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核转录因子Gli在恒河猴轮状病毒致胆道闭锁小鼠肝脏上皮间充质化中的调控作用
编辑人员丨5天前
目的:研究sonic hedgehog(Shh)信号通路核转录因子Gli1/Gli2在恒河猴轮状病毒(RRV)感染致胆道闭锁小鼠肝脏上皮间充质化(EMT)中的调控作用。方法:通过RRV构建胆道闭锁小鼠模型,根据RNA干扰技术对Shh信号通路关键转录因子Gli1/Gli2表达调控的不同,将实验小鼠分为正常组、模型组、Gli1过表达组、Gli1 shRNA组、Gli2过表达组、Gli2 shRNA组,应用实时荧光定量聚合酶链反应及蛋白质印迹法检测实验小鼠肝脏组织中EMT关键调控因子Snail/Slug及EMT特征性细胞因子波形蛋白(Vimentin)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA及蛋白的表达;对不同分组中的小鼠肝脏组织分别行苏木精-伊红染色和Masson染色观察记录肝纤维组织表达面积百分比。采用单因素方差分析和 LSD- t检验进行数据分析。 结果:Gli2过表达组、Gli2 shRNA组及模型组Snail、Slug、Vimentin、α-SMA、E-cadherin mRNA相对表达量分别为15.13±3.40、5.48±0.46、8.78±1.06、12.40±2.18和3.06±0.53;3.73±1.16、5.62±1.75、3.56±1.06、3.88±1.16和10.51±1.83;8.13±1.27、5.32±0.98、5.05±0.98、4.02±0.77和5.12±1.60。与模型组相比,Gli2过表达组Snail、Vimentin、α-SMA的mRNA表达明显升高,E-cadherin的mRNA表达明显降低,差异均有统计学意义( t=4.53、5.29、8.12、-2.13,均 P<0.05);与模型组相比,Gli2 shRNA组Snail、Vimentin的mRNA表达明显降低,E-cadherin的mRNA表达明显升高,差异均有统计学意义( t=-2.86、-2.12、5.62,均 P<0.05)。Gli2过表达组、Gli2 shRNA组及模型组Snail、Slug、Vimentin、α-SMA、E-cadherin蛋白灰度比值分别为2.02±0.39、0.31±0.08、0.95±0.17、1.07±0.17和0.42±0.06;0.53±0.13、0.40±0.18、0.20±0.04、0.28±0.07和1.09±0.31;0.70±0.15、0.42±0.22、0.64±0.13、0.81±0.11和0.42±0.09。与模型组相比,Gli2过表达组Snail、Vimentin、α-SMA蛋白灰度比值明显升高,差异均有统计学意义( t=12.71、4.28、3.70,均 P<0.05);与模型组相比,Gli2 shRNA组Vimentin、α-SMA表达明显降低,E-cadherin表达明显升高,差异均有统计学意义( t=-6.14、-7.57、5.96,均 P<0.05)。Gli1过表达组及Gli1 shRNA组小鼠肝脏组织未见明确EMT特征细胞因子表达变化趋势。正常组、模型组、Gli1过表达组、Gli1 shRNA组、Gli2过表达组、Gli2 shRNA组肝脏纤维组织表达面积百分比分别为(1.03±0.58)%、(33.02±11.39)%、(39.81±5.67)%、(26.06±1.29)%、(49.81±8.57)%和(17.55±0.66)%。Gli2过表达组及Gli2 shRNA组与模型组肝脏纤维组织表达面积百分比相比,差异均有统计学意义( t=3.21、-2.96,均 P<0.05);Gli1过表达组及Gli1 shRNA组与模型组肝脏纤维组织表达面积百分比相比,差异均无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:Shh信号通路在胆道闭锁小鼠肝纤维化中起重要作用,Shh信号通路关键转录因子Gli2可显著调控胆道闭锁小鼠肝脏EMT过程。
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编辑人员丨5天前
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上皮间充质化在2,3,7,8-四氯二苯二噁英致胎鼠腭突融合障碍中的作用
编辑人员丨5天前
目的:探讨上皮间充质化在2,3,7,8-四氯二苯二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)致胎鼠腭突融合障碍中的作用。方法:将12只C57BL/6 J孕鼠按随机数字表法分为实验组和对照组,每组各6只。妊娠第10.5天(GD10.5),实验组以28 μg/kg的TCDD(玉米油溶解)灌胃,对照组则按照等量玉米油灌胃。在GD15.5分别处死2组孕鼠,在显微镜下行胎鼠腭突的形态学观察。购买原代腭突中嵴上皮细胞进行培养,将其分为实验组和对照组,实验组细胞分为3个亚组,分别添加浓度为5、10、20 nmol/L的TCDD于培养基,对照组则使用不加TCDD的培养基。72 h后,通过免疫荧光染色、激光共聚焦检测荧光强度和蛋白质印迹法检测腭突中嵴上皮细胞标志物细胞角蛋白19(CK-19)和腭突间充质细胞标志物波形蛋白(vimentin)的表达。采用单因素方差分析法对各组数据进行比较。结果:实验组中共获得36只胎鼠,死胎和吸收胎3只,腭裂发生率为100%(33/33),其中完全腭裂为84.8%(28/33),部分腭裂发生率为15.2%(5/33);对照组中获得40只胎鼠,死胎和吸收胎共2只,腭裂发生率为0(0/38)。实验组和对照组腭突中嵴上皮细胞培养72 h后形态均发生变化,由均一的鹅卵石样变为有伪足的星形或不规则形;对照组和实验组中5、10、20 nmol/L 3个亚组的腭突中嵴上皮细胞标志物CK-19蛋白相对表达量分别为0.739±0.120、0.483±0.023、1.007±0.109、1.086±0.145,荧光强度分别为53.384±5.785、36.818±8.250、64.575±8.323、76.898±3.711;腭突间质细胞标志物vimentin蛋白相对表达量分别为0.527±0.112、0.781±0.095、0.284±0.046、0.216±0.040,荧光强度分别为63.672±6.135、82.632±4.474、52.608±7.525、42.664±7.659。低剂量实验组(5 nmol/L)与对照组相比,CK-19降低而vimentin升高;高剂量实验组(10、20 nmol/L)与对照组相比,CK-19升高而vimentin降低,差异有统计学意义( P<0.05),高剂量组间比较差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:腭突中嵴上皮细胞间充质化(EMT)可能是一自发程序,TCDD致腭突融合障碍可能与腭突中嵴上皮细胞EMT过程受抑制有关,且随着TCDD剂量增加,这种抑制作用保持稳定。
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编辑人员丨5天前
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雷帕霉素对增生性玻璃体视网膜病变的保护作用研究进展
编辑人员丨5天前
增生性玻璃体视网膜病变(PVR)是眼外伤、孔源性视网膜脱离(RRD)等的并发症,也是造成RRD复位手术失败的常见原因。视网膜色素上皮(RPE)细胞异常增生、迁移和上皮间充质化在PVR相关的视网膜前增生膜的形成中起着主导作用。雷帕霉素是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的特异性抑制剂,选择性地结合细胞蛋白FKBP-12,和FKBP-雷帕霉素相关蛋白(FRAP)的FKBP12-雷帕霉素结构域(FRB)直接结合变构从而抑制mTOR活性。雷帕霉素具有多种衍生物和类似物,通过对mTOR信号转导途径的抑制发挥抑制细胞增生和调节细胞周期等作用,在PVR中对RPE细胞异常增生、迁移和上皮间充质化起到一定的抑制作用,对PVR中胶质细胞的修复、炎症细胞的抑制和血管内皮细胞的损伤也起到一定保护作用。近年来,雷帕霉素在多种眼病中的临床试验不断开展,对其在眼部给药方式的探索和用药安全性方面的证据逐渐全面。本文就雷帕霉素对PVR中RPE细胞及其他细胞的保护作用、用药安全性等方面作一综述。
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编辑人员丨5天前
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以MNNG刺激GES-1细胞构建上皮间充质化细胞模型
编辑人员丨2023/8/6
[目的]探究N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基 (N-methy-N'-nitro-N-nitrosoguanidine, MNNG) 刺激胃黏膜上皮细胞GES-1构建上皮间充质化 (EMT) 细胞模型及其机制.[方法]用MNNG不同的浓度梯度处理GES-1细胞, 光学显微镜观察细胞形态变化;CCK8检测MNNG体外处理GES-1后MNNG对GES-1细胞增殖的影响;Transwell检测细胞的迁移和侵袭能力;实时荧光定量PCR法和Western印迹法检测MNNG刺激GES-1细胞前后与EMT相关的钙粘蛋白 (N-cadherin) 和转录因子 (Snail, Twist) 的mRNA及蛋白水平的表达.RT-PCR检测STAT3抑制剂WP1066组与MNNG处理组N-cadherin及Twist的mRNA的变化, 同时用Western印迹法检测STAT3/Snail信号通路中p-STAT3、STAT3及Snail的蛋白水平的变化.[结果]MNNG刺激胃黏膜上皮细胞GES-1的EMT化的最佳浓度为0.4μmol/L;刺激后的GES-1细胞变形, 边界模糊, 并呈岛样生长;最佳浓度的MNNG能明显促进GES-1细胞的增殖、迁移和侵袭;细胞内N-cadherin、Snail、Twist的mRNA表达及蛋白表达明显上调 (P<0.05), STAT3和P-STAT3的蛋白表达亦上调;STAT3抑制剂WP1066处理后P-STAT3及Snail蛋白表达均下调, N-cadherin及Twist的mRNA水平亦明显下调 (P<0.05) .[结论]MNNG可能通过STAT3/Snail信号通路刺激GES-1细胞, 增加与EMT相关蛋白 (N-cadherin) 及转录因子 (Snail, Twist) mRNA和蛋白的表达, 成功构建了体外人胃黏膜细胞上皮间充质化模型.
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编辑人员丨2023/8/6
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体外共培养hBMSCs和HUVECs对Panc-1胰腺癌细胞上皮间质转化的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的:利用三维共培养技术体外构建含多种细胞的胰腺癌微组织,研究骨髓间充质干细胞(hBMSCs)、内皮细胞(HUVECs)对Panc-1胰腺癌细胞上皮间质转化的影响.方法:水凝胶复合细胞培养构建三维胰腺癌微组织模型.第一组:单纯Panc-1细胞;第二组:Panc-1细胞复合HUVECs;第三组:Panc-1细胞复合hBMSCs;第四组:Panc-1细胞复合HUVECs和hBMSCs.实时定量PCR分析胰腺癌肿瘤侵袭相关的基质金属蛋白酶(MMP-9)、肿瘤上皮间质化E-cadherin和Snail基因.West-ern blot测定胰腺癌肿瘤侵袭相关的MMP-9、肿瘤上皮间质化E-cadherin和Snail蛋白.结果:HU-VECs共培养不影响MMP-9、E-cadherin和Snail基因和蛋白的表达(>0.05),hBMSCs共培养促进MMP-9和Snail基因和蛋白的表达、抑制E-cadherin基因和蛋白的表达(<0.05),同时加入两种细胞促进MMP-9和Snail基因和蛋白的表达、抑制E-cadherin基因和蛋白的表达(<0.05).结论:利用水凝胶为载体,加入骨髓间充质干细胞、内皮细胞与Panc-1胰腺癌细胞共培养,成功构建复杂的胰腺癌肿瘤微组织.通过对胰腺癌上皮间质转化相关机制研究,发现骨髓间充质干细胞通过调节MMP-9和上皮间质化对胰腺癌的侵袭行为起重要作用.
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编辑人员丨2023/8/6
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SiO2刺激矽肺肺泡巨噬细胞上清液中CTGF在肺泡上皮细胞间充质化的作用
编辑人员丨2023/8/5
目的 了解SiO2体外激活肺泡巨噬细胞上清液结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的表达情况及对肺泡上皮细胞间充质化的作用.方法 从矽肺患者肺泡灌洗液中分离肺泡巨噬细胞,使用SiO2进行干预,收集处理后6、12、24、48 h上清液,检测各时间点CTGF表达情况;将A549细胞分成3组,分别为空白对照组、未刺激上清液组和刺激上清液组,刺激上清液组加入SiO2干预24 h的肺泡巨噬细胞上清液,未刺激上清液组加入无SiO2干预的24 h肺泡巨噬细胞上清液,空白对照组加入细胞培养基,培养48 h后,检测A549细胞CTGF、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA蛋白)表达情况.结果 刺激组的肺泡巨噬细胞上清液CTGF表达量随SiO2干预时间的延长而升高,于24 h 达到峰值[(30.48±1.66)ng/L],除6 h 外,其他时间点刺激组上清液 CTGF 表达量[(21.46±1.77)、(30.48±1.66)、(25.67±2.39)ng/L]均高于同期未刺激组上清液CTGF表达量[(17.36±1.96)、(18.86±1.90)、(18.32±1.64)ng/L],差异均有统计学意义(均P<0.05);在干预48 h后,未刺激上清液组和刺激上清液组的A549细胞呈长条形或不规则形,排列紊乱,刺激上清组细胞变化更明显,甚至出现分叉;刺激上清液组A549细胞CTGF、α-SMA表达量分别高于未刺激组和空白对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05/3),而E-cadherin表达量低于未刺激上清液组和空白对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05/3).结论 经SiO2激活的肺泡巨噬细胞CTGF的表达量升高,可诱导肺泡上皮细胞增加CTGF和α-SMA的表达、降低E-cad-herin 的表达,CTGF可能通过旁分泌或自分泌的形式促进肺泡上皮细胞间充质化改变.
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编辑人员丨2023/8/5
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叉头框蛋白C2在妇科常见恶性肿瘤中的研究现状
编辑人员丨2023/8/5
妇科常见恶性肿瘤发病率及致死率近年来均有所上升,严重威胁女性健康,且发病人群有年轻化趋势,早期诊治可提高患者的生存率及生活质量.叉头框蛋白C2(Forkhead box protein C2,FOXC2),隶属于FOX蛋白家族中的FOXC亚家族,主要见于胚胎发育阶段,是肿瘤发生和疾病进展的关键因素,近年来在恶性肿瘤的表达、治疗及预后评估中有较广泛的应用.本文就FOXC2在常见的妇科恶性肿瘤中的研究现状进行综述.
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编辑人员丨2023/8/5
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miR-206通过靶向GREM1调节鼻咽癌细胞的增殖、迁移能力
编辑人员丨2023/8/5
目的 探讨miR-206对鼻咽癌细胞增殖、迁移的影响及其机制.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测鼻咽癌细胞株(NP69、CNE2、HNE1、6-10B及5-8F)中miR-206的表达水平,然后选择miR-206表达水平较低的鼻咽癌细胞株HNE1和CNE2作为实验对象,将每株细胞均分为两组:NC组和miR-206 mimics组,分别转染无意义序列NC和miR-206 mimics.采用MTT法、细胞集落克隆检测细胞的增殖能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力.使用公共数据库GEPIA(Gene Expression Profiling Interactive Analysis)分析Gremlin1(GREM1)在人鼻咽癌组织和癌旁组织中的表达,蛋白质印迹实验(Western blot)检测鼻咽癌细胞中N-catenin、Vimentin及GREM1蛋白表达量,采用qRT-PCR检测鼻咽癌细胞中GREM1 mRNA的表达水平.使用生物信息学网站CoGeMiR、MicroRNAdb预测miR-206可能的靶基因,采用Transwell Boyden小室法检测过表达GREM1对鼻咽癌细胞迁移能力的影响.结果 在鼻咽癌细胞HNE1、CNE2中,miR-206 mimics组细胞存活率、克隆细胞集落数目、细胞迁移数目,N-catenin、Vimentin蛋白的表达均低于NC组(P<0.05).GREM1在人鼻咽癌组织中表达水平高于癌旁组织,miR-206 mimics组的GREM1的mRNA及蛋白表达水平较NC组下调(P<0.05).生物信息学网站CoGeMiR、MicroRNAdb预测miR-206与GREM1 mRNA存在结合位点.过表达GREM1后鼻咽癌HNE1、CNE2细胞的迁移能力增强(P<0.05).结论 miR-206对鼻咽癌细胞株HNE1、CNE2的细胞增殖、迁移和上皮间充质化(EMT)有抑制作用,这可能与其对GREM1表达的调控有关.
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编辑人员丨2023/8/5
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具核梭杆菌对结直肠癌细胞增殖、迁移及上皮间质转化作用的影响
编辑人员丨2023/8/5
[目的]评估具核梭杆菌对人结直肠癌细胞HCT116和人正常结肠上皮细胞HCoEpiC的增殖、黏附、凋亡、迁移、侵袭和上皮间质转化的影响.[方法]本研究用不同感染复数(MOI)Fusobacterium nucleatum ATCC 23726感染人结直肠癌细胞 HCT116和人正常结肠上皮细胞HCoEpiC,建立感染模型;用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide,MTT]、平板克隆、细胞划痕及侵袭(transwell)实验检测两组细胞的增殖、迁移和侵袭的变化;用流式细胞仪检测两组细胞凋亡情况;通过Western blotting检测两组细胞上皮标记物上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、Catenin δ-1蛋白、间充质标记物N-钙粘蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表达水平的变化.[结果]F.nucleatum可促进HCT116细胞增殖,诱导HCT116细胞的迁移和侵袭,但不能引起细胞凋亡;可抑制HCoEpiC细胞的增殖、迁移和侵袭,并加速其凋亡;对HCT116和HCoEpiC细胞表现出很强的粘附能力,致细胞分散和拉长,细胞间粘附减少;使HCT116和HCoEpiC细胞上皮标记物E-cadherin与Catenin δ-1的表达量减少,间充质标记物N-cadherin与vimentin的表达量上升,E-cadherin由细胞膜向细胞质转移.[结论]F.nucleatum可诱导结直肠癌细胞和人正常结肠上皮细胞发生上皮间质转化,但抑制人正常结肠细胞的增殖、迁移和侵袭,表现出与结直肠癌细胞相反的作用.
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编辑人员丨2023/8/5
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TDO2基因对鼻咽癌细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响及其机制
编辑人员丨2023/8/5
目的 探讨色氨酸-2,3-双加氧酶2(tryptophan-2,3-dioxygenase2,TDO2)对鼻咽癌细胞系CNE-2Z和HNE-1细胞生物学行为的影响及其作用机制.方法 通过TIMER2数据库分析TDO2基因在不同癌症或特定癌症亚型中的表达状态.培养人正常鼻咽黏膜上皮细胞系NP69、鼻咽癌细胞系5-8F、CNE-2Z和HNE-1.实验中对CNE2Z和HNE-1细胞分别转染TDO2干扰序列和阴性对照序列,分别命名为si-TDO2组和NC组.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测TDO2的mRNA相对表达水平;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率,细胞集落克隆实验检测集落数量;Transwell法和细胞划痕实验检测细胞迁移能力;蛋白质印迹实验(Western blot)检测鼻咽癌细胞中上皮间充质化(EMT)相关蛋白E-cadherin、N-cadherin及Vimentin及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2相对表达量.结果 与正常鼻咽黏膜上皮细胞NP69相比,在CNE-2Z和HNE-1细胞中TDO2的mRNA相对表达量明显上调(P<0.001).与NC组比较,si-TDO2组细胞存活率降低,克隆细胞集落明显减少(P<0.05);与NC组相比,si-TDO2组细胞迁移数量较少,迁移指数较小(P<0.05);与NC组相比,si-TDO2组EMT相关蛋白中N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达水平降低,E-cadherin蛋白相对表达水平升高,凋亡相关蛋白Bax蛋白相对表达量升高,Bcl-2蛋白的相对表达量降低(P<0.05).结论 TDO2可促进鼻咽癌细胞株CNE-2Z和HNE-1细胞增殖、迁移能力,并抑制细胞凋亡,其机制可能通过促进EMT进行调控.
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编辑人员丨2023/8/5
