Ⅱ型鼠李半乳糖醛酸聚糖(RG-Ⅱ)是果胶结构域中的一种,其结构在不同物种之间具有高度的保守性.RG-Ⅱ的主链由约 9个半乳糖醛酸经α-1,4糖苷键连接而成,并被 6个(A-F)明确定义的侧链取代.其中二糖侧链C、D和单糖侧链E、F的结构在不同来源的RG-Ⅱ中基本保持相同.寡糖侧链A和B则存在轻微的变异性.通过相对分子质量、单糖组成和质谱分析等手段可实现RG-Ⅱ的结构表征.中药中含有RG-Ⅱ结构域的多糖具有很高的药用价值,使用内切多聚半乳糖醛酸酶(Endo-PG)和草酸青霉可将RG-Ⅱ从中药中分离并对其在多糖中的含量进行测定.从葡萄酒中可快速制备大量RG-Ⅱ标准品用于新定量方法的开发,实现对中药活性多糖的质量控制,推动中药多糖的研究进程.

目的:分析法布里病（Fabry disease，FD）患者临床表现特点、酶替代治疗疗效及不良反应。方法:收集2020年6月至2021年9月山东第一医科大学附属省立医院确诊的FD患者的临床资料，回顾性分析患者的临床表现、实验室检查、基因突变类型、酶替代治疗疗效及不良反应。结果:16例FD患者入选本研究，其中经典型12例，迟发型4例，临床表现各异。与迟发型组患者比较，经典型组患者发病年龄较轻（ P=0.001），血浆α半乳糖苷酶A（α-Gal A）活性较低（ P=0.016）；脱乙酰基三己糖酰基鞘脂醇（Lyso-GL-3）水平较高（ P=0.030）。经典型组[（13.50 ±10.08）年]和迟发型组[（10.75 ±7.27）年]患者延迟诊断时间均较长。7例接受规律酶替代治疗6次的患者血浆Lyso-GL-3水平较治疗前显著下降（ P=0.018），5例患者疼痛缓解。3例不规律酶替代治疗患者症状加重；1例患者在规律酶替代治疗期间仍有脑卒中发作。阿加糖酶β和α用药均未发生严重不良反应。 结论:酶替代治疗可有效降低FD患者血浆Lyso-GL-3水平，缓解临床症状，安全性较好，但疗效具有剂量依赖性，临床获益需要更长时间的观察和随访。酶替代治疗要求患者依从性较好，且能接受长期规律治疗。

目的:探讨肺炎克雷伯菌(KP)外膜蛋白A(OmpA)和黏附素MrkD优势抗原表位融合蛋白对KP感染小鼠的免疫保护作用。方法:根据(美国)国家生物技术信息中心(NCBI)公布的KP ompA和mrkD序列，通过生信分析选取这两个蛋白的优势抗原表位，经融合聚合酶链反应(PCR)扩增表位序列后克隆至pColdI载体，并转入本科室保存的大肠杆菌BL21(DE3)，经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导，Ni ＋层析凝胶纯化后获得重组蛋白rAD。rAD经皮下免疫22只BALB/c小鼠，同时设置22只佐剂对照组。完成免疫程序后通过酶联免疫吸附试验(ELISA)对小鼠血清中的抗体水平和脾脏体外抗原刺激后细胞因子分泌水平进行测定，并对小鼠鼻腔注射KP，观察免疫后的小鼠存活率和肺脏细菌数量。组间比较采用 t检验。 结果:分别扩增出ompA和mrkD抗原表位序列，并成功融合，融合片段大小为1 056 bp，与预测大小一致，克隆至pColdI载体后测序，测序正确。重组表达菌BL21(DE3)-pColdI-rAD经IPTG诱导后破碎收集上清纯化，获得可溶性rAD，大小为38.4×10 3，与预测大小一致。rAD 3次免疫BALB/c小鼠后，免疫组抗体滴度显著高于对照组(170 667.00±59 121.00比0.00±0.00， t＝5.00， P<0.01)。KP感染小鼠后，免疫组小鼠存活率显著高于对照组[(65.00±5.00)%比(0.00±0.00)%， t＝22.52， P<0.01]，免疫组小鼠肺脏细菌数显著低于对照组[(9 500.00±1 384.00) CFU比(87 833.00±25 365.00) CFU， t＝7.55， P<0.01]。脾细胞分离后经rAD刺激，免疫组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)分泌量均显著高于对照组[(115.70±17.21) pg/ml比(24.00±9.17) pg/ml， t＝8.14， P<0.01；(200.30±8.51) pg/ml比(9.00±3.00) pg/ml， t＝36.75， P<0.01；(92.33±6.11) pg/ml比(9.67±1.53) pg/ml， t＝22.73， P<0.01]。 结论:KP OmpA和MrkD优势抗原表位融合蛋白rAD，免疫BALB/c小鼠有助于对KP感染的抵抗。

目的:探讨囊性肾病(CKD)囊液中的炎症因子成分以及对周围免疫微环境的影响。方法:选取2021年1月至2021年6月在本院诊断为多囊肾或肾囊肿并行后腹腔镜下肾囊肿去顶减压术的20例患者的囊壁组织作为实验组，同期体检的20例患者的囊壁组织作为对照组。分别采用流式多因子检测实验组的囊液成分及对照组血清，细胞增殖检测实验(CCK8)、克隆形成实验检测囊液对肾小管上皮细胞(HK2)增殖的影响，β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老，蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测可能的信号通路，免疫组织化学法检测巨噬细胞标志物(CD68、CD163)及纤维化标志物(α-SMA)在囊壁组织中的表达情况，Transwell实验检测巨噬细胞的迁移。结果:实验组的IL-2、IL-6、IL-10较对照组明显升高，差异均有统计学意义(均 P<0.0 05)。CCK8实验结果显示实验组在囊液刺激3 d后的细胞增殖较对照组明显增加，差异有统计学意义( P＝0.016)。克隆形成实验结果显示实验组在囊液刺激2周后的细胞克隆形成数较对照组增多，差异有统计学意义( P＝0.037)。细胞衰老检测结果显示实验组在囊液刺激1周后的β-半乳糖苷酶阳性的衰老细胞百分率高于对照组，差异有统计学意义( P＝0.004)。Western blot法检测结果显示，实验组在囊液刺激后GSK-3β表达量增高，β-catenin表达量降低。Transwell迁移实验结果显示与对照组比较，实验组的囊液能够明显趋化巨噬细胞，差异有统计学意义( P<0.0 05)。 结论:巨噬细胞参与CKD囊液形成、细胞老化、纤维化，为下一步免疫治疗提供理论基础。

法布雷病是一种X染色体连锁遗传溶酶体贮积症。由于编辑α半乳糖苷酶A的基因GLA发生致病突变，导致α半乳糖苷酶A活性下降或完全缺失，造成其分解底物无法被代谢并沉积于多个器官和组织而产生多系统功能损害。心血管受累是法布雷病患者最主要的死因，主要表现为进展性左心室肥厚、心律失常、心肌缺血，最终导致心力衰竭和心原性猝死。酶替代疗法是法布雷病的主要特异性治疗，可有效改善心肌肥厚，降低心血管事件发生率。早期诊断、特异性治疗是减少法布雷病心血管并发症和降低相关死亡率的关键。

目的:探讨FOXO4-DRI能否逆转放射性肺纤维化(RIPF)及其作用机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分为对照组、FOXO4-DRI组、照射组、照射＋ FOXO4-DRI组，照射组和照射＋ FOXO4-DRI组小鼠右侧全胸接受17 Gy X射线照射，FOXO4-DRI组和照射＋ FOXO4-DRI组小鼠照射后第16周和第20周分别腹腔注射FOXO4-DRI。照射后第24周收集小鼠右肺组织，进行HE染色和Masson三色染色，观察肺组织形态学改变和胶原沉积情况；免疫组织化学染色法检测肺组织中col1α1和α-SMA的表达；β-半乳糖苷酶(β-gal)染色观察衰老细胞；活性氧试剂盒检测肺组织活性氧水平；RT-PCR检测P21、P16 Ink4a和衰老相关分泌表型(SASP)mRNA的表达；Western blot检测相关蛋白表达水平。 结果:FOXO4-DRI减少了RIPF小鼠肺组织中胶原组织的沉积( t＝6.18， P<0.05)，降低了col1α1和α-SMA的表达( t＝4.69、3.20， P<0.05)。FOXO4-DRI减少了RIPF小鼠肺组织中β-gal阳性细胞的数量( t＝6.09， P<0.05)。FOXO4-DRI能够抑制RIPF小鼠肺组织中P21和P16 Ink4a基因、蛋白的表达( t＝5.31、3.32和4.77、3.37， P<0.05)，抑制SASP基因IL-1α、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNFα)和MMP2的表达( t＝4.36、4.84、4.47、3.82， P<0.05)。FOXO4-DRI能够降低RIPF小鼠肺组织中活性氧水平( t＝2.84， P<0.05)，促进p-AKT和p-PI3K蛋白的激活( t＝－7.13、－12.61， P<0.05)。 结论:FOXO4-DRI通过激活PI3K/AKT信号通路减少氧化应激、抑制细胞衰老，逆转RIPF。

患儿男性，9岁9个月。因发热、腹痛半天入院。体检发现右下腹麦氏点明显压痛。腹部B超检查提示阑尾炎可能。家族史，家族中有多人曾有手足疼痛，其表哥近期确诊法布雷病。于入院当日行阑尾切除术，术中见阑尾肿胀充血。阑尾组织病理学检查（电镜见大量髓样小体）、α-半乳糖苷酶A活性检测（0.4 μmol·L -1·h -1）及基因检测（GLA c.100A>C p.N34H变异）确诊法布雷病。予患儿阿加糖酶β每次1 mg/kg，两周1次，治疗一年余，目前患儿的手足疼痛等症状较前好转。对其家系进行筛查发现，5例有手足疼痛的成年女性患者，但直至出现3例男性患儿才被确诊。提示，经典型法布雷病患者早期即有明显的消化道累及。女性法布雷病的早期诊断对阻断本病向子代遗传具有重要意义。

目的:探讨腓骨蛋白-1(Fibulin-1)在高磷诱导的大鼠平滑肌细胞衰老相关钙化过程中的作用及其机制。方法:2020年9月至2021年9月自10只6~8周的雄性SD大鼠胸主动脉和腹主动脉提取大鼠原代血管平滑肌细胞。采用磷酸盐(2.5 mmol/L Pi)刺激大鼠平滑肌细胞钙化作为应激性衰老相关钙化模型。通过β-半乳糖苷酶染色评估细胞衰老。通过茜素红染色和细胞钙含量测定判断细胞钙化程度。蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测平滑肌细胞在衰老相关钙化过程中发生表型转化的指标和Fibulin-1表达水平。使用siRNA敲低原代大鼠平滑肌细胞中Fibulin-1表达，免疫荧光检测Psmad3的表达，Western Blot检测Fibulin-1对平滑肌细胞表型转化指标的影响。用重组Fibulin-1培养，并同时加入转化生长因子(TGF)-β抑制剂A83-01和Psmad3抑制剂SIS3，通过Western Blot检测平滑肌细胞衰老和钙化指标。结果:在磷酸盐刺激大鼠平滑肌细胞钙化的应激性衰老模型中，Fibulin-1的表达上调( t＝11.20， P<0.01)，平滑肌细胞收缩表型标志物MHC、SM22α表达下调( t值分别为7.97、10.27，均 P<0.01)，成骨表型标志物OPN、Bmp2和衰老标志物P53的表达上调( t值分别为4.80、9.56、14.07，均 P<0.01)。Fibulin-1敲低后改善了细胞衰老程度和钙沉积( t＝12.90， P<0.05)、降低了平滑肌细胞表型转化蛋白OPN、Bmp2和衰老蛋白P53的表达( t值分别为5.92、10.15、8.28， P<0.05或 P<0.01)，同时TGF-β/信号转导蛋白(Smad3)及Psmad3表达被抑制( t值分别为12.90、7.46，均 P<0.01)。加入TGF-β/Smad3通路抑制剂后，重组Fibulin-1对平滑肌细胞表型转化蛋白OPN、SM22α和衰老标志蛋白表达P53的促进作用减弱( t值分别为4.52、9.82、3.85， P<0.01或 P<0.05)。 结论:Fibulin-1可通过TGF-β/smad3信号通路促进血管平滑肌细胞发生衰老相关钙化。

男性患儿，11岁出现皮疹，12岁出现肢端疼痛，14岁发现晨起眼睑水肿、泡沫尿，15岁时肢端疼痛难忍，尿蛋白4+就诊。辅助检查示，血压137/97 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），尿蛋白6.94 g/24 h，血肌酐124.7 μmol/L，尿素氮7.38 mmo1/L，尿酸582 μmol/L。超声心动图检查示左心室心肌普遍性稍增厚。肾穿刺活检组织病理见大量髓样小体。α-半乳糖苷酶A活性0.31。全外显子基因检测示GLA有一个半合子突变c.974G>A（p.G325D）。诊断法布雷病，慢性肾脏病3期。2020年8月20日起启动酶替代疗法，予阿加糖酶β 40 mg（约0.9 mg/kg）每2周输注1次，2021年1月1日起阿加糖酶β 40 mg每3周输注1次。2021年7月28日调整阿加糖酶β 45 mg（约1 mg/kg）每周输注2次。经酶替代疗法治疗1年余，血肌酐进行性升高至702 μmol/L，16岁9个月时迅速进展至终末期肾病尿毒症期，予腹膜透析治疗，17岁行肾移植术，目前继续规律酶替代疗法。通过对该病病因、临床特征、诊疗等进行归纳总结，为早期诊断、治疗及后续研究提供参考依据。

目的:分析酶替代疗法治疗法布里病（Fabry disease）的有效性和安全性。方法:回顾性收集和分析2020年7月至2021年5月期间浙江大学医学院附属第一医院收治的5例法布里病患者的临床资料、基因检测及家系调查结果、酶替代治疗效果和不良反应。5例患者阿加糖酶β用量为1 mg·kg -1·次 -1静脉泵注，每2周用药1次。 结果:5例患者均为男性，中位年龄37岁（29~51岁），均通过结合临床表现、家族史、肾病理检查、α-半乳糖苷酶A（α-Gal A）活性检测及基因检测结果明确诊断。临床表现多样，所有患者均有尿检异常及心电图和心脏B超异常，肾功能不全4例，幼年时肢端疼痛3例（持续至成年1例），皮肤血管角化瘤3例，少汗4例，腹泻4例，角膜涡状混浊4例，高频听力异常2例。基因测序结果显示，2例为 GLA基因错义变异[c.272T>C(p.I91T)，c.868A>G(p.Met290Val)]，1例为移码突变[c.348del p.(Ile117Phefs*4)]，2例为无义突变[c.1024C>T(p.Arg342*)，c.838C>T(p.Gln280*)]，其中移码突变患者表现为经典型法布里病，该变异在已知数据库中未见收录。5例患者输注阿加糖酶β过程中均未发生严重不良反应。酶替代治疗2~10个月后，5例患者血浆三己糖酰基鞘脂醇（Lyso-GL-3）水平较治疗前显著下降（ P<0.05），4例患者长期腹泻症状在用药后明显改善。 结论:法布里病临床表现和基因变异多样，短期阿加糖酶β治疗未见严重不良反应，治疗后患者血浆Lyso-GL-3水平显著下降。