者(DR组)、110例单纯糖尿病患者(DM组)和65例健康体检志愿者(对照组).实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达,酶联免疫吸附试验检测血清血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6水平.Pearson分析DR患者血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达与血清VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平相关性.单因素和多因素Logistic回归分析DR危险因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3诊断DR的价值.结果 DR组血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达以及VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平高于DM组和对照组(P＜0.05).DR组血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达与VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平均呈正相关(P＜0.05).多因素Logistic回归分析结果 显示高水平circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3及VEGF是糖尿病患者发生DR的独立危险因素(P＜0.05).三者诊断糖尿病患者发生DR的曲线下面积分别为0.736、0.740和0.864,联合诊断高于单独诊断(P＜0.05).结论 糖尿病患者血清中circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达上调与DR发生有关,两者可以作为DR辅助诊断的潜在指标.

目的:分析tristetraprolin(TTP)在大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后的相对表达水平,以及TTP对SAH后早期脑损伤(early brain injury,EBI)的作用及其可能机制.方法:将56只成年雄性SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组(sham组)和SAH组,采用血管内穿刺法建立SAH模型,SAH组分别于出血后0、12、24、48、72 h和1周取脑组织,Western blot法检测TTP在不同组别中的表达;另取60只成年雄性SD大鼠,随机分成sham组、SAH组、SAH+对照质粒(vector)组和SAH+TTP组,SAH造模48 h后检测神经功能损伤和脑组织含水率;检测脑组织内伊文思蓝(Evans blue,EB)含量以评估血脑屏障通透性;TUNEL法检测大脑皮层细胞凋亡;ELISA法检测脑组织中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达;Western blot法检测脑组织中TTP、Bax、Bcl-2和cleaved caspase-3的水平.结果:与sham组比较,TTP在SAH后12 h开始表达下调,在48 h时表达最低,随后呈上升趋势;SAH组大鼠Garcia神经功能评分较sham组明显降低,脑组织含水率和EB含量较sham组均明显升高(P<0.01),脑组织中IL-6和TNF-α的表达上调(P<0.05);SAH组大鼠脑出血后细胞凋亡率显著上升(P<0.01),Bax和cleaved caspase-3的表达升高(P<0.01),而Bcl-2的表达下调(P<0.01);与SAH+vector组比较,SAH+TTP组大鼠Garcia神经功能评分明显升高,脑组织含水率和EB含量均明显降低(P<0.05),IL-6和TNF-α在脑组织中的表达下调(P<0.05),细胞凋亡率显著下调(P<0.01),Bax和cleaved caspase-3的表达下调(P<0.01),而Bcl-2的表达上调(P<0.01).结论:大鼠SAH后早期TTP表达下调,并通过其促凋亡机制参与EBI发生;上调TTP可显著减轻大鼠SAH后EBI.

目的 研究RNA结合蛋白tristetraprolin在肺腺癌中的表达及抑制自噬作用的分子机制.方法 瞬时转染tristetraprolin过表达质粒,分别在转染tristetraprolin 24、48及72 h后采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测肺腺癌细胞中tristetraprolin表达及自噬相关分子Beclin1、LC3II/LCI及p62的表达变化.瞬时转染tristetraprolin过表达质粒及加入TNF-α,将肺腺癌细胞分为空载组、tristetraprolin组、空载+TNF-α组及tristetraprolin+TNF-α组,应用免疫荧光和Western blot检测NF-?B p65、c-rel、p50分子在细胞核中表达情况.共转染tristetraprolin过表达质粒及IκBα-mut质粒,将肺腺癌细胞分为tristetraprolin空载组、IκBα-mut空载组、tristetraprolin组、IκBα-mut组及tristetraprolin+IκBα-mut组,采用RT-qPCR和Western blot检测tristetraprolin表达及自噬相关基因表达变化.结果 Tristetraprolin在肺腺癌细胞中RNA及蛋白水平表达低(P<0.001).过表达tristetraprolin后,自噬相关基因Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ在RNA及蛋白水平表达均较空载组降低(P<0.001).同时,过表达tristetraprolin后,细胞核内的p65及c-rel蛋白表达较空载组及空载+TNF-α组减少(P<0.05),但p50表达无明显变化(P>0.05).过表达tristetraprolin后,p65及c-rel核移位较空载组减少.共转染IκBα突变质粒及tristetraprolin过表达质粒后,NF-κB信号通路被阻断,自噬相关基因Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ在RNA及蛋白水平表达较tristetraprolin过表达组升高(P<0.05),NF-?B信号通路被阻断后tristetraprolin对自噬的抑制作用减弱.结论 Tristetraprolin在肺腺癌细胞中低表达,过表达tristetraprolin可能通过抑制NF-?B p65及c-rel核移位而抑制肺腺癌细胞自噬.

目的:探讨RNA结合蛋白Tristetraprolin(TTP)对大鼠胰岛 β细胞RINm凋亡的影响.方法:取培养增殖期的NR8383巨噬细胞,分别转染不同载体,设为空载体组(pcDNA 3.1组)、TTP过表达载体组(pcDNA 3.1-T T P组)、T T P抑制载体组(si-T T P组)、阴性对照组(si-NC组)和空白对照组(NC组),于转染后12h,更换新鲜培养基,继续培养至36h,取各组巨噬细胞和部分上清,采用RT-qPCR和Western bloting检测其TTP和白细胞介素-6(IL-6)mRNA及其蛋白表达水平.取各组剩余上清液加入体外培养大鼠胰岛β细胞株,形成与前述对应的pcDNA 3.1+RINm组、pcDNA 3.1-TTP+RINm组、si-TTP+RINm组、si-NC+RINm组和NC+RINm组,再培养24h,采用流式细胞术检测各组胰岛RINm细胞凋亡率.结果:(1)pcDNA 3.1-TTP组TTP mRNA和蛋白水平较pcDNA 3.1组明显升高(P<0.01),IL-6 mRNA和蛋白水平较pcDNA 3.1组明显降低(P<0.01);si-TTP组TTP mRNA和蛋白水平较pcDNA 3.1组显著降低(P<0.01),IL-6 mRNA和蛋白水平较pcDNA 3.1组显著升高(P<0.01).pcDNA 3.1组、si-NC组和NC组间TTP、IL-6 mRNA和蛋白水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(2)pcDNA 3.1-TTP+RINm组胰岛RINm细胞凋亡率较pcDNA 3.1+RINm组明显降低(P<0.01);si-TTP+RINm组胰岛RINm细胞凋亡率较pcDNA 3.1+RINm组明显升高(P<0.01).pcDNA 3.1+RINm组、si-NC+RINm组和NC+RINm组间胰岛RINm细胞凋亡率比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论:过表达TTP可能通过抑制巨噬细胞分泌炎性因子,进而抑制胰岛β细胞凋亡.

目的 探讨β2肾上腺素受体(β2AR)激动剂沙丁氨醇在脂多糖(lipopolysacchride,LPS)诱导的急性肺损伤肺部炎症反应的作用及其分子机制.方法 36只6-8周龄雄性BALB/c小鼠被随机分为3组:对照组(Con组)12只,无菌PBS持续雾化30 min;LPS组12只,2.5 mg/ml LPS溶液持续雾化30 min;沙丁氨醇处理组(LPS+SALB组)12只,一次性腹腔注射5 mg/kg的沙丁氨醇,间隔30 min,再给予2.5 mg/ml LPS溶液持续雾化30 min.雾化结束后第24小时处死小鼠,收集各组小鼠右肺支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF),计数细胞总数及中性粒细胞分类,检测上清液TNF-α、IL-1β、IL-6浓度;取各组小鼠左肺下叶肺组织HE染色,免疫印迹方法 检测左肺上叶肺组织中tristetraprolin(TTP)蛋白水平.结果 LPS组小鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞分类计数及TNF-α、IL-1β、IL-6水平均较对照组明显升高(P<0.05);LPS组肺组织的正常形态结构消失,内皮细胞和上皮细胞破坏严重,肺水肿、肺出血,以中性粒细胞为主的炎症细胞大量浸润,肺组织中TTP蛋白水平较对照组亦明显升高(P<0.05).LPS+SALB组小鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞分类计数以及TNF-α、IL-1β、IL-6水平较LPS组显著下降(P<0.05),肺部炎症反应较LPS组明显减轻;伴随肺组织中的TTP蛋白较LPS组明显升高(P<0.05).结论 β2AR 激动剂沙丁氨醇可能通过促进TTP 蛋白表达,抑制炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6 的表达,从而抑制 LPS诱导的肺部炎症损伤.

目的 探究电针丰隆穴对高脂血症患者的降脂疗效及对巨噬细胞与人血清共培养Janus激酶2/信号传导和转录激活子3信号通路/锌指蛋白36(JAK2/STAT3/TTP信号通路)的影响.方法 将90例辨证为痰浊阻遏证高脂血症患者,随机分为电针组、药物组与对照组,每组30例.电针组予以电针针刺丰隆穴治疗;药物组予以口服血脂康治疗;对照组予以非经非穴针刺治疗.观察治疗前后及治疗后1月、2月、6月3组患者总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)的水平变化;取各组患者血清,与人THP-1巨噬细胞共培养,并采用实时定量聚合酶链反应法(RT-PCR)及免疫印迹法(Western Blotting)检测巨噬细胞JAK2、STAT3、TTP mRNA和蛋白表达,并加以比较.结果 治疗结束后,电针组总有效率83.3％,药物组总有效率86.6％,两者改善血脂总有效率无统计学差异(P>0.05);电针组与药物组TC、TG、LDL-C下降水平比较,差异无统计学意义(P>0.05).与治疗后比较,治疗后2月、治疗后6月,药物组TC、TG、LDL-C有所升高,差异有统计学意义(P<0.05),电针组未见明显差异(P>0.05).治疗后电针组与药物组巨噬细胞JAK2、STAT3、TTP及蛋白表达较对照组均显著升高(P<0.05);电针组与药物组比较,两者变化无明显差异(P>0.05).结论 电针丰隆穴可降低患者TC、TG、LDL-C水平,且疗效较药物持久,可促进巨噬细胞JAK2、STAT3、TTP mRNA和蛋白的表达,促进胆固醇逆转运,减弱炎症活动,由此实现对动脉粥样硬化性心脑血管疾病的有效防治.

Egg granuloma formation in the liver is the main pathological lesion caused by Schistosoma japonicum infection,which generally results in liver fibrosis and may lead to death in advanced patients.MicroRNAs(miRNAs)regulate the process of liver fibrosis,but the putative function of miRNAs in liver fibrosis induced by S.japonicum infection is largely unclear.Here,we detect a new miRNA,miR-182-5p,which shows significantly decreased expression in mouse livers after stimulation by soluble egg antigen(SEA)of S.japonicum or S.japonicum infection.Knockdown or overexpression of miR-182-5p in vitro causes the increased or decreased expression of tristetraprolin(TTP),an important immunosuppressive protein in the process of liver fibrosis.Furthermore,knockdown of miR-182-5p in vivo upregulates TTP expression and significantly alleviates S.japonicum-induced hepatic fibrosis.Our data de-monstrate that downregulation of miR-182-5p increases the expression of TTP in mouse livers following schisto-some infection,which leads to destabilization of inflammatory factor mRNAs and attenuates liver fibrosis.Our results uncover fine-tuning of liver inflammatory reactions related to liver fibrosis caused by S.japonicum infection and provide new insights into the regulation of schistosomiasis-induced hepatic fibrosis.