目的:通过两步脱溶剂-交联法制备携带流感病毒血凝素茎部α螺旋区(HAα)、6个串联重复的M2蛋白胞外域(6M2e)和鞭毛蛋白(Flg)的双层蛋白质纳米颗粒，探究其在小鼠体内的免疫效果。方法:采用脱溶剂-交联法将融合蛋白FljB-6M2e-△D2D3-HAα和HAα-6M2e制备成双层蛋白质纳米颗粒。通过透射电镜和纳米颗粒跟踪分析仪进行物理表征后评估其细胞毒性。免疫小鼠后采用ELISA方法进行特异性抗体效价测定，ELISPOT检测细胞免疫水平，CCK-8法检测脾细胞的增殖情况。结果:本研究成功制备了粒径为（130.03±2.96） nm的双层蛋白质纳米颗粒FljB-6M2e-△D2D3-HAα/ HAα-6M2e。免疫小鼠后产生的抗M2e-IgG抗体效价为1∶25 600，抗HAα-IgG抗体效价为1∶12 800，高于对照组小鼠，差异均具有统计学意义（ t=3.051和3.780， P=0.038和0.019）。与对照组相比，多肽刺激可以使小鼠脾细胞显著增殖[M2e刺激增殖率：（154.18±2.34）%，HAα刺激增殖率：（151.51±1.56）%]（ t=12.942和24.591， P均<0.001），并且诱导产生分泌更多IL-4和IFN-γ的淋巴细胞（M2e刺激： t=5.477和6.571， P=0.005和0.013；HAα刺激： t=9.239和7.671， P=0.001和0.013）。多种细胞因子的mRNA水平显著升高，IFN-γ和IL-4的转录水平均高于对照组（IFN-γ： t=13.253和20.847， P均<0.001；IL-4 ： t=6.032和4.824， P=0.004和0.009)。 结论:本研究所制备的双层蛋白质纳米颗粒可以刺激小鼠产生较高水平的体液和细胞免疫应答，为开发多表位流感通用疫苗提供了有效依据。

目的:研究结核分枝杆菌Rv0446c的抗原表位及其免疫原性，为结核病的免疫诊断技术及疫苗研发提供候选抗原及表位。方法:利用生物信息学软件TE-predict和IEDB的T细胞表位预测软件对结核分枝杆菌抗原Rv0446c进行T细胞表位预测，用ELISPOT实验检测表位在2019年1月到2020年12月期间来自佛山市第四人民医院和福州肺科医院的结核病患者（50例）、肺部疾病患者（39例）及健康志愿者（55例）中的免疫反应性。将60只6周龄BALB/c小鼠随机分成10组，每组6只，分别采用PBS、血蓝蛋白（KLH）、高剂量结核分枝杆菌抗原Ag85B（50 μg/只）、低剂量Ag85B（20 μg/只）、高计量P120、低剂量P120、高计量P121、低剂量P121、高剂量P123、低剂量P123（P120、P121、P123高剂量为100 μg/只、低剂量为50 μg/只）多肽对其皮下免疫，每只小鼠免疫3次，每次间隔2周，末次免疫后4周，应用ELISA方法检测各组小鼠脾细胞产生的IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10细胞因子水平。结果:预测的7条表位多肽中，ELISPOT试验筛选出4条阳性T细胞表位多肽P120、P121、P122、P123，在结核病患者中检测灵敏度和特异度分别为30.0%、18.0%、6.0%、22.0%和96.8%、98.9%、100%、96.8%。与对照PBS组和KLH组比较，P120多肽能刺激小鼠产生较高水平的IFN-γ、IL-4、IL-10，P121多肽刺激小鼠产生较高水平的IFN-γ和IL-4（均 P<0.05），P123多肽刺激小鼠产生较高水平的IFN-γ（均 P<0.05）。P120、P121、P123多肽刺激小鼠产生的IL-2的水平高于PBS组低于Ag85B-L组和Ag85B-H组（均 P<0.05），但与KLH组差异无统计学意义（均 P>0.05）。 结论:Rv0446c蛋白及其T细胞表位具有较好的免疫原性及免疫反应性，能刺激机体产生强烈的细胞免疫应答，可用于结核病的临床诊断技术研究和新型结核亚单位疫苗的构建。

目的:在小鼠中筛选和确定尼帕病毒(Nipah virus，NiV)融合糖蛋白(fusion glycoprotein，F)和附着糖蛋白(attachment glycoprotein，G)特异性的H-2 d限制性T细胞表位。 方法:本研究基于NiV F和G蛋白全序列设计合成多肽库(单肽长为15个氨基酸，前后肽重复10个氨基酸)，使用表达NiV F和G蛋白的DNA疫苗肌肉注射免疫BALB/c小鼠，通过矩阵设计将F和G抗原全序列肽库分别混合成肽池，取免疫后小鼠脾细胞进行IFN-γ ELISPOT检测，确定肽库中特异反应的优势表位肽。结果:F肽库筛选到12条特异性优势肽，第56条多肽产生的反应最强；G肽库筛选到4条特异性优势肽，第72条多肽产生的反应最强。结论:本研究使用IFN-γ ELISPOT方法筛选和确定了12条NiV F抗原特异性和4条NiV G抗原特异性H-2 d限制性优势T细胞表位，为NiV免疫学与疫苗研究提供了参考。

目的:观察脾多肽联合化疗对三阴性乳腺癌免疫功能及程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡受体-配体1(PD-L1)表达的影响。方法:山西省肿瘤医院2018年3月至2019年2月收治的三阴性乳腺癌改良根治患者40例，分为对照组( n＝20)及干预组( n＝20)，对照组采用常规化疗，干预组在常规化疗的基础上加用脾多肽，观察两组治疗前后免疫相关指标及外周血PD-1/PD-L1表达的影响。免疫组织化学法检测三阴性乳腺癌患者癌组织及癌旁组织中PD-1及PD-L1蛋白的表达。体外培养三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株，流式细胞术检测脾多肽作用后对细胞周期的影响，蛋白质印迹法(Western blot)检测脾多肽作用后对细胞PD-1及PD-L1蛋白表达的影响。多组计数资料比较采用方差分析，两两比较采用 t检验。 结果:对照组化疗后T细胞总数低于化疗前(59.93±3.43比65.28±3.29， t＝-4.452， P<0.05)，差异均有统计学意义，干预组化疗后CD4 +T细胞(41.47±3.67比34.69±3.61， t＝5.783， P<0.05)及T细胞总数(69.33±3.59比63.25±3.29， t＝3.686， P<0.05)高于化疗前，差异均有统计学意义。干预组化疗后外周血PD-1(5.74±0.52比4.81±0.35， t＝3.325， P<0.05)/PD-L1(5.14±0.29比4.30±0.21， t＝4.453， P<0.05)低于化疗前，差异均有统计学意义。PD-1(11比2， χ2＝7.440， P<0.05)及PD-L1(17比4， χ2＝10.912， P<0.05)在三阴性乳腺癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织，差异均有统计学意义，PD-1在三阴性乳腺癌中的表达与患者的组织学分级有关(8比3， χ2＝4.713， P<0.05)，PD-L1在三阴性乳腺癌中的表达与患者的临床分期有关(11比6， χ2＝5.966， P<0.05)，差异均有统计学意义。脾多肽干预后，MDA-MB-231细胞G 0/G 1期细胞比例降低( F＝5.998， P<0.05)，S期比例增高( F＝10.375， P<0.05)，PD-1( F＝32.123， P<0.05)及PD-L1( F＝37.550， P<0.05)蛋白的表达显著降低，差异均有统计学意义。 结论:脾多肽可改善三阴性乳腺癌化疗患者的T细胞免疫功能，下调患者外周血及细胞株中PD-1/PD-L1的表达。

胃癌前病变(Gastric precancerous lesions,GPL)具有发展为胃癌的风险,而胃解痉多肽表达化生(Spasmolytic polypeptide expressing metaplasia,SPEM)是GPL的初始步骤,具有恶性进展为胃癌前病变的风险.目前关于该化生阶段发病机制的探讨尚不完整,中医药依托扎实的中医理论基础及丰富的中药资源,在防治GPL上具有独特优势.因此,笔者基于"脾虚邪滞"理论,从疾病的病理生理状态、标志物、信号通路三方面进行微观辨证分析,提出以健脾化瘀解毒法为主要疗法,结合文献分析其可行性,以期为SPEM的中医治疗提供新的思路与方法.

目的 探究日本血吸虫源多肽SJMHE1对卵清蛋白(OVA)诱导的小鼠变应性鼻炎(AR)的保护作用与机制.方法 将15只雌性BALB/c小鼠随机分为正常组、AR组以及AR+SJMHE1组,每组5只.正常组全程未给予任何处理;AR组在第0、7、14天腹腔给予OVA佐剂混悬液致敏,随后在第28～32天鼻腔滴注5%OVA溶液(20 μL)进行局部激发,每日1次;AR+SJMHE1组在诱导变应性鼻炎的基础上于第0、14、28天皮下注射SJMHE1乳化液进行干预.末次激发后观察各组小鼠20 min,并进行行为学(挠鼻和打喷嚏)记录;苏木精-伊红染色观察各组小鼠鼻黏膜病理学改变;酶联免疫吸附试验检测各组小鼠血清中白细胞介素(IL)-4、IL-13和IL-10含量;流式细胞术检测小鼠脾脏CD19+细胞中IL-10+细胞比例.另选6只雌性BALB/c小鼠分为空白对照组和异硫氰酸荧光素(FITC)-SJMHE1组,每组3只.空白对照组注射磷酸盐缓冲液(PBS),FITC-SJMHE1组皮下注射FITC标记的SJMHE1(FITC-SJMHE1).流式细胞技术检测FITC阳性细胞在脾脏中的含量,并观察CD19+细胞与FITC-SJMHE1 结合比例.结果 与AR组挠鼻次数(33.20±5.07)次/20 min和打喷嚏次数(中位数=8次/20 min)相比,AR+SJMHE1组小鼠挠鼻次数(17.20±6.02)次/20 min和打喷嚏次数(中位数=1次/20 min)显著下降,差异均有统计学意义(F/H=33.71、10.81,P均<0.01),且鼻粘膜病理损伤得到缓解.与AR组小鼠血清中IL-4(21.55±2.78)pg/mL、IL-13(40.80±3.54)pg/mL和IL-10(61.32±15.30)pg/mL的水平相比,AR+SJMHE1组IL-4(14.39±1.53)pg/mL、IL-13(22.49±3.32)pg/mL水平降低,IL-10(108.65±25.26)pg/mL水平升高,差异均有统计学意义(F=58.92、80.10、17.12,P均<0.01).与AR组小鼠脾脏CD19+细胞中IL-10+细胞比例(0.79±0.32)%相比,AR+SJMHE1 组IL-10+比例(3.35±0.99)%显著上调,差异有统计学意义(F=19.55,P<0.01).流式细胞术结果显示FITC-SJMHE1可分布于小鼠脾脏且与CD19+细胞结合.结论 SJMHE1对OVA诱导的小鼠变应性鼻炎有干预作用,可能与上调脾脏中Breg细胞比例有关.

目的 为了构建病证结合的小鼠模型及进行胃癌前病变(gastric precancerous lesions,GPL)脾胃虚实证候的本质研究.方法 采用他莫昔芬(tamoxifen,TMXFR)诱导构建解痉多肽表达化生(spasmolytic peptide expression metagenesis,SPEM)小鼠模型,并在SPEM模型基础上分别模拟构建脾胃湿热证、脾气虚证模型,结合TMXFR诱导的SPEM模型具有自恢复的特性,以TMXFR组及生理盐水处理组作为对照组,监测小鼠一般情况,HE染色检测SPEM模型的构建及恢复情况,ELISA检测小鼠血清胃泌素水平,PCR检测各组小鼠胃黏膜中miR-7a-5p含量,免疫组化检测各组小鼠胃黏膜中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-13(interleukin-13,IL-13)表达.结果 病证结合的脾胃湿热证、脾气虚证组较TMXFR组、SPEM组织恢复明显延迟;脾胃湿热证较对照组及TMXFR组的胃泌素表达异常升高(P＜0.05),SPEM模型组小鼠胃黏膜中miR-7a-5p较对照组水平降低(P＜0.05),病证结合的脾胃虚实组miR-7a-5p表达较TMXFR有下降趋势;病证结合的脾胃虚实组IL-1β表达较TMXFR组、对照组升高(P＜0.05),脾胃湿热证、脾气虚证组中IL-13表达有升高趋.结论 此项研究结果侧面证实了在癌前病灶已形成的前提下,虽无幽门螺杆菌感染,在外感湿热之邪、进食肥甘厚腻、饥饱失常、过劳伤脾等诱因下,机体可突破自身代偿修复能力,延缓SPEM恢复甚至使GPL进一步进展.这可能跟miR-7a-5p介导炎症因子IL-1β使得Th1/Th2细胞失衡相关,但具体机制尚待进一步研究.

基于血清代谢组学探讨六君子汤治疗 4-硝基喹啉-N-氧化物(4-nitroquinoline-N-oxide,4NQO)诱导食管癌模型小鼠的作用机制.选取 35～45 日龄小鼠 100 只,随机分为空白组、模型组、六君子汤低浓度组、六君子汤中浓度组、六君子汤高浓度组.除空白组外,其余小鼠自由饮用 100 μg·mL-1 的 4NQO溶液 16 周,构建食管癌小鼠模型.六君子汤低、中、高浓度组分别用药物质量分数为 18.2、36.4、54.6 g·kg-1的定制饲料喂养,称量各组小鼠体质量和脏器质量计算脏器指数;采用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察各组小鼠食管组织病理改变;超高效液相色谱-串联质谱(ultra performance liquid chroma-tography-mass spectrometry,UPLC-MS/MS)进行小鼠血清样本的代谢物采集,筛选潜在生物标志物及分析相关代谢通路.结果显示,模型组小鼠脾脏、胃脏器指数明显降低,肺、食管、肾的脏器指数明显升高,与模型组相比,六君子汤各浓度脏器指数无明显变化;HE结果显示,六君子汤能改善小鼠食管癌细胞浸润性生长及癌变情况;血清代谢组学分析筛选出 9 种六君子汤干预食管癌小鼠的潜在生物标志物,分别为尿刊酸(urocanic acid,UCA)、1-油酰甘油磷酸丝氨酸(1-oleoylglycerophosphoserine)、11-脱氧前列腺素E1(11-deoxy prostaglandin E1)、多肽链Leu-Glu-Lys-Glu、(±)4-羟基-5E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z-二十二碳六烯酸[(±)4-HDHA]、脲基琥珀酸(ureidosuccinic acid)、泛酸[(2R)-2,4-dihydroxy-3,3-dimethylbutanoic acid]、犬尿酸(kynurenic acid)和双环前列腺素E2(bicyclo prostaglandin E2),涉及的通路包括组氨酸、嘧啶、丙氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、泛酸和色氨酸代谢及辅酶a生物合成等.六君子汤对 4NQO诱导的食管癌模型小鼠发挥治疗作用,其作用机制可能与调节小鼠体内氨基酸代谢、炎症反应和免疫功能有关.

目的:评估脾多肽注射液(LPI)对卡铂(CBP)化疗后昆明(Kunming mice,KM)小鼠骨髓抑制和免疫力低下的治疗作用及其可能的作用机制.方法:KM雌鼠随机分为对照组、模型组、脾多肽低剂量和高剂量治疗组.第1天,治疗组及模型组腹腔单次注射卡铂(70 mg/kg)构建化疗所致骨髓抑制小鼠模型,对照组注射生理盐水.第2至16天,治疗组每天(60 mg·kg-1·d-1)腹腔注射脾多肽1次,对照组和模型组注射生理盐水.给药结束后,检测小鼠外周血中血小板、白细胞和红细胞数量、体质量、胸腺和脾脏的器官指数;流式细胞术检测小鼠胸腺和脾的CD4+T细胞亚群、CD8+T细胞亚群和CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)亚群的变化.结果:与对照组比较,模型组小鼠第16天白细胞和血小板数量显著减少,胸腺和脾脏的器官指数减少,胸腺和脾脏Treg淋巴细胞亚群比例降低;高剂量脾多肽干预后,白细胞和血小板计数显著恢复,胸腺和脾脏Treg淋巴细胞亚群比例恢复(P<0.05).结论:脾多肽注射液对化疗后KM小鼠的骨髓抑制和免疫力低下,具有一定的治疗作用.

目的 研究不同转移因子对环磷酰胺诱导的免疫功能低下小鼠的调控作用,并分析其多肽图谱.方法 采用腹腔注射环磷酰胺(50 mg·kg-1)诱导免疫功能低下模型,模型小鼠随机分为正常组、模型组、转移因子卫材组、转移因子海欣组和转移因子精优组.灌胃给药15 d后,检测分析小鼠的胸腺/脾脏指数,全血白细胞数,血T淋巴细胞(CD3+)百分比,淋巴细胞增殖反应和巨噬细胞的吞噬能力.通过LC-MS/MS联用技术,对转移因子的多肽图谱进行表征.结果 转移因子给药后能有效预防环磷酰胺诱导的脾指数和外周血白细胞数降低,增加血T淋巴细胞百分比,提高淋巴细胞的增殖能力和巨噬细胞的吞噬功能.且不同转移因子产品免疫调节功能表现出一定的差异.LC-MS/MS分析也显示不同产品多肽图谱存在较大差异.结论 转移因子能有效改善环磷酰胺损伤小鼠的免疫功能;不同转移因子产品的免疫调节功能和多肽组成存在差异,有必要提升质控方法和标准以保证药品的一致性.