目的:利用生物信息学方法筛选外阴鳞状细胞癌(VSCC)的关键基因及分析免疫浸润特征.方法:从GEO数据库中下载VSCC相关基因表达数据,应用差异表达基因(DEGs)分析和加权基因共表达网络分析筛选出共同的DEGs,对DEGs进行富集分析.采用STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白互作(PPI)网络,并通过4种算法筛选出关键基因,进行关键基因GSEA分析.应用CIBERSORT分析VSCC相关免疫细胞浸润特征及关键基因与免疫细胞的相关性.结果:共筛选出182个DEGs,DO富集主要涉及生殖器官良性肿瘤、结缔组织癌等疾病;GO和KEGG富集结果主要与表皮发育、角质化包膜、氧化应激、免疫细胞迁移等有关;PPI网络中有65个节点,90条边,筛选出6个关键基因,S100A7、SPRR2B、SPRR2G、CASP14、CDSN、ESR1,共同富集到了细胞周期、蛋白酶体信号通路.免疫浸润分析结果显示,与对照组相比,VSCC组初始B细胞、静息CD4+T记忆细胞下调(均P＜0.05),记忆B细胞、调节性T细胞、活化的NK细胞、巨噬细胞M0型、静息肥大细胞、活化的肥大细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞上调(均P＜0.05).Spearman相关性分析显示,S100A 7、SPRR2G、CASP14、CDSN均与γδT细胞呈负相关(均P＜0.05),与巨噬细胞M0型呈正相关(均P＜0.05);ESR1与巨噬细胞M0型呈负相关(P＜0.05),与静息CD4+T记忆细胞呈正相关(P＜0.05);S100A7、CASP14 与静息 CD4+T 记忆细胞呈负相关(均 P＜0.05);SPRR2G、CDSN 与 CD8+T 细胞呈负相关(均 P＜0.05).结论:S100A7、SPRR2B、SPRR2G、CASP14、CDSN、ESR1可能是VSCC潜在的生物标志物,长期慢性炎症刺激导致表皮终末分化过程异常可能是VSCC发生、发展的关键因素.

目的 基于乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)诱导表达系统制备呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial vi-rus,RSV)口服疫苗,并对其免疫原性进行分析.方法 将构建的质粒pUC57-Pre F与pNZ8149分别经Nco Ⅰ和Kpn Ⅰ双酶切,酶切产物经T4 DNA连接酶连接后获得重组质粒pNZ8149-Pre F,电转化至感受态L.lactis NZ3900,经乳糖培养基筛选获得非分泌型重组L.lactis NZ3900/pNZ8149-Pre F,以nisin A为诱导剂诱导表达,经Western blot和免疫荧光标记对其表达产物进行分析;将雌性BALB/c小鼠随机分为PBS、L.lactis NZ3900/pNZ8149、L.lactis NZ3900/pNZ8149-Pre F组,15只/组,每只口服500 μL,于第1、2天进行初次免疫,第16、17天进行加强免疫,第14和28天经小鼠下颌取血并分离脾脏细胞,ELSIA法检测重组L.lactis NZ3900/pNZ8149-Pre F诱导的体液和黏膜免疫应答水平,ELISpot法检测重组L.lactis NZ3900/pNZ8149-Pre F诱导的细胞免疫应答水平.结果 重组L.lactis NZ3900/pNZ8149-Pre F经PCR及测序鉴定,证明构建正确;抗原蛋白Pre F特异性地表达在L.lactis NZ3900中,相对分子质量约 50 000;初次免疫后第 14 和 28天,与 PBS 和L.lactis NZ3900/pNZ8149组相比,L.lactis NZ3900/pNZ8149-Pre F组小鼠血清Pre F-特异性IgG抗体效价、肠洗液中特异性分泌型IgA抗体以及脾脏细胞中IFNγ和IL-4分泌水平均明显升高,且差异均有统计学意义(t=-30.268～-3.087,P均＜0.05).结论 基于L.lactis诱导表达系统构建的RSV 口服疫苗具有较强的免疫原性,为研发RSV黏膜疫苗提供了参考,也为开发其他病毒或细菌口服疫苗提供了新的研究策略及方法.

神经代谢障碍性疾病琥珀酸半醛脱氢酶(SSADH)缺乏症会导致严重的神经化学失衡和严重的神经表现.该病的病因是SSADH酶功能丧失,导致主要抑制性神经递质γ-氨基丁酸(GABA)代谢受损.尽管已知酶缺乏的身份,但SSADH缺乏症的潜在病理机制仍不清楚.为了揭示该病的新机制,我们在SSADH缺乏症的遗传小鼠模型(ALDH5A1基因敲除小鼠)中进行了脑蛋白表达、功能代谢和脂质组成的非靶向整合分析.我们的蛋白质组学分析显示存在明显的区域脆弱性,因为蛋白质改变主要在ALDH5A1基因敲除小鼠的海马体和大脑皮质中表现出来.这些区域显示出与氨基酸稳态、线粒体、胶质细胞功能和髓鞘形成相关的蛋白质异常表达.在急性分离的脑切片中进行稳定同位素示踪显示,葡萄糖的氧化代谢总体上得以维持,但ALDH5A1基因敲除小鼠大脑皮质的星形胶质细胞代谢活性有所下降.相比之下,在ALDH5A1基因敲除小鼠的大脑中观察到氧化性谷氨酰胺代谢能力增强,这可能是星形胶质细胞谷氨酰胺供应受损的神经元补偿.除了少突胶质细胞关键蛋白表达减少外,ALDH5A1基因敲除小鼠大脑中还发现富含髓鞘的神经鞘脂严重耗竭,表明髓鞘退化.综上所述,我们的研究表明星形胶质细胞和少突胶质细胞功能障碍与SSADH缺乏症病理密切相关,提示选择性靶向胶质细胞可能在该病的治疗中具有潜力.

目的:总结并分析儿童非结核分枝杆菌腮腺淋巴结炎的临床特点、影像学特征、病理学特征、治疗及预后,以提高对儿童非结核分枝杆菌腮腺淋巴结炎的认识.方法:回顾性分析2020年12月至2023年12月在广州市胸科医院住院诊断的3例儿童非结核分枝杆菌腮腺淋巴结炎的临床资料,包括一般资料(年龄、性别、身高、体质量、卡介苗接种史、结核病接触史等)、临床表现、实验室检查、影像学检查、手术及病理结果、治疗方案及预后.以"non-tuberculous mycobacteria,children,lymphadenitis"为检索词,在 PubMed 数据库中进行检索,检索时间为2004-2023 年,共检索到相关文献 189 篇,以"non-tuberculous mycobacteria,children,lymphadenitis,parotid gland"为检索词,在PubMed数据库中进行检索,仅检索到相关文献5篇;分别以"非结核分枝杆菌,儿童,淋巴结炎"和"非结核分枝杆菌,儿童,腮腺"为检索词,在万方数据库和中国知网数据库中进行检索,未检索到相关中文文献.阅读文献入选50例及本研究病例,共53例进行文献复习.结果:53例患者中,男性32例,女性21例,平均年龄为(2.71±1.52)岁.以反复颈面部肿物为主要表现,常为无痛性淋巴结肿大,病程1个月至1年,多数无发热,无明显咳嗽及其他呼吸道症状,彩色超声、CT及核磁检查提示腮腺脓肿,25例结核菌素皮肤试验阳性,10例脓液及病灶组织抗酸杆菌染色阳性,病理均提示慢性肉芽肿性炎,非结核分枝杆菌复合群核酸阳性,抗酸杆菌染色阴性,脓液及病灶组织GeneXpert MTB/RIF阴性,血γ-干扰素释放试验(IGRA)阴性.经手术联合阿奇霉素、利福平、乙胺丁醇等抗感染治疗后痊愈,未再复发.结论:当婴幼儿反复出现单侧无痛性腮腺或耳前淋巴结肿大,皮肤潮红至紫罗兰色,不伴发热、咳嗽、消瘦、盗汗等全身症状,常规抗生素治疗效果差,血IGRA阴性,无活动性肺结核病史,需警惕非结核分枝杆菌腮腺淋巴结炎,确诊后需及时手术切除联合抗感染治疗.

目的:分析沙丁胺醇雾化吸入联合脾多肽治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期(acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease, AECOPD)的临床疗效。方法:选择2020年2月至2022年11月我院收治的AECOPD患者67例，随机分为观察组35例和对照组32例。对照组采用沙丁胺醇雾化吸入治疗。观察组在此基础上联合静脉滴注脾多肽连续治疗14 d。比较两组治疗前后白细胞介素-2(interleukin-2, IL-2)、干扰素-α(interferon-α，IFN-α)、干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)、免疫球蛋白M(immunoglobulin M, IgM)、免疫球蛋白A(immunoglobulin A, IgA)、P物质(P substance, SP)、神经激肽-1(neurokinin-1, NK-1)，临床疗效及不良反应。结果:两组治疗前IFN-α、IFN-γ及IL-2差异无统计学意义(P>0.05)。观察组治疗后IFN-α(4.23±0.85)ng/L、IFN-γ(14.91±3.15)ng/L、IL-2(4.28±0.51)ng/L低于对照组(7.12±2.09)ng/L、(17.53±3.67)ng/L、(5.16±0.44)ng/L(P<0.05)。两组治疗前血清IgM、IgA差异无统计学意义(P>0.05)。观察组治疗后血清IgM(0.94±0.16)g/L、IgA(0.52±0.15)g/L低于对照组(1.37±0.27)g/L、(0.77±0.34)g/L(P<0.05)。两组治疗前血清NK-1R mRNA、SP mRNA差异无统计学意义(P>0.05)。观察组治疗后血清NK-1R mRNA(1.38±0.27)g/L、SP mRNA(1.58±0.21)g/L低于对照组(3.43±0.32)g/L、(3.27±0.29)g/L(P<0.05)。观察组治疗总有效30例(85.71%)高于对照组22例(68.75%)(P<0.05)。结论:沙丁胺醇雾化吸入联合脾多肽治疗AECOPD可有效调节体液免疫和细胞免疫，具有临床意义。

目的 对SD大鼠在高原实地和模拟高原环境这2种低氧胁迫方式下建立的急进高原模型进行比较研究,进而鉴定模拟高原实验舱的可靠性.方法 将SD大鼠分别急进模拟高原动物实验舱(4000 m)或高原实地实验室(4010 m)来建立大鼠急进高原模型,在暴露24 h或72 h后采集并测定高原生理病理变化相关指标,主要包括血常规、血生化、血气、氧化损伤指标((超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SO D)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px))、炎症指标((白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)、γ 干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、单核细胞趋化蛋白 1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)和白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6))、病理组织分析和低氧敏感基因((低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,Hif-1α)和血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,Vegfa))等,最终对结果进行差异性分析,得出差异性评估报告.结果 相同海拔高度下,高原实地或模拟高原暴露72 h后均可以产生明显的肺部和脑部损伤.相同暴露时间下,动物机体的血常规、血生化和血气结果相近,炎症指标(IL-6,IL-1β,MCP-1和IFN-γ)、氧化损伤指标(MDA,SOD和GSH)和脑部低氧敏感基因(Hif-1α和Vegfa)等检测结果无显著性差异.但是,模拟72 h组的二氧化碳分压(partial pressure of carbon dioxide,PaCO2)和碱剩余(base excess,BE)显著高于其他低氧处理组、模拟72 h组的肺部低氧敏感基因(Hif-1α和Vegfa)与空白对照组无显著性差异,以及高原实地处理组脑系数显著高于模拟高原处理组等结果提示高原实地和模拟高原环境可能存在细微区别.结论 模拟高原实验舱在4000 m海拔可成功建立急进高原动物模型,最优暴露时间应大于24 h但略短于72 h.模拟高原实验舱具有良好的可靠性,但条件允许情况下应尽量前往高原实地来建立急进高原动物模型.

目的 研究结核病患者尿液、肺泡灌洗液中细胞因子的水平,探讨细胞因子在结核病诊断中的作用.方法 采用病例-对照的研究方法,选择2023年1月至2023年7月在甘肃省兰州市肺科医院就诊及体检筛查结核感染的人群,按照纳入和排除标准,共纳入153例患者做为研究对象,其中结核病病原学阳性确诊患者74例,纳入活动性结核组;体检筛查人群中γ-干扰素释放试验(IGRA)结果为阳性27例患者,纳入结核潜伏感染组;肺炎、支气管扩张及肿瘤等非结核病患者52例,经IGRA实验阴性后纳入阴性对照组.对三组患者尿液和肺泡灌洗液样本,采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验检测γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素17(IL-17)和白细胞介素22(IL-22)等8种细胞因子的表达水平.结果 尿液样本中,活动性结核组IFN-γ、IL-2和IL-10均低于另两组水平,差异有统计学意义(P＜0.05),TNF-α,IL-4,IL-6,IL-17和IL-22在三组中差异无统计学意义(P＞0.05);肺泡灌洗液样本中,活动性结核组IFN-γ、IL-2和IL-10均低于另两组水平,活动性结核组IL-6均高于另两组水平,差异有统计学意义(P＜0.05),TNF-α,IL-4,IL-17和IL-22在三组中差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 活动性结核病患者尿液和肺泡灌洗液中IFN-γ、IL-2和IL-10表达水平降低以及肺泡灌洗液中IL-6表达水平升高,可为活动性结核病的诊断提供一定的参考价值.

目的:基于网络药理学和分子对接技术探讨车前子治疗高尿酸血症(hyperuricemia,HU A)的作用机制,以期为车前子治疗高尿酸血症的研究提供思路.方法:根据前期对车前子入血成分研究结果确定车前子的潜在药效成分,结合药物靶点数据库(TTD)、人类在线孟德尔遗传(OMIM)数据库、GeneCards数据库筛选高尿酸血症的作用靶点,进而确定成分与疾病的交集核心靶点,利用Cytoscape 3.8.0软件构建"成分-靶点-疾病网络",并对靶点进行GO富集分析与KEGG通路富集分析,再采用分子对接技术与实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术对结果进行验证.结果:共得到85个成分与疾病的交集靶点,包括胱天蛋白酶3(CASP3)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARG)、白细胞介素-6(IL-6)、雌激素受体1(ESR1)等,GO富集分析在生物过程、细胞组分和分子功能三个层面上分别得到56、15和18个GO功能条目,KEGG通路富集分析得到肿瘤坏死因子、代谢信号转导、胰岛素抵抗、缺氧诱导因子-1等信号通路.分子对接结果显示主要活性成分与核心靶蛋白间的结合性能较好;RT-qPCR结果表明,与模型组比较,车前子给药组大鼠肾脏组织中Ras与p38mRNA的表达水平显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:本研究建立了车前子干预高尿酸血症的"成分-靶点-通路"网络,为系统阐释车前子治疗高尿酸血症的分子机制提供了参考.

目的 探究涂阴肺结核患者实验室检测指标特征与涂阳肺结核患者及健康人群之间的差异.方法 研究对象选自 2023 年 3-9 月在云南省传染病医院就诊的 50 例初治肺结核患者,根据诊断划分为涂阴组 22 例和涂阳组 28 例,收集研究对象一般资料,采用流式细胞仪检测研究对象淋巴细胞亚群和细胞因子水平,比较各组间淋巴细胞亚群、细胞因子、血常规指标及生化指标之间的差异.结果 涂阴组患者吸烟史、耐药肺结核、痰培养阳性、GeneXpert阳性及有肺部空洞的比例均显著低于涂阳组(P<0.05).涂阴组PTB患者的CD45+、CD3+T、CD4+T、CD8+T和NK细胞计数显著低于健康对照组(P<0.05),CD45+、CD3+T、CD4+T、CD8+T和B细胞计数显著高于涂阳组PTB患者(P<0.05).涂阴组PTB患者IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17 和IFN-γ水平显著高于健康对照组,IL-12 和IFN-α水平显著低于健康对照组(P<0.05);涂阴组PTB患者IL-2、IL-5、IL-6、IL-12、IL-17 和IFN-γ水平显著低于涂阳组PTB患者(P<0.05).涂阴组PTB患者中性粒细胞比、CRP和降钙素原水平显著高于健康对照组(P<0.05),红细胞、血红蛋白、总蛋白、白蛋白、白球比和前白蛋白水平显著低于健康对照组(P<0.05);涂阴组PTB患者单核细胞水平和单核细胞比例显著低于涂阳组PTB患者(P<0.05).结论 肺结核患者存在明显的免疫功能受损状态,与涂阴肺结核相比,痰涂片阳性肺结核患者的淋巴细胞亚群受损更为严重,细胞因子水平更高,感染程度也更加严重.

目的 探讨髋关节骨缺损患者术后免疫功能及细胞因子水平与髋关节功能的关系.方法 选取2021年12月至2023年12月聊城市第二人民医院收治的33例髋关节骨缺损患者作为研究对象,所有患者行后外侧入路手术方式全髋关节翻修术.在患者术前和术后清晨抽取静脉血,分离血清和血细胞,采用流式细胞术分析T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+、TH1/TH2、Treg)、和自然杀伤(NK)细胞水平;采用Harris髋关节功能评分表分析髋关节骨缺损患者术前术后髋关节功能情况.采用相关性分析免疫细胞比例(CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+)和炎性因子[白细胞介素(IL)-4、IL-10和γ-干扰素(IFN-γ)]与Harris评分的关系.组间计量数据比较采用t检验.结果 髋关节骨缺损患者术后CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞比例和CD4+/CD8比值[(80.93±6.56)％、(53.20±5.29)％、(26.93±2.93)％、(1.58±0.05)]明显低于术前[(72.80±5.32)％、(45.53±6.56)％、(22.73±2.12)％、(1.25±0.10)],差异有统计学意义(t=7.903,7.340,7.171,17.610,P＜0.05).髋关节骨缺损患者术后Th1/Th2比值和NK细胞比例[1.23±0.08、(13.12±1.92)％]明显低于术前 Th1/Th2 比值和 NK 细胞比例[1.49±0.17、(17.16±1.74)％],差异有统计学意义(t=7.928、8.763,P＜0.05).髋关节骨缺损患者术后Treg比例比例[(7.06±0.64)％]明显高于术前Treg比例[(3.53±0.33)％],差异有统计学意义(t=27.900,P＜0.05).髋关节骨缺损患者术后IL-4和IL-10水平[(52.03±10.13)、(43.42±8.56)pg/ml]明显高于术前 IL-4 和 IL-10 水平[(35.57±6.79)、(30.27±4.89)pg/ml],差异有统计学意义(t=7.746、7.665,P＜0.05).髋关节骨缺损患者术后INF-γ水平(43.00±8.78)pg/ml明显高于术前INF-γ水平(22.30±3.75)pg/ml,差异有统计学意义(t=7.746,P＜0.05).治疗前患者Harris髋关节功能评分(72.15±7.94)分明显低于治疗后患者髋关节评分(91.75±4.48)分,差异有统计学意义(t=12.340,P＜0.05).Harris髋关节功能评分与CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞比例和CD4+/CD8比值呈负相关(r=-0.891、-0.778、-0.715,P＜0.05).Treg 比例、IL-4 和 IL-10 水平与 Harris 髋关节功能评分呈负相关(r=-0.521、-0.891、-0.778,P＜0.05).Th1/TH2 比值、NK 细胞比例、INF-γ水平Harris髋关节功能评分呈负相关(r=0.441、0.285、0.514,P＜0.05).结论 髋关节置换术后髋关节骨缺损患者免疫功能明显改善,患者术后免疫功能与术后髋关节功能呈正相关.