甲状腺癌是人体最常见的内分泌系统恶性肿瘤,其发病率逐年递增.甲状腺癌常见病理类型中甲状腺乳头状癌(PTC)和滤泡状癌(FTC),两者约占所有甲状腺癌的90％以上,也被统称为分化型甲状腺癌(DTC),其生物学行为相对惰性,预后良好,经合理治疗后的10年生存率超过90％.甲状腺癌较易发生颈淋巴结转移,尤其是PTC,颈部淋巴结Ⅱ～Ⅶ区均可出现转移,而中央区(Ⅵ)淋巴结转移常先于颈侧区(Ⅱ～Ⅴ)淋巴结转移出现.

目的 探讨北京地区妊娠35～37周孕妇携带的无乳链球菌(GBS)血清型的分布特点.方法 按照2010年美国CDC颁布的指南中的推荐对6000名妊娠35 ～ 37周的孕妇进行GBS常规筛查.阴道和直肠分泌物联合取样进行分离培养,用VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定系统对疑似B群链球菌进行鉴定,使用多重PCR扩增及基因测序的方法对GBS菌株进行血清分型检测.结果 共检出311株无乳链球菌,分为8个血清型.血清分型为Ⅰa型106例(34.1％),Ⅰb型53例(17.4％),Ⅲ型134例(43.1％),Ⅳ型6例(2.3％),Ⅱ型5例(1.6％),Ⅷ型3例(0.96％),Ⅴ型2例(0.64％),Ⅸ型2例(0.64％).结论 北京地区妊娠35 ～ 37周孕妇携带的无乳链球菌血清分型主要为Ⅲ、Ⅰa型.

细菌分泌系统的发现是近年来细菌致病机制研究的重点.致病菌为在宿主体内生存、繁殖、扩散,会分泌一些蛋白性质的毒性因子.目前认为革兰阴性致病菌在长期进化过程中形成入侵宿主细胞的特异性分泌系统共有5种类型(Ⅰ～Ⅴ型),其中最显著的是细菌Ⅲ型分泌系统(type three secretion system,T3SS),与细菌致病性密切相关.T3SS抑制剂的策略是细菌分泌毒力蛋白,阻止其对宿主细胞的侵染.本文对细菌T3SS的组成、T3SS抑制剂筛选系统、T3SS抑制剂以及作用机制等进行综述,为深入研究以T3SS为靶点的药物设计提供参考.

[背景]禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)可引起禽的大肠杆菌病,严重危害养禽业.Ⅴ型分泌系统(Type Ⅴ secretion system,T5SS)在APEC感染过程中发挥重要作用.[目的]分析不同致病型大肠杆菌的T5SS在APEC中的分布规律,探讨T5SS与APEC的大肠杆菌进化分群及其他毒力因子的关联性.[方法]根据大肠杆菌的15个T5SS序列设计特异性引物,采用PCR检测T5SS在APEC临床分离株中的分布;分析APEC菌株的系统进化分群及毒力因子分布,探讨T5SS分布和APEC系统进化分群及毒力因子的相关性.[结果]T5SS在APEC临床分离株中广泛分布,其中ydeK和pplfP的分布率最高,分别为98.55％和92.03％;而upaC和pic的分布率均低于10％.系统进化分群结果显示,APEC主要属于A、B1和D进化分群,B2群较少;T5SS分布和进化分群分析发现ehaA、ehaB、pic、vat在D进化分群APEC菌株中分布率较高,而ehaG、ag43/flu、apaC主要分布于A及B1群APEC中.然而,T5SS和APEC其他毒力基因分布无明显的关联性.[结论]T5SS广泛存在于APEC分离株中,且部分T5SS分布与大肠杆菌系统进化分群存在关联性.

铜绿假单胞菌是一种广泛分布于自然界的条件致病菌,它是院内感染常见的病原体之一.铜绿假单胞菌对多种抗生素有耐药性,开发具有高效保护作用的疫苗是防治其感染的有效手段之一.铜绿假单胞菌钙反应蛋白Ⅴ(PcrⅤ)属III型分泌系统,具有良好的免疫原性,是疫苗开发的靶点之一.本文拟就PcrⅤ的特性、重组抗原疫苗、DNA疫苗及重组沙门氏菌疫苗等方面的研究现状进行综述.

[背景]鲍曼不动杆菌耐药严重,基因敲除是研究细菌毒力与耐药的重要方式.但现有的大部分细菌基因敲除方法基于抗生素抗性筛选,导致不适用于多重耐药菌株的基因敲除.[目的]旨在建立一种非依赖于抗生素抗性筛选的方法,用于敲除多重耐药鲍曼不动杆菌基因.[方法]运用同源 重组和自杀载体pMo 130-TelR对亚碲酸钾的抗性,使用两步筛选法,构建鲍曼不动杆菌Ⅴ型分泌系统溶血素共调节蛋白(Hemolysin-Coregulated Protein,Hcp)基因敲除突变体,并对缺失株的生长能力、细菌竞争能力以及血清抵抗能力进行测试.[结果]通过构建合同源片段的重组pMo 130-TelR载体,成功敲除了鲍曼不动杆菌标准株ATCC 17978中的hcp基因,获得了ATCC 17978 hcp基因缺失突变体.突变体生长能力没有显著改变,但细菌竞争能力显著下降,血清抵抗能力显著升高.[结论]pMol30-TelR可成功用于鲍曼不动杆菌无痕基因敲除,对于研究鲍曼不动杆菌的耐药机制等相关问题具有深远意义.

目的 对急诊科患者携带金黄色葡萄球菌耐药情况进行分析,为金黄色葡萄球菌感染治疗提供参考. 方法 采集血液、尿液、痰液和切口分泌物等标本,培养后进行菌落形态观察,进行涂片、染色和镜检,并经全自动微生物鉴定系统鉴定为金黄色葡萄球菌.采用头孢西丁筛选耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),采用PCR扩增金黄色葡萄球菌耐药基因,并对利福平耐药株进行测序. 结果 290株金黄色葡萄球菌中共检出MRSA 158株,检出率54.48％.研究中痰液、分泌物、脓液、穿刺液、血液和尿液金黄色葡萄球菌检出率分别为56.90％、21.03％、11.03％、5.52％、3.45％和2.07％.金黄色葡萄球菌对青霉素、四环素、红霉素、头孢唑林、氨苄西林/舒巴坦、克林霉素、庆大霉素、左氧氟沙星、利福平和万古霉素耐药率分别为84.14％、66.90％、74.83％、65.17％、50.34％、58.97％、50.69％、22.41％、1.72％和0.00％.金黄色葡萄球菌携带ermA、ermB、ermC、aac(6')/aph(2”)、aph(3')-Ⅲ和ant(6')-Ⅰ耐药基因检出率:43.45％、1.72％、23.45％、11.03％、5.52％和7.59％,未检出VanA.本次研究中,Ⅰ型～V型SCCmec检出率共计96.57％,Ⅰ型～Ⅴ型检出率分别为:6.96％、16.46％、58.23％、10.76％和3.16％.rpoB基因测序结果显示:4株同时发生481His/Asn和466Leu/Ser突变,1株仅发生481His/Asn突变. 结论 金黄色葡萄球菌对青霉素、四环素和红霉素具有较高程度的耐药.SCCmecⅢ型检出率较高,应注意交叉感染.

革兰氏阴性菌Ⅴ型分泌系统是细菌病原蛋白分泌的主要途径之一,可分为Ⅴa-Ⅴe5个亚型,其中Ⅴa型(即经典的单体自转运蛋白)是细菌毒力和黏附因子向细胞外分泌的重要工具,其在内膜Sec易位子和外膜BAM蛋白复合体的协助下,通过2个连续的跨膜步骤介导蛋白质穿过阴性菌的内外膜.据信Va型是目前已知蛋白质跨膜转运时最简单的分泌途径,故该蛋白质分泌系统作为一种生物工程手段被认为是进行外源蛋白细菌细胞表面展示的理想系统.本文概括了目前已知的自转运蛋白的种类、结构域组成及其可能的分泌机理,总结基于自转运蛋白构建细菌细胞表面展示系统的生物工程应用,特别是其在疫苗研发领域的最新研究进展,并探讨了其在病原体检测方面的潜在应用,以期深入拓展该分泌系统在生物工程方面的应用.

革兰阴性(Gram-negative,G-)菌的分泌系统至少有9种,依次命名为Ⅰ～Ⅸ型分泌系统,其中V型分泌系统(type V secretion system,T5SS)亦被称为自主转运分泌系统(autotransporters,AT),广泛存在于G-菌中.该系统分泌的蛋白占G-菌外泌蛋白的比例最高.该系统只含1或2条多肽链,被视为最简单的分泌系统,但其分泌机制复杂.本文对T5SS蛋白的结构、类型、分泌过程、基于T5SS的表面展示技术及T5SS研究中常用的方法作一综述,旨在为研究细菌的致病机制提供参考,以及新型抗生素的研发和T5SS的生物学应用等提供新的思路.

目的 探究开放性骨折术后迟发性感染患者脓性分泌物分离社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)分子型、耐药性及毒力特征.方法 收集2018年1月-2021年7月南京市溧水区人民医院开放性骨折术后患者脓性分泌物分离MRSA 90株,分为CA-MRSA和医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(HA-MR-SA),多位点序列分析(MLST)检测葡萄球菌染色体mec(SCCmec)分型,分析系统检测耐药性,聚合酶链式反应(PCR)检测毒力基因.结果 90 株 MRSA 中检出 CA-MRSA 53 株(58.89％),HA-MRSA 37 株(41.11％);53 株CA-MRSA对苯唑西林、青霉素、氨苄西林耐药率为100.00％,对米诺环素和磺胺甲噁唑/甲氧苄啶耐药率分别为3.77％和13.21％,而对利奈唑胺、万古霉素、替考拉宁100％敏感,与HA-MRSA比较,CA-MRSA对氯霉素、克林霉素、庆大霉素的耐药率较低(P＜0.05);MLST分型中有ST59型33株(62.26％),ST338型7株(13.21％),ST217 型 4 株(7.55％),ST398 型、ST5432 型各 3 株(5.66％),ST5424 型、ST5 型和 ST2141 型各 1 株(1.89％);SCCmec分型共检出5种SCCmec分型,CA-MRSA以SCCmec Ⅳ型和SCCmec V型为主,分别有22株(41.51％)和 27 株(50.94％),SCCmec Ⅱ 型 2 株(3.77％),SCCmec Ⅰ 型和 SCCmec Ⅲ 型各 1 株(1.89％);检出 7 种毒力基因,其中hla、hlb在CA-MRSA和HA-MRSA中均存在,tsst、eta、etb在CA-MRSA和HA-MRSA中检出率均＜10％,且 37 株 HA-MRSA 中均无 etb 检出;CA-MRSA 中 lukSF、PSMa3 检出率高于 HA-MRSA(P＜0.05).结论 开放性骨折术后迟发性感染以CA-MRSA为主,CA-MRSA对多种抗菌药物具有耐药性,但对利奈唑胺、万古霉素、替考拉宁、米诺环素和磺胺甲噁唑/甲氧苄啶敏感性较高,以ST59型、ST338型和SCCmec Ⅳ、Ⅴ型为主,毒力基因中hla、hlb可能是MRSA重要的毒力基因,而luk SF、PSMα3可能是CA-MRSA和HA-MRSA之间存在差异的关键.